人羊膜匀浆上清液对大鼠角朊细胞生长的影响

目的观察不同浓度人羊膜匀浆上清液(hAHS)对体外培养的SD大鼠角朊细胞生长的影响。 方法取SD大鼠背部皮肤,采用中性蛋白酶与胰蛋白酶复合消化的方法,分离第一代角朊细胞。将新鲜人羊膜制备成hAHS,采用考马斯亮蓝法、酶联免疫吸附试验分别测定hAHS中总蛋白含量和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。用不同浓度hAHS对第一代角朊细胞进行体外培养：将细胞以2.5×10⁴个/mL密度接种于96孔板中(每孔100 μL),随机数字表法将其分为体积分数0(对照组)及10%、15%、20%、25% hAHS组,用含10%胎牛血清低糖培养基培养24 h后,根据hAHS在低糖DMEM培养基中的不同体积分数进行换液,分别于培养即刻和培养24、48、96 h,用噻唑兰法检测各孔的吸光度值并绘制角朊细胞的生长曲线和计算各组细胞增殖率。采用SPSS13.0统计软件进行分析,各不同体积分数hAHS组的数据与对照组比较采用Dunnett－t检验。 结果hAHS中总蛋白含量为(675.435±9.215)×10^－3 g/L,EGF、bFGF和VEGF的浓度分别为(470.625±2.546)×10^－6、(4.121±0.026)×10^－6和(0.172±0.002)×10^－6 g/L。与对照组比较,10% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t＝4.644、9.694,P值均小于0.01),15% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率均明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t＝4.766、6.648,P值均小于0.01);20% hAHS组培养24 h角朊细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(t＝2.272,P<0.05),培养48、96 h增殖率均明显高于对照组,差异有显著性统计学意义(t＝5.027、8.861,P值均小于0.01);25% hAHS组培养48 h增殖率低于对照组,差异有统计学意义(t＝2.188,P<0.05),培养96 h增殖率明显低于对照组,差异有显著性统计学意义(t＝5.147,P<0.01)。 结论体积分数10%、15%、20% hAHS对体外培养的角朊细胞增殖有明显促进作用,且促增殖的效果随hAHS体积分数的增加而增强,但hAHS的体积分数在25%时角朊细胞的增殖受到抑制,平稳期相对缩短。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用

背景：碱性成纤维细胞生长因子是具有多功能的细胞生长因子,对来源于中胚层及神经外胚层的细胞有明显的促进增殖作用。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用。 方法：将第5代人牙周膜细胞,以1×108 L-1的浓度分别接种到96孔板,随机分成4组,分别加入含0,1,10,100 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为15%胎牛血清的α-MEM培养基进行培养。在第1,3,5,7天测定细胞的增殖情况,在第1,7天检测碱性磷酸酶活性。 结果与结论：4组之间人牙周膜细胞增殖情况的差异有显著性意义(F=6.586,P=0.024),随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增大,吸光度值均增大,其中100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组的吸光度值均大于其他组(P < 0.05);碱性成纤维细胞生长因子各组的碱性磷酸酶活性均低于对照组(P=0.000),浓度越大,活性越低(P < 0.05)。结果显示碱性成纤维细胞生长因子在1-100 μg/L范围内质量浓度越高,促进人牙周膜细胞增殖和抑制碱性磷酸酶活性的作用越强。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养上清液对RSC96 细胞生物学功能的影响

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）培养上清液对大鼠RSC96细胞生物学功能的影响。方法：体外培养、纯化SD大鼠BMSC并进行鉴定;收集第3代BMSC培养上清液（BMSC-CM）;采用MTT法检测BMSC-CM对RSC96细胞增殖的影响;平板克隆实验分析BMSC-CM对RSC96单个细胞增殖的影响;划痕实验和TranswellTM小室实验分析BMSC-CM对RSC96细胞迁移的作用,Western blot法检测BMSC-CM对RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的改变。结果：SD大鼠第3代BMSC形态呈长梭形,旋涡样生长;成骨染色为阳性结果;成脂诱导后有脂滴出现;BMSC-CM作用后抑制RSC96细胞的增殖和迁移能力,且作用后的RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论：BMSC-CM促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

