生物反应器的设计与组织工程肌腱的构建

目的设计一套生物反应器,能构建具有较好形态和机械力学性能的肌腱组织。方法根据肌腱细胞体内的生物和力学环境,建立了细胞和可降解材料复合物的力学模型,设计了一套能够模拟体内力学环境的生物反应器,采用鸡肌腱为种子细胞培养扩增后接种于聚羟基乙酸(PGA)材料上,形成细胞-材料复合物并置于反应器中培养。设静态培养对照组,通过实验取材进行大体观察、组织学和生物力学检测。结果生物反应器能够构建出具有一定组织结构和机械强度的肌腱。检测结果显示恒定交变应力作用下培养的肌腱优于静态培养的肌腱组织。结论细胞和可降解材料复合物的力学模型具有一定的正确性,通过分析也存在某些局限性;应力作用下可以促进肌腱细胞基质的分泌,蠕变特性成为促进胶原定向排列的重要因素。     

脂肪源性干细胞体外分离培养及向内皮祖细胞的诱导分化

背景：脂肪源性干细胞是目前组织工程种子细胞的研究热点,通常采用胶原酶消化脂肪组织来获得,但是存在着操作繁琐,花费高等不足。 目的：观察组织块培养法分离的脂肪源性干细胞的基本生物学特性及其向骨细胞、脂肪细胞及内皮祖细胞的诱导分化潜能。 方法：无菌条件下切取大鼠双侧腹股沟脂肪组织,组织块法分离培养脂肪源性干细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪分析干细胞表面标志表达。取第4代脂肪源性干细胞用成骨诱导液、成脂诱导液、内皮祖细胞诱导液培养两三周并进行鉴定。 结果与结论：组织块培养法得到的脂肪源性干细胞易扩增,传代后以长梭形细胞生长为主,呈漩涡状排列,克隆样生长;经多次传代仍能保持较强的增殖能力,细胞生长曲线呈抛物线形;细胞表面标志CD44、CD90、CD29呈阳性表达,CD45、CD31呈阴性表达。成脂诱导后细胞油红O染色阳性、成骨诱导后细胞茜素红染色阳性。诱导后的内皮祖细胞CD34及DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性。以上结果显示组织块培养法能成功分离培养出脂肪源性干细胞,且获得的细胞纯度较高、易于增殖培养,能高表达干细胞表面抗原以及具有向骨细胞、脂肪细胞及内皮祖细胞多向分化的潜能,可以满足组织工程研究种子细胞的需求。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

利用hBMSCs在生物反应器中构建小口径血管的实验研究

目的采用改进的生物反应器系统,应用人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)构建小口径的组织工程血管。方法设计一套血管生物反应器系统,采用有限元方法对组织工程小血管托架材料进行分析,从而设计一套用于构建直径为2mm的小血管托架;收集人的原代骨髓基质干细胞进行体外扩增和培养,选用第3代细胞与聚羟基乙酸酯(PGA)复合后置于血管生物反应器中动态培养;培养4周后,对材料复合物取材,进行大体观察、HE染色、扫描电镜和平滑肌免疫组化等指标检测。结果血管色泽明亮,有一定的弹性,用镊子反复压下血管能够反弹恢复原样;细胞分泌的胶原基质排列较规则,免疫组化结果表明血管含有平滑肌弹性肌动蛋白的成分。结论改进的血管生物反应器能模拟血管的力学环境,并能利用hBMSCs成功构建组织工程化小血管组织。     

猪脂肪干细胞与脱细胞真皮基质的生物相容性

背景：脱细胞真皮基质已广泛应用于器官或组织缺损的修补。 目的：观察猪脂肪源性干细胞与脱细胞真皮基质的相容性。 方法：酶消化法原代培养猪脂肪源性干细胞,利用流式细胞仪和多向诱导分化方法鉴定脂肪干细胞,将其与脱细胞真皮基质共培养。 结果与结论：实验成功培养出猪脂肪源性干细胞,流式细胞仪检测结果显示阳性表达CD44和CD105,不表达CD34和CD45;在诱导培养基条件下,可向脂肪细胞、成骨细胞分化。苏木精-伊红染色及扫描电镜发现干细胞能在脱细胞真皮基质表面黏附生长。脂肪源性干细胞与脱细胞真皮基质具有良好的相容性,将两者体外复合培养后,有望将复合物植入体内进行缺损组织、器官的修复。     

