N-乙酰半胱氨酸对吸烟导致小鼠肺气肿及IL-12水平的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对烟草烟雾暴露导致的小鼠肺气肿及白介素-12(IL-12)水平的影响.方法 健康雄性C57BL/6小鼠24只,按随机数字表法分为正常对照组、烟雾暴露组和NAC组.烟雾暴露组和NAC组小鼠给予香烟烟雾吸入共20周.NAC组小鼠在烟雾暴露16周时,予以加用NAC腹腔内注射给药,4周后处死小鼠,留取肺组织、血液和肺泡灌洗液(BALF).使用HE染色法观察小鼠肺组织病理形态改变,计算单位面积内的平均肺泡内衬间隔以及肺泡数;使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠BALF和血清中IL-12的浓度水平.结果 与正常对照组相比,烟雾暴露组小鼠肺组织内炎症细胞浸润及肺气肿样变化明显,肺泡内衬间隔增加,肺泡数减少.同时,血清及BALF内IL-12水平较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);NAC组小鼠肺组织病理变化与烟雾暴露组相比明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.05);血清和BALF内IL-12水平较烟雾暴露组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NAC能明显抑制烟雾暴露导致的肺气肿,降低炎症因子IL-12水平,提示NAC对烟雾暴露导致的小鼠肺部炎症反应及肺气肿可能有减轻作用.     

烟草烟雾暴露对哮喘大鼠气道CCR6 mRNA及其蛋白表达的影响

目的研究烟草烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道chemokine receptor 6(CCR6)表达的影响,探讨吸烟加重哮喘气道炎症的免疫学机制。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只。建立哮喘大鼠模型和哮喘大鼠烟草烟雾暴露模型,采集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞计数及分类,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法及免疫组织化学法检测各组大鼠气道CCR6 mRNA及蛋白的表达。结果①哮喘组(69.0±3.5;4.1±1.0;8.9±2.0)、哮喘+烟雾暴露组(86.7±5.2;2.2±1.0;19.0±2.8)BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均高于对照组(10.1±3.8;1.3±0.7;2.2±1.1)、烟雾暴露组(47.7±6.8;0.5±0.3;2.7±1.4)(P均<0.05);哮喘+烟雾暴露组BALF中白细胞总数和中性粒细胞高于哮喘组,嗜酸粒细胞低于哮喘组(P均<0.05)。②哮喘组(8.15±0.88;0.452±0.013)、哮喘+烟雾暴露组(15.16±0.87;0.531±0.024)CCR6 mRNA及其蛋白表达水平均明显高于对照组(1.01±0.52;0.299±0.027)、烟雾暴露组(5.55±0.54;0.442±0.018)(均P<0.01);哮喘+烟雾暴露组明显高于哮喘组(均P<0.01)。结论烟草烟雾暴露可通过促使气道CCR6 mRNA及其蛋白高表达,加重哮喘大鼠气道慢性炎症。     

辅助性T细胞17和调节性T细胞在哮喘小鼠中的失衡表达及其意义

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达失衡在哮喘小鼠发病机制中的作用。方法将24只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组,每组12只。哮喘组采用卵白蛋白致敏和激发的方法制作小鼠哮喘模型,对照组用等量的生理盐水代替。采用体积描记法测定气道反应性;对BALF中炎性细胞进行计数;流式细胞术检测脾脏单个核细胞中Th17及Treg细胞占CD4+ T细胞比例;ELISA法检测BALF及肺匀浆中Th17及Treg相关细胞因子IL-17和IL-10水平。结果与对照组比较,哮喘组平均气道阻力显著升高(P0.01),Th17细胞比例显著升高[(5.68±1.99)%比(2.80±0.82)%,P0.01],而Treg细胞比例显著降低[(2.88±0.46)%比(6.10±2.44)%,P0.01],Th17/Treg比值显著升高(1.93±0.41比0.50±0.15,P0.01),BALF及肺匀浆中IL-17水平均显著升高[(22.37±3.00)pg/mL比(11.42±2.15)pg/mL,(52.93±5.39)pg/mL比(19.38±2.65)pg/mL,P均0.01],而IL-10水平均显著降低[(6.05±1.25)pg/mL比(14.23±2.94)pg/mL,(9.33±1.79)pg/mL比(21.40±2.44)pg/mL,P均0.01]。结论哮喘小鼠Th17细胞数量增多及IL-17水平增高,而Treg细胞数量减少及IL-10水平降低,Th17/Treg细胞比例失衡可能在哮喘的发病机制中具有重要作用。     