坐骨神经瓦勒变性大鼠许旺细胞生物学特性及分泌功能变化

背景：研究表明外周神经损伤后,许旺细胞在基底膜管内形成Bunger带,引导再生轴突延伸,但具体作用机制目前尚不清楚。 目的：观察大鼠坐骨神经损伤后瓦勒变性对许旺细胞生物学特性及分泌功能的影响。 方法：建立大鼠坐骨神经横切模型,分为坐骨神经瓦勒变性组(坐骨神经横断组)和手术对照组。采用神经段单酶消化法分离培养许旺细胞,光镜下观察细胞形态变化,S-100免疫荧光鉴定。取第1代许旺细胞,利用计数法绘制14 d内许旺细胞的生长曲线,MTT法检测14 d内许旺细胞增殖活性,酸性磷酸酶法检测许旺细胞黏附能力,ELISA法检测神经生长因子浓度。 结果与结论：坐骨神经段培养第14天,坐骨神经横断组神经段边缘可见大量许旺细胞,呈线形排列;手术对照组许旺细胞数量少,呈散在分布,两组许旺细胞S-100均呈阳性表达。许旺细胞传代培养第3天,两组许旺细胞均进入对数增长期,随时间延长,细胞数及细胞增殖吸光度值均呈上升趋势,坐骨神经横断组细胞数及增殖吸光度值明显高于手术对照组(P < 0.05);坐骨神经横断组许旺细胞黏附能力明显高于手术对照组(P < 0.05);ELISA法检测示,坐骨神经横断组神经生长因子浓度在培养第4,6,8,10,12,14天时均高于手术对照组(P < 0.05)。结果表明大鼠坐骨神经损伤后两三周,瓦勒变性对许旺细胞生物学功能具有显著影响,可诱导许旺细胞幼稚化,促使许旺细胞在短期内迅速分裂增殖,并分泌大量神经营养因子及细胞外黏附成分,为再生轴突的延伸提供适宜的神经微环境;并增加细胞黏附能力,为外周神经损伤修复提供适宜的神经微环境。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

人参环氧炔醇对体外培养RSC96细胞的实验观察

目的研究人参环氧炔醇(Panaxydol,PND)对体外培养RSC96细胞神经营养因子及髓鞘蛋白表达的影响并探讨其机制。方法用含不同血清浓度的培养基培养RSC96细胞,MTT检测其增殖能力,以获取最适宜RSC96细胞体外生长的血清浓度。在适宜的血清培养基中加入PND(10μmol/L)处理RSC96细胞,以RT-PCR、western blot及ELISA检测RSC96细胞NGF和BDNF的表达。另外,预先在培养基中加入钙离子通道阻滞剂尼非地平探讨PND可能的作用途径。结果培养基血清浓度为4mmol/L时,RSC96细胞生长形态最接近于原代Schwann细胞。PND增强RSC96细胞表达和释放NGF和BDNF(P0.05)。尼非地平的使用,则削弱了PND对RSC96细胞的作用(P0.05)。结论在适宜的血清培养基中,体外培养的RSC96细胞可替代原代Schwann细胞,作为研究药物对它的影响及机制的细胞模型。PND增强RSC96细胞的生物活性的作用机制可能通过Ca2+信号途径介导。     