骨髓间充质干细胞-聚乙醇酸支架复合体种植动物皮下构建组织工程化小口径血管

背景：课题组的前期工作已证实骨髓间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮细胞和血管平滑肌细胞,并证实所诱导的细胞和胶原包埋的聚乙醇酸支架具有良好的组织相容性。 目的：探讨利用动物皮下作为生物反应器构建小口径组织工程化血管的可行性。 方法：骨髓间充质干细胞诱导分化为血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞,分层种植于胶原包埋聚乙醇酸支架表面,然后将细胞-支架复合体种植于动物皮下,构建小口径组织工程化血管。 结果与结论：人工血管组织学观察见管壁结构清晰,其大体结构和天然血管相似,可承受26.6 kPa的血管腔内压力不破裂。皮下培养8周免疫荧光观察Brdu标记的部分细胞核呈现明亮的黄绿色荧光。结果说明利用动物的皮下作为生物反应器,采用静态培养的方式构建小口径组织工程化血管是可行的。     

三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

背景：关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。 目的：采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。 方法：无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。 结果与结论：分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而 CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建

背景:构建组织工程软骨的方法多为自体种子细胞复合天然或合成物支架,目前多存在种子细胞来源有限、支架安全性和生物相容性、以及细胞在支架中分布不均的问题。目的:探讨人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导分化并体外构建无支架组织工程软骨的可行性。方法:分离培养人脐带Wharton胶中的间充质干细胞,进行流式细胞学鉴定。对软骨诱导前后的细胞进行组织学和免疫组织化学染色,对其表达的葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原进行定量研究,并应用RT-PCR检测软骨诱导前后Ⅱ型胶原和Sox-9mRNA的表达。采用密集诱导培养→离心管培养→生物反应器培养,进行体外构建无支架软骨组织。结果与结论:人脐带Wharton胶富含干细胞,流式细胞仪检测结果显示这些细胞不表达造血干细胞标志,表达CD44,CD105、CD271等间充质干细胞表面标志;HLA-ABC阳性表达,HLA-DPDQDR阴性表达。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志,诱导后葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原显著增高。RT-PCR结果显示人脐带Wharton胶间充质干细胞诱导前后均表达Sox-9、Ⅱ型胶原mRNA。说明人脐带Wharton胶间充质干细胞具有前软骨细胞的特性。采用密集诱导培养结合生物反应器培养,不用支架,体外可以构建成大块组织工程软骨。表明人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种良好的构建组织工程软骨的种子细胞。     

兔骨髓间充质干细胞向尿路上皮分化后构建膀胱组织工程化移植物

背景：尿路上皮细胞是泌尿系组织工程领域重要的种子细胞,但是难以体外大量扩增;有研究表明骨髓间充质干细胞可以向尿路上皮细胞分化,但关于分化后细胞在植入动物体内后上皮生成情况,以及分化后细胞在组织工程领域的具体应用研究尚不多。 目的：分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,诱导骨髓间充质干细胞向尿路上皮细胞分化并与兔膀胱脱细胞基质构建组织工程化移植物,了解分化后细胞作为种子细胞的效果。 方法：12只8周龄雄性新西兰大白兔胫骨穿刺,抽取骨髓,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,第4或5代细胞以条件培养基培养2周,进行分化后细胞的鉴定。随后将分化后细胞种植在膀胱脱细胞基质上构建组织工程化移植物,进行膀胱修补;另12只动物作为对照组以尿路上皮细胞与膀胱脱细胞基质构建复合物行膀胱修补。 结果与结论：骨髓间充质干细胞培养成功并在体外扩增,由条件培养基培养诱导分化后,PCR检测提示分化后细胞干细胞标志物CD44表达降低,而上皮细胞标志物UP1a表达升高,行免疫荧光检测发现分化后细胞能表达尿路上皮特异性标志物UP1a,而骨髓间充质干细胞无表达。分化后细胞构建的组织工程化移植物在膀胱修补2周后可形成稳定连续的上皮覆盖,上皮层厚度与尿路上皮细胞构建的组织工程化移植物类似。提示骨髓间充质干细胞向尿路上皮诱导分化后可作为泌尿系组织工程的种子细胞,可能是尿路上皮细胞之外的又一新选择。     