香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液及外周血4-HNE和γ-GCS表达的影响

目的 研究香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液( BALF)及外周血4-羟基壬稀醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-Glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)表达的影响,探讨4-HNE及γ-GCS在COPD氧化/抗氧化失衡发病机制中的作用.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组;采用双抗体夹心酶联免疫吸附( ABC-ELISA)法分别检测各组大鼠BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的含量.结果 (1)与不吸烟组(15.917±1.584;12.305±1.822)比较,吸烟6周组(21.376±2.80;18.333±2.585)和吸烟12周组(28.634±2.999;22.754±3.882)大鼠BALF和外周血中4-HNE含量明显增加,差异均有统计学意义(P均＜0.01);吸烟12周组与吸烟6周组比较有所增加,差异也有统计学意义(P＜0.01).(2)与不吸烟组(13.525±2.311;11.847±1.171)比较,吸烟6周组(15.802±1.647;16.221±1.577)大鼠BALF和外周血中γ-GCS的表达明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05;P＜0.01);与不吸烟组比较,吸烟12周组( 11.527±1.606;9.015±1.569)的表达明显减少,差异也有统计学意义(P ＜0.05;P＜0.01).(3)吸烟6周组BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的表达呈正相关(r=0.764,r =0.674),吸烟12周组BALF中4-HNE和γ-GCS表达呈负相关(r=-0.777),差异均有统计学意义(P均＜0.05),而外周血中二者表达无显著相关性.结论 香烟烟雾暴露可使大鼠体液4-HNE及γ-GCS的表达水平增高,随着吸烟时间延长,γ-GCS逐渐降低,提示二者在COPD氧化/抗氧化失衡中发挥一定的作用.     

炎症相关趋化因子/细胞因子在香烟暴露和戒烟小鼠肺组织中的表达

目的 观察香烟暴露及戒烟后小鼠肺组织炎症以及炎症相关趋化因子及细胞因子表达的情况。方法 将18只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、香烟暴露组及戒烟组3组,每组6只。测量小鼠气道阻力,HE和Masson染色观察肺部形态及炎症情况,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数及细胞分类数,采用实时PCR方法及免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中CXCL9、CXCL10、CXCL11、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、MMP12及转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA及蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法测量BALF上清中CXCL9、CXCL10、CXCL11、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TGF-β1水平。结果 香烟暴露组小鼠气道阻力(Rn)显著高于正常对照组(P＜0.01),戒烟组Rn亦显著高于正常组(P＜0.05)。与正常对照组比较,香烟暴露组与戒烟组肺组织病理总评分均显著增高(P＜0.001)。香烟暴露组和戒烟组的炎症细胞总数显著高于正常对照组(P＜0.001)。香烟暴露组和戒烟组CXCL9、CXCL10、MMP9和MMP12的 mRNA水平均显著高于正常对照组(P均＜0.05)。香烟暴露组和戒烟组CXCL9、CXCL10、CXCL11、MMP2、MMP9、MMP12及TGF-β1的蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均＜0.05)。与正常对照组比较,香烟暴露组和戒烟组BALF上清中的CXCL9、CXCL10、CXCL11、IL-8及TGF-β1浓度显著增加(P均＜0.05),香烟暴露组IL-6和TNF-α浓度亦显著升高(P均＜0.05)。结论 香烟暴露引起炎症细胞在肺组织中聚集及炎症细胞因子升高,戒烟后炎症细胞及炎症细胞因子尽管有所下降,但仍高于正常对照。戒烟后肺部炎症持续存在,趋化因子受体CXCR3的配体可能在其中发挥关键作用。     

