基于生物信息学探讨ALPL基因在多囊卵巢综合征中的表达及其临床价值

目的:基于生物信息学分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者与健康人群之间的基因芯片数据，筛选差异表达基因，进行有效整合多种数据集并深度挖掘高效靶分子，从而初步探讨其相关发病机制，进而预测PCOS的潜在治疗靶点。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载GSE106724数据集，通过对生物学属性分析，筛选出与PCOS相关的差异表达基因，进行GO功能注释及KEGG信号通路富集分析，获得差异表达基因(DEGs)的主要作用通路。使用STRING数据库筛选不同数据集中的共同基因，运用CytoScape软件完成蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI)的构建，筛选出以ALPL为核心的相互关联的关键差异表达基因，RT-qPCR法检测正常和PCOS女性卵泡液中ALPL表达。结果:从GSE106724筛选出607个DEGs,其中310个DEGs表达上调，297个DEGs表达下调。通过对DEGs进行GO功能及KEGG信号通路分析发现主要富集在：细胞对干扰素的反应、趋化因子受体结合、哮喘、类风湿性关节炎等。通过筛选获得与ALPL密切关联的6个关键差异基因(ALPL、SPP1、FKBP5、AKAP5、LDHAL6A、DL...     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

白细胞介素6诱导卵巢上皮性癌细胞对化疗药物产生耐药的机制研究

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞对化疗药物产生耐药的机制及相关信号传导通路.方法 应用外源性重组IL-6短期处理或将正义IL-6基因(ssIL-6)稳定转染至A2780细胞(不表达IL-6但表达其受体、对顺铂和紫杉醇敏感),同时将反义IL-6基因(asIL-6)稳定转染至SKOV3细胞(高表达IL-6及其受体、对顺铂和紫杉醇耐药),应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、逆转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白印迹法(western blot)观察IL-6是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对可能的信号传导通路进行研究.结果 (1)外源性重组IL-6处理A2780细胞后,对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为6.25和7.31倍;ssIL-6转染A2780细胞后(内源性过表达IL-6),IL-6低、中、高表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为7.13、7.47和8.34倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为7.61、8.27和10.70倍;而asIL-6转染SKOV3细胞后(抑制内源性IL-6表达),IL-6中、高抑制表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为0.15和0.10倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为0.10和0.08倍,可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性.(2)外源性IL-6作用后,上调了A2780细胞中耐药相关基因MDR1和GST-π以及凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL和XIAP mRNA和蛋白的表达;与此相一致,ssIL-6转染的A2780细胞中MDR1、GST-π及bcl-2、bcl-xL、XIAP mRNA和蛋白的表达水平增加,而asIL-6转染的SKOV3细胞则明显降低.(3)有丝分裂原活化的蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂--PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--wortmannin能分别阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)的活化作用,且两者均能阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药,细胞生长明显减少.结论 IL-6诱导的卵巢癌细胞化疗耐药很可能与其上调卵巢癌细胞耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL、XIAP的表达以及活化MEK/ERK和PI3K/Akt信号传导通路有关.     

microRNA let-7e逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:研究人类microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测let-7e在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞A2780/CP中的表达;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测A2780细胞和A2780/CP细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)mRNA和蛋白的表达。将let-7e模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/CP细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测EZH2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果:与A2780细胞比较A2780/CP细胞中let-7e呈低表达、EZH2mRNA和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P0.05)。A2780/CP细胞转染let-7e mimics后,EZH2 mRNA和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。顺铂作用于转染let-7e mimics的A2780/CP细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P0.05)。结论:let-7e在卵巢癌耐药细胞A2780/CP中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。let-7e可能通过作用于靶蛋白EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。     

