过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2表达及与免疫应答的相关性

背景：Toll样受体及其信号通路在自身免疫性疾病、超敏反应、炎症反应、细胞凋亡及移植排斥反应中发挥重要的作用,其在过敏性紫癜患儿免疫发病机制中的地位尚未完全阐明。目的：探讨过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2的表达及其与免疫应答的相关性。方法：64例过敏性紫癜患儿分为2组,即过敏性紫癜无肾损害组(36例)、过敏性紫癜肾损害组(28例),选择同期入院的30例健康体检儿童设置为对照组,采用流式细胞术检测外周血单核细胞TLR2表达,荧光定量PCR技术检测外周血单核细胞TLR2 mRNA相对表达量, ELISA检测血浆干扰素γ、白细胞介素4水平, ELISA法测定Treg细胞分泌的转化生长因子β、白细胞介素10水平。结果与结论：过敏性紫癜组干扰素γ、干扰素γ/白细胞介素4水平均显著低于对照组(P < 0.05),白细胞介素4水平显著高于对照组(P < 0.05);过敏性紫癜组TLR2 mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P < 0.05);过敏性紫癜肾损害组TLR2 mRNA和蛋白表达显著高于过敏性紫癜无肾损害组(P < 0.05);过敏性紫癜组患者白细胞介素10和转化生长因子β表达显著高于对照组(P < 0.05)。结果表明过敏性紫癜患儿外周单核细胞TLR2 mRNA及蛋白表达增高,且患儿存在免疫表达失衡现象,TLR2参与过敏性紫癜免疫发病机制,转化生长因子β表达量能够评估Treg的免疫应答,可作为过敏性紫癜患儿诊断、治疗及预后参考依据。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景：目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。目的：分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法：选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论：①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组(P < 0.05)。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组(P < 0.05)。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组(P < 0.05),白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组(P < 0.05);紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组(P < 0.05),紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组(P < 0.05)。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.60,P < 0.01);过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关(P < 0.01),与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关(r=-0.66,P < 0.01)。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞 TLR2、TLR4表达及其与 Th1和 Th2型免疫应答相关性观察北大核心CSCD

目的：研究Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）2、TLR4在过敏性紫癜（HSP）患儿外周血单核细胞的表达及其与Th1和Th2型免疫应答的相关性,探讨TLR2、TLR4在HSP发病机制中的作用。方法选取2011年10月-2012年11月于我院儿内科收治的HSP患儿64例为研究对象,分为HSP无肾损害组（NHSPN,36例）及HSP有肾损害组（HSPN,28例）,另选取我院儿保科健康查体儿童30例作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及单核细胞TLR2及TLR4蛋白表达,实时荧光定量PCR技术检测外周血单核细胞TLR2 mRNA及TLR4 mRNA的基因相对表达量,ELISA法检测血浆IFN-γ、IL-4、IL-6水平。结果（1） HSP 患儿外周血单核细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA相对表达量及TLR2、TLR4蛋白表达均显著高于正常对照组（P均＜0．01）,HSPN组外周血单核细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA相对表达量及TLR2、TLR4蛋白表达均明显高于NHSPN组（P＜0．05;P＜0．01;P＜0．01;P＜0．01）。（2）HSP组CD3＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞显著降低,CD3＋CD8＋T细胞及CD3＋HLADR＋活化T细胞明显升高（P均＜0．01）。（3）HSP组血浆IL-4、IL-6水平显著高于正常对照组（P＜0．01,P＜0．01）,IFN-γ水平显著低于正常对照组（P＜0．05）,IFN-γ/IL-4比值显著低于对照组（P＜0．01）。（4）HSP组TLR2、TLR4蛋白表达与血浆IL-4、IL-6水平均呈显著正相关（P＜0．01,P＜0．05;P＜0．01,P＜0．01）;与IFN-γ/IL-4比值均呈显著负相关（P＜0．01;P＜0．01）。结论TLR2及TLR4活化可能参与了HSP的免疫发病机制,TLR2及TLR4的过度活化可能与HSP的肾损伤有关。 HSP患儿存在T淋巴细胞亚群失调,功能紊乱,Th1/Th2失衡。活化的TLR2及TLR4可能通过上调Th2型免疫应答介导HSP的免疫发病机制。     