组蛋白去乙酰化酶2的表达在烟草烟雾暴露后哮喘大鼠气道Th1/Th2平衡中的作用研究

目的 通过研究烟草烟雾暴露对哮喘大鼠气道组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）2以及血浆、支气管肺泡灌洗液（BALF）中干扰素（interferon,IFN）-γ、白细胞介素（interleukin,IL）-4表达的影响,探讨HDAC2在辅助性T淋巴细胞（T helper cell）Th1/Th2平衡中的作用。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、烟雾暴露+哮喘组、布地奈德+哮喘组、布地奈德+烟雾暴露+哮喘组,建立哮喘大鼠模型、哮喘大鼠烟雾暴露模型以及布地奈德干预模型。免疫组织化学法检测各组大鼠气道HDAC2蛋白的表达,酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测血浆和BALF中Th1型特征性细胞因子IFN-γ以及Th2型特征性细胞因子IL-4水平。结果 与对照组相比,烟雾暴露+哮喘组、哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,与哮喘组相比,烟雾暴露+哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P均<0.05）。与布地奈德+哮喘组相比,布地奈德+烟雾暴露+哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组相比,哮喘组大鼠和烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义（P均<0.01）;与哮喘组相比,烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义（P均<0.01）;与布地奈德+哮喘组相比,布地奈德+烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义（P均<0.01）;肺组织HDAC2蛋白的表达与血浆中IFN-γ表达呈正相关（r=0.533,P<0.01）,与IL-4表达呈负相关（r=-0.642,P<0.01）。结论 烟草烟雾暴露可以下调哮喘大鼠模型肺组织HDAC2蛋白的表达,从而影响气道炎症,IFN-γ、IL-4的表达以及布地奈德的治疗效果,这可能是烟草烟雾恶化哮喘气道Th 1/Th2平衡的一个免疫学机制。     

香烟烟雾暴露肺气肿小鼠肺中Th17细胞的变化及可能机制

目的 探讨香烟烟雾暴露肺气肿小鼠肺实质中Th17细胞的变化及其可能机制.方法 将40只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组:对照12周组、对照24周组、烟雾暴露12周组、烟雾暴露24周组,每组10只.香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型.HE染色观察小鼠肺组织的改变,计算平均内衬间隔和肺泡破坏指数;流式细胞术检测小鼠肺实质中Th17细胞、Th1细胞、Th17/Th1细胞、CD4+IL-17+趋化因子受体(CCR)6+T细胞占CD4细胞比例及CCR6+Th17细胞占Th17细胞比例;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺实质中的白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-23、转化生长因子(TGF)-β、γ-干扰素(IFN-γ)及趋化因子(CCL)20水平,并分析其相互关系.结果 烟雾暴露12周组和24周组小鼠平均内衬间隔分别为(39±4)μm和(47±7)μm,肺泡破坏指数分别为(39.1±1.6)和(45.2±3.1),明显高于对照12周组[(33±3)μm和(28.2±1.6)]和24周组[(32±4)μm和(28.9±2.1)],以烟雾暴露24周组增高更为显著(均P<0.05);Th17细胞比例分别为(3.27±1.12)和(7.19±2.24)、Th17/Th1细胞比例分别为(0.61±0.30)和(1.82±0.52)、Th1细胞比例分别为(10.02±3.68)和(26.21±6.04)也均高于对照12周组[(1.80±0.75),(0.27±0.12)和(3.75±1.72)]和24周组[(1.99±0.59),(0.28±0.11)和(4.16±1.32)](均P＜0.01),且与平均内衬间隔、肺泡破坏指数呈正相关(r=0.706～0.877,均P＜0.01);CD4+IL-17+CCR6+T细胞比例分别为(0.69±0.34)和(1.11±0.48),CCR6+Th17细胞比例分别为(12.23±2.13)和(18.65±1.17),高于对照12周组[(0.22±0.18)和(6.55±2.13)]和24周组[(0.25±0.17)和(7.29±1.57)],以烟雾暴露24周组增高更为显著(均P＜0.05),其中CCR6+Th17细胞比例与平均内衬间隔和肺泡破坏指数呈正相关(r=0.617、0.741,均P＜0.05);IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β及CCL20浓度也高于对照12周组和24周组(均P＜0.01),且与Th17细胞比例呈正相关(r=0.394～0.800,均P<0.05).结论 香烟烟雾暴露肺气肿小鼠肺内Th17细胞增高;这可能与IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β的升高及CCR6/CCL20趋化轴作用有关.

