脂肪源性干细胞基质胶的研究进展

脂肪源性干细胞基质胶(SVF-gel)是利用物理方法 从脂肪组织中提取的一种可注射凝胶状生物材料,其包含高浓度的脂肪干细胞(ADSC)及细胞外基质,具有独特的再生模式,局部移植也展现出了良好的干细胞治疗潜力.文章从目前中国国内的研究现状出发,就SVF-gel的生物学特性、参与组织修复再生的作用机制和临床应用现状进行综述...     

低温保存的GFP标记脂肪源性干细胞体外构建组织工程骨的研究

目的研究经低温保存的GFP基因转染的犬脂肪源性干细胞（ASCs）在脱钙骨（DBM）支架材料上的生长特性及成骨分化潜能。方法胶原酶消化法分离获取并常规培养犬ASCs,用绿色荧光蛋白（GFP）重组逆转录病毒载体转染第2代ASCs,然后进行低温保存。-196℃液氮保存4周后,37℃复苏,测定细胞存活率。低温保存前后的ASCs接种DBM,用成骨诱导液诱导培养2周。激光共聚焦显微镜观察细胞在DBM上的生长情况,DNA定量（Hoechst33258法）测定细胞的体外增殖活性。通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙蛋白（OCN）含量,观察低温冻存对细胞在支架材料上成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后细胞的存活率〉90%,激光共聚焦显微镜显示细胞在材料上黏附生长良好。体外培养12d时细胞增殖达到平台期,ALP活性与OCN含量则随培养时间延长而不断上升,低温保存前后细胞的检测结果无显著差异（P〉0.05）。结论低温保存对GFP标记的犬ASCs在脱钙骨上的体外生长及成骨能力无显著影响,可以作为组织工程骨的种子细胞。     

聚丙交酯-乙交酯支架结合脂肪源性干细胞构建组织工程尿道

背景:生物电喷雾与静电纺丝技术的结合能促进活细胞和支架材料的直接整合,可将细胞均匀地分布在支架纤维间,是制备含细胞支架的一种很有前景的替代方法.目的:分析多方法结合制备富含脂肪源性干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)的聚丙交酯-乙交酯[(poly(lactide-co-glycoli...     

以壳多糖为基质网架构建大鼠组织工程皮肤

目的 探索以壳多糖为基质网架构建组织工程皮肤的可能性。方法 将体外传代培养的大鼠表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞，分别接种在预先制备的多孔三维壳多糖基质网架的两侧，经液—气界面培养，构建出复层人工皮肤。分别用光镜和电镜观测该复层人工皮肤的组织形态及超微结构的动态变化。结果 光镜下可见，本实验构建的组织工程皮肤由表皮和真皮构成。随着培养时间的推移，表皮逐渐成熟、分化，真皮逐渐形成，基质网架逐渐降解、被吸收，并由真皮细胞所分泌的细胞外基质所取代。结论 以壳多糖为基质网架构建的组织工程皮肤，在组织结构和代谢功能上与天然皮肤极为相似。     

ES细胞源性表皮干细胞与类真皮构建组织工程皮肤的体内分化

目的以ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与类真皮构建组织工程皮肤,探讨其在体内的分化。方法胎鼠皮肤成纤维细胞和大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),分别与复合凝胶-明胶海绵构建类真皮(类真皮Ⅰ、Ⅱ),植入小鼠全层皮肤缺损创面,以生物膜为载体,把羊膜诱导后带有核标记的表皮干细胞覆盖在类真皮上,术后1～8周连续取材,苏木精-伊红染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10和CEA免疫荧光双标和免疫组化观察。结果两组组织工程皮肤植入皮肤缺损3～4周后,创面完全长合,较厚新生皮完全覆盖创面,基底层细胞增生,形成短的细胞柱突向真皮层。新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15、CK19阳性,真皮中的管腔样结构呈核荧光和CEA免疫组化双标阳性,4～8周新生表皮基底层细胞呈CK19、CK10阳性,新生表皮下可见毛囊样、皮脂腺样结构。结论ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与类真皮构建的两种组织工程皮肤在体内具有修复缺损皮肤及分化为表皮及毛囊样、皮脂腺样和汗腺样等皮肤附属结构的潜能。     