静脉注射丙种球蛋白治疗对急性期川崎病IgGFc受体和TLR4表达的影响

目的 探讨静脉注射丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗对川崎病(Kawasaki disease,KD) Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达的影响.方法 急性KD患儿25例,正常同龄对照儿童15例.流式细胞术检测单核细胞(monocyte cells,MC) TLR4表达水平;双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TNF-α浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测MC FcγRⅡb、TLR4信号转导途径分子(MyD88、TRAF-6、TAKl)和细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)mRNA表达.结果 急性期KD患儿MC TLR4及其转导分子表达明显高于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后较治疗前明显降低(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb明显低于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后明显升高(P＜0.05);急性期KD患儿IL-1β、IL-6、TNF-α表达及血浆TNF-α浓度显著增高(P＜0.05),IVIG治疗后下降(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb表达与TLR4表达及炎症细胞因子呈相关性(P＜0.05).结论 IVIG可能上调FcγRⅡb表达,下调TLR4表达,从而抑制炎症反应.     

Notch1与TLR2相互作用调控CD14~+单核细胞功能在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用

目的观察Notch1/2分子和Toll样受体(TLR)在冠心病患者中的表达变化,探讨Notch信号通路与TLR2的相互作用对CD14~+单核细胞的调控作用。方法本研究入组稳定性心绞痛(SA)22例、不稳定性心绞痛(UA)34例、急性心肌梗死(AMI)27例,同时入组31例健康对照者。实时定量PCR法检测PBMC中Notch1/2以及TLR1-10 mRNA的相对表达量。分选CD14~+单核细胞,应用Notch信号通路抑制剂DAPT和/或TLR2激动剂Pam3Csk4刺激培养24 h,检测TLR2和Notch信号通路相关分子的表达变化,ELISA法检测上清中促炎细胞因子的表达变化,Western blot法检测细胞中抗髓样分化因子88(MyD88)和TIR结构域接头分子(TRIF)的水平。结果 Notch1 mRNA的相对表达量在AMI组显著升高,Notch2 m RNA的相对表达量在各组间的差异无统计学意义。TLR4、TLR7、TLR9 mRNA的相对表达量在SA组、UA组和AMI组中均显著高于NC组,TLR2 mRNA的相对表达量在AMI组中显著高于NC组、SA组和UA组。DAPT刺激可降低CD14~+单核细胞中TLR2 m RNA的相对表达量,对TLR4、TLR7和TLR9 mRNA的表达无显著影响。Pam3Csk4刺激可升高AMI患者CD14~+单核细胞中Notch1 mRNA的相对表达量,Notch信号通路相关分子Hes1和Hes5 mRNA的相对表达量亦显著升高。DAPT刺激还可抑制AMI患者中TLR2介导的炎症信号通路的应答,降低Pam3Csk4刺激后AMI患者CD14~+单核细胞培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α的表达,这一过程主要通过影响TIR结构域接头分子表达及核因子-κB的磷酸化而实现。结论 Notch1和TLR2的相互作用可能发挥调控冠心病患者CD14~+单核细胞功能的作用。     

大肠杆菌麦芽糖结合蛋白激活TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径诱导Th1活化

目的探讨TLR2/TLR4介导的信号通路在大肠杆菌麦芽糖结合蛋白诱导Th1活化中的调控作用。方法免疫磁珠分选方法获取纯的CD4+T细胞,经CD3/CD28抗体活化后的CD4+T细胞分别用MBP、MBP+anti-TLR2、MBP+anti-TLR4刺激。ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-4的分泌;RT-PCR检测CD4+T细胞IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的mRNA表达;Western blotting方法检测CD4+T细胞MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的蛋白表达。结果 MBP组IFN-γ水平升高、IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3的mRNA上调、TRAF6的mRNA下调;MBP+anti-TLR2组IFN-γ水平降低、TRAF6的mRNA上调、MyD88的mRNA下调、TRIF、TRAF3的mRNA无影响;MBP+anti-TLR4组IFN-γ水平升高、TRAF6的mRNA上调、MyD88、TRIF、TRAF3的mRNA下调,Western blotting实验也出现了相似的结果。结论 TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径在MBP诱导的Th1活化过程中发挥了重要的调控作用。     