Abstract：

Objective To evaluate the expression of Th17 cell in a cigarette smoke-induced mice model of emphysema and explore the probable mechanisms of its elevation. Methods Forty male Balb/c mice were randomly divided into 4 groups: control group for 12 weeks (C12), control group for 24 weeks (C24), smoke-exposure group for 12 weeks (S12) and smoke-exposure group for 24 weeks (S24)（n=10 each）. Morphological changes were evaluated by mean linear intercepts (Lm) and destructive index (DI). The percentages of Th17, Th1, Th17/Th1, CD4+IL-17+CCR6+T and CCR6+Th17 cells were determined by tetra-color flow cytometry while the levels of interleukin （IL）-1β, IL-6, IL-23, transforming growth factor (TGF)-β, interferon (IFN)-γ and CC chemokine ligand (CCL)-20 assayed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results The values of Lm [(39±4) μm, (47±7) μm] and DI [(39.1±1.6), (45.2±3.1)] were significantly higher in S12 and S24 than those in C12 [(33±3) μm, (28.2±1.6)] and C24 [(32±4) μm, (28.9±2.1)], particularly in C24 (all P<0.05). The percentages of Th17 cell [(3.27±1.12), (7.19±2.24)], Th17/Th1 cell [(0.61±0.30), (1.82±0.52)] and Th1 cell [(10.02±3.68), (26.21±6.04)] in the lungs of S12 and S24 significantly increased than those in C12 [(1.80±0.75), (0.27±0.12), (3.75±1.72)] and C24 [(1.99±0.59), (0.28±0.11), (4.16±1.32)], particularly in C24 (all P<0.01). The percentages of Th17, Th17/Th1 and Th1 cells in the lungs of S12 and S24 had a positive correlation with Lm and DI (all P<0.01). The percentages of CD4+IL-17+CCR-6+T cell [(0.69±0.34), (1.11±0.48)] and CCR6+Th17 cell [(12.23±2.13), (18.65±1.17)] were significantly elevated in S12 and S24 compared to those in C12 [(0.22±0.18), (6.55±2.13)] and C24 [(0.25±0.17), (7.29±1.57)], particularly in C24 (all P<0.05). Furthermore, a positive correlation between CCR6+Th17 cell and emphysematous lesions was also found (all P<0.05). The levels of IL-1β, IL-6, IL-23, TGF-β, IFN-γ and CCL20 significantly increased in S12 and S24 as compared with those of C12 and C24 (all P<0.05). Meanwhile, the percentage of Th17 cell had a positive correlation with IL-1β, IL-6, IL-23, TGF-β, IFN-γ and CCL20. Conclusion There is an up-regulated expression of Th17 in lungs of cigarette smoke-induced emphysema mice. The CCR6/CCL20 axis and the elevated levels of IL-1β, IL-6, IL-23, TGF-β and IFN-γ may be related with the above effect.     

吸入前列腺素E1对脂多糖所致大鼠急性肺损伤模型Th1/Th2的影响

目的 探讨雾化吸入前列腺素E1(PGE1)对脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)模型Th1/Th2的影响.方法 尾静脉注射LPS复制大鼠ALI模型,PGE1雾化入宽大玻璃瓶内让大鼠自由吸入,用ELISA法检测大鼠外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的水平及IFN-γ/IL-4比值.结果 LPS组外周血及BALF中IFN-γ/IL-4比值较生理盐水对照组(NS组)显著升高(P＜0.01),PGE1组外周血IFN-γ/IL-4(Th1/Th2)比值在6、12及24 h时间点显著低于LPS组(P＜0.01),而BALF中各时间点IFN-γ/IL-4(Th1/Th2)比值显著低于LPS组(P＜0.01).结论 雾化吸入PGE1可使LPS所致大鼠ALI失衡的Th1/Th2趋于平衡,减轻LPS所致大鼠ALI.     

三氧化二砷对支气管哮喘小鼠Th17细胞的影响

目的 观察三氧化二砷（ATO）对支气管哮喘小鼠Th 17细胞和IL-17的影响.方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和ATO组.末次激发24小时后,测定气道肺阻力,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,细胞分类计数,流式细胞仪检测脾脏Th17细胞阳性率.ATO干预20小时后,检测培养上清液及BALF中IL-17及IL-4水平.结果 ①哮喘组BALF中各类炎症细胞均明显高于对照组（P＜0.05）,而ATO组明显低于哮喘组（P＜0.01）.②哮喘组肺阻力、脾脏CD4＋T细胞总数、Th17细胞阳性率、BALF中IL-17及IL-4均明显高于对照组,而ATO组上述指标均明显低于哮喘组（P＜0.05）.③ATO干预组培养上清液中IL-17、IL-4含量显著低于原液组（P＜0.01）.④Th17细胞阳性率、IL-17含量均与中性粒细胞数量呈显著正相关（P＜0.05）.结论 ATO能够抑制Th17细胞、IL-17的表达,减轻哮喘小鼠气道炎症及高反应性.     

