噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位

目的 利用噬菌体12肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体(EGFR)抗原模拟表位。方法 以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗及尼妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选表皮生长因子受体抗原模拟表位,经过3轮淘选后,选择可与西妥昔单抗及尼妥珠单抗有不同程度结合的噬菌体,对阳性产物进行克隆及测序。结果 发现17个和21个阳性噬菌体分别与西妥昔单抗及尼妥珠单抗不同程度地结合;阳性克隆测序结果分别获得了3种不同的氨基酸序列。结论 初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体展示的随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位。     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

【摘　要】目的：以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法：运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库 3 轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果：3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖（lipopo-lysaccharide,LPS）能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6 McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论：筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。     

应用噬菌体肽库筛选胃癌相关抗原模拟表位

目的 利用噬菌体递呈随机肽库筛选技术,进行胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ模拟表位的研究,方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗胃癌单克隆抗体ＭＧ７Ａｂ,细胞ＥＬＩＳＡ方法检测其活性,以ＭＧ７ｍＡｂ作为筛选分子,生物淘洗噬菌体递呈随机７肽库,经３次淘洗后将筛选所得的噬菌体克隆进行ＤＮＡ测序,递呈随机７肽氨基酸序列同源性分析,结果 对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序理分析,获得一侯选模拟表位（ＫＰＨＸＨＸ     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗原模拟表位的筛选和鉴定

目的：筛选丙肝病毒（HCV）包膜蛋白（E2）特异性噬菌体模拟表位。方法：以抗－HCV E2的单克隆抗体作为固相筛选分子，对噬菌体同七肽库进行5轮“吸附－洗脱－扩增“的筛选过程，随机挑取50个克隆，经酶联免疫吸附法（ELISA）鉴定、交叉反应以及竞争抑制性实验，最后对所选克隆进行DNA序列分析，以确定HCV E2抗原的模拟表位。结果：经噬菌体富集后，得到12个阳性克隆，确定氨基酸序列XXPXYXW为HCV E2的模拟表位。结论：用噬菌体七肽库成功筛选得到HCV E2的模拟表位，为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件。     

递呈BAC5单抗识别位点的M13噬菌体克隆系的建立

【目的】获得可递呈抗低分化和未分化癌细胞单克隆抗体 (BAC5单抗 )抗原表位的M13 噬菌体克隆系。【方法】以BAC5单抗为靶抗体 ,对由M13 噬菌体构建的随机 12肽文库进行生物淘洗。用抗体竞争方法从阳性克隆中选出与BAC5单抗结合率较高的克隆系。通过ELISA方法检测BAC5单抗对上述克隆的选择性识别。【结果】经过 3轮淘洗 ,获得的阳性克隆率为77% (35 /4 5 )。来自C2、C17和C2 9号克隆的噬菌体对外加BAC5单抗的结合率分别为 71 6 %、49 4%和 6 4 0 % ,高于其它阳性克隆。BAC5单抗与来自上述 3个克隆的噬菌体呈阳性反应 ,与来自辅助型M13 株的噬菌体 (VCSM13 )和淘洗前的文库噬菌体(RPLM13 )呈阴性反应。【结论】来自C2、C17和C2 9号克隆的噬菌体有可能递呈与BAC5单克隆抗相关的抗原表位。     

从噬菌体随机肽库中筛选SARS病毒N蛋白表位模拟肽的研究

目的获得具有生物学活性的SARSN蛋白的模拟肽。方法以抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子,免疫筛选噬菌体随机十二肽库,并采用夹心ELISA、竞争抑制试验鉴定阳性克隆。结果经噬菌体富集后,从随机筛选的各46个克隆中得到N蛋白的2个不同表位,即由ELISA鉴定出单克隆抗体C00835个阳性克隆,确定氨基酸序列GXLXTPXXXXGT为SARSN蛋白的一个表位;单克隆抗体C03941个阳性克隆,确定氨基酸序列TTLPXXXXAXXX为SARS病毒N蛋白的另一个表位。结论用噬菌体随机12肽库成功筛选得到SARSN蛋白的2个不同模拟表位,为用SARS表位去探索其病毒的结构及疫苗的研制创造了条件。     

噬菌体随机肽库筛选抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶单抗2A5的识别表位

目的利用噬菌体随机肽库技术筛选恶性疟原虫乳酸脱氢酶(pfLOH)抗体2A5的识别表位。方法以抗pfLDH的单抗2A5筛选噬菌体随机12肽库,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。通过ELISA、竞争抑制试验鉴定获得的噬菌体短肽与单抗2A5之间的结合特性。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出21株可与2A5单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列SQK(R)L,该序列与pfLDH的一级序列具有一定同源性。竞争抑制实验显示,带有核心序列的噬菌体克隆可与pfLDH竞争结合单抗2A5。结论 SQK(R)L是pfLDH单抗2A5特异识别的表位。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型gD模拟抗原表位的筛选及分析

