动脉移植BMSCs对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓细胞凋亡和caspase-9基因的影响

目的 探讨肾下腹主动脉移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血再灌注损伤脊髓细胞凋亡、caspase-9表达及功能恢复的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、移植组,每组8只.假手术组仅行手术操作;缺血再灌注组阻断肾下腹主动脉120 min后开放,恢复脊髓再灌注5 min后经动脉留置管推注1 mL培养基;移植组恢复再灌注5 min后推注100万BMSCs悬液1 mL.术后1、3和7d对大鼠进行BBB评分;用RT-PCR、Western blot 检测术后7d大鼠缺血节段脊髓内caspase-9基因和蛋白表达,TUNEL观察细胞凋亡.结果 缺血再灌注组和移植组大鼠BBB评分于术后1、3和7d均显著低于假手术组(P＜0.01),移植组术后3、7 d BBB评分高于缺血再灌注组(P＜0.01);移植组和缺血再灌注组损伤脊髓caspase-9 mRNA和蛋白表达水平较假手术组增加(P＜0.01),缺血再灌注组增加更为显著(P＜0.01).缺血再灌注组和移植组损伤脊髓内出现大量凋亡细胞,而移植组凋亡细胞数少于缺血再灌注组(P＜0.01).结论 肾下腹主动脉移植BMSCs可通过抑制缺血再灌注损伤脊髓caspase-9表达,减轻脊髓局部细胞凋亡,改善其神经功能恢复.     

带气囊导管构建脊髓缺血模拟再灌注与缺血分离模型

背景：采用带有气囊的导管急性压迫脊髓缺血模拟人类损伤可以造成再灌注与缺血分离的动物模型。 目的：应用免疫组化和生物化学分析方法观察不同缺血时间窗处理对损伤脊髓的影响。 方法：SD大鼠36只,随机分为假手术组,带气囊导管造成大鼠脊髓缺血10,30,45,60,90 min组。 结果与结论：再灌注48 h后,随着缺血时间的延长,脊髓前角神经元坏死和凋亡逐渐加重,丙二醛水平逐渐增加,超氧化物歧化酶活性逐渐下降,大鼠的神经行为学病症加重。提示用带气囊的导管建立缺血再灌注大鼠模型成功,再灌注后大鼠脊髓的损伤随缺血时间的延长而加重。     

缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

背景：肺切除、体外循环、肺移植、肺动脉栓塞等病都会造成肺组织缺血再灌注损伤,肺缺血再灌注损伤也是肺移植后肺功能失调的重要因素。 目的：分析缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的影响。 方法：将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组8只。建立肺缺血再灌注损伤模型,假手术组只分离左肺门和肺动静脉,未阻断;缺血再灌注组肺缺血1 h后再灌注2 h;缺血后处理组于再灌注前给予3次缺血30 s再灌注30 s,然后恢复再灌注2 h。实验后取肺组织标本,检测肺组织湿/干质量比、超氧化物歧化酶、丙二醛和髓过氧化物酶活性,炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的含量,观察肺组织病理学变化。 结果与结论：缺血再灌注组和缺血后处理组肺组织湿/干质量比、丙二醛、髓过氧化物酶活性、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平与假手术组比较有显著增高(P < 0.05),而缺血后处理组增高不明显,与缺血再灌注组比较,含量和活性均降低(P < 0.05)。缺血再灌注组和缺血后处理组超氧化物歧化酶活性明显低于假手术组,缺血后处理组明显高于缺血再灌注组。缺血再灌注组肺组织病理检查见肺泡壁增厚,有水肿和大量炎性细胞浸润。缺血后处理组肺泡壁增厚和水肿程度较缺血再灌注组减轻,有部分炎性细胞浸润。肺组织病理学评分,缺血后处理组较缺血再灌注组有所降低。结果提示,缺血后处理可以通过抑制肺缺血再灌注后炎症细胞聚集、氧自由基产生和促炎细胞因子释放,对肺缺血再灌注损伤模型大鼠起到保护作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