细胞膜片技术在组织工程中的应用与研究进展

BACKGROUND: The cell sheet technology that is applied with the absence of scaffolds and enzymatic digestion can effectively repair tissue defects and improve organ function, by stimulating the secretion of extracellular matrix to form a dense membrane tissue. OBJECTIVE: To review the recent progress in cell sheet technology used in tissue engineering, thereby providing a new idea for relevant basic and clinical research. METHODS: The first author retrieved CNKI database, Wanfang database and PubMed with the keywords of “cell sheet, tissue engineering” in Chinese and English, respectively. Literature retrieval period was from January 2010 to July 2015. RESULTS AND CONCLUSION: Cell sheet technology combined with scaffold materials can be used for reconstruction and repair of tissues and organs. With the emerging of new technologies, multi-layer cell sheets are stratified to form a three-dimensional tissue for repair of soft tissues and organs. Compared with the monolayer cell sheet, the three-dimensional cell sheet that is laminated by same or different cell sheets has stronger regenerative ability and can be used to construct the ideal target tissue model in vitro. Cell sheet technology combined with scaffolds can improve the mechanical strength of the composite and reduce cell loss, which has made great progress in the repair of tooth, bone and cartilage tissue. Currently, the cell sheet technology is at the laboratory stage, and little is reported on its clinical applications. We look forward to more innovative technologies that can be integrated into the cell sheet technology.      

组织工程皮肤的构建及组织形态学观察

背景：应用于临床的组织工程皮肤具有血管化速度慢、力学强度差以及无法永久性保留等局限,因此,需要对相关技术环节进行改进以制备一种合适的永久性皮肤替代物。 目的：建立一种构建有活性的双层组织工程皮肤的方法,并对其组织形态学进行观察。 方法：以Ⅳ型胶原和成纤维细胞联合修饰的同种脱细胞真皮基质为支架,与表皮干细胞复合后依次经浸没式培养和气液分离界面培养构建组织工程皮肤,利用光镜和扫描电镜对其组织学特点进行观察和分析。 结果与结论：以表皮干细胞和同种脱细胞真皮基质制备的组织工程皮肤具有表、真皮双层结构,其中表皮由多层不同分化程度的表皮细胞组成,真皮为天然三维孔隙结构,胶原纤维完整,且表皮层与真皮层紧密连接,形成整体结构,可满足全层皮肤替代物的基本组织学要求。     

细胞膜片技术在组织工程和再生医学领域的应用

细胞膜片技术是通过物理的方法将扩增融合的细胞从培养皿底壁分离,获得膜片状细胞结构的一种技术。与传统胰酶消化收集细胞的方法相比,运用该技术收集到的细胞保留了体外培养过程中分泌的胞外基质、建立的细胞-基质连接以及细胞间连接等结构。本文综述了细胞膜片技术在构建包括软组织(角膜、黏膜、心肌、血管、胰岛、肝组织、膀胱、皮肤)和硬组织(骨、软骨、牙根)等组织再生领域的相关应用,以期为组织工程和再生医学的发展提供新思路,并提出今后可在提高该技术的操作性及构建大块组织可行性方面进行深入研究。     

体外构建人羊膜间充质干细胞膜片及成骨分化潜能

文题释义：细胞膜片技术：该技术避免了蛋白酶的消化和外源性支架材料的应用,通过细胞外基质分泌形成膜片组织,然后将膜片用于修复组织缺损和改善器官功能。该技术保留了大量自体细胞分泌的细胞外基质,为细胞的增殖和分化提供与体内极度相似的微环境,目前该技术已经用于临床眼角膜和食管损伤的修复。人羊膜间充质干细胞：取自于废弃的胎盘,贴壁生长,具有低免疫原性和生长周期短等特点,不仅具有成体间充质干细胞的特性还具有部分胚胎间充质干细胞的特性。  摘要背景：人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞,其来自于废弃的胎盘,来源广泛,可以无创获取,具有免疫原性低、生长周期短等特点,是组织工程种子细胞的重要来源,目前人羊膜间充质干细胞已经用于临床糖尿病的治疗。目的：探索一种简便的方法构建人羊膜间充质干细胞膜片,并研究其成骨分化潜能。方法：将第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于普通培养皿中,加入成膜片诱导培养基以构建人羊膜间充质干细胞膜片,通过组织学染色以及扫描电镜观察细胞膜片的特性。取第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于培养皿中,加入成膜片诱导培养基培养7 d,再换用成骨诱导培养基培养14 d以构建成骨诱导的人羊膜间充质干细胞膜片。通过茜素红染色、免疫组化染色、碱性磷酸酶活性、RT-PCR以及Western blot检测人羊膜间充质干细胞膜片的成骨分化潜能。结果与结论：①苏木精-伊红染色可见人羊膜间充质干细胞膜片由多层细胞累积而成,细胞分布均匀;②扫描电镜观察可见人羊膜间充质干细胞膜片呈复层结构,胞外有大量的胞外基质产生,细胞包埋于胞外基质中;③人羊膜间充质干细胞膜片成骨诱导14 d,茜素红染色后可见橘红色沉淀,免疫组化染色后细胞周围有大量Ⅰ型胶原产生;④与未诱导的人羊膜间充质干细胞膜片相比,成骨诱导14 d后人羊膜间充质干细胞膜片碱性磷酸酶活性显著升高(P < 0.01),Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、Runt相关转录子2的mRNA和蛋白表达量显著升高(P < 0.05);⑤该实验应用一种简便、经济的方法在普通培养皿上成功构建了人羊膜间充质干细胞膜片,体外研究证实人羊膜间充质干细胞膜片具有良好的成骨分化潜能。ORCID: 0000-0003-2163-3897(邹刚)中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

