张应力刺激大鼠髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达*

背景：研究表明软骨细胞外基质合成的变化反映了外力对于颞下颌关节的影响和机体对于外力的适应性。 目的：观察周期性张应力对髁突软骨细胞主要细胞外基质合成的影响。 方法：采用FX-5000T应力加载系统对第3代大鼠髁突软骨细胞分别施加0,1,6,12和24 h的周期性张应力,应力刺激强度为10% 1 Hz。加力完成后收集加力细胞,提取总RNA反转录成cDNA,应用RT-PCR技术检测软骨细胞主要细胞外基质Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达变化情况。 结果与结论：与对照组(0 h组)相比,加力   6 h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均显著增加(P < 0.05);加力12 h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均开始下降;当加力至24 h时二者表达量均显著降低(P < 0.05)。结果表明：周期性张应力可以影响髁突软骨细胞主要细胞外基质的合成,随加力时间的延长基质合成逐渐增强;进一步延长加力时间,基质的合成受到明显抑制。      

永生化下颌骨髁突软骨细胞的微囊化研究

为了探讨微囊包裹软骨细胞在软骨组织工程中的适用性 ,根据气流切割原理采用海藻酸钠 -多聚赖氨酸 -海藻酸钠 ( APA)对永生化下颌骨髁突软骨细胞 ( Im mortalized mandibular condylar chondrocyte,IMCC)进行微囊包裹。用倒置显微镜观察、台盼蓝染色、细胞记数、HE染色、免疫组化等方法检测微囊的大小、细胞的生长及微囊内组织的软骨特性等情况。研究发现 ,IMCC可在微囊内存活 ,活细胞率 >80 % ,微囊直径平均 779μm。细胞数量随着培养时间的延长逐渐增多 ,约 2 0 d左右达到平台期 ,细胞在囊内呈簇样生长 ,高表达软骨特异的蛋白多糖和 型胶原。提示 IMCC可在微囊内形成类软骨组织样结构 ,微囊技术适用于包裹软骨细胞     

周期性张应力作用下软骨细胞半胱氨酸蛋白酶12的表达规律

BACKGROUND: Excessive mechanical stimulation can lead to endoplasmic reticulum stress. Endoplasmic reticulum stress plays an important role in the occurrence and development of degenerative diseases. Caspase-12 is a specific molecule of endoplasmic reticulum stress, and the intensity of endoplasmic reticulum stress can be reflected by caspase-12 expression. OBJECTIVE: To observe the expression rule of Caspase-12 in chondrocytes under the cyclic tensile stress. METHODS: Human chondrocytes were used as test subjects. After group assignment, mechanical loading system was used. The loading group and corresponding Z-ATAD-FMK inhibitor group received 2, 12, 24, 36, and 48 hours of mechanical stimulation. The blank group (0 hour) and the paired Z-ATAD-FMK inhibitor group received the same process as the loading group except the loading. After loading, cell morphology and growth were observed under the microscope. RT-PCR and western blot assay were used to detect the expression changes of caspase-12 gene and protein in each group. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Morphological observation results demonstrated that apoptosis appeared at 2 hours after loading, peaked at 24 hours. With prolonged time, cell growth showed the trend along stress, but apoptosis weakened. It is indicated that cyclic tensile stress could make chondrocyte apoptosis. Endoplasmic reticulum stress might be activated. The model of cells in vitro was established successfully. (2) Caspase-12 gene and protein expression showed consistent trend, and peaked at 24 hours, which showed significant differences as compared with the blank and inhibitor groups (P < 0.05). (3) Cyclic tensile stress can induce chondrocyte endoplasmic reticulum stress, and affect caspase-12 expression. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

大鼠髁突软骨细胞凋亡与胰岛素样生长因子1的影响

背景：胰岛素样生长因子1参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。 目的：探索胰岛素样生长因子1对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达变化的影响。 方法：体外培养并鉴定出生后1,28 d大鼠髁突软骨细胞后,将每个年龄组的髁突软骨细胞分别分为实验组和对照组。饥饿培养24 h后,实验组加入100 μg/L重组大鼠胰岛素样生长因子1细胞因子孵育48 h,对照组正常培养。 结果与结论：与对照组相比,实验组加入重组胰岛素样生长因子1后,髁突软骨细胞数量增多,增殖速度显著增加(P < 0.05)。实时PCR和Western blot检测显示,加入重组胰岛素样生长因子1培养48 h后,各组髁突软骨细胞中bcl-2 mRNA和蛋白表达增加,bax mRNA和蛋白表达减少(P < 0.05)。 提示胰岛素样生长因子1可以促进新出生及青春期大鼠髁突软骨细胞增殖,抑制其凋亡,并可能通过Bcl-2和Bax介导抑制凋亡。     