双腔搅拌式生物反应器提高β-磷酸三钙修复关节软骨缺损的效果

背景:前期实验自行研发了一种可进行成骨及成软骨双向诱导分化的双腔搅拌式生物反应器。目的:探索双腔搅拌式生物反应器的力学刺激能否提高组织工程骨软骨修复山羊膝关节缺损的效果。方法:取青山羊12只,制作双侧后肢股骨内髁骨软骨缺损,随机分组,实验组与对照组缺损处均植入在双腔搅拌式生物反应器中进行成软骨、成骨诱导2周的自体骨髓间充质干细胞与β-磷酸三钙复合体,不同的是实验组将双腔搅拌式生物反应器置于磁力搅拌仪上给予力学刺激,对照组未给予力学刺激;空白对照组不做处置。植入后12,24周进行大体观察,Masson染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和组织学评分。结果与结论:实验组与对照组均有新生软骨与骨组织生成,实验组修复骨缺损效果明显优于对照组(P0.05);空白对照组无新生软骨生成。表明通过双腔搅拌式生物反应器体外培养阶段的力学刺激,可以改善以山羊骨髓间充质干细胞为种子细胞、β-磷酸三钙为支架的组织工程骨软骨复合物对膝关节缺损的修复效果。     

自制双腔生物反应器构建组织工程骨软骨复合体的体外性能

背景：关节软骨损伤往往并发软骨下骨损伤形成骨软骨复合缺损,其治疗仍为骨科急待解决的问题,利用组织工程学构建骨软骨复合体为治疗该类疾患提供了新思路。 目的：探讨利用自行设计制造的双腔搅拌式生物反应器构建一体化组织工程骨软骨复合体的可行性。 方法：在双腔搅拌式生物反应器内对复合于β-磷酸三钙支架材料的羊骨髓间充质干细胞同时进行成骨和成软骨诱导,并根据施加剪切应力分为动态培养组和静态培养组。利用MTT试验、RT-PCR和扫描电镜检测骨髓间充质干细胞体外增殖和诱导分化情况。 结果与结论：MTT试验和扫描电镜结果显示,骨髓间充质干细胞增殖良好。成骨和成软骨相关基因RT-PCR检测结果表明,骨髓间充质干细胞诱导分化良好,动态培养组要优于静态培养组。提示利用自行设计制作的双腔搅拌式生物反应器进行骨软骨复合体的体外构建是可行的,力学刺激环境下的构建效果要优于静态环境。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

The effect of mechanical extension stimulation combined with epithelial cell sorting on outcomes of implanted tissue-engineered muscular urethras

Urethral defects are common and frequent disorders and are difficult to treat. Simple natural or synthetic materials do not provide a satisfactory curative solution for long urethral defects, and urethroplasty with large areas of autologous tissues is limited and might interfere with wound healing. In this study, adipose-derived stem cells were used. These cells can be derived from a wide range of sources, have extensive expansion capability, and were combined with oral mucosal epithelial cells to solve the problem of finding seeding cell sources for producing the tissue-engineered urethras. We also used the synthetic biodegradable polymer poly-glycolic acid (PGA) as a scaffold material to overcome issues such as potential pathogen infections derived from natural materials (such as de-vascular stents or animal-derived collagen) and differing diameters. Furthermore, we used a bioreactor to construct a tissue-engineered epithelial–muscular lumen with a double-layer structure (the epithelial lining and the muscle layer). Through these steps, we used an epithelial–muscular lumen built in vitro to repair defects in a canine urethral defect model (1 cm). Canine urethral reconstruction was successfully achieved based on image analysis and histological techniques at different time points. This study provides a basis for the clinical application of tissue engineering of an epithelial–muscular lumen.     

