骨髓间充质干细胞共培养减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞损伤

目的：观察骨髓间充质干细胞对顺铂所致的肾小管上皮细胞损伤影响并探讨其机制。方法:①从小鼠骨髓中分离及鉴定间充质干细胞；②流式细胞仪检测顺铂所致肾小管上小管上皮细胞的坏死及凋亡状况。③骨髓间充质干细胞与肾小管上皮细胞共培养后，观察肾小管上皮细胞的坏死及凋亡状况。结果:细胞凋亡是顺铂致肾小管上皮细胞损伤的重要机制；骨髓间充质干细胞与肾小管上皮细胞间接共培养条件下，肾小管上皮细胞数量明显增高而肾小管上皮细胞的凋亡百分率明显降低；直接共培养较间接共培养肾小管上皮细胞数量增加更为明显。结论:骨髓间充质干细胞抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡及促进肾小管上皮细胞增殖，这一作用可能与骨髓间充质干细胞的旁分泌作用密切相关。     

黄芪甲苷对肺炎链球菌体外诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的影响

目的 探讨黄芪甲苷对肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响和机制探讨。方法体外培养正常肺上皮BEAS-2B细胞,用肺炎链球菌处理后,选择黄芪甲苷10、20、40、60μmol/L处理,采用MTT法检测细胞活性。选择黄芪甲苷40μmol/L进行后续实验,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Cas3、MCP-1、NF-κB蛋白表达;qRT-PCR检测Bcl-2、Bax、Cleaved Cas3、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达量;ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果 与Con组相比,SP组细胞活性明显降低（P<0.05, P<0.01）;与SP组相比,SP+Astragaloside Ⅳ各组呈剂量效应关系增加细胞活性（P<0.05, P<0.01）。肺炎链球菌感染细胞后促进凋亡,并增加炎症相关因子和蛋白表达。黄芪甲苷降低肺炎链球菌诱导的细胞凋亡率,及炎症相关因子和蛋白表达。结论 黄芪甲苷能减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤,...     

p38 MAPK在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p38 MAPK在顺铂诱导大鼠近端肾小管上皮细胞(RPTC)凋亡中的作用。方法:首先采用Western blot实验检测0、5、10和20μmol/L顺铂处理24 h对细胞凋亡的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μmol/L顺铂联合50 mg/L p38 MAPK抑制剂SB203580刺激RPTC,实验分为对照组、顺铂组及顺铂+SB203580(加入SB203580处理RPTC 1 h后再给予顺铂处理24 h)。采用相差荧光显微镜观察和流式细胞术分析顺铂处理后RPTC的凋亡情况;采用Ac-DEVD-AFC试剂盒检测RPTC裂解液中的caspase活性;Western blot实验检测p38、磷酸化p38、cleaved PARP和cleaved caspase-3等的蛋白水平;pH计检测顺铂处理后RPTC外环境pH值改变。结果:20μmol/L顺铂处理RPTC 24 h,可以明显诱导细胞凋亡;顺铂处理15 min后RPTC中p38 MAPK开始磷酸化并达到高峰。顺铂处理后12.08%的RPTC呈凋亡形态,具有增强的caspase活性,并且cleaved PARP和cleaved caspase-3水平明显升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂SB203580可抑制p38的磷酸化,降低RPTC的凋亡率和caspase活性,并减少cleaved PARP和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时,SB203580可逆转顺铂诱导的RPTC培养基pH值的改变。结论:p38 MAPK的磷酸化在顺铂诱导的RPTC凋亡中发挥作用。顺铂诱导RPTC凋亡后,可改变细胞外酸性环境,并可被p38 MAPK抑制剂SB203580所抑制。     

黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS 含量的影响研究

目的:探讨黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS 含量的影响。方法:HK-2 细胞分为低糖组、高糖组和黄芪多糖+高糖组,处理细胞48 h 后,CCK-8 实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS 含量;Western blot 检测E-cadherin、α-SMA、STAT1、STAT3、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达。结果:高糖组细胞存活率显著低于低糖组(P<0.01),细胞凋亡率、ROS 含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达均显著高于低糖组(P<0.01),高糖+黄芪多糖组细胞存活率显著高于高糖组,细胞凋亡率、ROS 含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达均显著低于高糖组(P<0.01)。结论:黄芪多糖可促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡及转分化,其机制与下调JAK/ STAT 信号通路有关。     