羌活二黄汤对大鼠佐剂性关节炎的疗效及其机制

目的 观察羌活二黄汤对佐剂型关节炎大鼠的治疗效果,并从Treg/Th17细胞角度探讨其作用机制.方法 选取雄性SD大鼠,常规建立佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型,造模成功后设正常对照组,模型组,甲氨蝶呤组,中药(羌活二黄汤)高剂量组(18 g/kg)、中剂量组(9g/kg)及低剂量组(4.5 g/kg).于关节肿胀第1天开始定时灌胃给药,在4周内连续观察各组大鼠关节炎指数评分的变化,4周后处死大鼠,留取踝关节作常规苏木精-伊红(HE)染色,CCK-8检测脾淋巴细胞增殖,流式细胞术检测大鼠脾淋巴细胞Treg/Th17的百分比.结果 与模型组比较,甲氨蝶呤组、中药高剂量组能够降低大鼠关节炎指数评分[24 d(1.33±1.56),28 d(0.17 ±0.28),P＜0.01;24 d(3.00±1.33),28 d(0.67 ±0.67),P＜0.01],明显抑制脾淋巴细胞的增殖[24 h(0.25 ±0.03),48 h(0.25±0.03) ,72 h(0.27 ±0.01) ,P ＜0.01;24 h(0.26±0.03) ,48 h(0.25±0.03) ,72 h(0.27 ±0.01) ,P＜0.01],减轻大鼠踝关节滑膜组织炎症.与正常对照组比较,模型组脾淋巴细胞Treg百分比降低[(5.75±0.46)％,P＜0.01],而Th17百分比明显增高[(1.84±0.45)％,P＜0.01],呈失衡状态.经高剂量中药干预后,大鼠脾淋巴细胞Treg百分比明显上升[(1 1.19±2.01)％,P＜0.01],Th17百分比下降[(0.98±0.35)％,P＜0.05].与模型组相比,中药中、低剂量组无明显治疗效应(P＞0.05).结论 18g/kg羌活二黄汤对大鼠佐剂性关节炎具有一定的治疗效果.其机制可能与纠正CD4+T淋巴细胞亚群Treg/Th17的失衡有关.     

芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道炎症的影响

目的 观察芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响.方法 采用香烟烟熏加气管内注入脂多糖的复合因素造模法建立COPD大鼠模型,于造模第15天,空白组、模型组给予等体积中剂量颗粒辅料溶液灌胃4周,其他各药物干预组给予芪蛭皱肺颗粒小剂量、中剂量、大剂量和阳性药物（固本咳喘片）溶液灌胃4周,末次用药后取肺组织HE染色,取血清和BALF采用放免法检测IL-8和TNF-α的含量.结果 采用香烟烟熏加气管内注入脂多糖的方法成功复制了COPD大鼠模型,病理观察显示大鼠支气管及肺血管壁炎细胞浸润,分泌物明显增多,肺泡扩张.与空白组比较,模型组血清IL-8与TNF-α含量均升高（P＜0.01或＜0.05）;BALF IL-8与TNF-α含量亦均升高（P＜0.05或＜0.01）;与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒各剂量组及固本咳喘片组血清及BALF中IL-8和TNF-α含量均降低（P＜0.05）,以芪蛭皱肺颗粒大剂量组降低更明显（P＜0.01）.结论 芪蛭皱肺颗粒有可能是通过减少炎症因子的生成和释放,从而有效调节肺炎症损伤时IL-8和TNF-α水平的升高,对大鼠模型气道炎症具有一定的干预作用.     

1,25-二羟维生素D3处理的树突细胞在变应性气道炎症中的免疫调节作用

目的 探讨1,25-二羟维生素D,[1,25(OH)2D3]处理的树突细胞(DC)在变应性气道炎症中的免疫调节作用及其机制.方法 小鼠骨髓来源DC分2组,分别用1,25(OH):D,和磷酸盐缓冲液(PBS)处理,RT-PCR和蛋白质印迹法检测2组Dc Notch配体Mrna和蛋白表达.将2组DC和Notch配体中和抗体封闭的1,25(OH)2D3处理DC分别与小鼠脾脏来源CIM+T细胞共培养,流式细胞仪检测CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比.将卵清蛋白(OVA)致敏小鼠分2组,每组5只,分别过继转移1,25(OH)2D3组DC[1,25(OH)2D3-DC组]和PBS组DC(PBS-DC组),以OVA激发气道炎症后行肺脏病理、支气管肺泡灌洗液(BALF)中自细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和干扰素γ(IFN-γ)水平以及脾脏CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比检查.结果 1,25(OH)2D3组DC Notch配体Jaggedl和Jagged2 Mrna表达(0.376±0.029、0.564±0.018)和蛋白表达(0.786±0.034、0.632±0.026)均明显高于PBS组(分别为0.146±0.032、0.267±0.012和0.124±0.025、0.098±0.012,均P＜0.01).与CIM+T细胞共培养后,1,25(OH)2D3组CD4+T细胞中CD4+C1)25+Foxp3+T细胞百分比(22.49%±0.56%)明显高于PBS组(6.67%±0.60%,P＜0.01);经Jagged2中和抗体封闭组CIM4CD25+Foxp3+T细胞百分比(6.56%±1.89%)明显低于未封闭组(20.37%±1.64%,P＜0.01),1,25(OH)2D3-DC组小鼠气道炎症明显轻于PBS-DC组;BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ水平(pg/ml)分别为33±5、134±23、91±11和未检测到(＜12.5),均明显低于PBS-DC组(分别为55±7、332±49、152±19、23±6,均P＜0.01);脾脏CD4+T细胞中CIM+CD25+Foxp3+T细胞百分比(14.69%±1.14%)明显高于PBS-DC组(2.38%±0.14%,P＜0.01).结论 1,25(OH)2D3处理DC对变应性气道炎症有抑制作用,这种作用可能与1,25(OH)2D3处理DC通过Jaggect2介导的Notch信号途径诱导CD4+CD25+Foxp3+T细胞生成有关.     

