可生物降解聚合物作为药物载体的应用进展

目前作为控制释放体系的药物载体材料大多是高分子聚合物材料。生物降解聚合物在一定时间内能被水解或酶解成小分子,可通过生理途径代谢排出体外,不需二次手术取出载体材料,因此比生物惰性材料更安全、更可靠,有更好的生物相容性,成为了药物载体的首选材料。简要综述了主要常用生物降解性聚合物在药物控释体系中的应用进展。     

可生物降解材料作为基因载体的研究

研究可生物降解聚合物作为控制释放的基因载体。合成聚乳酸-聚乙二醇二元共聚物（Poly（Dl-lactic acid）-co—poly（ethylene glycol，PELA）及聚乳酸-聚乙二醇-聚乙醇酸三元无规共聚物（Poly（lactic acid）-co—poly（ethylene glycol）-co—poly（glycolic acid）random copolymer，PLGAE），包裹质粒pCH110。探讨了PELA和PLGAE作为基因载体包裹DNA的各种影响因素，这两种控制释放体系的体外降解及释放行为以及对它们的细胞毒性及体外转染效率进行了测定。制备的PELA微球平均粒径1～3μm，包裹效率为62％。PLGAE微球平均粒径0．72μm，包裹效率为70％。采用包裹了质粒pCH110的微球对COS-1细胞的细胞毒性及转染实验中得出：二者的细胞毒性较小，PELA和PLGAE的转染效率均较高，且能持续表达96h，其中PLGAE的缓释效果更明显。可生物降解聚合物材料作为基因载体具有较强的优越性。     

双磷酸改性血管支架作为基因载体的研究

目的 将基因通过化学偶联和特异性免疫结合在双磷酸氨基酯改性的316L不锈钢冠状动脉支架上,评价支架改性和负载质粒DNA的效果.方法 金属支架首先利用双磷酸氨基酯改性引入氨基活性基团,化学偶联抗DNA抗体,然后免疫偶联质粒DNA,得到血管支架上负载抗体和基因的模型.结果 利用X射线光电子能谱(XPS)和原子力显微镜(AFM)等分析确定了支架表面磷酸氨基的存在,同位素标记验证了改性后支架表面结合的抗体具有很好的稳定性和结合容量.结论 双磷酸氨基改性的血管支架表层富含可反应氨基,可以作为新型反应界面,与生物活性分子进行偶联反应.     

一种新型调控基因表达的反义寡核苷酸:LNA

LNA(lockednucleicacid)是新近发现的一种新型调控基因表达的反义寡核甘酸 ,它以RNA为骨架 ,亚甲基键连接核糖环中的 2′ 氧和 4′ 碳。这种锁套式的结构 ,增加了LNA与其互补序列的亲和力并为基因表达的调控和微阵列的研究提供了一个新的研究途径     

CpG 寡核苷酸链作为新型佐剂的研究进展

 1924 年 Ramon 提出免疫佐剂的概念，80 多年来，虽然进行了深入的研究，人用疫苗佐剂主要还是铝胶佐剂。直到最近几年才上市了几种新型的疫苗佐剂，如 MF59（高压条件下将鲨烯与 Tween 80 和 Span 85 混合后进行微流化形成的均一小滴状乳液，应用于美国 Chiron 公司开发的流感亚单位疫苗），重组霍乱毒素 B 亚单位（rCTB，应用于瑞典 SBL Vaccin AB 公司研发的霍乱疫苗 Dukoral），AS04（一种含有单磷脂 A 和皂角苷的油包水乳剂，应用于英国GlaxoSmithKline 公司的乙型肝炎疫苗 Fendrix）等，但应用范围较小。虽然铝胶佐剂应用最为广泛，但它存在不少缺点，已远远不能满足新型疫苗发展的要求。目前，对新型佐剂的研制与开发已成为现今疫苗研究中一个非常重要的领域。与传统佐剂相比，理想的新型佐剂应该具有以下特点：第一，化学结构明确、低相对分子质量、低毒、高效；第二，能以多种途径免疫，尤其是能以极有应用前景的黏膜免疫途径进行免疫；第三，能广泛应用于各类不同抗原，能有效控制免疫反应质量（反应类型的控制、局部免疫以及细胞类型的控制），稳定且生产成本低。 含胞嘧啶-鸟嘌呤（CpG）二核苷酸的寡核苷酸链（CpG oligodeoxynucleotides，CpG ODN）便是一种非常具有开发潜力的佐剂，这是一类合成的、包含有 1 个或多个非甲基化的 CpG 基序的单链 DNA。此类非甲基化的 CpG 二核苷酸在细菌和病毒基因组中出现的频率远高于在脊椎动物基因组中的出现频率，这种差异使得脊椎动物的免疫系统能够轻易识别入侵的外来细菌和病毒，从而引发一系列的免疫应答机制。研究表明，CpG ODN 能够选择性地促进脊椎动物的细胞和/或体液免疫，有效提升大多数疫苗的免疫效果。本文就 CpG ODN 的分类、免疫机制及其作为佐剂应用的研究进展进行综述。......     