老年非小细胞肺癌患者外周血TLR2、TLR4水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性

目的 探究老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Toll样受体(TLR)2、TLR4水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性.方法 取2018年2月至2020年12月于我院收治的123例老年NSCLC患者,按照病理检查结果及TNM肿瘤分期分为早期(Ⅰ期)组27例、中期(Ⅱ～Ⅲ期)组66例、晚期(Ⅳ期)组30例,同时选取于我院体检中心进行体检的健康者50例作为对照组.检测三组老年NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织中增殖基因、侵袭基因mRNA表达量,并测定所有研究对象的外周血单核细胞中TLR2、TLR4 mRNA表达;采用Spearman相关性分析明确外周血单核细胞中TLR2、TLR4 mRNA表达与老年NSCLC肿瘤恶性生物学行为的相关关系.结果 晚期组TLR2、TLR4、PAK6、Bin1、CD59、PAX6、HOXB7 mRNA水平均明显高于早期组、中期组以及对照组,且中期组水平均明显高于早期组、对照组,早期组水平亦均明显高于对照组,两两比较组间差异具有统计学意义(P<0.05).晚期组caspase-8、LRRC3B mRNA水平均明显低于早期组、中期组以及对照组,且中期组水平均明显低于早期组、对照组,早期组水平亦均明显低于对照组,两两比较组间差异具有统计学意义(P<0.05).经Spearman相关性分析发现,外周血TLR2、TLR4 mRNA水平与老年NSCLC患者肿瘤组织增殖基因CD59、PAX6、HOXB7 mRNA水平呈正相关,与LRRC3B mRNA表达量呈负相关(P<0.001);与肿瘤组织侵袭基因PAK6、caspase-8 mRNA表达量呈正相关,与Bin1 mRNA表达量呈负相关(P<0.001).结论 外周血单核细胞中TLR2、TLR4 mRNA水平越高,老年NSCLC分期及肿瘤恶性程度越高,有助于对老年NSCLC患者诊断、治疗和预后判断,值得推广应用.     

TLR2、TLR4 及 MyD88 高表达与 Cm 呼吸道感染肺组织炎症相关

目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/ HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H 与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1伊103 IFU 沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR 检测感染后不同时间点小鼠肺组织Toll 样受体TLR2、TLR4 及转导蛋白MyD88 mRNA 的表达。结果:使用1伊103 IFU 的Cm 呼吸道感染C3H与C57BL/6(C57)诱导小鼠衣原体肺炎,Cm 感染在高易感性的C3H 小鼠及低易感的C57 小鼠均诱导Toll 样受体的表达,但在感染后第7 天及第14 天,高易感的C3H 小鼠肺组织中TLR2 和TLR4 mRNA 的表达均显著高于C57 小鼠,尤其TLR2(P<0.001 或P<0.05),进一步研究发现Cm 呼吸道感染C3H 小鼠肺组织MyD88mRNA 的表达也显著高于C57 小鼠,并在感染后第14 天仍维持高表达。结论:Cm 呼吸道感染诱导TLR2、TLR4 及MyD88 在高易感的C3H 小鼠肺组织高表达,可能与C3H 小鼠肺组织过度炎症反应相关。     

糖尿病肾病尿毒症患者外周血单核细胞TLR4的表达及其与血浆MCP-1浓度的关系

目的:探讨外周血单核细胞TLR4的表达及其与糖尿病肾病的关系.方法:分别用RT-PCR和流式细胞术测定外周血单核细胞TLR4mRNA和蛋白的表达;用ELISA测定血浆MCP-1的浓度.结果:糖尿病肾病尿毒症患者外周血单核细胞TLR4的表达较健康对照增加,外周血单核细胞TLR4蛋白的表达与血浆MCP-1浓度呈正相关.结论:糖尿病肾病尿毒症患者外周血单核细胞TLR4的表达上调,并且与糖尿病肾病的发病有关.     