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道高反应性及炎症影响的研究

目的探讨免疫刺激序列CpG寡聚脱氧核苷酸（ODN）对小鼠哮喘模型气道高反应性（AHR）及炎症过程的影响。方法雌性C57BL／6J小鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、CpGODN预防组（C组）、CpGODN治疗组（D组）及布地奈德治疗组（E组）,建立小鼠哮喘模型。采用有创体积描记法对小鼠进行肺功能及AHR检测;采集血、肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,对BALF行细胞总数计数及嗜酸粒细胞（EOS）绝对值计数,ELISA法测定血清和BALF中细胞因子IL一4、IFN—γ水平。结果B组BALF中细胞总数、EOS绝对值计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著高于A组（均P〈001）,C、D、E组均显著低于B组（均P〈0．01）,但仍显著高于A组（P〈0．05或0．01）。B组气道阻力增加幅度（Raw％）和肺顺应性下降幅度（Cdyn％）均显著高于A组（P〈0．01）;C、D、E组较B组显著降低（均P〈0．01）;C、D、E组肺组织炎症程度改变不一,明显比B组减轻。B组血清和BALF中IL-4的水平显著高于A组（P〈0．01）,而BALF中IFN—γ的水平显著低于A组（P〈0．01）。结论CpGODN在致敏阶段及致敏后均能明显改善哮喘肺组织炎症,降低BALF中细胞总数及EOS％;降低AHR;调节Th1/Th2细胞因子的平衡。致敏后CpGODN干预优于致敏阶段的干预。     

色氨酸代谢物调控Th17/Treg分化在小鼠哮喘变应原特异性免疫治疗中的作用及机制研究

目的 对色氨酸代谢物调控Th17/Treg分化在小鼠哮喘变应原特异性免疫治疗中的作用及机制进行研究.方法 将30只BALB/c鼠随机法分为5组:对照组、哮喘组、OVA-SIT组(OVA:鸡卵白蛋白;SIT:变应原特异性免疫治疗)、OVA-SIT+ 1-MT组(1-MT:IDO抑制剂,1-甲基色氨酸),OVA-SIT+1-MT+ KYN组(KYN:色氨酸代谢产物,犬尿氨酸).哮喘组:第0、7d予OVA致敏,第6周每天予1％OVA雾化激发,50 d予10％ OVA加强激发;OVA-SIT组:第4周每天予大剂量OVA皮下注射,余同哮喘组;OVA-SIT+ 1-MT组:第4周每天在腹腔内注入1-MT,1h后予大剂量OVA皮下注射h,余同哮喘组;OVA-SIT+ 1-MT+ KYN组:第3周每天加入1-MT,第4周每天加入KYN,末次加入KYN后1h予大剂量OVA行免疫治疗,余同哮喘组.末次激发6h内检测气道高反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数分析;ELISA检测血清IgE及BALF中IL-5、IL-10、IL-17;流式细胞技术检测脾脏CD4+RORγt+T及CD4+Foxp3+T细胞分化情况.结果 OVA-SIT+1-MT+KYN组较OVA-SIT+1-MT组酸性粒细胞浸润减少,炎症反应明显减轻.前者BALF中Il-5为74.8 ～ 86.8(83.48±6.02) pg/mL,IL-17为33.8～46.5(38.72 ±4.61) pg/mL,CD4+ RORγt+T细胞为2.45 ～2.82(2.60±0.14)％,CD4+ Foxp3+T细胞为7.83 ～9.09(8.36 ±0.53)％;后者BALF中Il-5为240.3～285.1 (259.65±16.27) pg/mL,IL-17为55.2 ～ 65.8(59.97±3.76) pg/mL,CD4+ RORγt+T细胞为4.31 ～5.34(4.94±0.38)％,CD4+Foxp3+T细胞为5.93～6.59(6.33 ±0.28)％,因此OVA-SIT+ 1-MT+ KYN组中Il-5、IL-17细胞因子以及脾脏中CD4+ RORγt+T细胞均明显低于OVA-SIT+ 1-MT组,差异均有统计学意义(P＜0.01),而前组脾脏中CD4+ Foxp3+T细胞水平明显高于后者,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 色氨酸代谢产物有助于特异性免疫治疗减轻气道炎症作用,其机制与通过调控Th17及Treg分化有关.     