黄芪甲苷拮抗马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤

 目的：观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤的影响。方法：（1）体外实验：四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致人近曲小管上皮细胞（HK-2）存活率降低的拮抗作用;（2）动物体内实验：马兜铃酸Ⅰ腹腔注射6 d建立昆明小鼠急性肾损伤模型,同时用50 mg·kg^-1·d^-1黄芪甲苷灌胃进行干预治疗。7 d后检测尿蛋白、尿γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）、血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）水平的变化和肾脏组织形态学变化。结果：（1）黄芪甲苷能增加马兜铃酸Ⅰ处理的HK-2细胞存活率,并呈剂量依赖趋势;（2）黄芪甲苷干预组小鼠尿蛋白、尿γ-GT、SCr、和BUN的水平均低于马兜铃酸肾损伤组;近曲小管坏死和裸基底膜面积也较马兜铃酸肾损伤组明显改善。结论：黄芪甲苷可以拮抗马兜铃酸Ⅰ诱导的急性肾小管损伤。     

不同剂量黄芪注射液对人肾小管上皮细胞黏附分子CD146表达的影响

目的:探讨不同剂量黄芪注射液对人肾小管上皮细胞(HK2)黏附分子CD146表达的干预作用。方法:将传代HK2等分为5组,进行培养处理:正常对照组(LG组,只加5.5mmol/L D-葡萄糖),高糖组(HG组,加入25mmol/L D-葡萄糖),黄芪注射液干预组:在HG组中加入不同剂量黄芪注射液,加入2μg/ml者为低剂量组(AML组)、加入20μg/ml者为中剂量组(AMM组)、加入200μg/ml为高剂量组(AMH组)。观察37℃培养24h、48h、72h后,各组HK2形态变化、分别收集各组培养细胞,用Western Blotting检测其CD146蛋白表达。结果:HG组较LG组HK2变长,呈梭形,细胞间连接疏松,间隔增大;黄芪注射液干预各组,细胞形态均较HG组变小变圆,且连接逐渐紧密,AMH组呈堆积生长。HG组CD146表达均较LG组明显增加(P0.01),干预24h、48h、72h,AMM组、AMH组与HG组比较,CD146表达均明显减少(P0.05或P0.01),AML组干预培养72h,CD146的表达亦明显减少(P0.01)。结论:黄芪注射液改善高糖引起的HK2形态改变和降低其CD146表达,对防治DN有积极作用。     

骨髓源性干细胞向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小管上皮细胞分化的研究

目的:观察骨髓源性干细胞能否向慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠肾小管上皮细胞分化。方法:雌性Wistar大鼠30只,随机分移植组、非移植组和正常对照组,每组10只,移植组和非移植组经关木通水煎剂灌胃12周,制作CAAN大鼠模型,第12周末,移植组经尾静脉输入骨髓干细胞1×108个/只(约0.35 mL/只),非移植组经尾静脉输入0.35 mL生理盐水;正常对照组,先用饮用水灌胃12周,然后经尾静脉注射等量(0.35 mL)生理盐水。第16周分别处死大鼠。大鼠在处死时留取血、尿、肾组织标本。肾组织连续切片,做免疫荧光(IF)染色结合Y染色体荧光原位杂交(Y-FISH)检测观察移植组大鼠肾组织中骨髓源性干细胞的分化情况。结果:第16周,移植组大鼠肾组织中可见Y+CK18+及Y+RCAI+双阳性细胞,非移植组未见到Y+细胞。结论:骨髓源性干细胞具有向CAAN大鼠肾脏小管上皮细胞分化的潜能。     

大鼠脂肪源性干细胞诱导分化为成骨细胞的免疫原性改变

目的观察脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)体外成骨诱导后的免疫原性。方法体外原代培养ADSC,成骨诱导1、7、14、21 d后,采用流式细胞仪检测各组主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ)的表达,单向混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)测定刺激指数(stimulation index,SI)。结果 ADSC成骨诱导后1、7、14、21 d均未检测到MHC-Ⅱ表达;MLC未测到细胞明显增殖(1.15±0.12～1.16±0.18,P>0.05)。结论 ADSC体外成骨诱导后免疫原性低表达,适合作为异体移植细胞。     