脂质体作为基因载体的研究进展

脂质体无毒、无免疫原性,可与归巢装置如抗体,糖脂连接形成靶向脂质体,将其携载的基因特异地转入靶细胞。目前应用的脂质体有Lipofectin和用去污剂透析或反相蒸发制备的负电荷脂质体。在体外,脂质体作为基因载体可将各种基因有效地转化至细菌、真菌、植物原生质体和动物细胞;在体内,可将基因转入肝细胞,血管内皮细胞,神经组织和肺。外源性基因在体内外可瞬时或稳定表达。     

星形聚合物作为纳米药物载体的研究进展

在纳米医药领域,星形高分子聚合物因其生物学性能独特、适用性广而引起了广泛关注.与线形和高支化聚合物相比,星形聚合物的独特结构特性在作为纳米递送载体方面更具优势.星形聚合物已成为一种潜在的有望用于疾病治疗和诊断的纳米靶向生物材料.为此,综述了星形聚合物及其作为药物和基因纳米载体的相关研究进展.     

聚合物囊泡作为药物载体的研究进展

聚合物囊泡作为一类新型的药物载体,具有独特优越的结构、性质和稳定性,可包载多种亲水、疏水性药物分子,已经成为当前分子自组装纳米药物载体的研究热点.论述了聚合物囊泡的结构和特点、制备方法与形成条件,介绍了形成聚合物囊泡的两亲聚合物类型及所形成的聚合物囊泡的特性,并对聚合物囊泡作为药物载体在诊断和治疗中的研究进展作一综述.     

bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞生长的影响

目的: 研究bcr-abl融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸(Aspo)对K562细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病(CML)基因治疗中的意义。方法:倒置显微镜下细胞活体观察;Aspo与细胞共同培养24 h、48 h、72 h、96 h及120 h,用0.4％台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞P210蛋白表达变化。结果:Aspo处理后细胞仍呈克隆状生长,当Aspo浓度达5μmol/L时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用120 h,当Aspo达10μmol/L时,在一定细胞浓度范围内(1×10⁴ /mL~5×10⁵/mL),均有显著抑制作用,当Aspo浓度达5μmol/L以上时,K562细胞P210蛋白表达明显下降甚至不表达。b2a2型Aspo对表达b3a2型mRNA的K562细胞也表现出交叉抑制作用。结论:bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深入研究。     

bcr-ahl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞生长的影响

目的：研究 ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸（Ａｓｐｏ）对 Ｋ５６２细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）基因治疗中的意义。方法：倒置显微镜下细胞活体观察;Ａｓｐｏ与细胞共同培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ及 １２０ｈ,用０．４％台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞Ｐ２１０蛋白表达变化。结果：Ａｓｐｏ处理后细胞仍呈克隆状生长,当 Ａｓｐｏ浓度达５μｍｏｌ／Ｌ时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用１２０ｈ,当Ａｓｐｏ达１０μｍｏｌ／Ｌ时,在一定细胞浓度范围内（１×１０４／ｍＬ－ ５× １０５／ｍＬ）,均有显著抑制作用,当Ａｓｐｏ浓度达５μｍｏｌ／Ｌ以上时,Ｋ５６２细胞 Ｐ２１０蛋白表达明显下降甚至不表达。 ｂ２ａ２型 Ａｓｐｏ对表达 ｂ３ａ２型 ｍＲＮＡ的 Ｋ５６２细胞也表现出交叉抑制作用。结论：ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因反义寡核苷酸对Ｋ５６２细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深人研究。     

