循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响

目的探讨循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响。方法取6~8周龄雌性裸鼠18只(体质量20~25 g),随机分为3组(n=6)。去势组采用卵巢切除术制备去势裸鼠模型,高雌激素组及正常雌激素组仅作相同切口进入腹膜后,不切除卵巢组织。术后高雌激素组每3天灌胃雌二醇(0.2 mg/g)1次,共持续30 d;其他两组同时间点等量PBS灌胃。术后30 d取3组裸鼠尾静脉血经ELISA检测雌二醇浓度后,将接受抽脂术的健康女性捐赠的颗粒脂肪注入裸鼠头皮下(0.3 mL/只)。脂肪移植后8周取材大体观察、称重后,制备切片行HE染色、CD31-围脂滴蛋白荧光染色、解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)免疫组织化学染色和雌激素受体α免疫荧光染色,测量脂肪细胞直径及脂肪组织血管密度;实时荧光定量PCR检测UCP1和雌激素受体αmRNA表达。结果实验期间裸鼠无死亡。ELISA检测显示与正常雌激素组相比,去势组雌二醇浓度明显降低,高雌激素组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。脂肪移植8周后,移植物体积从大到小依次为去势组、正常雌激素组、高雌激素组,其中去势组移植物湿重显著高于高雌激素组(P<0.05)。组织学染色显示,与正常雌激素组相比,去势组脂肪细胞增大且围脂滴蛋白表达较弱、血管密度减小,几乎不表达脂肪标记物UCP1,雌激素受体α阳性细胞减少;而高雌激素组上述观察结果与去势组相反;脂肪细胞直径、血管密度及雌激素受体α阳性细胞组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示,与正常雌激素组相比,高雌激素组移植物UCP1和雌激素受体αmRNA相对表达量升高,而去势组均降低;组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论体内循环雌激素水平对脂肪移植的转归有显著影响。低雌激素水平导致移植物脂肪细胞肥大,高雌激素水平导致脂肪移植物中生成大量米色脂肪并伴随血管密度增大,其机制可能与升高的循环雌激素水平活化脂肪细胞上雌激素受体α相关。     

胰腺癌中雌激素受体α与β的表达

目的：检测胰腺癌中雌激素受体α、β（ERα、ERβ）蛋白和mRNA的表达。方法：采用免疫组化和RT-PCR检测50例胰腺癌和20例乳腺癌患者ERα、ERβ蛋白的表达以及ERα、ERβ mRNA的表达情况。结果：胰腺癌ERα蛋白的阳性率为32%,ERβ蛋白的阳性率为38%。胰腺癌ERα mRNA/ERβ mRNA的比值明显低于ER（ ）和ER（-）的乳腺癌。结论：ERβ在胰腺癌的发生、发展中可能起重要的作用。     

二丁二仙汤预防去势雌性大鼠泌尿道感染的作用与机制研究

目的：通过与雌激素比较,观察中药二丁二仙汤是否具有调节血清雌激素水平、膀胱雌激素受体表达,下调TNF-α蛋白、IKBα磷酸化表达,从而探讨二丁二仙汤预防泌尿道感染的作用机制。方法：取40只雌性SD大鼠随机分组：假手术组（Sham）8只,去势组（OVX）8只,模型组（Model）8只,雌激素组（Estrogen）8只,二丁二仙汤组（EDEX）8只,共5组,行双侧卵巢次切术,术后予药物灌胃8周,8周后予隔天膀胱内灌注大肠埃希氏菌2次。检测各组血清雌二醇水平,光镜下观察膀胱组织HE染色,运用Real Time-PCR方法检测膀胱雌激素受体α和雌激素受体β mRNA表达变化,运用Western Blot方法检测膀胱TNF-α、IΚBα、P- IΚBα蛋白表达变化。结果：光镜下观察膀胱HE染色情况,假手术组及去势组无炎症表现,模型组重度急性炎症表现,可见大量中性粒细胞浸润,两组药物组均为轻度炎症表现。二丁二仙汤组、雌激素组血清雌二醇水平较去势组明显上升（P＜0.05）。雌激素组膀胱雌激素受体βmRNA较模型组上升（P＜0.05）,二丁二仙汤组雌激素受体β mRNA较模型组有上升趋势。二丁二仙汤组、雌激素组膀胱TNF-α蛋白和磷酸化IΚBα蛋白表达,较模型组明显下降（P＜0.05）。结论：与雌激素比较,中药二丁二仙汤也能预防泌尿道感染发生,其机制可能为上调血清雌激素,局部激活膀胱雌激素受体β,调节NF-κB通路,抑制IΚBα磷酸化,下调TNF-α产生。     