压力对髁突软骨细胞超微结构及可聚蛋白多糖分泌的影响

目的 探讨髁突软骨细胞超微结构及软骨可聚蛋白多糖(aggrecan)分泌随压力的变化过程。方法 体外培养髁突软骨细胞，采用可控液压细胞加载装置90kPa压强下分别加载60min、360min，透射电镜观察细胞的超微结构，原位杂交方法观察髁突软骨细胞(MCC)中软骨可聚蛋白多糖mRNA的表达。结果 对照组细胞在透射电镜下生长良好，未见到细胞凋亡现象；90kPa加压60min后细胞生长状态亦良好，多见到明显伸长盘绕的微绒毛；90kPa加压360min后细胞部分出现明显的细胞凋亡指征；软骨可聚蛋白多糖mRNA在受压60min后表达明显增强，加压时间延长到360min后表达弱于60min组但仍高于对照。结论适宜的压力可使MCC结构及功能都发生一定的变化，aggrecan代谢水平升高。     

手术治疗髁状突骨折的进展

下颌骨骨折是常见的面部损伤,而髁状突是下颌骨骨折的好发部位之一。髁状突是颞下颌关节重要的组成部分,故其治疗效果的优劣直接影响到颌、功能及面部外形,并有发展成颞下颌关节强直的潜在危险[1]。自Desant（1805年）最早发表了有关髁状突骨折治疗的观点,各种治疗方法不断出现,但基本可分为保守和手术治疗两大类。保守治疗后常出现咬合关系欠佳、关节疼痛、关节运动受限、假关节和关节强直,颌间固定,是以往保守治疗的主要方法而颌间固定具有以下缺点：①闭口固定时间过久,进食困难患者体重明显减轻。②口腔卫生较差。③下颌功能减…     

切开复位治疗髁状突骨折的疗效分析

目的 分析切开复位治疗髁状突骨折的疗效，探索更能提高髁状突骨折治疗效果的临床治疗方法。方法 对38例46侧髁状突骨折行切开复位微型钛板内固定术，术后行临床和影像学观察。结果 术后一年临床评价优良率为79％，无张口受限，关节疼痛厦弹响，无面瘫症状。影像学评价优良率为65％，髁状突异常主要有骨折片移位，骨质吸收和成角畸形。结论 切开复位微型钛板内固定治疗髁状突骨折可取得满意临床疗效，合理选择手术适应证和规范的手术操作是避免手术并发症的关键。     

周期性张应变通过活性氧生成促进膝关节骨关节炎患者的软骨细胞发生凋亡

目的探讨周期性张应变诱导体外培养的膝关节骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者软骨细胞发生凋亡过程中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)的作用机制。方法对受力组软骨细胞施加频率0.5 Hz、强度20%延伸率的周期性张应变。对照组细胞的培养条件与受力组细胞一致,但不受力。N-乙酰半胱氨酸(NAC)和丁胱亚磺酰亚胺(BSO)干预组的软骨细胞在受力前分别使用NAC和BSO进行预处理。流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA为荧光探针检测细胞内ROS含量,分光光度法检测软骨细胞内caspase-9活性变化。结果 0.5 Hz、20%延伸率的周期性张应变可以刺激软骨细胞内ROS、caspase-9活性及细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。使用NAC和BSO抑制及升高细胞内ROS含量后,可以明显抑制及促进周期性张应变诱导的软骨细胞的caspase-9活性及细胞凋亡率(P<0.05)。结论周期性张应变通过促进ROS生成,进而激活caspase-9介导膝关节OA患者软骨细胞发生凋亡。抑制ROS的生成可以减轻周期性张应变导致的软骨细胞凋亡。     