目的:用抗-HSV-2gD单克隆抗体(mAb)从噬菌体随机12肽库中筛选HSV-2gD抗原模拟表位序列.方法:利用HSV-2gD McAb淘筛噬菌体随机12肽库,经四轮富集筛选,随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA进行序列测定,并利用生物信息学软件对包膜糖蛋白D(gD)进行B细胞抗原表位分析.结果:经四轮生物淘筛后,特异性噬菌体克隆得到了富集.经过对阳性克隆携带的随机12肽序列进行综合生物信息学分析,得到了PYH-H和P-PLW两个模拟HSV-2gD抗原表位的主要氨基酸基序.结论:用噬菌体随机12肽库成功筛选到了两个模拟HSV-2gD抗原表位的主要氨基酸基序,可模拟McAb针对的抗原表位,可能是HSV的替代抗原.该研究方法为研制更有效及更广谱的HSV基因疫苗提供了依据.     

胃癌相关抗原MG7-Ag模拟肽表位的筛选及测序分析

目的　从噬菌体呈现的随机肽库中筛选胃癌单克隆抗体MG7所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位 ,为进一步研究胃癌相关抗原与单抗结合的结构基序奠定基础。方法　用胃癌单克隆抗体MG7对呈现于噬菌体衣壳蛋白pⅧ上的 2个九肽库分别进行亲和富集和免疫筛选 ;阳性克隆进一步用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹法证实其结合活性 ;经随机抽取部分阳性克隆进行DNA序列分析 ,推导出相应噬菌体呈现肽的氨基酸序列 ,通过序列比较分析相对保守的表位信息 ;运用HLA分子结合分析软件预测已测序短肽与HLA分子结合的可能性。结果　经反复多轮筛选和结合活性检测 ,从pⅧ和pⅧ cys 2个噬菌体肽库中分别得到了 12和 30个阳性克隆 ;通过对部分阳性克隆进行测序分析 ,推导相应的随机肽序列和序列比较分析 ,得到具有相对保守性的表位信息如PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等。经计算机预测分析 ,发现它们可与HLA多个分子结合。结论　PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等有可能为胃癌单克隆抗体MG7所识别的表位基序。     

噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。     

利用噬菌体肽库技术筛选SARS病毒N蛋白表位模拟肽

目的 获得具有生物学活性的SARS病毒N蛋白表位模拟肽。方法 以抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子，免疫筛选噬菌体随机十二肽库，并采用夹心ELISA、竞争抑制试验鉴定阳性克隆，最后用合成肽技术进行表位鉴定。结果 经噬菌体富集后，从随机筛选的各46个克隆中得到N蛋白的2个不同表位， mAb C008 对应表位氨基酸序列为GXLXTPXXXXGT；mAb C039 对应表位氨基酸序列为TTLPXXXXAXXX。结论 用噬菌体随机12肽库成功筛选得到SARS N蛋白2个不同表位，为下一步开展用SARS表位研究病毒的制病机制、诊断、疫苗及治疗等奠定了基础。     

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的　用抗 JEV E蛋白的 m Ab 2 H4筛选噬菌体 15肽库 ,以研究 JEV E蛋白模拟肽 .方法　用生物素标记的 m Ab 2 H4,对噬菌体随机 15肽库进行 3轮筛选 .经 EL ISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性噬菌体克隆测序 ,并与 JEV E蛋白进行同源性比较 .结果　筛选到的噬菌体能与 m Ab 2 H4特异地结合 ,并且这种结合可被天然 JEV抗原所抑制 . 10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同 ,均为 RQDPQWPYANSTIAR.同源分析表明 ,在 JEV E蛋白不同区域有两个同源性较高的序列 :STXAR和WXXAXST.阳性噬菌体展示肽也能与抗天然 JEV抗原的鼠血清…     

用噬菌体随机12肽库筛选单纯疱疹病毒2型gD基因模拟抗原表位的研究

目的用针对HSV-2gD的单克隆抗体（McAb）从噬菌体展示随机12肽库中筛选HSV-2gD基因的抗原模拟表位，寻找更有效的小片段短肽作为HSV新型基因工程疫苗的候选抗原。方法利用HSV gD McAb淘筛噬菌体随机12肽库，经“吸附-洗脱-扩增”的4轮筛选，随机挑取噬菌体克隆经酶联免疫吸附实验（ELISA）进行鉴定，并对阳性克隆所携带的外源DNA片段进行序列测定和计算机辅助分析。结果经4轮生物淘筛后特异性噬菌体克隆得到了富集，对阳性克隆的分析结果表明P-PLW和PYH--H氨基酸序列是模拟妒基因抗原表住的骨架结构，携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合。结论从噬菌体随机12肽库中筛选到的外源序列可以模拟HSV-2 gD McAb针对的抗原表位，可能是HSV-2gD一个抗原表住的替代抗原，为进一步研究HSV-2基因疫苗奠定了基础。     