阿托伐他汀对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路的影响

背景：研究表明Toll样受体4参与了动脉粥样硬化的发生和发展,目前Toll样受体4与MyD88依赖性或MyD88非依赖性信号转导通路在动脉粥样硬化发生和发展中的机制尚不明确。 目的：观察阿托伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路主要元件MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF表达的影响,分析阿托伐他汀防治动脉粥样硬化的机制。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖刺激并加入阿托伐他汀干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA表达;用Western blotting法测定TLR4、MyD88及TRAF-6蛋白表达。 结果与结论：用脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF的高表达(P < 0.01),用阿托伐他汀干预后可显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6的表达(P < 0.01)。提示阿托伐他汀可阻断Toll样受体4高表达,同时阻断Toll样受体4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,这可能是阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

Toll样受体4/髓样分化蛋白88在早期自然流产母-胎界面的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白88(MyD88)与早期自然流产的相关性。方法:选择30例正常妊娠妇女作为对照组,采用免疫组织化学显色对30例早期自然流产患者(流产组)母-胎界面的蜕膜和绒毛组织中TLR4、MyD88蛋白表达进行定位观察,采用RT-PCR技术对其TLR4和MyD88mRNA表达进行半定量分析。结果:TLR4和MyD88蛋白在流产组和对照组的绒毛及蜕膜组织中均有表达,定位表达于绒毛滋养层细胞、蜕膜细胞的细胞质内,阳性反应强弱不等。RT-PCR半定量分析结果显示,在绒毛组织中,流产组TLR4 mRNA、MyD88 mRNA的表达显著高于对照组;在蜕膜组织中,流产组TLR4 mRNA、MyD88 mRNA的表达显著高于对照组。流产组绒毛和蜕膜组织中TLR4与MyD88的表达均呈正相关。结论:TLR4和MyD88可能参与早期自然流产的病理过程,且TLR4可能通过MyD88信号途径参与早期自然流产的发生。     

贞芪扶正胶囊介导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制慢性湿疹小鼠炎症反应

目的 探讨贞芪扶正胶囊对慢性湿疹小鼠炎症反应的抑制作用.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只,按随机数字表法随机分为对照组(control组)、模型组(CAD组)与贞芪扶正胶囊组(ZQFZ组).观察各组小鼠双耳肿胀程度、双耳变应评分;HE染色观察病灶处皮肤病理学变化;ELISA法检测血清炎性因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平;RT-PCR检测皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β mRNA表达;Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达;RT-PCR检测皮肤中TLR4、MyD88及NF-κB mRNA表达.结果 ZQFZ可以显著改善小鼠双耳肿胀程度,降低小鼠双耳变应评分(P＜0.05);减轻小鼠皮肤炎症浸润并降低血浆及皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β蛋白与mRNA表达(P＜0.05);同时ZQFZ还可显著下调小鼠皮肤组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白与mRNA表达(P＜0.05).结论 贞芪扶正胶囊可以通过抑制炎性反应达到治疗慢性湿疹作用,其作用机制可能与其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关.     

TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用

目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.     

中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上TLR4表达和血浆TNF-α水平

目的 观察中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上Toll样受体4(TLR4)表达水平和血浆TNF-α浓度,初步探讨TLR4在HIV感染中的作用.方法 分别运用流式细胞术、ELISA法测定46例HIV/AIDS患者和30例健康对照者的外周血单核细胞上TLR4的表达及血浆TNF-α浓度,采用t检验和相关分析进行数据分析.结果 HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4的表达率、血浆TNF-α浓度分别是52.19%±4.37%和(35.79±5.08)pg/ml,均显著高于健康对照组;单核细胞上TLR4的表达率与血浆TNF-α浓度、HIV-1病毒载量的相关系数分别是0.645和0.708,呈正相关.结论 中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4表达上调,并且与患者体内HIV复制存在一定的相关性.     