下调HIPK2基因表达促进顺铂诱导的肾小管上皮细胞HKC凋亡

目的探讨HIPK2对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法构建顺铂诱导的HKC细胞凋亡模型,实时荧光定量PCR和Western blot检测HIPK2的表达;设计合成2条HIPK2 siRNA干扰片段,通过脂质体转染HKC细胞,建立HIPK2干扰的细胞株;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HIPK2 mRNA和蛋白的表达;再用顺铂处理细胞,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot检测Bax表达的影响。结果顺铂呈剂量依赖性诱导的HKC细胞凋亡过程中,HIPK2 mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P0.05);转染siRNA后可显著降低HIPK2在HKC细胞内mRNA和蛋白的表达(P0.05),且HIPK2表达降低后会促进顺铂诱导的HKC细胞凋亡。结论HIPK2可抑制顺铂诱导的HKC细胞凋亡。     

犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤

文题释义：犬脂肪间充质干细胞：由犬皮下脂肪组织分离得到,是一类具有自我更新潜能、多向分化能力的成体多能干细胞,它能分泌多种细胞因子、趋化因子以及外泌体等活性物质,具有强大的组织修复作用,在宠物临床上有很大发展前景。外泌体：是活细胞分泌产生的胞外囊泡,大小为40-100  nm,含有多种蛋白质、mRNA和miRNAs,它通过这些生物分子的传递改变受体细胞的生化特征,是参与细胞间通讯的重要成分,而且在疾病诊断和治疗中也发挥着重要作用。  摘要背景：犬肾脏损伤的特点是肾小管上皮细胞凋亡坏死。最近研究表明间充质干细胞及其外泌体在人、大鼠、小鼠肾损伤治疗中显示出良好的效果,但对犬的研究甚少。目的：探讨犬脂肪间充质干细胞及其外泌体对庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤的影响。方法：采用5 mmol/L硫酸庆大霉素处理犬肾小管上皮细胞,随后分别将犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体与受损犬肾小管上皮细胞共培养。在24 h及48 h后采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,最后通过Q-PCR法检测PCNA、Bcl-2和Bax基因的表达。结果与结论：犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体均可显著促进受损犬肾小管上皮细胞增殖以及减少细胞凋亡(P < 0.05),其中犬脂肪间充质干细胞外泌体的效果最好,可显著提高受损犬肾小管上皮细胞PCNA、Bcl-2基因的表达(P < 0.05),对庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞损伤发挥修复作用。 ORCID: 0000-0003-3613-2980(林嘉颖) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

大鼠成体骨髓干细胞在肾小管上皮细胞再生中的作用

目的：观察肾小管上皮细胞的更新、再生有无来源于骨髓干细胞。方法:建立性别不匹配大鼠间的骨髓移植和肾脏移植模型，通过激光切割技术，将肾小管上皮细胞切割下来，提取其基因组DNA，用针对大鼠Y染色体上性别决定基因（Sry基因）的引物进行PCR反应，以观察提取的DNA中有无Sry基因。结果:据PCR反应结果，在2种模型所取标本的肾小管上皮细胞中，大部分可见Sry基因的存在。结论:骨髓干细胞可能是肾小管上皮细胞再生的一个来源。     

C-反应蛋白诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨与微炎症状态相应的C-反应蛋白(CRP)水平是否诱导肾小管上皮细胞凋亡。方法:以微炎症状态相应的CRP浓度刺激HK-2细胞。采用AnnexinⅤ-FITC、PI染色和流式细胞术检测凋亡细胞的百分率。采用Hoechst 33258染色观察肾小管上皮细胞凋亡的形态学改变。比色法检测细胞caspase-3活性。Real-time PCR检测促凋亡基因bax、抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达。结果:CRP呈剂量和时间依赖性地诱导HK-2细胞凋亡,细胞凋亡在CRP浓度为10 mg/L时达高峰,在20 mg/L时则以晚期凋亡和坏死为主。Hoechst 33258细胞核染色显示CRP作用的HK-2细胞呈现染色质浓缩、碎裂或染色质边集等细胞凋亡的特点。CRP增高细胞caspase-3的酶活性、上调促凋亡基因bax的表达和下调抗凋亡基因bcl-2的表达。结论:CRP轻度增高可诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

特异性小干扰RNA沉默CHOP对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:研究C/EBP同源蛋白(CHOP)对肾小管上皮HK2细胞凋亡的影响。方法:采用qPCR法检测急性肾损伤患者及健康对照者血清中CHOP的mRNA水平。体外培养肾小管上皮HK2细胞,随机分为对照组、阴性组和si-CHOP组,si-CHOP组和阴性组分别转染CHOP小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导细胞损伤。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率, Western blot检测细胞中细胞核抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与健康对照者相比,急性肾损伤患者血清中CHOP的表达量显著增加(P0.05);转染CHOP siRNA显著降低肾小管上皮细胞HK2中CHOP的水平,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。敲减CHOP的表达显著增加肾小管上皮HK2细胞的活力(P0.05),降低其凋亡率(P0.05),增加Ki-67和PCNA的表达量(P0.05),下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。结论:在急性肾损伤患者血清中CHOP的水平增加。敲减CHOP表达通过调节增殖和凋亡相关蛋白的表达抑制肾小管上皮HK2细胞的凋亡。     

