可变剪切事件在鳖甲煎丸抑制肝癌细胞增殖过程中的作用机制及变化

目的 探讨可变剪切事件在鳖甲煎丸抑制肝癌细胞过程中的变化和作用机制。方法 鳖甲煎丸血清(实验组)、空白血清(对照组)分别作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,观察两组肝癌细胞增殖活性,采用全细胞转录组学检测和分析两组肝癌细胞的可变剪切变化及基因的差异表达。结果 实验组细胞的增殖活性较对照组明显降低(P<0.05)。实验组鉴定出5 736个基因对应20 447个剪切体,对照组中鉴定出5 533个基因对应18 955个剪切体,且均以外显子跳跃和第1个外显子可变剪切两种类型为主。实验组中有1 061个基因的可变剪切事件不重合,对照组中有858个基因不重合,96个基因差异表达明显,其中ARHGAP8、ATP5L2、BIRC7、CASP9、HES5、INPP4B、SLC6A19、TNRC18、TPT1与肿瘤发生、发展密切相关。CASP9、HES5、INPP4B、SLC6A19的表达与肝癌患者生存率明显相关(P<0.05)。在不同肝炎病毒感染所致的肝癌中,ARHGAP8、HES5、INPP4B、TPT1起到保护因素的作用;酒精摄入所致的肝癌中,ATP5L2、HES5、INPP4B、TN...     

可变剪切事件在胰腺癌中的发生及其临床意义

目的探索胰腺癌(PAAD)中存在的差异RNA剪接模式,分析可变剪切(AS)事件与胰腺癌临床预后的关系。方法自癌症基因组图谱(TCGA)中下载RNA-seq数据、临床数据资料,提取剪接因子(SF)表达量;采用TCGA SpliceSeq工具下载提取AS事件数据,评估7种可变剪切类型在胰腺癌病例中的发生情况;采用Kaplan-Meier分析及Cox回归分析评估AS事件风险值和生存时间之间的相关性,并探索PAAD的独立危险因素;采用Cytoscape构建基于生存相关的AS事件与SF的调控关系网络。结果PAAD中与生存相关的AS事件以外显子跳跃(ES)类型多见,外显子互斥(ME)类型较少;各亚型AS事件对生存影响不同,低风险组的预后较好,且风险值可作为PAAD独立预后因素(P<0.01,AUC=0.765)。剪接网络提示PAAD患者中剪接因子的表达与AS事件之间具有相关性。结论AS事件风险值可作为PAAD的独立预后因子,且SF对AS事件的调控呈多样性,SF可能会作为PAAD治疗的潜在靶点。     

比格犬一种新雌激素β受体可变剪切体的克隆及鉴定

目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。     

Peroxiredoxin Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达

目的探讨Peroxiredoxin(PRDX)Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达。方法分别选用C57BL/6j小鼠不同周龄、不同动情周期以及促性腺激素预处理卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDXⅥmRNA表达。结果 PRDX Ⅵ mRNA在新生(3D)小鼠卵巢中表达为3周龄组的1.47倍、为6周龄组的3.89倍、为8月龄组的4.28倍(P<0.05);在小鼠动情前期卵巢中表达高于动情后期和动情间期(P<0.05);在促性腺激素预处理试验中,在孕马血清注射48 h后卵巢中表达是对照组的1.7倍,而人绒毛膜促性腺激素注射8、10及12 h后分别为对照组的0.44、0.41、0.54倍,而48 h后则为对照组的2.32倍(P<0.05)。结论 PRDX Ⅵ可能通过调节卵巢氧化应激压力而在卵泡发育和卵巢衰老中发挥重要调控作用。     

TLR4在抵抗生殖道感染过程中对小鼠卵泡发育的影响

目的 探讨固有免疫调节受体TLR4在抵抗生殖道感染过程中对卵泡发育的影响.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为LPS组、PBS组和未处理组,每组12只.组织学方法计数各组卵泡发育的变化,real time qPCR技术检测TLR成员在LPS组卵巢中的表达模式.体外培养BALB/c小鼠的卵巢,随机分为LPS刺激组和对照组....     