下肢缺血再灌注损伤模型大鼠接受依达拉奉干预后的超微结构变化

背景：肢体缺血再灌注损伤中,氧自由基及细胞凋亡发挥重要的作用,通过抑制氧自由基生成及细胞凋亡,可减轻肢体缺血再灌注损伤。 目的：验证依达拉奉在大鼠肢体缺血再灌注损伤方面的应用及疗效。 方法：30只雌性SD大鼠,随机取20只,分别用自制气囊袖带环扎大鼠右后肢根部加压至40 kPa达到阻断血流,4 h后松解形成再灌注,制作肢体缺血再灌注损伤模型。造模成功后随机分为2组,依达拉奉灌注组于再灌注前5 min由左股静脉注射依达拉奉3 mg/kg,模型组及剩余10只(正常组)于相同时间点给予等量的生理盐水。于再灌注24 h,取每组大鼠右胫前肌,用透射电镜观察其超微结构变化,并采用RT-PCR对每组大鼠胫前肌中bcl-2 mRNA、bax mRNA进行半定量检测并计算bcl-2/bax比值。 结果与结论：①电镜结果显示：依达拉奉灌注组与模型组相比肌纤维较整齐,M线、Z线较清晰,线粒体肿胀减轻、其数量及嵴稍增多。②RT-PCR结果显示,缺血再灌注24 h后,右胫前肌bcl-2 mRNA的相对表达量以及bcl-2 mRNA与bax mRNA的比值：模型组显著低于依达拉奉灌注组(P < 0.05),而bax mRNA的相对表达量模型组高于依达拉奉灌注组,且两组均高于正常组(P < 0.05)。结果提示自由基清除剂依达拉奉可能通过改善线粒体等超微结构及促进bcl-2 mRNA、抑制bax mRNA的表达来减轻肢体缺血再灌注损伤,这可为肢体缺血再灌注损伤的治疗提供新的选择。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

右美托咪定在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的 保护作用及机制研究

目的 探讨右美托咪定对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用及PI3K/Akt传导通路在其中的作用。方法 30只成年雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和右美托咪定治疗组,每组10只。建立大鼠脊髓缺血/再灌注损伤模型,对再灌注损伤后6 h、12 h、24 h、48 h实验大鼠后肢运动功能进行评分,检测缺血脊髓前角组织中P-AKT的表达水平及神经元的凋亡指数。结果 右美托咪定可改善脊髓缺血/再灌注损伤后实验大鼠的后肢运动功能(P＜0.05);提高脊髓前角P-AKT的表达水平(P＜0.05),抑制缺血/再灌注损伤所致的脊髓神经元的凋亡(P＜0.05)。结论 右美托咪定对脊髓缺血/再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt传导通路,从而抑制神经元的凋亡有关。     

丙酮酸对模型大鼠移植小肠细胞间黏附分子表达的影响

背景：小肠移植过程中移植肠不可避免地要受到缺血再灌注的损害,而小肠又对缺血再灌注损伤特别敏感。前期研究证实丙酮酸对小肠和移植小肠缺血再灌注损伤具有保护作用,并探讨了部分相关机制。 目的：在前期研究基础上,进一步证实探讨丙酮酸对大鼠移植小肠缺血再灌注损伤的保护作用与移植小肠组织中细胞间黏附分子表达的关系。 方法：选用近交系成年雄性SD大鼠,按随机数字表法分为3组：假手术组行剖腹、左侧肾切除作为对照;移植小肠缺血再灌注组和丙酮酸处理组均建立小肠移植缺血再灌注动物模型,分别于供体小肠阻断血流、灌洗前10 min向肠腔内注入10 mL含有多聚葡萄糖的营养液或含有分析纯丙酮酸的营养液。分别留取缺血45,90 min和再灌注30,180 min小肠组织标本,光镜下观察小肠组织损伤病理变化,免疫组化法检测小肠组织中细胞间黏附分子1的表达。 结果与结论：缺血再灌注不同时相移植小肠缺血再灌注组小肠组织损伤程度均重于其他2组,而丙酮酸处理组小肠组织损伤程度与假手术组相似。缺血期间小肠组织中细胞间黏附分子1的表达均不明显,呈弱阳性;再灌注后移植小肠缺血再灌注组细胞间黏附分子1的表达迅速增加,高于与假手术组及丙酮酸处理组(P < 0.01),而丙酮酸处理组细胞间黏附分子1的表达变化不明显(P > 0.05)。说明丙酮酸作用下大鼠移植小肠缺血再灌注过程中细胞间黏附分子1的表达减少,可能是丙酮酸保护大鼠移植小肠缺血再灌注损伤的重要环节之一。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