鼠伤寒脂多糖表位模拟位的筛选

目的获得模拟脂多糖抗原表位的噬菌体环状展示肽。方法用抗鼠伤寒菌脂多糖单克隆抗体2F4为靶分子,亲和筛选噬菌体随机环七肽库,双夹心ELISA及特异性抗原抑制试验鉴定阳性克隆。结果经三轮筛选,随机挑选38个克隆,其中34个克隆显示与2F4结合。鼠伤寒沙门氏菌脂多糖可抑制噬菌体克隆与2F4结合,所有克隆的半数抑制浓度为(0.125~0.250)μg/ml。挑选10个克隆测序并推导氨基酸序列,其中7个克隆出现P-X-WAS-X-W保守序列;10个序列中非极性氨基酸含量平均值为71.4%。结论噬菌体展示环七肽可模拟鼠伤寒沙门氏菌脂多糖抗原表位。     

噬菌体随机肽库筛选日本血吸虫22.6kDa蛋白有效抗原表位的初步研究

目的：从噬菌体随机12肽库中筛选出中国大陆株日本血吸虫22.6kDa蛋白（Sj22.6kDa抗原表达的短肽分子，探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。方法：以纯化的抗日本血吸虫22.6kDa的多克隆抗体IgG为配基，对噬菌体12肽库进行5轮亲和筛选，富集特异性噬菌体，挑取克隆，经序列分析，免疫识别和动物初筛后获得阳性克隆。结果：经过5轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集。随机挑选的24个噬菌体克隆中获得4个有效抗原表位。结论：利用噬菌体随机肽库筛选可获得类似日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位的短肽分子，这些短肽分子能诱导抗血肿虫的保护性免疫。     

鼠伤寒脂多糖表位模拟位的筛选

目的 获得模拟脂多糖抗原表位的噬菌体环状展示肽。方法 用抗鼠伤寒菌脂多糖单克隆抗体2F4为靶分子，亲和筛选噬菌体随机环七肽库，双夹心ELISA及特异性抗原抑制试验鉴定阳性克隆。结果 经三轮筛选，随机挑选38个克隆，其中34个克隆显示与2F4结合。鼠伤寒沙门氏菌脂多糖可抑制噬菌体克隆与2F4结合，所有克隆的半数抑制浓度为(0．125-0.250)μg／ml。挑选10个克隆测序并推导氨基酸序列，其中7个克隆出现P-X-WAS-X-W保守序列；10个序列中非极性氨基酸含量平均值为71．4％。结论噬菌体展示环七肽可模拟鼠伤寒沙门氏菌脂多糖抗原表位。     

噬菌体随机12肽库中VEGF模拟表位的筛选及初步鉴定

目的:从噬菌体随机12肽库中筛选能与抗血管内皮生长因子(VEGF)mAb阿瓦斯汀(Avastin)特异性结合的多肽.方法:用Avastin为靶分子,对噬菌体12肽库进行3轮生物淘洗,随机挑取80个克隆,ELISA法鉴定其亲和性,将亲和性高的阳性克隆进行DNA序列测定,推导与噬菌体外壳融合的12肽氨基酸序列.Fmoe固相法合成12肽,戊二醛交联12肽与血蓝蛋白(KLH),打点印迹(Dot blot)检测偶联物能否与Avastin结合.结果:ELISA显示,42个噬菌体克隆与Avastin有较强的亲和性,测序发现41个阳性克隆表达的融合12肽的序列一致,1个不同;化学合成的12肽能与Avastin特异性结合,12肽-KLH偶联物也能与Avastin特异性结合.结论:初步证明12肽模拟了VEGF部分表位.     

基于抗原表位预测的MUC1模拟肽表位筛选

目的:预测粘蛋白1(Mucin1,MUC1)抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位.方法:对MUC1的二级结构及免疫原性进行分析,预测MUC1的抗原表位.利用纯化获得的Ma695抗体筛选噬菌体随机12肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆.结果:MUC1存在有17个潜在的抗原表位区域.经3轮筛选,获得了14个阳性克隆,DNA序列分析并推导出其氨基酸序列:KHYDPFHHRMPQ,QADTARS VALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIHYWNHNRV;4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上.结论:预测MUC1抗原B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能奠定了基础.所得序列KHYDPFHHRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI及MTPIH YWN HNRV能模拟MUC1抗原表位.     

日本脑炎病毒糖蛋白模拟短肽的筛选和基因定位

目的 寻找JEV mAb2F2识别的抗原表位,为JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据。方法 链亲和素包被塑料平皿,加入生物素标记2F2与噬菌体随机15肽库,再洗脱,扩大培养进行三轮淘筛,经夹心ELISA,竞争ELISA鉴定后,挑取10个阳性克隆,DNA测序,与JEV E蛋白同源分析。结果 筛选到的噬菌体能特异地与2F2结合,并且这种结合可被天然抗原所抑制。10个克隆的氨基酸序列相同;－HTPQWSP－SQYRPSLR－,同源分析在JEV E蛋白在224－229aa得到一个同源性较高的序列：PXXSPS。结论 PXXSPS可能为JEV E蛋白的一个模拟表位。     

应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究

目的：从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据.方法：用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库.经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较.结果：经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性.结论：所得肽段可能是Em18抗原模拟表位.