下颌持续前导作用下髁状突软骨改建的超微结构变化

背景：以往的动物实验证明,前导下颌可以导致年轻SD大鼠的颞下颌关节组织发生改建,主要表现为髁状突组织的生长速度加快,下颌骨发生继发性生长。但其髁突软骨细胞的超微结构改建研究仍是研究的关键所在。 目的：观察生长期大鼠在下颌持续前导作用下髁状突软骨生长和改建的组织学和超微结构的变化。 方法：将4周龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组24 h佩戴下颌前导矫治器,分别在干预3,7,14,21,30 d麻醉处死动物并取材,光学显微镜和透射电镜观察大鼠髁突软骨的组织学和超微结构的变化。 结果与结论：从干预14 d开始,实验组髁突软骨厚度在观察周期中出现先增加后变薄的现象,髁状突中后部软骨厚度变化显著(P < 0.01)。从干预7 d开始髁突软骨细胞的超微结构发生改建,包括细胞内细胞核固缩,粗面内质网腔隙肿胀,脂滴变小甚至消失,核周微丝变少且不规则,细胞外基质增宽变多以及出现大片空白等。结果证实,在下颌前导作用下,大鼠髁突软骨会随着承受力的时间增厚或变薄,软骨细胞基质合成能力也会显著增强。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

兔髁状突骨上组织Ⅲ型胶原的免疫组织化学研究

采用免疫组织化学方法对兔髁状突骨上组织中Ⅲ型胶原的研究发现，正常对照组Ⅲ型胶原含量较少，主要分布在肥大层浅层的软骨细胞胞浆及胞膜上，一些区域无阳性表达；拔除一侧下颌磨牙后２周、１月和３月时，Ⅲ型胶原的含量均有不同程度的增加，非拔牙侧的表达稍多。提示颞下颌关节的功能负荷改变后，髁状突的软骨发生改建，Ⅲ型胶原参与其改建和修复的过程。     

胰岛素样生长因子1促进创伤性关节炎软骨细胞的体外增殖

背景：早期受损的软骨细胞在体外培养时容易产生去分化,表型不稳,常需添加一定的生长因子。 目的：观察胰岛素样生长因子1对成年兔创伤性关节炎早期关节软骨细胞体外增殖的促进作用。 方法：采用改良Hulth法制备成兔创伤性关节炎模型,造模成功后无菌条件下片状切取股骨远端及胫骨近端,用消化培养法培养软骨细胞。将软骨细胞随机分为2组,对照组加入含体积分数10%胎牛血清因子的DMEM培养液培养;实验组在对照组的基础上加入100 μg/L的胰岛素样生长因子1。通过细胞形态学、细胞计数、细胞活性检测胰岛素样生长因子1对创伤性关节炎关节软骨细胞增殖的影响。 结果与结论：成功培养出早期创伤性关节炎兔软骨细胞,细胞多数为小细胞,形态有小梭形、小圆形及小多边形。苏木精-伊红染色显示实验组细胞数量多于对照组,MTT实验证实实验组细胞的吸光度值大于对照组   (P < 0.01)。结果提示,胰岛素样生长因子1能促进早期创伤性关节炎模型兔软骨细胞的体外增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

In situ hybridisation study of type I, II, X collagens and aggrecan mRNAs in the developing condylar cartilage of fetal mouse mandible

The aim of this study was to investigate the developmental characteristics of the mandibular condyle in sequential phases at the gene level using in situ hybridisation. At d 14.5 of gestation, although no expression of type II collagen mRNA was observed, aggrecan mRNA was detected with type I collagen mRNA in the posterior region of the mesenchymal cell aggregation continuous with the ossifying mandibular bone anlage prior to chondrogenesis. At d 15.0 of gestation, the first cartilaginous tissue appeared at the posterior edge of the ossifying mandibular bone anlage. The primarily formed chondrocytes in the cartilage matrix had already shown the appearance of hypertrophy and expressed types I, II and X collagens and aggrecan mRNAs simultaneously. At d 16.0 of gestation, the condylar cartilage increased in size due to accumulation of hypertrophic chondrocytes characterised by the expression of type X collagen mRNA, whereas the expression of type I collagen mRNA had been reduced in the hypertrophic chondrocytes and was confined to the periosteal osteogenic cells surrounding the cartilaginous tissue. At d 18.0 of gestation before birth, cartilage-characteristic gene expression had been reduced in the chondrocytes of the lower half of the hypertrophic cell layer. The present findings demonstrate that the initial chondrogenesis for the mandibular condyle starts continuous with the posterior edge of the mandibular periosteum and that chondroprogenitor cells for the condylar cartilage rapidly differentiate into hypertrophic chondrocytes. Further, it is indicated that sequential rapid changes and reductions of each mRNA might be closely related to the construction of the temporal mandibular ramus in the fetal stage.     