基于生物信息学分析建立子痫前期Logistic预测模型研究

目的 子痫前期是一种严重威胁母婴健康的疾病,其发病机制不明,缺乏早期诊断及治疗方法。目前针对子痫前期的生物信息学研究多集中在差异基因筛选及microRNA方面,缺乏Logistic预测模型的相关研究。方法 从Gene Expression Omnibus(GEO)公共数据库下载GSE48424数据集并筛选差异基因。采用加权网络分析方法（WGCNA）筛选与子痫前期最为相关模块,与差异基因取交集。对GO、KEGG基因功能富集分析,并进行蛋白网络互作分析（PPI）,采用CytoHubba软件分析鉴定了10个关键基因。将GSE48424数据集分为训练集（70%）,验证集（30%）,使用关键基因建立Logistic预测模型。结果 在GSE48424数据集中共发现了180个差异基因。WGCNA分析中brown模块与子痫前期最为相关。选取其与差异基因取交集,共筛选出73个重叠基因。GO及KEGG分析显示重叠基因功能主要与囊泡组织、TNF通路、VEGF信号通路等相关。PPI鉴定了10个关键基因。筛选出4个基因（NUAK1、SGK1、MAP2K1、RNASEL）构建Logistic预测模型。主成分分析提...     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药相关性的研究

目的:探讨钙结合蛋白S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:MTT法测定顺铂对卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780和耐药株CP70的半效抑制浓度(IC50);分别应用免疫细胞化学、Western blot和实时荧光定量PCR检测A2780和CP70细胞株中S100A4的差异表达,观察顺铂处理CP70细胞后S100A4在蛋白水平及基因水平的动态变化。结果:顺铂对A2780和CP70的IC50分别为20.88μmol/ml和57.10μmol/ml。S100A4蛋白在二者中均以胞浆表达为主;CP70中S100A4 mRNA水平和蛋白水平的表达均显著高于A2780;经顺铂处理CP70后,S100A4的表达呈剂量-时间依赖性。结论:S100A4的高表达与卵巢癌顺铂化疗耐药有关。     

顺铂对人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780影响的差异表达蛋白质分析

目的:比较不同浓度的顺铂作用人卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP和敏感系A2780 48h的双向凝胶电泳(2-DE)图谱的变化,从整体蛋白质水平对卵巢癌顺铂耐药机制进行初步探讨。方法:MTT法观察顺铂对A2780/DDP和A2780细胞系生长的抑制效果。利用2-DE分离顺铂培养48h的A2780/DDP和A2780细胞总蛋白,Image master图像分析系统分析,从中选取部分分离较好的差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析获取肽质量指纹图谱,PeptIdent软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果:获取重复性和分辨率较好的顺铂作用人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780的2-DE图谱。获取5张肽质量指纹图谱。初步鉴定3种可能影响顺铂抑制A2780/DDP或A2780细胞系生长的蛋白质。结论:建立了5μmol/L和20μmol/L顺铂作用A2780/DDP和A2780的2-DE图谱,并识别鉴定出部分差异表达蛋白质,为阐明卵巢癌顺铂耐药机制提供了实验依据。     

利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性

目的:利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性。方法:超速离心法从卵巢癌细胞A2780、SKOV3、CAOV3培养上清及卵巢癌患者血清中提取外泌体。MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度(IC_(50)),检测出顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测敏感细胞A2780在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的增殖。Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的凋亡。MTT法检测A2780细胞在卵巢癌患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的增殖,并随访卵巢癌患者病情进展情况。结果:通过超速离心法能从卵巢癌细胞系培养上清及卵巢癌患者外周血清中分离出外泌体。MTT分析证实A2780为顺铂敏感细胞,SKOV3、CAOV3为顺铂不敏感细胞。细胞系来源的外泌体能显著降低A2780对顺铂的敏感性(P<0.05),同时削弱顺铂对A2780中Caspase 3/7的活性(P<0.05),其中SKOV3和CAOV3外泌体的抑制作用显著高于A2780。基于A2780细胞+顺铂模型,将30例卵巢癌患者分为顺铂敏感组和不敏感组,其中不敏感组的13例患者的血清外泌体降低A2780对顺铂敏感性(P<0.05),术后1年已有5例患者有复发情况,而敏感组无复发。结论:利用A2780细胞模型分析外泌体对顺铂杀伤作用的影响,能在一定程度上评估卵巢癌患者对顺铂的敏感性。     