缺血预处理对脊髓缺血再灌注损伤HIF-1α表达的影响

目的探讨缺血预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠120只,随机分为4组:Sham组置入球囊导管但不阻断胸主动脉;I/R组球囊导管阻断胸主动脉12min造成脊髓缺血再灌注损伤;缺血预处理(Ischemic preconditioning,IPC)先短暂阻断胸主动脉3min,恢复灌注10 min实施缺血预处理,之后阻断胸主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤;IPC+2ME2组缺血预处理前30min腹腔注射HIF-1α抑制剂2ME2(15 mg/kg),缺血预处理后阻断胸主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤。分别于再灌注损伤后为4 h、12 h、24 h、3 d和7 d进行神经功能评分,并取脊髓L4-6缺血节段,脊髓组织病理学观察脊髓前角内健存运动神经元,Real time-PCR法检测HIF-1αmRNA表达。结果与Sham组比较,I/R组神经运动功能评分降低,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量减少,HIF-1α表达增加(P<0.05)。与I/R组比较,IPC组神经运动功能评分增高,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量增多,HIF-1α表达更多(P<0.05)。IPC+2ME2组HIF-1α表达上调受到抑制,神经运动功能评分降低,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量减少(P<0.05)。结论缺血预处理可能通过上调HIF-1α表达减轻脊髓缺血再灌注损伤。     

构建急进高海拔地区急性应激性胃肠道损伤大鼠模型

背景：前急进高海拔地区胃肠道急性应激损伤的模型建立鲜有报道,建立稳定的急进高海拔肠应激性损伤模型成为当前研究急进高海拔应激性胃肠损伤及相关疾病的前提。目的：建立急进高海拔引起的急性应激性肠缺血再灌注大鼠模型。方法：将雄性Wistar大鼠24只按随机数字表法分为3组,高海拔下限正常对照组、高海拔假手术组和高海拔缺血再灌注组各8只。大鼠急进海拔地区,缺血再灌注组以血管夹夹闭肠系膜上动脉根部完全阻断血流60 min,之后松开动脉血管夹,恢复肠道血流形成再灌注,时间为60 min。假手术组仅分离肠系膜上动脉不作夹闭。正常对照组不作任何处理。大鼠再灌注60 min后,以化学发光法检测肌酸激酶同工酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐水平,并行病理组织学观察分析。结果与结论：急进高海拔并行肠缺血再灌注对大鼠肝、肾、心功能均有不同程度的损伤,肠黏膜出血,腺体断裂甚至发生溶解,黏膜层和黏膜固有层有大量炎性细胞浸润。提示采用急进高海拔地区后动脉夹夹闭肠系膜上动脉的方法制备急进高海拔地区急性应激性胃肠道损伤的大鼠模型病情相对稳定,方法简单,适于进行急进高海拔地区急性应激性胃肠道损伤的防治研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达

背景：现阶段,针对已知的炎性递质的干预措施对于减轻脊髓继发损伤的效果局限。白细胞介素17是重要的促炎性细胞因子,在中枢神经系统疾病发病机制中的作用正逐渐受到关注。 目的：观察急性脊髓损伤模型大鼠白细胞介素17 mRNA和蛋白表达的变化规律。 方法：健康雄性SD大鼠随机分为2组：模型组制作大鼠脊髓完全横断模型,假手术组仅剪开硬脊膜而不伤及脊髓实质。开放后测定肢运动功能评分观察急性脊髓损伤对大鼠运动功能的影响,苏木精-伊红染色观察脊髓损伤后不同时间点组织病理学改变,实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各组大鼠脊髓损伤后不同时间点白细胞介素17 mRNA和蛋白水平表达变化。 结果与结论：开放后肢运动功能评分结果：假手术组大鼠BBB评分均为20-21分,脊髓损伤1,2 d大鼠BBB评分均为0分,损伤后7 d BBB评分为0-3分(P < 0.05)。苏木精-伊红染色结果：与假手术组相比,脊髓损伤6 h后,炎性细胞浸润,神经元和胶质细胞肿胀,神经元突起减少;脊髓损伤12 h后,灰质、白质组织结构疏松、空泡化;脊髓损伤后7 d,胶质细胞增生,组织纤维化明显。RT-qPCR结果显示：白细胞介素17 mNA于脊髓损伤后3 h出现,并于6 h表达出现高峰(P < 0.01),随后表达减少,7 d后表达接近假手术组水平。Western blot结果显示：脊髓损伤6 h后,白细胞介素17表达开始升高,并于损伤后12 h出现高峰(P < 0.05),随后表达减少,至伤后7 d表达接近假手术组水平。结果可见脊髓损伤12 h后组织损伤表现最严重,并与白细胞介素17表达改变存在时间的一致性,推断白细胞介素17可能参与了脊髓继发性炎症反应过程。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