持续低氧预处理促进兔尿源性干细胞增殖和减少凋亡

目的探讨持续低氧(3%O_2)环境对兔尿源性干细胞(r USCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响。方法 r USCs分别置于3%O2和20%O_2条件下培养,连续观察其形态学变化,绘制细胞增殖曲线;检测其分泌、周期及凋亡变化。结果 r USCs原代培养约第6天便可见单个"米粒样"细胞,不同氧浓度培养后发现常氧组细胞为"长梭形",低氧组向"鹅卵石"样改变;两组细胞增殖曲线均呈"S"形,但低氧组增殖速度较快(P0.01);低氧组较常氧组相比,血管营养因子表达量均有上调且表达因子种类增加;常氧组G0/G1期细胞数为91.73%±1.35%,明显高于低氧组的71.82%±8.86%(P0.05);常氧组S期细胞数为3.48%±0.73%,显著低于低氧组的18.77%±3.87%(P0.01);流式常氧组凋亡率为3.24%±0.38%,明显高于低氧组的0.43%±0.05%(P0.001);Hoechst结果常氧组凋亡率为4.27%±0.48%,明显高于低氧组的1.37%±0.33%(P0.01)。结论持续性低氧(3%O2)环境可促进r USCs细胞的增殖,减少细胞凋亡,增加其分泌功能。     

Influence of food consistency on growth and morphology of the mandibular condyle

The objective of this study was to determine if variation in the shape and mineralization of the mandibular condyle are the result of natural adaptation in response to different functional loading demands. Eight female Kuni Kuni piglets were randomly assigned to two groups of four, receiving either a soft or hard diet. Each animal was given three separate doses of vital stains intravenously at set time points during the study. At 8.5 months, animals were euthanized and temporomandibular joints (TMJs) were excised. Histological analysis was used to measure the amount of new bone deposition in the anterior, central, and posterior regions of the mandibular condyle. Backscatter electron (BSE) imaging was used as a semiquantitative estimate of bone mineralization in these two diet groups. Histology revealed that the degree of new bone deposition in the hard-diet group was significantly (n = 4, P < 0.001, paired t-test) higher than that of the soft-diet group. Also, the majority (87%) of animals fed a hard diet tended to show greater new bone deposition on the leftside in comparison to the right, indicating a chewing preference for the left side. In both groups, the degree of new bone deposition was significantly (P < 0.01) higher in the posterior area than in other regions. BSE imaging corroborated basic histology results, with significantly (P < 0.01) higher mineralization levels detected in the hard-diet group. These findings indicate that diet consistency has a small but significant effect on the rate of bone deposition in the mandibular condyle.     

紫檀芪干预人软骨细胞的氧化应激性凋亡

文题释义：紫檀芪(pterostilbene,PTE)：是紫檀、蓝莓、葡萄和花榈木等中药植物的有效成分之一,是白藜芦醇衍生的非黄酮类多酚化合物,两者具有相似的药理特性。紫檀芪是一种强大的天然抗氧化剂,已有证明能降低细胞氧化应激和活性氧的发生,并抑制不同细胞系过氧化氢酶的表达增加。 氧化应激：是指体内氧化与抗氧化作用失衡,倾向于氧化,导致中性粒细胞炎性浸润,蛋白酶分泌增加,产生大量氧化中间产物。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用,并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。 背景：已有研究表明多种抗氧化剂可抑制炎性因子生成而表现出抗关节炎作用,紫檀芪是一种强大的天然抗氧化剂,但其在软骨细胞抗氧化应激作用中的研究目前尚无相关报道。 目的：探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响。 方法：体外培养正常人关节软骨细胞,使用含不同质量浓度紫檀芪(7.8-32 000 μg/L)的培养基继续培养  24 h,确定紫檀芪的最佳浓度。实验分为对照组,紫檀芪组(含有125 μg/L紫檀芪的培养基),H₂O₂组(0.2 mmol/L 的H₂O₂),H₂O₂+紫檀芪组(含有125 μg/L 紫檀芪的培养基预处理2 h后,更换含H₂O₂与125 μg/L 紫檀芪的培养基继续培养),分别处理24 h。通过MTT实验观察细胞增殖率,应用苏木精-伊红染色观察细胞形态及数量、FDA/PI染色检测细胞活性、番红O染色观察蛋白聚糖水平的变化,以及通过RT-PCR检测软骨细胞分化标志基因聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原酶1表达变化。研究方案取得广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准,批号201805008。结果与结论：①MTT实验显示,紫檀芪在15.6-250 μg/L可显著促软骨细胞生长,尤其是在为125 μg/L时促进作用最明显;②苏木精-伊红染色和FDA/PI染色结果显示,在H2O2组中软骨细胞的数量减少,在H2O2+紫檀芪组中细胞数量较单独H2O2刺激组显著增加,细胞活性提高;③番红O染色显示紫檀芪促进软骨细胞分泌蛋白聚糖,抑制H2O2对软骨细胞的不利作用;④RT-PCR结果表明紫檀芪可促进氧化应激损伤的软骨细胞高表达聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原酶1基因,改善软骨细胞分化功能;⑤结果说明,紫檀芪能够促进软骨细胞增殖,抑制氧化应激引起的人关节软骨细胞凋亡。 ORCID: 0000-0002-2761-6222(林义才) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子调控软骨细胞增殖中的作用