组织工程复合物进行兔尿流改道

背景：根治性膀胱切除是目前对于肌层浸润性膀胱癌最有效的治疗手段,膀胱切除后尿流改道需利用肠道,并发症较多。 目的：试用膀胱脱细胞基质和尿路上皮细胞构建组织工程化卷管进行尿流改道。 方法：制作兔脱细胞基质,体外培养扩增兔膀胱上皮细胞,将上皮细胞种植到兔脱细胞基质上,培养7 d后制作成4 cm长的卷管;新西兰兔28只,其中实验组24只,分6组每组4只,分别行保留膀胱三角区的膀胱大部分切除,再将膀胱三角区与组织工程化卷管吻合,网膜包裹卷管;对照组4只,利用未种植细胞的脱细胞基质制作成流出道并与膀胱三角区吻合。分别于手术后1,2,4,8周取标本做苏木精-伊红染色,8周后对复合物进行免疫组织化学检测。 结果与结论：实验组所有的动物均存活,苏木精-伊红染色显示流出道覆盖上皮,随着时间的推移,种植的上皮细胞与脱细胞基质逐渐融合,8周后免疫组织化学可见抗细胞角蛋白单克隆抗体 AE1/AE3阳性,抗ZO-1抗体阳性,证实流出道组织内有成熟上皮细胞覆盖,尿路上皮细胞之间有连接功能;对照组4只兔术后2周内均死亡,尸体解剖见流出道瘢痕形成,闭锁,双肾重度积水。结果表明,利用种植有尿路上皮细胞的脱细胞基质制作成组织工程化卷管在动物体内进行尿流改道是可行的,流出道内腔有成熟上皮覆盖,具有防止尿外渗的功能。     

无血清培养促进脂肪干细胞向血管内皮细胞分化

背景：无血清培养对大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化影响的报道甚少。 目的：观察无血清培养大鼠脂肪干细胞后向血管内皮细胞诱导分化的情况。 方法：采用酶消贴壁培养法获得雄性SD大鼠脂肪干细胞,传代培养至第3代。实验组细胞无血清培养24 h,对照组用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养。然后应用血管内皮细胞诱导培养基培养3周。 结果与结论：大鼠脂肪干细胞经体外培养可呈多角形或梭形贴壁生长,并能稳定传代。传代后大鼠脂肪干细胞极低表达细胞表面标志CD31。大鼠脂肪干细胞定向血管内皮细胞诱导分化后细胞呈鹅卵石样,CD31阳性表达明显上升且实验组明显高于对照组。实验组诱导后大鼠脂肪干细胞能够吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白及在基质胶上形成2D小管样结构,其能力明显强于对照组。结果证实无血清培养可促进体外大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化。     

肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性

背景:脂肪组织来源丰富,不同部位脂肪组织分离培养的脂肪干细胞在体外生物学特性上是否存在差异,目前相关研究较少。目的:观察肾脂肪囊来源与腹股沟来源脂肪干细胞的体外增殖和成软骨诱导分化能力。方法:收集大鼠肾脂肪囊来源与腹股沟区来源组织进行脂肪干细胞培养与鉴定,MTT法检测两组细胞的体外增殖能力。取第3代细胞进行软骨定向诱导2周,免疫荧光检测诱导后细胞CollagenⅡ表达,RT-PCR检测两组细胞诱导后Aggrecan、CollagenⅡm RNA表达水平。结果与结论:(1)肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞经原代与传代培养,形态基本一致;(2)经流式细胞仪检测,不同来源脂肪干细胞的CD44阳性率均达到95%以上;(3)两组细胞的体外生长曲线均呈"S"型;(4)诱导后两组细胞均表现出CollagenⅡ阳性表达;(5)两组细胞的Aggrecan、CollagenⅡmRNA表达水平比较差异无显著性意义(P>0.05);(6)结果显示,肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞均在体外生长稳定,迅速增殖,经定向诱导向软骨细胞发生分化,二者无明显区别。     