肿瘤坏死因子-α预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨100 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)预处理人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡的影响。 方法本实验按随机数字表法将HUVEC分为对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组。首先使用含有100 ng/mL TNF-α的内皮细胞培养基刺激HUVEC 12 h后,对照组更换为原培养基,条件培养基组则更换为hUCMSC的条件培养基,以及预处理条件培养基组更换为TNF-α 预处理hUCMSC的条件培养基。采用MTT法测定HUVEC的增殖活性,流式细胞仪检测细胞的增殖周期,AO-EB染色和流式细胞仪定性、定量检测细胞的凋亡情况。数据比较采用重复测量方差分析。 结果MTT的检测结果提示,在培养24、48、72 h时,对照组细胞的吸光度值是0.51、0.43、0.32,而条件培养基组和预处理条件培养基组吸光度值是0.56、0.51、0.45和0.59、0.56、0.52。流式细胞仪检测细胞增殖周期(G2/M＋S期)的结果示：在培养24、48和72 h时,对照组细胞处于G2/M＋S期的比例是(22.34±1.03)%、(10.66±1.07)%、(9.58±0.82)%,而条件培养基组和预处理条件培养基组处于G2/M＋S期的比例则分别是(27.95±1.85)%、(18.59±1.48)%、(13.02±1.91)%和(31.17±1.29)%、(22.44±2.28)%、(16.28±1.11)%, 3组比较差异有统计学意义(F＝58.793,P<0.05)。此外,流式细胞仪定性检测结果表明：在培养24、48和72 h时,对照组细胞的凋亡率是(18.95±1.01)%、(16.66±1.51)%、(11.37±1.01)%,而条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率分别是(12.04±1.13)%、(10.88±1.39)%、(6.88±1.63)%和(8.16±1.44)%、(6.97±1.34)%、(2.97±1.44)%,3组比较差异有统计学意义(F＝119.372,P<0.05)。AO-EB定性检测细胞凋亡的结果与流式定量检测的结果趋势类似。 结论TNF-α预处理hUCMSC的条件培养基可发挥显著促进HUVEC的增殖和抑制HUVEC凋亡的作用。     

人Ⅰ型胶原包被培养板不同时间对人原代表皮细胞培养的影响

目的探索人Ⅰ型胶原包被培养板不同时间对培养的人原代表皮细胞形态、黏附、增殖、迁移率及细胞周期的影响。 方法取来源于解放军总医院第四医学中心泌尿外科新鲜人体皮肤组织标本，配置体积分数为1%的人Ⅰ型胶原蛋白溶液并包被培养板，按包被时间不同分为10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组，采用胰蛋白酶动态消化法消化分离表皮细胞，接种于不同胶原包被时间的培养板中，加入表皮细胞培养基(CnT-Pr培养基)于37 ℃、含5%CO₂的细胞培养箱中培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态，细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞黏附及增殖，划痕实验观察细胞迁移，流式细胞法检测细胞周期。对数据行方差分析与LSD-t检验。 结果(1)细胞数量及形态：随时间推移，各包被组细胞形态未见明显差异，大小较均匀，呈球形或眼型，细胞数量逐渐增多。0 s组细胞数量较其他5组少且未贴壁细胞比例多。(2)细胞黏附：人原代表皮细胞接种后24 h，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组、0 s组的吸光度值分别为0.28±0.07、0.30±0.05、0.33±0.06、0.34±0.07、0.36±0.05、0.16±0.02，6组间比较，差异有统计学意义(F＝4.640，P＝0.014)；10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组组间两两比较，差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。0 s组分别与10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组比较，差异均有统计学意义(t＝2.640、3.059、3.584、3.889、4.187，P＝0.021、0.010、0.004、0.002、0.001)。(3)细胞增殖：人原代表皮细胞增殖曲线显示胶原包被的各组细胞增殖情况相似，明显高于0 s组细胞增殖情况。细胞接种后2 d，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组的细胞吸光度值分别为0.41±0.05、0.41±0.02、0.46±0.06、0.49±0.08、0.53±0.12、0.09±0.04，6组间比较，差异有统计学意义(F＝16.050，P<0.05)。组间两两比较可以发现，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组间差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。0 s组分别与10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组比较，差异均有统计学意义(t＝0.323、0.323、0.374、0.401、0.440，P值均小于0.05)。细胞接种后4 d，6组间吸光度值比较，差异均有统计学意义(F＝9.816，P＝0.001)；组间两两比较可以发现，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组间差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。0 s组分别与10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组比较，差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。细胞接种后6 d，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组的细胞吸光度值分别为2.76±0.20、3.03±0.17、3.03±0.16、3.18±0.17、3.33±0.26、0.53±0.25。(4)细胞迁移划痕后12 h，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组细胞迁移率分别为(15.60±4.11)%，(18.26±6.79)%，(18.09±6.97)%，(18.00±4.70)%，(17.40±5.97)%，(4.05±1.71)%；划痕后24 h，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组细胞迁移率分别为(36.33±5.63)%，(38.45±11.97)%，(42.36±14.40)%，(41.96±10.78)%，(44.04±12.28)%，(9.17±3.28)%；划痕后36 h，10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组及0 s组细胞迁移率分别为(73.71±17.90)%，(62.33±12.45)%，(69.79±20.82)%，(81.89±18.05)%，(73.49±22.89)%，(11.62±2.64)%。各组间整体比较，差异有统计学意义(F＝9.914，P<0.05)；不同包被时间各组间进一步比较，可以发现10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组间两两比较，差异均无统计学意义(P值均大于0.05)，0 s组分别与10 s组、1 min组、5 min组、15 min组、30 min组比较，差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。(5)细胞周期：细胞周期检测结果显示，接种后5 d，各组人原代表皮细胞G1、G2、S期所占比例比较，差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。 结论人Ⅰ型胶原包被对人原代表皮细胞贴壁培养非常必要，胶原包被培养板不同时间对人原代表皮细胞培养无显著影响。     