单细胞转录组测序在哮喘研究中应用的研究进展

 哮喘是一种异质性疾病,传统转录组测序方法获得的是同一基因在所有细胞中的平均表达水平,不能完全揭示异质性哮喘的发病机制及药物疗效。单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing,scRNA-seq）是在单细胞水平对全转录组进行扩增与测序的一项新技术,能够获得每个细胞的mRNA表达信息,发现不同的细胞亚群及相关信息,揭示细胞间基因表达的异质性及鉴定稀有细胞类型,为深入研究和理解哮喘发病机制提供了新的技术手段。本文对scRNA-seq技术在哮喘研究中的应用做一概述,以期为深入研究哮喘这一异质性疾病的发病机制提供新的视角和研究思路。     

小鼠窦前卵泡体外培养的研究

目的探讨不同直径的窦前卵泡的培养对获得成熟卵母细胞的影响。方法出生10天的小鼠窦前卵泡体外培养12 天。直径小于80μm的卵泡258个为A组;直径80-110μm的卵泡306个为B组。观察卵泡形态的变化,测量卵泡直径的变化。结果 A组卵泡成活率56．2％,窦腔形成率13．1％,卵母细胞成熟率11．7%;B组卵泡成活率89．5％,窦腔形成率51．8％,卵母细胞成熟率56．6％。B组卵泡成活率、窦腔形成率和卵母细胞成熟率显著高于A组(P<0．05,P<0．01,P<0．01)。A组卵泡直径(72．5±15．7)μm,培养后卵泡直径(246．3±22．2)μm(P<0．01);B组卵泡直径(101．7±20．1)μm,培养后卵泡直径(370．3 ±33．9)μm(P<0．05)。A组卵母细胞直径(52．3±4．4)μm,培养后卵母细胞直径(68．5±9．3)μm(P<0．01);B组卵母细胞直径(55．6±5．8)μm,培养后卵母细胞直径(71．9±5．7)μm(P<0．01)。结论出生10天小鼠窦前卵泡培养后可以得到第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵母细胞;直径80μm以上的卵泡成活率,窦腔形成率,卵母细胞成熟率较高,培养效果较好。     

牙本质基质蛋白1突变小鼠血脑屏障通透性变化的分子机制

目的 通过单细胞转录组数据,探究牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)突变小鼠血脑屏障通透性改变的分子机制.方法 通过同源重组的方法,在C57BL/6J背景的小鼠体内敲入一段突变序列,将DMP1糖基化位点的丝氨酸错义突变为分子量更小的甘氨酸,构建S89G-DMP1小鼠模型.前序研究...     

单细胞转录组测序分析人类胚胎发育阻滞的潜在机制

目的 探讨胚胎发育阻滞的分子机制,为提高辅助生殖成功率提供新思路。方法 单细胞转录组测序技术研究发育阻滞胚胎（包括体外受精和胞质内单精子注射过程）及对照组的转录组情况,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)等生物信息学手段分析与胚胎阻滞相关的信号通路和关键基因。结果 阻滞胚胎中与细胞分裂、细胞周期等相关的信号通路表达异常。与ICSI组相比,IVF组阻滞胚胎的细胞骨架、氧化磷酸化等通路表达异常。结论 通过单细胞转录组测序技术分析阻滞胚胎转录组的结果说明细胞分裂、周期、代谢等通路可能影响胚胎正常发育,ICSI过程影响了线粒体功能、结构的变化。     