阳离子多聚物纳米基因载体系统的研究进展

阳离子多聚物能与DNA通过静电吸附作用而自组装成纳米微粒，保护DNA防止被核酸酶降解。阳离子多聚物由于具有合成简便、储存稳定、目的基因容量大、特异靶向性强、免疫原性低等优点被用作非病毒基因载体。阳离子多聚物按特性可分为两类：人工合成型和天然生物型。常见的人工合成型阳离子多聚物基因载体主要有：多聚左旋赖氨酸[poly(L-Iysine)，PLL]，多聚乙烯亚胺(polyethyIenimine，PEI)和星状树突体[PnIyamidnamine(PAMAM)dendrimers]等：天然生物型阳离子多聚物基因载体主要有壳聚糖及其衍生物和明胶等。本文重点讨论了阳离子多聚物介导的基因导入细胞机理和基因进行靶向性转移的策略，详细论述了各种阳离子多聚物用作基因载体的性能特点，最后对非病毒基因载体的发展作出展望。     

沙门菌细聚合菌毛作为新型载体表达外源基因片段

目的 用减毒Salmonella typhimurium ST14028-3b菌株的细聚合菌毛（thin angregative funbriae）构建表达HIV-1 2F5抗原表位的载体。方法 通过两步重叠PCR法（two step overlap extension PCR）构建重组体agfA：：2F5，将重组体克隆至具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pHSG415中，构成重组质粒pHSGAgfA2F5，然后经电穿孔法转化人ST14028-3b菌株中，经温度和抗生素选择压力进行等位基因置换，通过PCR筛选出含有外源基因的突变株，测序验证其序列的正确性。最后，用Western blot法检测菌毛蛋白的表达，黏附试验来证明含有外源基因的菌株Bu96的黏附能力。结果 序列分析表明基因置换后的突变株在菌毛基因上含有外源基因2F5，且不含有质粒pHSG415的复制子序列。Westernblot结果显示菌毛蛋白表达，黏附试验表明了菌株Bu96的黏附能力。结论 利用具有分离缺陷的温度敏感性低拷贝质粒pBSG415，在ST14028-3b的细聚合菌毛编码基因agfA上插入表达2F5或其他外源基因的方法可行。本方法的最大优点在于不需要使用专门的菌株或抗生素抗性标记重组基因来进行位点特异性基因置换，同时也避免了在染色体上非目的DNA的出现。     

登革病毒反义寡核苷酸的抗病毒活性测定

测定了一段与登革病毒2型(DEN—2)基因5′端非编码区及相邻部份编码区20个核苷酸序列互补的反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒活性。DEN—2感染的蚊细胞于感染前后不同时间给予不同剂量的ASON,在对照组出现明显细胞病变时,观察给药组的细胞出现病变(CPE)并测定病毒含量。另用中等剂量的ASON加入感染的细胞内,每24h动态观察CPE、病毒含量、抗原表达及核酸释放。结果显示,ASON对细胞的保护作用与用药时间及剂量明显相关,给药组的CPE、膜表面病毒抗原的表达及病毒核酸的检出时间均比对照组晚,两组培养液内病毒的TCID_(50)最大可相差10~5以上。实验表明,所用ASON可抑制DEN在蚊细胞中的增殖。     

肽核酸作为反基因和反义治疗药物的研究进展

肽核酸是一类由２氨乙基甘氨酸组成的肽（聚酰胺）键的骨架替代普通核酸中核糖磷酸二酯键骨架构成的核酸类似物。ＰＮＡ与ＤＮＡ,ＲＮＡ核酸链以ｗａｓｔｏｎｃｒｉｃｋ碱基配对形成双螺旋ＰＮＡ／ＤＮＡ．ＲＮＡ,一定条件下第二分子ＰＮＡ键反平行与ＰＮＡ／ＤＮＡ（ＲＮＡ）以Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ硷基配对形成ＰＮＡ／ＤＮＡ（ＲＮＡ）ＰＮＡ三螺旋结构来抑制基因转录,由于ＰＮＡ的理化特性,除它的ＤＮＡ（ＲＮＡ）结合特性外在生物稳定性,细胞摄取,结构修饰的进展显示出作为反义反基因药物具有良好前景。     

壳聚糖作为基因输送载体的最新研究进展

基因治疗是一种非常有前景的医学治疗技术,然而目前尚不能广泛地应用于临床,安全高效的基因输送载体的缺乏是其临床推广应用的主要限制因素之一。壳聚糖作为一种天然存在的阳离子多聚物,具有较好的生物相容性和生物降解性,可以与DNA通过快速混合形成纳米颗粒,从而具有作为基因输送载体的重大潜力。就壳聚糖作为基因输送载体的最新研究进展进行系统综述,重点讨论纳米粒子进入体内后需要跨越的各个生物屏障以及如何克服这些生物屏障。     

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景：前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率。 目的：验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用。 方法：建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组。后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒。 结果与结论：移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少(P  < 0.01),纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组(P  < 0.05)。纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05),纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组(P  < 0.05)。提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用。