肝匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞分化为肝样细胞

背景：前期实验证明大鼠肝组织匀浆上清液能诱导人脐带间充质干细胞发生形态学变化,但诱导后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特征尚不清楚。 目的：以人脐带间充质干细胞为研究对象,对肝组织匀浆上清液定向诱导分化后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特性进行初步验证。 方法：选取第3代人脐带间充质干细胞,采用肝组织匀浆上清液作为诱导培养基,进行如下分组：单纯肝组织匀浆上清液作为阴性对照组,QSG-7701人肝细胞株作为阳性对照组,基础培养的人脐带间充质干细胞作为标准对照组;肝组织匀浆上清液处理3,5,7 d诱导组;在蛋白水平和转录水平对肝细胞特异性标志物甲胎蛋白、角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶进行检测。 结果与结论：经肝组织匀浆上清液诱导后,细胞形态发生了显著变化,随诱导时间延长梭形干细胞逐渐减少,细胞呈三角形,多角形或不规则形。肝组织匀浆上清液诱导干细胞3,5,7 d后肝细胞标志物甲胎蛋白、人细胞角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶在蛋白和mRNA水平均显著高于标准对照组(P < 0.01)。实验结果提示在体外经肝组织匀浆上清液诱导后,人脐带间充质干细胞能够分化为具有肝细胞特异性标记的肝样细胞,并具有部分肝细胞功能。     

法舒地尔和RhoA沉默对许旺细胞增殖的影响

背景：许旺细胞在周围神经损伤和修复再生过程中发挥重要作用。 目的：观察Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠许旺细胞增殖的影响。 方法：体外培养Wistar大鼠许旺细胞,分6组干预：对照组,5,10,15,20 μmol/L 法苏地尔组,siRNA沉默RhoA基因组。处理后第3天,RT-PCR、Western blot检测各组许旺细胞RhoA基因和蛋白的表达。连续5 d用细胞计数法测定生长曲线。应用MTT比色法观察许旺细胞增殖情况;采用流式细胞术测定许旺细胞周期分布的变化。 结果与结论：法苏地尔浓度增加到20 μmol/L时对细胞的作用并非随浓度的增加而增强,与15 μmol/L组的差异无显著性意义(P > 0.05)。Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默在体外实验均能促进许旺细胞,法舒地尔最佳作用浓度为15 μmol/L,沉默RhoA基因效果较好。     