体外诱导脂肪干细胞向内皮细胞及成血管的分化

背景：脂肪干细胞作为组织工程中种子细胞的选择,可以诱导为内皮细胞从而有效解决材料血管化困难的难题。 目的：体外观察脂肪干细胞经诱导向内皮细胞转分化的可能性、以及在立体培养基上的血管形成情况。 方法：切取人皮下脂肪,用酶消化法分离和培养脂肪干细胞,将传至第3代或第4代的脂肪干细胞用内皮细胞诱导液、同时在Matrigel三维培养基内诱导培养,观察细胞生长情况及变化。对脂肪干细胞和诱导细胞行免疫组织化学检查CD31的表达。 结果与结论：免疫组织化学检测脂肪干细胞的CD31表达阴性,诱导细胞CD31可见阳性表达。在三维立体培养基内诱导的细胞24 h逐渐迁徙成团,伸出伪足,诱导1周细胞形成网格样交叉,2周形成较长血管,后血管增粗,并出现分叉,CD31阳性表达。因此,脂肪干细胞体外可以被诱导向内皮细胞表型转分化,并形成血管,提示脂肪干细胞可以作为促进组织工程移植物血管化的种子细胞的理想选择。     

Characterization of human adipose-derived stem cells and expression of chondrogenic genes during induction of cartilage differentiation

OBJECTIVES:

Understanding the changes in chondrogenic gene expression that are involved in the differentiation of human adipose-derived stem cells to chondrogenic cells is important prior to using this approach for cartilage repair. The aims of the study were to characterize human adipose-derived stem cells and to examine chondrogenic gene expression after one, two, and three weeks of induction.

MATERIALS AND METHODS:

Human adipose-derived stem cells at passage 4 were evaluated by flow cytometry to examine the expression of surface markers. These adipose-derived stem cells were tested for adipogenic and osteogenic differentiation capacity. Ribonucleic acid was extracted from the cells for quantitative polymerase chain reaction analysis to determine the expression levels of chondrogenic genes after chondrogenic induction.

RESULTS:

Human adipose-derived stem cells were strongly positive for the mesenchymal markers CD90, CD73, CD44, CD9, and histocompatibility antigen and successfully differentiated into adipogenic and osteogenic lineages. The human adipose-derived stem cells aggregated and formed a dense matrix after chondrogenic induction. The expression of chondrogenic genes (collagen type II, aggrecan core protein, collagen type XI, COMP, and ELASTIN) was significantly higher after the first week of induction. However, a significantly elevated expression of collagen type X was observed after three weeks of chondrogenic induction.

CONCLUSION:

Human adipose-derived stem cells retain stem cell characteristics after expansion in culture to passage 4 and serve as a feasible source of cells for cartilage regeneration. Chondrogenesis in human adipose-derived stem cells was most prominent after one week of chondrogenic induction.     

自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞联合尿道周围注射治疗大鼠压力性尿失禁☆

背景：干细胞增殖和分化形成成纤维细胞以及适当的结缔组织,从而实现组织的再生,治疗自体盆腔器官脱垂和压力性尿失禁是目前该领域的一个研究热点。 目的：观察自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞治疗压力性尿失禁的可行性。 方法：建立压力性尿失禁大鼠模型,建模后1个月行自体脂肪源干细胞与成纤维细胞尿道周围注射,细胞移植后1个月测定大鼠腹压漏尿点压力,同时近端尿道组织采用苏木精-伊红染色、弹力纤维染色观察形态学改变。 结果与结论：干细胞治疗后的模型大鼠漏尿点压力升高(P < 0.01),膀胱排空正常。尿道壁肌层增厚(P < 0.01),弹力纤维、平滑肌含量增多(P < 0.01)。结果证实,自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞联合尿道周围注射能明显提高压力性尿失禁大鼠腹压漏尿点压力,增强注射点尿道肌层压力,可用于压力性尿失禁的治疗。     