Wnt通路抑制因子甲基化与卵巢癌耐药的相关性

目的探讨Wnt通路抑制因子甲基化与卵巢癌耐药的相关性。方法2008年在四川大学华西第二医院采用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR检测卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR-8(紫杉醇耐药),A2780及A2780/D(顺铂耐药)中,Wnt通路抑制因子SFRP-1、2、4、5,WIF-1、DKK-3的甲基化状态、mRNA水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法比较DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后,OVCAR-8细胞耐药逆转的情况,并检测WIF-1基因甲基化状态、mRNA表达水平的改变。结果WIF-1基因在OVCAR-8细胞中为高甲基化表达抑制,5-Aza-CdR可使其去甲基化后重新表达,并部分逆转OVCAR-8细胞的紫杉醇耐药。结论WIF-1基因的高甲基化状态与卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8的紫杉醇耐药相关,去甲基化后可部分逆转耐药,这为逆转卵巢癌耐药提供了新的研究方向。     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。     

基于生物信息学筛选的CEBPA在子痫前期胎盘组织的表达及对滋养细胞上皮间质转化的影响

目的:鉴定与子痫前期(PE)相关的关键基因及其主要的富集通路。验证差异表达基因(DEG)CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPA)在PE胎盘组织的表达情况及对滋养细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:(1)筛选PE关键基因：在GEO数据库中下载GSE10588、GSE25906、GSE35574 PE胎盘转录组微阵列数据集矩阵数据,分别进行DEG筛选;同时在数据库中下载GSE75010矩阵数据对每个基因的表达量进行单因素Logistics回归分析,以鉴定PE胎盘中的关键基因;利用STRING数据库构建关键基因的蛋白质-蛋白质互相作用网络(PPI),并进行京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析。(2)验证：收集14例正常妊娠孕妇(对照组)和14例PE孕妇(PE组)的胎盘组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测比较CEBPA在两组中的mRNA表达水平,免疫荧光检测CEBPA在胎盘组织的表达以及定位。在HTR8/SVneo细胞系中敲降CEBPA后(细胞转染分为：siNC组、siCEBPA组)检测EMT相关蛋白表达水平。结果:(1)对数据库的微阵列数据进行分析及Logisti...     

沉默NAC-1基因对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感的影响

目的:探讨核转录因子NAC-1基因沉默对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响。方法:采用LV4-LUC-GFP慢病毒转染建立NAC-1基因沉默SKOV3/DDP细胞株,将细胞接种到免疫缺陷小鼠皮下,建立人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,给予顺铂化疗,比较NAC-1基因沉默对SKOV3/DDP在裸鼠体内增殖的影响。取肿瘤组织进行转录组测序,利用Illumina平台进行转录组mRNA测序,筛选差异表达基因,并进行GO和KEGG功能注释和富集分析,揭示NAC-1基因影响移植瘤化疗敏感的可能分子机制。使用STRING数据库构建DEGs编码蛋白互作网络,筛选MCC算法、Degree算法、Closeness算法3种算法共有基因作为关键基因,使用Metascape网站在线分析这些共同基因的基因功能。结果:与对照组相比,抑制NAC-1基因后裸鼠皮下肿瘤体积变小,重量减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。转录组学分析显示,抑制NAC-1基因导致肿瘤组织中460个基因显著下调,568个基因显著上调。差异基因(DEGs)在多项GO富集类别中具有显著差异,如...     

APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

TWEAK激活自噬增强上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP顺铂敏感性的研究

目的:观察TWEAK对上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP的顺铂(DDP)耐药性的影响,并初步探讨其机制。方法:CCK8法测定不同浓度TWEAK刺激后A2780/DDP的顺铂半数细胞致死量(IC50)。Western blot法检测TWEAK刺激A2780/DDP后Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3)及成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的表达水平。激光共聚焦显微镜检测绿色荧光-LC3蛋白(GFP-LC3)在A2780/DDP细胞内的分布情况。用TWEAK刺激敲除Fn14表达的A2780/DDP细胞,Western blot法检测Beclin-1、LC3的表达。结果:CCK8检测结果显示,10、100ng/mlTWEAK组的顺铂IC50分别为(31.940±0.118)μg/ml、(28.769±0.090)μg/ml,均显著低于0ng/ml组(36.358±0.106)μg/ml(P均<0.05)。Western blot法结果显示,TWEAK可呈剂量和时间依赖性诱导Beclin-1、LC3及Fn14表达上调,而特异性敲除Fn14表达后,Beclin-1、LC3表达明显下调。激光共聚焦显微镜检测结果显示,TWEAK可诱导GFP-LC3致密斑形成。结论:TWEAK可增强人卵巢癌细胞耐药株A2780/DDP的顺铂敏感性;呈剂量和时间依赖性激活A2780/DDP的自噬活性,且主要通过与其受体Fn14结合介导。     

人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析

近年来，生命科学研究领域的热点，蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善，可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度，探讨卵巢癌顺铂耐药的机理。本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术，分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白，建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱，再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术，及数据库鉴定部分差异蛋白质，希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质。     

EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系.方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Rea...     