人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应

背景：人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用。 目的：验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应。 方法：构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,利用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞。观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及RT-PCR检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。 结果与结论：测序及酶切证实真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1构建正确。体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6 h检测到有EGFP的表达,至60 h达到高峰,转染效率为(16±3)%。细胞上清中人胰岛素样生长因子1的浓度在60 h达到22.65 μg/L。免疫组织化学染色及RT-PCR均检测到人胰岛素样生长因子1的表达。转染后的细胞分裂增殖加快,细胞群体倍增时间缩短,S期细胞比例增多。证实人胰岛素样生长因子1基因可有效转染脂肪源性干细胞并表达人胰岛素样生长因子1蛋白质,同时可促进细胞增殖。     

Rho激酶抑制剂Y-27632干预大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的变化

背景：Rho激酶抑制剂可以调节细胞骨架重构,激活转录因子,促进细胞增殖和分化。 目的：观察Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞分裂增殖和细胞周期的影响。 方法：采用贴壁细胞培养法体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,并传代。取生长状态良好的第2代骨髓间充质干细胞分组：实验组加入10 µmol/L Rho激酶抑制剂Y-27632,对照组正常培养。 结果与结论：①骨髓间充质干细胞增殖：细胞生长曲线呈“S”型,Rho激酶抑制剂Y-27632作用后,3 d左右进入平台期,细胞生长加速,生长曲线上移。②骨髓间充质干细胞的细胞周期：对照组G0/G1期细胞比例为(80.640±5.516)%,S期细胞比例为(13.397±2.511)%;实验组G0/G1期细胞比例为(61.723±8.829)%,S期细胞比例为(29.380±7.630)%,实验组S期细胞比例高于对照组(P < 0.05)。表明Rho激酶抑制剂Y-27632可以促进骨髓间充质干细胞DNA的合成,促进细胞分裂和增殖。关键词：细胞周期;增殖;骨髓间充质干细胞;Rho激酶抑制剂;分离培养; 大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.007     

Bovine lactoferrin protects RSC96 Schwann cells from tumor necrosis factor-alpha-induced growth arrest via extracellular-signal-regulated kinase 1/2

Bovine lactoferrin (bLF) is a member of the transferrin protein family that is abundant in bovine milk. Recent studies have shown that bLF plays roles in the regulation of cell growth. However, the biological function of bLF in the peripheral nervous system is still unclear. In this study, the immortalized rat Schwann cells (RSC96) were exposed to bLF at concentrations ranging from 10 to 800 microg/ml for 48 h and compared with control group. The bromodeoxyuridine BrdU cell viability assay was used to examine the effect of bLF on cell viability of RSC96 Schwann cells. Cell-counting test was used to assay the growth rate of RSC96 cells after exposure to bLF, and immunoblot analysis was used to test the signaling pathway controlled by bLF in the RSC96 cells. It was found that the viability of the RSC96 cells was increased by more than 25% when treated with 50 microg/ml bLF and the cell number of RSC96 cells was increased by more than threefold when treated with 800 microg/ml bLF. Our results showed that bLF could significantly improve viability and number of RSC96 Schwann cells. Also, bLF could significantly increase the phosphorylation state of extracellular-signal regulated kinase 1/2 (ERK1/2) that could be specifically inhibited by PD98059. Furthermore, bLF could not only protect RSC96 cells from tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) -induced growth arrest but could also restore proliferation rate in TNF-alpha-treated RSC96 cells. In conclusion, bLF plays a crucial role in the proliferation of RSC96 Schwann cells and the protection of RSC96 Schwann cells from TNF-alpha-induced growth arrest via ERK1/2 protein.     