ERα和ERβ及GPR30在MCA-38细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的：检测雌激素受体ERα、ERβ和GPR30在小鼠结肠腺癌细胞系MCA-38中的表达,研究雌激素影响MCA-38细胞增殖的作用机制。方法：采用RT-PCR和Western blot检测MCA-38细胞ERα、ERβ、GPR30 mRNA及蛋白表达情况,经不同浓度E2和E2-BSA（空白对照、0.01、0.1、1、10和100 nmol/L）作用于MCA-38细胞24 h后应用MTT法检测细胞增殖情况,比较E2组和E2-BSA组细胞增殖差异。结果：MCA-38细胞表达ERα、ERβ和GPR30,其中ERβ表达量最高;生理浓度的E2（0.1～10 nmol/L）促MCA-38细胞增殖作用最为明显（P〈0.05）,而E2-BSA组与空白对照组比较,无明显促增殖作用（P〉0.05）。结论：ERα是MCA-38细胞所表达的主要雌激素受体,一定浓度的E2对MCA-38细胞有明显的促增殖作用,该作用为E2通过核受体途径实现,而与雌激素膜受体无关。     

雌激素受体相关受体α在乳房肥大中的表达

目的探讨雌激素受体相关受体α（ERRα）在乳房肥大中的表达和作用。方法选择28例乳房肥大患者的乳腺组织（单侧总体积在600ml以上）作为标本，未婚育者15例，已育哺乳者13例；与12例乳房发育正常者的乳腺组织标本做比较，采用免疫组化法检测两组乳腺组织中ERRa的表达情况。结果ERRa蛋白主要分布于乳腺上皮细胞和脂肪细胞的细胞核内。乳房肥大组ERRα的总阳性率为53．6％，乳房正常发育组阳性率为8．3％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。已育哺乳组和未婚育组ERRα的表达分别为46．2％与60％，两者比较差异无统计学意义（P〉O．05）。结论ERRα与乳房肥大的形成存在一定的相关性。     

甲状腺乳头状瘤的p16蛋白与雌激素受体表达及其相关 …

目的 探讨ｐ１６蛋白与雌激素受体在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用及其相关性。方法 应用免疫组化法对５０例甲状腺乳头癌标本进行ｐ１６蛋白及雌激素受体检测。结果 ｐ１６蛋白表达及雌激素受体与甲状腺乳头状癌的组织分化、淋巴结转移及预后有关。结论ｐ１６蛋白表达与雌激素受体有助于甲状腺癌的分化及预后的判断。     

甲状腺乳头状癌的p16蛋白与雌激素受体表达及其相关性研究

目的　探讨p16蛋白与雌激素受体在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用及其相关性。方法　应用免疫组化法对 5 0例甲状腺乳头状癌标本进行 p16蛋白及雌激素受体检测。 结果　p16蛋白表达及雌激素受体与甲状腺乳头状癌的组织分化、淋巴结转移及预后有关。结论　p16蛋白表达与雌激素受体水平有助于甲状腺癌的分化及预后的判断     