黄芪对脑缺血再灌注损伤c-fos表达和细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCA)血流2h,再灌注24h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将24只Wistar雄性大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组、黄芪组。造模前1h时黄芪组给与黄芪200mg/kg腹腔注射。假手术组、缺血再灌注组给予等剂量生理盐水。再灌注24h后断头取脑、切片,进行HE染色、c-fos免疫组化染色和细胞凋亡检测。结果缺血2h再灌注24h后,黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层可检测到细胞凋亡细胞,黄芪组凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组,假手术组未见凋亡细胞;黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层c-fos阳性细胞数均高于假手术组,与缺血再灌注组相比,黄芪组大鼠缺血侧皮层c-fos表达降低。结论黄芪可抑制缺血再灌注损伤后缺血侧皮质的细胞凋亡。     

己酮可可碱对兔缺血再灌注损伤脊髓的保护作用及机制

目的： 对己酮可可碱(PTX)在脊髓缺血再灌注损伤中神经元的保护作用及其机制进行初步探讨。方法: 采用日本大耳白兔腹主动脉夹闭法建立脊髓缺血再灌注损伤动物模型，随机分为A组（假手术组，8只）、B组（对照组，20只）、C组（夹闭血管前用药组，20只）、D组（再灌注即刻用药组，20只）。于再灌注后12 h、24 h、48 h、72 h检测血TNF-α活性、组织MPO活性、免疫组化法观察并检测PECAM-1及caspase-3表达、HE染色观察神经元并计数坏死神经元、TUNEL染色观察并计数凋亡神经元、电镜观察坏死及凋亡神经元形态改变，并于再灌注后48 h进行运动功能评分（改良Tarlov评分）。结果: 用药组（C组及D组）改良Tarlov评分明显高于对照组（P<0.05），血TNF-α、组织MPO含量、免疫组化PECAM-1及caspase-3表达强度均明显下降，HE及TUNEL染色切片中坏死细胞及凋亡细胞均明显减少，与对照组有显著差异（P<0.05）。假手术组未见坏死及凋亡细胞。结论: 己酮可可碱在脊髓缺血再灌注损伤中能够发挥抑制神经元坏死及凋亡的双重脊髓保护作用。     

丙泊酚干预脊髓损伤模型脊髓水肿及后肢电生理的变化

BACKGROUND: A large number of studies have verified that propofol could effectively reduce secondary nerve injury by improving microenvironment of spinal cord injury. OBJECTIVE: To study the effects of propofol on spinal cord edema and electrophysiology of the hind limb in rats with spinal cord injury. METHODS: Rat models of acute spinal cord injury were established by using the modified Allen method. A total of 40 rat models were randomly divided into spinal cord injury group and propofol group (n=20). Rats in the propofol group were injected with propofol through the caudal vein. The spinal cords of an additional 20 rats were exposed in the sham surgery group. Motor function was evaluated using BBB score and inclined plate test before modeling, 1, 3 days, 1-4 weeks after modeling. Neuronal apoptosis was detected after spinal cord injury using TUNEL assay at 72 hours after modeling. AQP4/9, matrix metalloproteinases 9/2 mRNA and protein expressions were measured using RT-PCR and western blot assay. At 4 weeks after modeling, pathological changes of the spinal cord were observed using immunohistochemistry and hematoxylin-eosin staining. Neurophysiological recovery was analyzed using motor evoked potentials and somatosensory evoked potentials. RESULTS AND CONCLUSION: (1) At 1-4 weeks after modeling, BBB score and inclined plate test score were higher in the propofol group than in the spinal cord injury group (P < 0.05), but lower than in the sham surgery group (P < 0.05). (2) The number of apoptotic cells was significantly more in the spinal cord injury group than in the propofol group (P < 0.05). No apoptotic cells were found in the sham surgery group. (3) At 72 hours after spinal cord injury, AQP4/9 and matrix metalloproteinases 9/2 mRNA and protein expression was higher in the propofol group than in the sham surgery group (P < 0.05). AQP4/9 and matrix metalloproteinases 9/2 mRNA and protein expression was significantly reduced in the propofol group (P < 0.05). (4) At 4 weeks after modeling, the spinal cord was loose, and the cavity was small. Partial neuronal necrosis could be seen. The degree of nerve fiber density in the propofol group was between the sham surgery group and spinal cord injury group. (5) Motor evoked potentials and somatosensory evoked potentials were obviously recovered, the latency was short, amplitude was increased in the propofol group, which showed significant differences as compared with the sham surgery group and the spinal cord injury group (P < 0.05). Results suggested that propofol can reduce apoptosis in rat neurons after spinal cord injury, reduce spinal cord edema-related gene expression, and improve electrophysiological function and limb motor function.       