自然流产患者的卵泡液代谢标志物研究

目的 探讨与自然流产发生相关的卵泡液（FF）代谢标志物,以进一步科学阐释自然流产的发生机制。方法 利用超高效液相色谱- 高分辨质谱技术对因输卵管因素行体外受精- 胚胎移植（IVF-ET）后自然流产患者即流产组（40 例）及分娩者即对照组（45 例）的FF 进行代谢组学分析。结果 流产组和对照组FF 共32 种差异代谢物,主要有氨基酸类、胆固醇类、维生素类、脂肪酸类、胆酸类、溶血卵磷脂类及其他7 大类,其中上调的有Dehydroepiandrosterone sulfate,LysoPC（16 ∶ 0）,Palmitoylglycerophosphocholine等8 种,下调的有L-valine,6-Oxohexanoate,L-Phenylalanine,2-Oxoglutarate,Linoleate 等24 种。结论 本研究鉴定的32 种差异代谢物与自然流产相关,为自然流产提供可能的诊断依据和治疗靶点,从FF 代谢组学层面为阐释自然流产发生机制提供科学依据。     

X线照射后小鼠淋巴滤泡的动态变化

目的　探讨X线照射对小鼠月国窝淋巴结淋巴滤泡的影响。方法　采用组织学、免疫组织化学及三维重塑技术 ,观察小鼠全身X线照射后月国窝淋巴滤泡的变化。结果　小鼠全身X线照射后月国窝淋巴结重量迅速减小 ,淋巴细胞数量下降 ,淋巴滤泡被破坏。结论　X线照射可破坏淋巴滤泡 ,并经过一定时期可以重新聚集 ;再构筑的淋巴滤泡不是新产生的而是受损淋巴滤泡再生形成的     

Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的新的全长ｃＤＮＡ。方法 从小鼠胚胎ｃＤＮＡ文库中筛选出一个新的ＥＳＴ,以８～９ｄ齿小鼠胚胎组织ｍＲＮＡ为模板进行ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）,结合ＰＣＲ筛选ｃＤＮＡ文库,获得共全长ｃＤＮＡ序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。整合后的ｃＤＮＡ两上物进行ＲＴ－ＰＣＲ,克隆ＰＣＲ产物,并对产物进行全序列测定,验证整     

冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的影响

目的：探讨冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的形态及存活率的影响。方珐：程序冷冻法保存人卵巢组织．采用常规组织学检测冷冻前后卵泡中颗粒细胞形态,并采用胶原酶消化联合镜下机械分离卵巢组织中的始基卵泡．采用双荧光标记,检测冷冻前后人卵巢组织分离始基卵泡中颗粒细胞的存活比例。结果：形态学检测发现,冷冻前卵巢组织中颗粒细胞发生损伤的始基卵泡占12．4％．卵母细胞损伤20．6％：冷冻后两者的比例分别为23．3％与24．4％。荧光标记的冷冻前卵巢组织中颗粒细胞存活的始基卵泡占72．7％,〈50％颗粒细胞存活的卵泡仅占3．6％,卵母细胞存活率为85．5％;冷冻组中颗粒细胞存活的始基卵泡占79．5％,〈50％颗粒细胞存活的卵泡仅占2．5％,卵母细胞存活率达86．1％。结论：冷冻复温的过程主要破坏卵泡中的颗粒细胞．而对卵母细胞的损伤很小。     

大鼠磷脂酶C-γ1前体mRNA剪接的初步鉴定

目的 探讨在大鼠中是否存在磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)选择性剪接变异体的表达及其可能意义.方法 针对在人中已发现的选择性剪接位点(即第30内含子的3'末端与第31外显子交界处)自行设计引物,将大鼠RNA逆转录为cDNA后,再用该对引物进行PCR扩增及序列测定.用此方法初步筛查了大鼠包括胚胎时期、出生早期、成年时期6种脏器组织心、肝、肺、肾、脑和眼球样品共21份.结果 在大鼠中未发现与人相似的第一种剪接方式PLC-γ1aNM 002660).结论 (1)由于不同物种之间的差异,在大鼠中可能不存在与在人类中已发现的PLC-γ1前体mRNA相似的选择性剪接方式,在大鼠中PLC-γ1转录后的剪接主要以与人类相似的第二种剪接方式(PLC-γ1b)为主.(2)在大鼠中PLC-γ1的选择性剪接位点可能与人不同而位于其他位点.     

LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达

目的:研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达.方法:采用以SYBR Green I为荧光染料的定量RT-PCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达.结果:FQ RT-PCR结果表明,LMO3在出生前高表达,P7d后表达水平急剧下降,至成年都维持在一个较低的水平. LMO3 mRNA在小鼠胚胎期E10.5d即有表达,但仅限于整个脑泡组织内,胚体其他区域均为阴性;E11.5d脑区信号逐渐加强,无核团及脑区的特异性,胚体其他部分仍为阴性;E15.5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色;P7d LMO3阳性信号较出生前变弱,分布逐渐集中;P14～P60d LMO3 mRNA表达范围较P7d逐渐缩小,但仍有广泛表达,阳性信号主要集中于不同核团,表达有强弱之分.结论:LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持有关.     

Modification of Alternative Splicing of Bcl-x Pre-mRNA in Bladder Cancer Cells

The development , progression, and mainte-nance of cancer involve deregulation of apoptosis .Genetic and biochemical studies have revealed thatPCDis under complex and delicate regulation. Ani mportant level of such regulation may be pre-mR-NAsplicing. Many apoptotic regulatory genes un-dergo alternative splicing to control the gene ex-pressionlevel .Forinstance ,Bcl-x has two alterna-tive 5' splice sites and produces two distinct pro-teins :Bcl-xL and Bcl-xS.Bcl-xL,like Bcl-2 ,is a-ble t…     

一个新的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体的克隆及鉴定

目的:克隆并鉴定NPCEDRG基因mRNA剪接变异体.方法:利用5’-RACE、3’-RACE在CNE2细胞中对NPCEDRG基因mRNA剪接变异体进行扩增,T/A克隆入pMD20载体,所获得的阳性重组子经测序证实.结果:成功克隆得到一种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CD...     

食蟹猴脑缺血过程中皮层谷氨酸水平动态变化的研究

目的 探讨食蟹猴脑缺血过程中皮层细胞外谷氨酸水平动态变化.方法 取3只(7.3±1.5)岁的食蟹猴,将大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA) M1段近端夹闭1h后放开,建立食蟹猴脑缺血性模型,并通过磁共振成像检查(MRI)、神经功能缺损评分评价临床表现.在MCA M1夹闭前、夹闭过程中、夹闭放开后和术后第1、2周于手术同侧大脑皮层运动区同一部位,运用电化学微电极传感器技术检测该部位谷氨酸水平.结果 短期夹闭MCA M1段的食蟹猴大脑皮层运动区谷氨酸水平在MCA M1夹闭过程中较夹闭前上升(P =0.003);夹闭放开后较夹闭过程中的变化差异无统计学意义(P =0.877);术后第1周较夹闭放开后下降(P =0.004);术后第2周较术后第1周的变化差异无统计学意义(P =0.085).结论 脑缺血时可能加速皮层细胞外谷氨酸的释放,再灌注后谷氨酸的释放可能有所减弱或处于动态平衡.     

肝癌相关基因的分子克隆和可变剪切分析

目的: 获取肝癌相关基因(hepatoma associated gene,HTA)的mRNA分子全长序列并对其可变剪接进行分析,检测其转录本在各肝癌细胞系中的表达,为进一步研究该基因在肝癌发生、发展中的作用奠定基础。方法: 用3'RACE 和5'RACE方法扩增HTA基因的全长序列并对其序列信息和可变剪接进行扩增和测序分析,用Northern印迹检测该基因转录本在不同肝癌和正常肝细胞系中的表达。结果: HTA基因全长序列为1414 bp,经分析该序列包含3个外显子,2个内含子,其中2号内含子在可变剪接中被作为外显子表达。Northern印迹显示HTA基因1.7 kb转录本和1.4 kb转录本均表达于恶性肝癌细胞系,而不表达于正常细胞系。结论: 成功获得了HTA基因的全长序列并对其可变剪接进行了分析,2个大小不同的转录本均在肝癌细胞系中特异性表达,作为一个肝癌相关基因值得进一步深入研究。