背景：L型钙通道作为电压依赖式钙通道的一种,是细胞外钙离子进入细胞内的主要途径,在维持细胞的形态及生理活动上起重要作用,具有单通道电导较大,通道衰减较慢,通道开放持续时间较长的特点,以往研究表明碱性成纤维细胞生长因子能够促进体外培养的软骨细胞的增殖。 目的：利用膜片钳技术探讨L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞增殖分化调控中的作用。 方法：取3日龄新西兰兔关节软骨细胞,培养至第2代后,随机分为实验组和对照组,关节软骨细胞分别在含有10 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子及不含生长因子的培养液中培养。采用膜片钳记录L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子作用下的开放情况。然后采用激光共聚焦显微镜观察碱性成纤维细胞生长因子培养2周后软骨细胞内游离钙离子浓度。最后用Cell Titer单溶液细胞增殖反应试剂盒分析连续培养8 d软骨细胞增殖情况和免疫组织化学染色方法观察培养10 d后软骨细胞合成Ⅱ型胶原情况。 结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子对L型钙通道的开放有一定的抑制作用,导致细胞内游离钙离子浓度降低(P < 0.01)。碱性成纤维细胞生长因子培养的软骨细胞与常规条件下培养的软骨细胞相比细胞数量增多   (P < 0.01),Ⅱ型胶原染色面积明显增大(P < 0.05)。结果证实,碱性成纤维细胞生长因子能够通过抑制L型钙通道的开放使软骨细胞内钙离子浓度维持在较低水平,以此促进软骨细胞的增殖和分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

新生兔气管软骨细胞的生物学特性

 目的：探讨体外分离培养的新生兔气管软骨细胞的生物学特性。方法：通过酶消化法体外分离培养新生兔气管软骨细胞;倒置显微镜观察软骨细胞形态及生长状况;电镜观察软骨细胞超微结构;运用real-time PCR、免疫细胞化学染色和甲苯胺蓝染色检测气管软骨细胞分泌的细胞外基质成分。结果：体外分离、培养的兔气管软骨细胞呈短小三角形或不规则形贴壁生长。超微结构显示细胞较多突起,孔隙较多,胞质丰富,细胞器发达,细胞内可见大量蛋白分泌物。软骨细胞表达I、II型胶原、蛋白聚糖等,以II型胶原和蛋白聚糖表达为主。免疫细胞化学染色II型胶原和SOX9阳性,I型胶原弱阳性。甲苯胺蓝染色阳性。结论：适宜的酶消化单层培养法获得的新生兔气管软骨细胞具有分泌软骨细胞外基质成分的特性,可初步为体外构建组织工程气管治疗新生兔气管狭窄的实验研究提供种子细胞。     

RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖

目的：研究RACK1高表达对人结肠癌细胞增殖能力的影响。方法：采用脂质体转染术分别建立 RACK1表达下调的SW620细胞系、RACK1表达上调的SW480细胞系以及对照细胞系;采用CCK-8细胞增殖测定、软琼脂集落形成实验、EdU掺入实验以及流式细胞术检测RACK1表达改变对 SW620和SW480细胞增殖的影响;采用Western blot分析RACK1表达改变对G1/S期限制点调控蛋白Cyclin D1和p27蛋白表达的影响。结果：下调RACK1的表达抑制SW620细胞的生长、软琼脂集落形成能力,降低EdU标记的S期细胞数目,阻滞细胞周期于G1/S期;而上调RACK1的表达增强 SW480细胞的生长、软琼脂集落形成能力,增加EdU标记的S期细胞数目,促进细胞周期G1/S期进程。结论：RACK1高表达促进人结肠癌细胞的生长和增殖。