Perfusion bioreactor for small diameter tissue-engineered arteries

A scaleable perfusion bioreactor has been developed for tissue engineering of small diameter arterial constructs. This modular bioreactor allows for dynamic sequential seeding of smooth muscle and endothelial cells, biomechanical stimulation of cells during culture, and monitoring of tissue growth and maturation. Bovine aortic smooth muscle and endothelial cells were seeded onto porous tubular poly(glycolic acid) nonwoven scaffolds and cultured in the bioreactor under pulsatile flow conditions for up to 25 days. Cell proliferation was more than 3-fold after 4 days, smooth muscle cells expressed differentiated phenotype after 16 days, and collagen and elastin were distributed throughout the construct after 25 days of culture. In bioreactor experiments in which the construct lumen was seeded with endothelial cells by perfusion after 13 days of smooth muscle cell culture, endothelial cell seeding efficiency was 100%, and a confluent monolayer was observed in the lumen within 48 h. These data demonstrate that this perfusion bioreactor supports sequential seeding of constructs with smooth muscle and endothelial cells. Dynamic culture under pulsatile flow leads to cellular expression of differentiated function and extracellular matrix deposition toward the development of tissue-engineered arterial constructs.     

人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性

背景：高效、稳定地获得大量较高纯度的人脂肪干细胞,是其在组织工程学及再生医学中广泛应用的基础和前提。 目的：探索体外培养脂肪干细胞的适宜条件,从而提高其增殖能力。 方法：采用胶原酶消化的方法,从人腹部皮下块状脂肪中分离出脂肪干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞、低糖培养基体外培养扩增。Giesam染色后观察细胞形态;绘制细胞生长曲线并进行细胞周期分析,观察分析传代后染色体核型改变;选取第3代脂肪干细胞做流式细胞鉴定、EdU细胞增殖能力检测以及克隆形成实验。 结果与结论：分离培养的原代脂肪干细胞形态不一,经传代后的细胞形态趋于长梭形,排列紧密呈漩涡状生长。细胞生长曲线呈S形,细胞周期分析及EdU掺入法结果显示体外培养的脂肪干细胞具有较强的增殖能力。经染色体核型分析结果提示,体外培养不会引起脂肪干细胞的核型改变。第3代脂肪干细胞经流式细胞仪检测CD29,CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34和CD45呈阴性;克隆形成率为8.8%;在一定的诱导条件下,脂肪干细胞能够向脂肪细胞及成骨细胞分化。结果说明采用胶原酶消化法可成功分离培养人脂肪干细胞,且具有较强的增殖能力。     

小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定

背景：脂肪干细胞作为一种新的成体干细胞,具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点,受到人们越来越多地关注。 目的：体外分离培养小鼠附睾脂肪组织中的脂肪干细胞,并鉴定其生物学特性。 方法：无菌切取小鼠附睾处脂肪组织,采用胶原酶进行消化,利用1次消化多次收集与差速贴壁法分离纯化脂肪干细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察脂肪干细胞的形态。绘制脂肪干细胞的生长曲线。流式细胞术检测脂肪干细胞的免疫表型。加入细胞诱导剂对脂肪干细胞进行成骨及成脂肪的诱导分化。扫描电子显微镜观察脂肪干细胞与胶原支架材料的相容性。 结果与结论：倒置显微镜下可见脂肪干细胞呈长梭形或成纤维细胞样,密集排列成漩涡状或成束状交织,可在体外稳定传至第9代。透射电子显微镜下可见脂肪干细胞表面有丰富的微绒毛结构,细胞核体积大,细胞质内可见线粒体、粗面内质网等细胞器。脂肪干细胞表达CD44、CD29,不表达CD34。经成脂肪诱导剂诱导后,多数脂肪干细胞胞质内可见小脂滴,油红O染色可将小脂滴染成红色。经成骨诱导剂诱导后,在脂肪干细胞生长密集区域内的细胞结构模糊、细胞间界限不清楚。经茜素红染色后,可见较多大小不一的折光率较强颗粒状结构沉积。扫描电子显微镜观察到脂肪干细胞呈铺展状生长于胶原支架材料上。结果表明该方法分离出的脂肪干细胞能在体外扩增并稳定传代,在一定诱导条件下,能够分化为成骨细胞和脂肪细胞并且与胶原支架具有良好的相容性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：