Effects of recombinant human hepatocyte growth factor on the proliferation and function of porcine hepatocytes

A porcine hepatocyte based bioartificial liver (BAL) is still insufficient to replace liver transplantation. In this experiment, to strengthen the performance of a BAL, the effect of human recombinant hepatocyte growth factor (rhHGF) on the proliferation and function of xenogeneic porcine hepatocytes was studied. Isolated porcine hepatocytes were seeded at various densities (5 x 10(3) to 8 x 10(4) cells/well) on a collagen coated 96 well plate in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) with 10% FCS. After 4 hours, the medium was changed to DMEM with added insulin and dexamethasone. Subsequently, rhHGF was added at various concentrations (0, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10, 20, 40 ng/ml) and cultured for an additional 24, 48, and 72 hours, respectively. The proliferation of porcine hepatocytes in response to rhHGF reached a plateau at 2.5 ng/ml at 24 hours and subsequently decreased. The levels of porcine albumin vs protein present in the supernatant increased when cultured at high cell density. In conclusion, rhHGF was found to stimulate proliferation of porcine hepatocytes at low cell density and low concentration. rhHGF can also increase albumin synthesis at higher cell density, thus indicating its potential use in a more satisfactory porcine hepatocyte based BAL.     

MicroRNA-21促进大鼠雪旺细胞增殖的实验研究

目的:探讨神经损伤后microRNA-21(miR-21)促进雪旺细胞增殖的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。通过脂质体介导将人工合成的miR-21模拟物(mimic)及其阴性对照转染大鼠雪旺细胞,CCK-8法检测转染miR-21的雪旺细胞的增殖。流式细胞术分析miR-21对雪旺细胞细胞周期的影响。使用Western blotting实验分析转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)和cyclin D1的表达水平。结果:miR-21在损伤模型组中的表达分别为假手术组和正常神经组织的(7.87±0.75)和(7.75±0.80)倍(P0.01)。miR-21 mimic组miR-21的表达分别为对照组和空白组的(2.21±0.14)和(2.29±0.21)倍(P0.05)。转染48 h后miR-21 mimic组CCK-8实验的A450值较阴性对照组和空白对照组增高(P0.05)。实验组细胞增殖指数高于阴性对照组和空白对照组(P0.01)。同时与对照组相比,转染miR-21后48 h实验组细胞TGFBI明显降低,cyclin D1表达增多(P0.05)。结论:miR-21可促进雪旺细胞增殖,其机制可能与其下调TGFBI的表达有关。     

许旺细胞在不同孔径丝素蛋白支架上的生长

背景：细胞在生物支架上的生长行为受到支架表面形貌、润湿性、孔径及孔隙率等多种因素影响。 目的：观察许旺细胞在不同孔径丝素蛋白支架上的生长情况。 方法：制备大孔径50~60 µm、小孔径10~   20 µm两种多孔丝素材料。选用许旺细胞永生化细胞R3 [33-10ras3]为种子细胞,当细胞在培养瓶底形成致密单层时即可消化细胞并进行接种实验,将许旺细胞悬液种于不同形貌的多孔丝素材料表面。复合培养1周后,扫描电镜观察许旺细胞的生长形态及增殖等情况。 结果与结论：不同孔径丝素材料的表面可见许旺细胞生长情况不一。在10~20 µm孔径材料支架上,细胞浓度较低,细胞表现为特异的双极性形态,细胞与细胞之间或平行排列,或首尾相连成细胞链;细胞与细胞之间或平行排列,或首尾相连成细胞链;在50~ 60 µm孔径丝素材料支架上,细胞浓度较高,细胞多为球形,单个分散在多孔支架表面,或呈现成团成串葡萄样聚集在孔的底部,未延展成双极性形态,只有极少量生长在孔与孔之间嵴上的细胞呈双极样。说明多孔丝素蛋白支架的孔径对许旺细胞的黏附、生长有一定的影响,许旺细胞更适合生长在孔径略大于胞体直径的支架材料上。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对人羊水细胞及其它细胞的影响*

目的：探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ） 对人羊水细胞及其它细胞的影响。方法：在低血清培养基培养条件下进行人羊水细胞及Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐（ ＭＴＴ） 比色法和倒置显微镜观察ｒｈｂＦＧＦ 对人羊水细胞存活的影响。结果：人羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞在０－４ ％ 胎牛血清培养基培养条件下,不同浓度的ｒｈｂＦＧＦ 对羊水细胞的作用存在相关性。结论：ｒｈｂＦＧＦ 能延长羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞的存活时间