乳腺癌组织中PSAmRNA的表达及其与ER亚型表达的关系

目的 探讨前列腺特异抗原（PSA）mRNA和雌激素受体（ER）β亚型在乳腺癌组织中的表达及其与不同雌激素受体亚型表达之间的关系.方法 检测35例乳腺癌和12例癌旁乳腺组织及10例乳腺纤维腺瘤组织中的PSA mRNA和ERβ mRNA表达;35例乳腺癌组织ERα和PR蛋白的表达,并分析乳腺癌组织PSA mRNA表达与雌激素受体亚型和PR表达之间的关系.结果 PSA mRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织（P均=0.00）.ERβ mRNA在乳腺癌中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织（P均=0.00）.PSA mRNA表达阳性者ERβ mRNA表达水平明显低于PSA mRNA表达阴性者,差异有显著性（P=0.038）.ERα和PR阳性表达的乳腺癌组织中PSA mRNA表达高于ER和PR阴性者,差异有显著性（P=0.001,0.004）.结论 PSA和ERβ基因在乳腺癌中的表达下调.PSA可能是反映乳腺癌组织中功能性甾体类激素受体的一个重要指标.     

G蛋白在雌激素调节疼痛中的作用

随着对脑功能研究的深入和对疼痛机理认识的不断提高,雌激素在疼痛中的作用日益受到关注。G蛋白作为众多膜受体的重要组成部分．在人体各项机能中发挥着广泛的作用。本文主要从雌激素膜受体GPR30。阿片样受体．G蛋白偶联的内向整流型钾通,瞬时受体电位通道四个方面介绍了G蛋白在雌激素调节疼痛中的作用。     

精子发生阻滞不育患者睾丸雌激素受体α的表达

目的:探讨雌激素受体α(ERα)在睾丸的表达与精子发生阻滞的关系。方法:用HE染色技术检查120例不育症患者睾丸活检标本,其中精子发生阻滞患者标本应用免疫组化法检查ERα的表达,并以10例健康人睾丸组织作为对照。结果:120例标本中符合精子发生阻滞病理诊断标准者有31例(占25.8%)。正常健康人睾丸组织中,ERα在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,生精上皮细胞不表达;而在精子发生阻滞的睾丸组织中,ERα也在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,但表达较弱,生精上皮细胞不表达。两者表达强度存在显著性差异(P<0.05)。结论:雄激素与雌激素通过各自的受体发挥协调作用而共同促进精子发生。精子发生阻滞可能与包括雄激素受体、ERα及热休克蛋白90在内的一系列复杂的细胞信号转导障碍有关。     

胰腺癌中雌激素受体表达与其生物学特性的研究

探讨胰腺癌中雌激素受体（ＥＲ）的表达及与其生物学特性的关系。方法观察２４例胰腺癌切除标本的ＥＲ表达（Ｓ－Ｐ免疫组化染色法）与肿瘤大小、有无血管浸润、淋巴转移关系,并以正常胰腺组织标本作为对照。结果２４例胰腺癌病人ＥＲ阳性１４例（５８．３％）,１２例正常胰腺中仅有１例为ＥＲ阳性（８３％）。胰腺癌的ＥＲ表达明显高于正常胰腺组织（Ｐ＜０．０１）。其中肿瘤越大其阳性表达越低,＞５ｃｍ者ＥＲ阳性率明显低于≤５ｃｍ者（Ｐ＜０．０５）。高分化胰腺癌中ＥＲ阳性率明显高于低分化者,两者之比为８３．３３％：３３．３％,Ｐ＜０．０５。ＥＲ阳性者的血管侵犯率明显低于ＥＲ阴性者（Ｐ＜０．０５）。ＥＲ阳性的胰腺癌转移率低于ＥＲ阴性者,但两者差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论胰腺癌组织中ＥＲ有较高的表达率（５３．３％）。ＥＲ的表达与肿瘤的大小、细胞分化程度、血管浸润等生物学特性相关,ＥＲ阳性者多有较好的生物学特性。     

青春期乳房肥大症乳腺组织中雌激素受体的表达

目的:探讨雌激素受体(ER)在青春期乳房肥大症乳腺组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化SP法检测了18例青春期乳房肥大症及1 2例原发性小乳症乳腺组织中ER的表达情况.结果:ER在青春期乳房肥大症和原发性小乳症乳腺组织中的阳性表达率分别为88.89%和16.67%,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:青春期乳房肥大症的发生可能与乳腺组织中ER的表达增加有关.     