TLR4、MyD88、NF-κBmRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的:研究TLR4、MyD88、NF-κB mRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达情况,探讨TLR4在肌炎发病中的作用。方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组(每组6只):第1组为正常对照组,其它4组分别为肌炎模型1周处理组、2周处理组、3周处理组和4周处理组,后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型(EAM)。采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠淋巴结TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果:(1)与正常小鼠相比,肌炎各组小鼠淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均有统计学差异,表现为不同程度升高(P<0.01),第3组升高最为显著(P<0.01),第4组较第5组升高(P<0.01);(2)各组淋巴结中TLR4 mRNA表达水平与MyD88 mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(r=0.906,r=0.967,P<0.01),MyD88 mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平呈正相关(r=0.919,P<0.01)。结论:TLR4在自身免疫性肌炎发生发展过程中发挥重要作用,且以MyD88依赖型信号途径为主,并通过激活NF-κB促进炎性因子释放。     

SOCS1 / 3 对TLR3 表达和T 细胞分化的调控及其在桥本甲状腺炎中的作用

目的:探讨细胞信号传导抑制因子1/3(SOCS1、SOCS3,SOCS1/3)对Toll样受体3(TLR3)和T细胞分化的调控及其在桥本甲状腺炎(HT)中的作用。方法:收集已确诊的桥本甲状腺炎患者40例(HT组)及正常体检人群30例(对照组);通过Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMCs),流式细胞术检测调节性T细胞(CD4+CD25+Treg,Treg)、辅助性T细胞17(Th17)及滤泡辅助性T细胞(Tfh),免疫组化法(IHC)检测甲状腺组织中SOCS1/3及TLR3蛋白表达,ELISA检测血浆中SOCS1/3、STAT3蛋白水平,qRT-PCR检测PBMCs中TLR3、SOCS1/3、STAT3、RORγt、Bcl6、Foxp3 mRNA的表达水平。结果:HT组PBMCs中Treg细胞数量降低而Th17细胞、Tfh细胞数量升高(P 0. 05),TLR3、SOCS1/3、Bcl6、RORγt mRNA表达升高,Foxp3、STAT3 mRNA表达降低(P 0. 05); HT组甲状腺组织SOCS1/3蛋白、TLR3蛋白浓度升高(P 0. 05),STAT3蛋白表达降低(P 0. 05)。结论:HT患者SOCS1/3表达升高,可能对HT的TLR3表达及T细胞亚群分化起调控作用。     

卵巢癌细胞株SKOV3对THP-1细胞TLR信号通路的作用

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科生殖道肿瘤,Toll样受体在组织损伤修复、组织损伤诱导炎症及肿瘤进展中发挥重要作用,其中单核-巨噬细胞中的TLR在炎症与肿瘤间发挥桥梁作用。本研究利用THP-1和卵巢癌细胞系SK-OV-3共培养体系及抗TLR1、TLR2、TLR6抗体中和实验,荧光定量PCR法检测细胞中促炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA表达水平;利用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果显示THP-1与SK-OV-3共培养组较单独培养组,TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调,IL-1β、IL-8及TNF-α促炎症细胞因子的mRNA表达水平显著增加(Fold=4.27,Fold=4.92,Fold=3.08,P0.05),而IL-6 mRNA表达水平无显著改变。抗体中和实验显示,anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组THP-1中促炎症细胞因子IL-1β(Fold=0.43,Fold=0.38,Fold=0.44)、IL-8(Fold=0.43,Fold=0.48,Fold=0.42)、TNF-a(Fold=0.23,Fold=0.21,Fold=0.23)mRNA表达水平较未加单抗共培养组显著下调,差异有统计学意义(P0.05);IL-6 mRNA表达水平则无显著改变。anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB、P-NF-κB表达水平较未加单抗共培养组下调。以上结果提示卵巢癌生长微环境中,TLR1/TLR2/TLR6介导的信号通路活化可诱导THP-1中促炎症细胞因子表达上调,在卵巢癌的发生、发展中发挥一定作用。     

LOC152742通过TLR4信号通路和炎症反应调控结核分枝杆菌对Ⅱ型肺泡上皮细胞的感染

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LOC152742对结核分枝杆菌感染的人Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症反应和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。方法 在A549细胞中转染LOC152742 siRNA，实验分为对照（Con）组、感染（H37Rv）组、转染对照（H37Rv+si-NC）组和转染（H37Rv+si-LOC152742）组。RT-PCR分析LOC152742表达水平变化，MTT法分析A549细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡情况，蛋白免疫印迹（Western blot）法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cleaved caspase-9)、TLR4、髓样分化因子（MyD88）蛋白表达，ELISA分析细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。在H37Rv+si-LOC152742组A549细胞中添加TLR4特异性抑制剂TAK242，检测TAK242对炎症反应的影响。结果 与Con组相比，H37Rv组A549细胞凋亡率、LOC15...     