Selective occlusion of lumbar arteries as a spinal cord ischemia model in rabbits

Paraplegia is a devastating complication of operations requiring transient occlusion of the descending thoracic aorta. Many animal models of spinal cord ischemia have been utilized to examine the efficacy of various neuroprotective methods. In this study, we establish a rabbit model of spinal cord ischemia by selective temporary occlusion of lumbar arteries and examine the protective effects of systemic mild hypothermia in this model. Animals were divided into the following four groups: sham group (group A, n = 6); 10 min ischemia, normothermia (39 degrees C) (group B, n = 6); 20 min ischemia, normothermia (group C, n = 6); and 30 min ischemia, mild hypothermia (35 degrees C) (group D, n = 6). After 7 d of reperfusion, three rabbits in group B and five rabbits in group C developed paraplegia (Tarlov's score = 0). In contrast, all rabbits preserved hindlimb motor function (Tarlov's score = 4) in groups A and D. Histological findings indicated that the number of motor neurons in the anterior horns in group C were significantly fewer than in group A. A large number of motor neurons were preserved in group D. Hypothermia is known to be an effective and reliable method of neuroprotection, but the risk of complications rises at deep hypothermia. Our current results confirm that systemic, mild hypothermia is a safe and effective neuroprotective method during ischemia-reperfusion injury of the spinal cord.     

脊髓缺血性再灌注损伤和预处理保护作用的实验研究

目的：探讨缺血预处理对家兔须缺血性损伤的保护作用。方法：家兔18只，随机分为Ⅰ组（假手术组）、Ⅱ组（缺血预处理组）和Ⅲ组（缺血再灌组），每组6只，Ⅰ组开腹后，在左肾动脉起点以下0．5cm处暴露并分离腹主动脉即关腹；Ⅲ组一次性阻断腹主动脉血流30min，松夹后关腹；Ⅱ组阻断腹主动脉血流5min，松夹后再灌注10min（如此反复2次），最后再持续夹闭腹主动脉30min，松夹后关腹。结果：Ⅰ组术后后肢运动功能全部正常，光镜和电镜检查显示组织结构变化甚微。Ⅲ组术后后肢运动功能发生严重障碍，脊髓组织严重损伤，与Ⅲ组比较，Ⅱ组术后后肢运动功能障碍较轻微，须组织损伤明显减轻，神经功能评价各组差异具有显著性（P12h=0.006和P36h=0.001)。结论：缺血预处理能够促进神经功能的恢复，减轻脊髓组织损伤，提示预处理对脊因再灌注损伤具有保护作用。     