GBE 对COPD 大鼠血清和肺泡灌洗液中IL-1、IL-8 含量的影响

目的 探讨银杏叶提取物（GBE）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清和肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素8（IL-8）含量的影响。方法 将90 只清洁级Wistar 大鼠称重后,随机分为A、B、C、D、E、F 组,每组15 只。B、C、D、E、F 5 组采用烟雾吸入等复合因素复制COPD 大鼠模型;C、D 组分别在1 ～ 14 d 和29 ～ 42 d 用GBE 干预;E、F 组分别在1 ～ 14 d 和29 ～ 42 d 用红霉素干预,实验结束取各组大鼠肺动脉血和BALF,检测各组血清和BALF 中IL-1、IL-8 的含量。结果 A、C、D、E、F 组与B 组相比,血清中IL-1、IL-8 含量及BALF 中IL-1 含量低于B 组（P <0.05）。在降低血清IL-1 水平方面,早期GBE 干预优于晚期;在降低大鼠血清和BALF 中IL-1、IL-8 水平方面,GBE 与红霉素比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论 GBE 具有抑制COPD 气道及全身炎症反应的作用。     

31例多发性硬化患者T淋巴细胞亚群及相关细胞因子 的检测

目的:探讨多发性硬化（MS）患者静脉血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子的意义。方法:采用流式细胞术（FCM）检测31例MS患者治疗前（MS组）、泼尼松治疗4周后（泼尼松组）及20例健康者（正常组）外周血Th1（CD4+IFN-γ+）、Th2（CD4+IL-4+）、Th17（CD4+IL-17+）、Treg（CD4+FoxP3+）、Tc1（CD4-CD8+IFN-γ+）和Tc2（CD4-CD8+IL-4+）T淋巴细胞亚群变化;流式微球芯片捕获技术（CBA）检测血浆细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4和IL-10的含量。结果:（1）FCM分析结果显示,与正常组比较,MS组Th1细胞和Th17细胞均明显升高（P＜0.05）;Treg细胞和Tc1细胞显著下降（P＜0.01）,Th17/Treg比例明显升高（P＜0.01）;与MS组比较,泼尼松组Tc1、Tc2和Treg细胞百分率均明显升高（P＜0.01）,而Th1和Th17细胞显著下降（P＜0.05）,Th17/Treg比值降低（P＜0.01）;（2）CBA法检测结果显示,与正常组比较,MS组IFN-γ和IL-17A含量升高（P＜0.05;P＜0.01）,IL-4和IL-10含量明显降低（P＜0.01）;与MS组比较,泼尼松组IL-17A含量明显降低（P＜0.01）,IL-4和IL-10均显著升高（P＜0.01）。结论:MS的发生可能主要与Th17上调和Treg下调有关,提示临床上针对MS靶向下调Th17和上调Treg,纠正Th17/ Treg比例失衡,具有潜在应用价值。     