TLR2/TLR4在失血性休克引发的脾组织TIPE2和TLR2/TLR4信号通路分子表达上调中的作用北大核心CSCD

目的研究发现,肠淋巴液回流是导致失血性休克后免疫功能紊乱的重要因素。本研究应用TLR2^(-/-)和TLR4^(-/-)小鼠探讨失血性休克对脾组织TIPE2和TLR2/TLR4信号下游分子表达的影响。方法将不同(C57BL/6J、TLR2^(-/-)、TLR4^(-/-))来源雄性小鼠随机分为Sham组、Shock组、Shock+Drainage组,分别予以不同手术处理后,无菌获取各实验组小鼠的脾组织。应用RTPCR技术分别检测WT小鼠脾组织TIPE2、TLR2、TLR4、MyD88、TRIF、TRAF3、TRAF6的mRNA表达。应用Western blotting技术分别检测不同小鼠(C57BL/6J、TLR2^(-/-)、TLR4^(-/-))脾组织TIPE2、TLR2、TLR4、MyD88、TRIF、TRAF3、TRAF6的蛋白表达。结果与Sham组相比,失血性休克后脾脏组织TIPE2、TLR2/TLR4及其下游分子表达水平均上调,肠淋巴液引流显著降低了失血性休克导致的TIPE2、TLR2/TLR4及其下游分子的高表达。TLR2的缺失降低了Shock组脾组织TIPE2、TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达。TLR4缺失降低了Shock组TIPE2、TLR2、MyD88、TRIF、TRAF6的蛋白表达。结论以TLR2、TLR4作为干预靶点,TIPE2可能通过负反馈机制调控TLR2/TLR4信号通路下游分子mRNA和蛋白的表达,有利于促进失血性休克后免疫平衡状态的恢复。     

依托咪酯通过miR-146a 调节TLR4 通路对内毒素急性肺损伤小鼠炎症 反应的保护作用研究

目的:观察依托咪酯对内毒素急性肺损伤小鼠炎症反应的影响,并探讨其作用机制。方法:雄性成年BLAB/c小鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、依托咪酯组,每组20只。模型组及药物干预组应用腹腔注射脂多糖(LPS,20 mg/kg)制作急性肺损伤小鼠模型,空白对照组给予等体积生理盐水腹腔注射。药物干预组于造模后0.5 h给予依托咪酯2.5 mg/kg。空白对照组及模型组给予等体积生理200μl/只。于给药后6 h检测小鼠血清中的内毒素水平,BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量;RT-PCR检测miR-146a、MyD88、IRAK1、IRF5、TRAF6 mRNA在肺组织中的表达;Western blot检测TLR4、MyD88、TRAF6、IRAK1、IRF5蛋白在肺组织中的表达。结果:模型组、依托咪酯组与空白对照组相比,血清内毒素含量、TNF-α、IL-6和IL-1β含量、miR-146a表达水平、TLR4、MyD88、IRAK1、IRF5、TRAF6 mRNA表达水平及TLR4、MyD88、IRAK1、IRF5、TRAF6蛋白表达均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);依托咪酯组与模型组比较,小鼠血清内毒素含量、TNF-α、IL-6和IL-1β含量、TLR4、MyD88、IRAK1、IRF5、TRAF6 mRNA表达水平及TLR4、MyD88、IRAK1、IRF5、TRAF6蛋白表达水平均明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:依托咪酯能够通过增加miR-146a的含量调节TLR4通路对内毒素急性肺损伤小鼠炎症反应的保护作用。