脂肪源性血管基质成分对皮肤光老化的影响

 目的:观察人脂肪源性血管基质成分 (stromal vascular fractions, SVF) 对中波紫外线(ultraviolet B, UVB) 诱导的裸大鼠皮肤光老化的影响。方法:6周龄裸大鼠随机分为正常对照组及实验组,实验组持续UVB照射8周建立皮肤光老化模型并随机分为模型组,以及SVF低剂量 (low-dose, LD)、中剂量(middle-dose, MD) 和高剂量 (high-dose, HD) (100 μL悬液中的细胞数分别为10⁴、10⁵和10⁶) 治疗组;采用酶消化法提取健康女性脂肪组织中的SVF,分别取低、中、高剂量的SVF悬液注射于裸大鼠背部皮下;模型组注射相同剂量的生理盐水,正常对照组不做任何处理;7 d后取材,观察注射部位表皮厚度及结构的改变;28 d后取材观察注射部位真皮厚度及结构的改变。结果:SVF治疗7 d后,中、高剂量治疗组裸大鼠皮肤较实验对照组表皮层厚度减小、角质层比例下降、基底层处于异常增殖状态的细胞核减少(P<0.05)。治疗28 d后,中剂量及高剂量治疗组I型胶原蛋白mRNA相对表达量增加,III型胶原蛋白及基质金属蛋白酶-3 (matrix metalloproteinases-3, MMP-3) mRNA相对表达量下降(P<0.05),高剂量治疗组皮肤真皮层厚度增加(P<0.05)。结论:SVF具有抗皮肤光老化的潜能,有潜在的临床应用价值。     

皮肤组织工程研究进展

由活细胞和生物相容性材料制成的人造生物皮肤是世界上第一种获得FDA(美国食品与药物管理局 )批准的组织工程产品 ,它为临床从根本上解决皮肤缺损的修复提供了良好的前景。从表皮、真皮、复合皮肤等方面对该领域的最新研究现状进行综述 ,分析组织工程目前存在的问题及未来发展方向。     

组织工程皮肤研究进展

组织工程是目前学术界研究的热点，人工皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一，已广泛应用于临床。从人工皮片、真皮、复合皮肤等方面对该领域的最新研究现状进行综述，并探讨了相应组织工程皮肤的应用情况，分析了组织工程皮肤目前存在的问题及未来发展方向。     

组织工程微粒皮肤的构建及其性能研究

目的 探索利用人成纤维细胞和York猪脱细胞真皮基质(ADM)微粒复合构建组织工程微粒皮肤的可行性并对其进行初步研究.方法 体外培养取自胎背的人成纤维细胞,用PKH26标记,将细胞与ADM微粒复合构建微粒皮肤,用荧光显微镜观察、电镜观察和MTT法检测组织工程微粒皮肤的性能.结果 脱细胞真皮基质微粒均匀柔软,弹性、韧性好,三维结构完整且排列规则.细胞与ADM微粒的复合情况良好,2 h后开始黏附,2d后增殖明显,10d增殖达到高峰;7 d时取材,HE和SEM显示成纤维细胞在ADM微粒表面成层黏附,并分泌大量基质;细胞生长良好.结论 利用人成纤维细胞和York猪的ADM微粒可以构建具有活性的组织工程微粒皮肤.     

应用细胞片层技术构建组织工程骨

背景：传统的骨组织工程学在收获和转移细胞方面仍存在诸多不足,细胞片层技术是收获种子细胞和对种子细胞进行转移的一项新技术。 目的：应用细胞片层技术与传统骨组织工程相结合的方法构建组织工程骨。 方法：密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,诱导其向成骨细胞分化。将诱导后的骨髓间充质干细胞接种至温度反应性培养皿中,先37 ℃饱和湿度培养,然后降温至20 ℃制备细胞片层;将犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞细胞片层/骨髓间充质干细胞复合体植入犬左侧背阔肌下,术后4,8,12周,观察成骨情况。 结果与结论：当温度降至20 ℃时,骨髓间充质干细胞从温度反应性培养皿上完全脱落,形成细胞片层,将其覆盖于犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞后植入犬背阔肌下,其成骨效果明显好于不加细胞片层对照侧。说明应用细胞片层技术与传统的骨组织工程方法相结合可构建出较理想的组织工程骨。     