抑癌基因SPARCL1低表达对卵巢癌耐药和临床预后的影响

目的:探讨SPARCL1表达对卵巢癌顺铂耐药的影响,阐明SPARCL1表达与耐药及预后的相关性。方法:RT-qPCR和Western blot法检测卵巢癌细胞中SPARCL1表达,免疫组化法(IHC)检测卵巢癌组织中SPARCL1表达,Kaplan-Meier生存曲线分析基因表达与无疾病生存期(DFS)和总生存期(OS)的关系。慢病毒转染过表达或干扰基因在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中的表达,CCK-8法检测细胞增殖并计算IC_(50)。转录组测序研究SPARCL1表达对卵巢癌细胞分子水平的影响。结果:与卵巢癌敏感组织相比,SPARCL1蛋白在耐药组织中显著低表达(P=0.001),且该蛋白低表达能预测卵巢癌不良DFS(P=0.001)和OS(P=0.021)。SPARCL1在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中显著下调表达,其过表达能减缓耐药细胞增殖速度并提高对顺铂的敏感性,而干扰其表达则能加快细胞增殖并降低细胞对顺铂的敏感性。转录组测序结果发现,SPARCL1过表达可能影响p53及细胞黏附分子等经典卵巢癌耐药调控通路。结论:SPARCL1低表达促进耐药且与不良OS和DFS显著相关,有望作为卵巢癌治疗靶标和潜在预后标记物应用于临床。     

ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响。方法:分别构建缺失Ⅷ外显子和野生型的ERCC1表达载体pD-DE(含突变型ERCC1基因)和pD-WE(野生型ERCC1),脂质体转染法转染A2780细胞,Western blot检测ERCC1表达水平研究该剪接变异对ERCC1基因表达水平的影响。MTT法检测肿瘤细胞的顺铂耐药性,彗星实验检测转染后细胞DNA的损伤修复情况。结果:成功构建重组质粒pD-DE和pD-WE;Western blot结果显示,该剪接变异未显著影响ERCC1表达;转染pD-DE的细胞与转染pD-WE的细胞相比,明显降低了顺铂的耐受性与细胞DNA损伤修复的能力。结论:ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异降低卵巢癌细胞DNA损伤修复能力和对顺铂的耐药性。     

基于转录组测序的sFlt-1诱导PE小鼠模型肾脏差异表达基因分析

目的:探究可溶性血管生长因子受体1(sFlt-1)诱导子痫前期(PE)小鼠模型蛋白尿形成的可能分子机制。方法:尾静脉注射sFlt-1重组腺病毒(Ad-sFlt-1)构建PE小鼠模型并作为模型组,注射生理盐水正常妊娠小鼠作为对照组。提取模型组和对照组小鼠肾脏组织RNA,利用Illumina Novaseq 6000行转录组测序,统计差异表达基因并进行GO和KEGG富集分析。结果:尾静脉注射Ad-sFlt-1成功构建PE小鼠模型,表现高血压与蛋白尿临床特征。模型组与对照组小鼠肾脏组织测序共筛选出518个差异表达基因,其中显著上调基因204个,显著下调基因314个。GO富集分析显示,差异基因多与生物学过程中的脂代谢和氧反应相关。KEGG富集分析显示,ABC转运蛋白家族及部分代谢通路在sFlt-1诱导PE模型蛋白尿发病机制中可能具有重要价值。结论:脂代谢及氧反应相关基因表达异常、ABC转运蛋白家族信号转导通路改变可能参与sFlt-1诱导PE小鼠模型蛋白尿的分子机制,为进一步探明PE病因提供了新的思路。