缺血预处理快速效应对兔急性缺血脊髓的保护作用

目的:探讨缺血预处理快速相对兔腹主动脉短暂阻断致缺血脊髓的保护作用。方法:36只雄性新西兰兔随机分成3组(n=12):即缺血再灌注损伤组(IR组)、缺血预处理组(IPC+IR组)及假手术组(Sham组)。IR组阻闭兔腹主动脉肾下段20min,复制兔脊髓缺血损伤模型;IPC+IR组预先阻闭腹主动脉肾下段6min,再灌注30min后再次阻闭腹主动脉肾下段20min;Sham组除不夹闭腹主动脉外,其余处理同IR组。再灌注后8h、12h、24h和48h分别对动物神经功能评分,然后,处死动物取脊髓(L_5-7),分别行组织病理学观察及测定脊髓组织中Na⁺,K⁺-ATP酶的活性。结果:Sham组及IPC+IR组神经功能评分各时点均明显高于IR组(P＜0.01);Sham组及IPC+IR组脊髓前角正常神经细胞数明显多于IR组(P＜0.01);Sham组及IPC+IR组脊髓组织中Na⁺,K⁺-ATP酶的活性明显高于IR组(P＜0.01)。结论:缺血预处理快速相对兔急性缺血脊髓有显著的保护作用,这种保护作用可能与稳定Na⁺,K⁺-ATP酶的活性有关。     

移植自聚合肽纳米纤维材料与RhoA-siRNA复合物修复脊髓损伤

背景：脊髓损伤后RhoA表达增高是神经再生困难的主要原因之一,本课题在前期研究证明自聚合肽纳米纤维材料能较好地促进脊髓损伤后结构与功能修复的基础上,构建了自聚合肽纳米纤维材料与RhoA-siRNA复合材料用于修复脊髓损伤。 目的：探讨自聚合肽纳米纤维材料介导siRNA干扰RhoA表达促进脊髓损伤修复。 方法：54只昆明小鼠随机数字表法分为4组。假手术组仅作脊髓暴露,其他3组在切除1 mm脊髓组织制备全横断脊髓损伤模型后,分别于损伤腔内填充生理盐水、自聚合肽纳米纤维支架或含有RhoA特异性siRNA复合物。通过FAM标记检测siRNA转染效率;免疫组化检测RhoA表达;免疫组化和定量分析检测再生神经纤维;行为学检测评定后肢功能恢复。 结果与结论：移植FAM标记的含有RhoA特异性siRNA复合物后,在脊髓内的神经纤维及大脑皮质运动区神经元胞体内均可检测到FAM荧光信号,提示siRNA可从复合材料中释放到组织中并成功导入靶细胞。与SAPNS组和生理盐水组相比,含有RhoA特异性siRNA复合物和自聚合肽纳米纤维支架组可显著降低RhoA在神经元的表达,提高脊髓损伤区内NF阳性神经纤维的密度,促进后肢功能的恢复。结果提示通过自聚合肽纳米纤维支架的介导,含有RhoA特异性siRNA复合物能有效干扰RhoA表达,从而促进脊髓损伤的修复。     

高压氧前处理脊髓损伤大鼠前角运动神经元的凋亡*☆

背景：脊髓损伤后难以修复,损伤后保护残存的神经元是促进神经再生的关键。 目的：验证高压氧预处理可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓前角运动神经元。 方法：随机将26只雄性Wistar大鼠等分成模型组和实验组。实验组在给予高压氧5 d后与模型组同时制作脊髓T9~10全横断模型。 结果与结论：尼氏染色显示脊髓T9~T10全横断后8 h及1 d,脊髓前角的浓染的细胞多见,与模型组相比,实验组脊髓前角浓染的细胞较少。TUNEL染色也显示脊髓T9~T10全横断后脊髓损伤后8 h~1 d,2组大鼠脊髓前角内均可见大量的凋亡神经元,3 d时凋亡神经元数量减少。相比于模型组,高压氧预处理8 h,1 d后大鼠脊髓前角凋亡神经元较少(P < 0.05,        P < 0.01)。说明高压氧预处理能对脊髓损伤后前角运动神经元起保护作用。       