Expression of estrogen receptor in diseased human prostate assessed by non-radioactive in situ hybridization and immunohistochemistry

To understand the role of estrogen in the pathogenesis of benign prostatic hyperplasia, expressions of estrogen receptor (ER) mRNA and ER protein by in situ hybridization and by immunohistochemistry, respectively, were investigated in human prostatic tissues. In non-malignant region, ER mRNA and ER protein were found in cytoplasm and nucleus, respectively, of stromal cells, but not in glandular epithelial and basal cells. In benign regions, ER mRNA/ER protein positive cells were found in fibromyoadenomatous and myoadenomatous hyperplasia, but not in adenomatous hyperplasia. A striking feature was periacinar arrangement of ER mRNA/ER protein positive stromal cells in all prostate carcinoma treated with androgen withdrawal. The ER mRNA/ER protein positive cells were immunohistochemically identified as fibroblasts, myoblasts, and smooth muscle cells. These results indicate that stromal cells are the primary target of estrogen in prostate, and that androgen withdrawal upregulates the expression of ER gene. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

猪皮下脂肪吸脂后组织学观察

目的 观察小型猪皮下组织抽吸后的组织学变化。方法 采用注射器和直径为2mm的抽吸管行白色五指山成年小型猪背部皮下吸脂术，于术前及术后不同时间点分别取吸脂区和对照区皮下脂肪组织标本进行肉眼和（或）组织切片观察。结果 抽吸侧皮下脂肪厚度明显变薄。约为对照侧的53.5%。术区脂肪组织中只在真皮下，浅筋膜隔旁和肌膜表面等处瘢痕形成较多且消褪缓慢，术后6-8个月脂肪小叶结构清楚，抽吸后皮下脂肪细胞的大小。形态与对照部位比较无显著意义。结论 吸脂术可明显减少皮下脂肪的厚度。抽吸时避免损伤皮肤和脂肪下肌层可减少术后瘢痕形成。采用细小的抽吸管可进行浅层脂肪抽吸。     

不同移植部位对组织工程化脂肪存活的影响

目的：采用人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）与蚕丝蛋白生物支架构建组织工程化脂肪组织,研究不同移植部位对组织工程化脂肪存活的影响。方法：将人脐带间充质干细胞接种于蚕丝蛋白支架上,体外成脂诱导培养1～2周,扫描电镜观察细胞在支架上的生长及黏附情况;同时,将细胞-支架复合物分别移植于6只Wistar雌性大鼠背部皮下和股二头肌内,观察其成脂及存活情况。结果：移植8周、12周后,组织冰冻切片油红O染色、HE染色及扫描电镜显示,实验组移植复合物内有脂肪细胞生成,背部移植复合物表面皮肤结合紧密,与底部肌肉组织结合疏松,体积较移植前增大,支架材料随移植时间延长逐渐降解;股二头肌内移植复合物移植8周后,与肌肉组织结合紧密,但体积较移植前明显减小,支架材料降解明显,到移植12周后移植处不见移植物存在。空白对照组移植物内无脂肪细胞生成,移植物体积较植入前减小,股二头肌内移植物减小更明显;股二头肌内移植物移植12周后,移植处不见移植物存在。结论：蚕丝蛋白生物支架具有良好的三维空间结构和生物降解性,人脐带间充质干细胞接种于蚕丝蛋白生物支架可用于组织工程化脂肪组织的研究;不同移植部位对该组织工程化脂肪存活有一定的影响,而背部皮下为良好的移植位点。     

Self‐synthesized extracellular matrix contributes to mature adipose tissue regeneration in a tissue engineering chamber