敲降ZEB1基因表达对人脂肪间充质干细胞增殖、周期与凋亡的影响

目的探讨敲降ZEB1基因表达对人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)增殖、周期和凋亡的影响。方法胶原酶消化法提取人脂肪组织中原代间充质干细胞,对其进行免疫学表型、成骨和成脂分化能力鉴定后用于实验。脂质体转染法将siRNA转入h ADSCs,实时定量PCR和Western blot检测ZEB1、细胞增殖、周期和凋亡相关基因mRNA和蛋白的表达。MTS法检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果与si-NC转染组相比,si-ZEB1转染组可使ZEB1 mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01),细胞增殖能力明显下降(P0.05),增殖相关基因CCND1、MKI67、MYC和PCNA表达显著下调(P0.05或P0.01);G1期细胞比例从50.71%增加到58.94%(P0.01),S期和G2期细胞比例分别减少了6.16%和2.07%;细胞凋亡率上升了10.2%,促凋亡相关基因TP53和BAX表达上调,抗凋亡基因MCL1和BCL2表达下调(P0.05或P0.01)。结论 ZEB1具有促进h ADSCs增殖和周期进展,抑制细胞凋亡的作用。     

阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

 目的：观察糖尿病大鼠造影剂急性肾损伤(CI-AKI)发病过程中肾小管上皮细胞凋亡变化,并探讨阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法：腹腔单剂量注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,饲养8周后糖尿病大鼠随机分为6组：空白对照组(N组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病+造影剂组(DM+CM组)、糖尿病+造影剂+5 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO1组)、糖尿病+造影剂+10 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO2组)和糖尿病+造影剂+30 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO3组)。注入碘普罗胺注射液24 h后收集尿标本,检测尿肌酐(UCr)以及24 h尿微量白蛋白(24 h-UAlb),记录24 h尿量并计算尿微量白蛋白排泄率(24 h-UAER)。注射碘普罗胺后48 h收集血标本,检测血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN),并计算内生肌酐清除率(CCr)。处死大鼠,摘取肾脏左肾行组织病理学分析,TUNEL检测凋亡情况及免疫组织化学法检测肾髓质Bax和Bcl-2蛋白的表达,并留取右肾,采用免疫印迹技术法检测肾髓质的Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果：与N和DM组比较,DM+CM组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平明显升高(P＜0.05),Ccr水平明显下降,肾小管上皮细胞的凋亡明显增加,肾髓质Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降;与DM+CM组比较,ATO1、ATO2和ATO3组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平均有下降,CCr升高,肾小管上皮细胞的凋亡明显减少,肾髓质Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高,且ATO3组的变化更为明显。结论: 碘普罗胺可诱导糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡;阿托伐他汀能改善碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾功能损伤,此保护作用可能与之抑制碘普罗胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡有关,且这种保护作用有剂量依赖性。     

Medullary thymic epithelial stem cells: role in thymic epithelial cell maintenance and thymic involution

The thymus consists of two distinct anatomical regions, the cortex and the medulla; medullary thymic epithelial cells (mTECs) play a crucial role in establishing central T-cell tolerance for self-antigens. Although the understanding of mTEC development in thymic organogenesis as well as the regulation of their differentiation and maturation has improved, the mechanisms of postnatal maintenance remain poorly understood. This issue has a central importance in immune homeostasis and physiological thymic involution as well as autoimmune disorders in various clinicopathological settings. Recently, several reports have demonstrated the existence of TEC stem or progenitor cells in the postnatal thymus, which are either bipotent or unipotent. We identified stem cells specified for mTEC-lineage that are generated in the thymic ontogeny and may sustain mTEC regeneration and lifelong central T-cell self-tolerance. This finding suggested that the thymic medulla is maintained autonomously by its own stem cells. Although several issues, including the relationship with other putative TEC stem/progenitors, remain unclear, further examination of mTEC stem cells (mTECSCs) and their regulatory mechanisms may contribute to the understanding of postnatal immune homeostasis. Possible relationships between decline of mTECSC activity and early thymic involution as well as various autoimmune disorders are discussed.