SD大鼠脊髓损伤后微环境的模拟实验

BACKGROUND: We built Sprague-Dawley rat models with mild, moderate, and severe spinal cord injuries to accord with the spinal cord injury types for basic empirical study, and consequently to further understand the microenvironmental change in Sprague-Dawley rats with spinal cord injury, and to provide help for clinical treatment. OBJECTIVE: To observe the changes in nerve function, pathological manifestation and motor sensory evoked potential in Allen’s models and Sprague-Dawley rats with complete spinal cord transection at different time points after spinal cord injury by simulating the microenviroment in Sprague-Dawley rats. METHODS: A total of 125 healthy adult female Sprague-Dawley rats were selected and randomly divided into group sham operation group, 100 gcf hit potential group (20 g×5 cm), 200 gcf hit potential (20 g×10 cm), 300 gcf hit potential group (20 g×15 cm), and spinal cord complete transection group with 25 rats in each group. At 1, 5, 7, 14 and 28 days after model establishment, the degree of spinal cord injury was identified by the BBB scores of motion function, motor evoked potential, and pathological section. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Totally 24 Sprague-Dawley rats died in the experiment. The death rate and the rate of complications were highest in the spinal cord complete transection group. The BBB score of each group was decreased. The BBB scores in every group increased as time went on. There were significant differences between each surgery group and the sham operation group at corresponding time points (P < 0.05).  No significant difference was found between the 300 gcf hit potential group and the spinal cord complete transection group at corresponding time points (P > 0.05). (2) In each surgery group, the infiltration of inflammatory cells and obvious swelling of neurons were visible at 1 day after injury. Neural cells reduced with time prolonged. At 28 days after injury, a large number of astrocytes proliferated, scar and spinal cord cavity formed. Above symptoms were worse in the 300 gcf hit potential group and spinal cord complete transection group than in the 100 gcf and 200 gcf hit potential groups. (3) Significant differences in amplitude and latency were detectable between each surgery group and the sham operation group (P < 0.05). No significant difference in amplitude and latency was detected between the 300 gcf hit potential group and the spinal cord complete transection group at corresponding time points (P > 0.05). Results confirmed that hit potential of 20 g×5 cm, 20 g×10 cm and 20 g×15 cm can simulate the microenvironment of Sprague-Dawley rats with mild, moderate and severe spinal cord injury. The rate of complication was lower in modified Allen’s model of different hit potentials than in models of spinal cord complete transection, and was more accorded with basic research.       

臂丛损伤后脊髓前角运动神经元超微结构改变

目的探讨大鼠臂丛损伤导致脊髓前角运动神经元死亡的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,其中对照组6只,损伤组18只。建立3种臂丛损伤模型:右C7前根撕脱(A组);右C7前根撕脱+同侧C5～T1后根离断(B组);右C7前根撕脱+右C5与C6之间脊髓半横断(C组)。术后14d取C7节段脊髓,采用尼氏染色方法和透射电镜技术,观察脊髓前角运动神经元的存活率及其超微结构改变。结果术后2周A组脊髓前角运动神经元的存活率最高,B组居中,C组最低。3个臂丛损伤组C7前角均可见凋亡特征性改变:运动神经元内核染色质聚集靠边,核固缩、碎裂、核膜皱褶并内陷,并有染色质团块形成的凋亡小体。细胞体积缩小,胞浆内细胞器密集,线粒体轻度肿胀,核周粗面内质网减少,游离核糖体增多,胞浆内可见较多的空泡。神经元胞体周围的有髓神经纤维和无髓神经纤维呈轻度肿胀,髓鞘的板层结构消失。结论臂丛损伤诱导脊髓运动神经元死亡途径中存在凋亡和坏死两种机制,运动神经元可形成凋亡小体。     

他克莫司后处理诱导缺血脊髓对再灌注损伤的耐受*

目的探讨他克莫司后处理能否诱导大鼠缺血脊髓对再灌注损伤的耐受。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术（s0）组、缺血再灌注（IR）组和他克莫司后处理（TP）组,每组10只大鼠,采用经股动脉置管球囊扩张制备脊髓缺血模型,SO组仅行置管,IR组在脊髓缺血20分钟后行再灌注,TP组在脊髓缺血20分钟后再灌注,即刻经左颈总动脉一次性注射他克莫司0．5mg／kg。再灌注后7、14天采用Tarlov评分法检测大鼠后肢运动功能,脊髓组织切片HE染色观察病理学改变。结果SO组大鼠各时间点后肢Tarlov评分均为5分,形态学检测显示脊髓组织结构正常;IR组大鼠Tarlov评分明显降低,脊髓组织呈现出坏死、水肿、空腔形成等缺血再灌注损伤表现;TP组大鼠Tarlov评分结果显著优于IR组,脊髓组织病理变化较IR组为轻。结论建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,并初步证实他克莫司后处理能诱导缺血脊髓对再灌注损伤的耐受。