The development of an engineered adipose tissue substitute capable of supporting reliable, predictable, and complete fat tissue regeneration would be of value in plastic and reconstructive surgery. For adipogenesis, a tissue engineering chamber provides an optimized microenvironment that is both efficacious and reproducible; however, for reasons that remain unclear, tissues regenerated in a tissue engineering chamber consist mostly of connective rather than adipose tissue. Here, we describe a chamber‐based system for improving the yield of mature adipose tissue and discuss the potential mechanism of adipogenesis in tissue‐chamber models. Adipose tissue flaps with independent vascular pedicles placed in chambers were implanted into rabbits. Adipose volume increased significantly during the observation period (week 1, 2, 3, 4, 16). Histomorphometry revealed mature adipose tissue with signs of adipose tissue remolding. The induced engineered constructs showed high‐level expression of adipogenic (peroxisome proliferator‐activated receptor γ), chemotactic (stromal cell‐derived factor 1a), and inflammatory (interleukin 1 and 6) genes. In our system, the extracellular matrix may have served as a scaffold for cell migration and proliferation, allowing mature adipose tissue to be obtained in a chamber microenvironment without the need for an exogenous scaffold. Our results provide new insights into key elements involved in the early development of adipose tissue regeneration.     

Differences at the receptor and postreceptor levels between human omental and subcutaneous adipose tissue in the action of insulin on lipolysis

The possible existence of regional differences in the antilipolytic action of insulin in human adipose tissue was investigated in vitro. Insulin-induced inhibition of glycerol release and insulin binding, measured in terms of receptor number, receptor affinity, and dissociation rates, were determined in omental and subcutaneous adipose tissue segments and isolated fat cells of 16 nonobese subjects who were undergoing elective abdominal surgery but were otherwise healthy. The sensitivity of the antilipolytic effect of insulin was higher in subcutaneous than in omental adipose tissue; the half-maximal effect was obtained with 1 and 3 microU/ml of insulin, respectively (P less than 0.01). Responsiveness of the antilipolytic effect of insulin was threefold higher in the subcutaneous than in the omental region (P less than 0.005). Insulin receptor affinity was significantly higher in subcutaneous than in omental fat cells, but there was no difference in receptor number (about 300,000 sites/cell). 125I-insulin dissociated more rapidly from omental than from subcutaneous adipocytes in both the absence and the presence of excess native insulin. The data suggest that significant regional differences exist in the antilipolytic action of insulin in man; omental fat being less responsive than subcutaneous fat. The difference involves the insulin receptor affinity, which is caused at least partly by variations in the insulin dissociation rate but is also due to differences in insulin action at the postreceptor level.     

人脂肪组织来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定方法的实验研究

目的探讨人脂肪组织来源的内皮祖细胞的分离、培养及鉴定的方法。方法脂肪抽吸术获取人体脂肪组织,消化法得到的细胞接种在Fibronectin包被的培养皿内,用含2%胎牛血清的DMEM培养,传至第2代,分诱导组(EGM-2,2?S,VEGF,bFGF等)和非诱导组(DMEM,2?S)两组进行培养。免疫细胞荧光分别检测两组的CD34、vWF和PECAM-1表达;流式细胞仪分别检测两组的CD34、CD45、CD133和PECAM-1表达率;荧光显微镜观察细胞摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞接种于甲基纤维素半固体培养基进行三维培养,观察血管样结构形成情况。结果诱导组细胞12d后呈现内皮细胞典型的铺路石样形态,未诱导组细胞未观察到这种变化;免疫细胞荧光显示诱导组vWF、PECAM-1表达阳性,未诱导组细胞CD34表达阳性;流式细胞仪检测显示诱导组PECAM-1阳性率为(67.41±13.35)%,明显高于非诱导组的(6.73±2.21)%(P<0.01),非诱导组CD34阳性率为(72.39±13.45)%,明显高于诱导组的(16.06±3.86)%(P<0.01);荧光显微镜观察显示诱导组细胞具有摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞三维培养形成"树枝样"分叉结构。结论建立了一种从人脂肪组织分离、培养EPCs的方法,并对其表型进行鉴定,有望为血管组织工程提供新的种子细胞来源。