利巴韦林对呼吸道合胞病毒感染哮喘加重小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素分泌的影响

目的 明确利巴韦林(RIB)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重治疗中的作用.方法 (1)细胞试验:人支气管上皮细胞16HBE随机分为RSV组、RSV/RIB组、RIB组和对照组,每组8瓶.感染细胞用RSV病毒液的感染复数(MOI)为2;RIB浓度为50 μg/ml.蛋白质印迹法检测各组细胞胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)蛋白表达.(2)动物实验:雌性BALB/c小鼠随机分为卵清蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/RIB组和对照组,每组8只.应用OVA腹腔注射致敏、OVA雾化吸入结合RSV病毒液滴鼻激发哮喘,RIB 10 mg/kg肌内注射.动物肺功能分析系统检测各组小鼠气道反应性;酶联免疫吸附试验检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、干扰素γ(IFN-γ)和支气管肺泡灌洗液(BALF)TSLP浓度;取肺组织观察炎症反应和气道上皮细胞TSLP表达水平.结果 细胞试验显示RSV、RSV/RIB、RIB和对照组TSLP蛋白表达量分别为1.97±0.22、1.16±0.19、0.99±0.17和0.89±0.08,RSV/RIB组明显低于RSV组(P＜0.01).动物实验显示OVA/RSV/RIB组小鼠气道反应性明显低于OVA/RSV组(P＜0.01);血清IL-4、IL-5、IFN-γ和BALF中TSLP浓度分别为(109.7±41.9)、(220.8±30.9)、(13.0±3.4)和(1945±82)pg/ml,均明显低于OVA/RSV组[分别为(274.2±103.7)、(293.3±46.1)、(30.1±5.7)、(2127±46)pg/ml,均P＜0.01];气道炎症细胞浸润和气道上皮细胞TSLP表达均明显少于OVA/RSV组.结论 RIB可以抑制RSV感染引起的TSLP分泌增加和哮喘加重.     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4 CD25 Foxp3 T细胞)及气道炎症的影响。方法28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7)。治疗组1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组)。分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达。以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7)。结果哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异。与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加。各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异。结论哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平。提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

CpGODN对尘螨哮喘小鼠Foxp3表达的影响

目的研究CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)对尘螨哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子及肺组织中Foxp3蛋白表达的影响。方法用雌性C57BL/6J小鼠建立尘螨哮喘小鼠模型,在抗原致敏阶段加入CpGODN进行干预,并设立GpCODN治疗对照组及布地奈德治疗对照组,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)的变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量变化;用免疫印迹(Western-blot)法检测肺组织Foxp3蛋白的表达水平。结果与哮喘模型组及GpCODN治疗对照组比较,CpGODN治疗组的BALF中IL-4、IL-5的浓度降低,IFN-γ浓度升高,肺组织中Foxp3蛋白表达增高;相关性分析显示肺组织Foxp3表达与BALF中IFN-γ水平呈正相关,与BALF中IL-4、IL-5水平、EOS绝对值均呈负相关。结论 CpGODN能够改善尘螨哮喘小鼠气道炎症,调节Th1/Th2型细胞因子的平衡,可能是通过诱导Foxp3的表达来起到免疫调节的作用。     

反复吸入烟曲霉孢子对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和重构的影响

目的观察反复吸入烟曲霉（AF）孢子对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠气道炎症和重构的影响。方法50只Wistar大鼠随机分为A、B、C、D及E组,每组10只。A、B、C和D组用气管内吸入脂多糖联合熏香烟的方法建立COPD模型,E组为正常对照组。建模后A、B和C组分别经鼻吸入高浓度AF孢子（1×10^6cfu/次）、低浓度AF孢子（1×10^3cfu/次）和生理盐水100μL,每周2次,连续5周;D组无处理。测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及分类,白细胞介素8（IL-8）和转化生长因子β（TGF-β）的水平;肺组织病理切片HE、PAS和Masson染色,观察气道炎症并行半定量评分及病理图像的形态学测量分析。结果与E组比较,D组大鼠出现典型COPD病理改变,模型建立成功。A组和B组BALF中白细胞总数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组和B组BALF中的IL-8和TGF-β浓度均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组的气道炎症评分高于B、C和D组（P均〈0.01）;A组和B组的管壁总厚度（WAt/Pbm）、平滑肌层厚度（WAm/Pbm）、管壁胶原沉积厚度（WCt/Pbm）、管壁外层胶原沉积厚度（WCo/Pbm）及杯状细胞占上皮细胞比例均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组和B组BALF中IL-8与中性粒细胞百分比、气道炎症评分及杯状细胞占上皮细胞百分比呈正相关（r=0.856,P〈0.01;r=0.884,P〈0.01;r= 0.702,P〈0.05）;TGF-β与WAt/Pbm、WCt/Pbm、WCo/Pbm及杯状细胞占上皮细胞百分比呈正相关（r=0.706,P〈0.05;r=0.802,P〈0.01;r=0.876,P〈0.01;r=0.713,P〈0.05）。结论反复吸入AF孢子可加重COPD大鼠气道炎症,并促进气道重构。