应用胶原海绵构建组织工程皮肤的实验研究

目的探讨以胶原海绵为支架材料构建组织工程皮肤的方法。方法体外分离、培养、鉴定角朊细胞和成纤维细胞,制备胶原海绵作为组织工程支架材料;在成功构建人工真皮的基础上,种植表皮细胞,构建人工复合皮肤,通过大体观察、HE染色与免疫组织化学进行组织学检测。结果制备的胶原海绵孔径平均100~150μm,孔隙率89%,组织相容性良好;以胶原海绵构建的皮肤替代物免疫组织化学染色显示Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白阳性,HE染色可见均具有表皮和真皮双层结构,在形态结构上与正常皮肤相似。结论培养的人角朊细胞和成纤维细胞种植于胶原海绵支架上培养可构建出具有类似天然皮肤结构的组织工程皮肤。     

脂肪干细胞在皮肤损伤再生及组织工程中的应用及进展

皮肤损伤尤其是大面积皮肤缺损,是临床难以解决的问题。组织工程化皮肤构建则是有效途径之一。而脂 肪干细胞（ASCs）作为成体间充质干细胞之一,因获得量大、供区损伤小及免疫原性低等独特优势,被认为在 皮肤再生及组织工程中具有重要的应用潜力。现主要从ASCs 在皮肤损伤再生及组织工程中的应用及其相关进展 等方面进行论述。     

组织工程全层皮肤修复糖尿病性皮肤溃疡创面的临床研究

目的探讨利用组织工程全层皮肤（ActivSkin）修复糖尿病性皮肤溃疡创面的临床应用方法。方法对皮肤溃疡患者采用控制血糖、增如营养、防治感染等措施，ActivSkin直接覆盖于创面，创面分3层包扎，常规换药，分别于术后观察组织工程皮肤的有效性及安全性。结果患者术后病情平稳，可见ActivSkin在创面存活，创面边缘可见白色新生组织形成，随时间延长创面逐渐缩小，平均28d后达到临床愈合。结论利用ActivSkin修复糖尿病性皮肤溃疡创面可促进创面早期修复、缩短病程和降低由此产生的致残率；为ActivSkin的临床应用提供了切实可行的方法。     

组织工程皮肤的研究进展

组织工程是目前学术界研究的热点,人工皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一。已初步试用于临床,本文从人工皮片、真皮、复合皮肤等方面对该领域的最新研究现状进行综述,并讨论了复合皮肤中成纤维细胞存在的意义。分析了组织工程皮肤目前存在的问题及未来发展方向。     

组织工程皮肤的研究进展

组织工程是目前学术界研究的热点 ,人工皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一 ,已初步试用于临床。本文从人工皮片、真皮、复合皮肤等方面对该领域的最新研究现状进行综述 ,并讨论了复合皮肤中成纤维细胞存在的意义 ,分析了组织工程皮肤目前存在的问题及未来发展方向     

改性丝素蛋白支架与生长因子基因修饰脂肪间充质干细胞构建组织工程脂肪

背景:构建工程化的脂肪组织,适宜的种子细胞和性能优良的支架材料缺一不可。目的:探讨携带重组人血管内皮细胞生长因子165基因的慢病毒载体感染人脂肪间充质干细胞后,与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体外构建组织工程脂肪的可行性。方法:选取生长良好的第3代人脂肪间充质干细胞,用携带重组人血管内皮细胞生长因子165基因的慢病毒进行感染。将慢病毒感染与未感染的第3代人脂肪间充质干细胞成脂诱导14 d,油红O染色观察细胞的成脂能力;将慢病毒感染和未感染的第3代人脂肪间充质干细胞分别接种于壳聚糖修饰丝素蛋白支架材料上,MTT法检测细胞增殖能力;成脂诱导14 d后进行油红O染色,RT-PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶增殖物活化受体γ2的表达。结果与结论:成脂诱导14 d后,慢病毒感染与未感染的第3代人脂肪间充质干细胞均可见成熟脂肪细胞,组间差异不明显。慢病毒感染和未感染的第3代人脂肪间充质干细胞在改性丝素蛋白支架的生长曲线相近;成脂诱导后,油红O染色及RT-PCR均显示生成大量成熟脂肪细胞。表明携带重组人血管内皮细胞生长因子基因的慢病毒感染人脂肪间充质干细胞后,不影响其生长及成脂能力,与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料可成功构建组织工程化脂肪。