宫内炎性预敏和生后高氧暴露对早产大鼠肺Bax和Bcl-2基因表达和肺细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察宫内炎性预敏及生后60%氧暴露对肺增殖性细胞核抗原(PCNA)及肺细胞凋亡影响的动态变化规律及Bcl-2家族中Bax、Bcl-2基因的表达对肺细胞凋亡的调控作用;探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制之间的关系.方法早产大鼠随机分为生理盐水+高氧组、脂多糖(LPS)+高氧组、LPS组和正常对照组,于生后第1、7和14天利用简单随机抽样方法取8只,采用免疫组织化学染色方法检测各组肺组织PCNA表达水平及脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测各组肺组织凋亡和Bax、Bcl-2基因表达水平.结果 ①PCNA的表达:LPS组和生理盐水+高氧组在生后第1天表达明显低于对照组(LPS组:0.18±0.01;生理盐水+高氧组:0.53±0.11;对照组:1.16±0.31;P=0.005,0.021);LPS+高氧组在生后第14天明显低于其他3组(对照组:0.89±0.22;LPS组:1.03±0.07;生理盐水+高氧组:0.96±0.16;LPS+高氧组:0.47±0.08;P=0.048,0.019,0.030).②凋亡指数(AI):LPS组在生后第1天明显高于对照组(17.73±2.21 vs 7.16±0.31,P=0.021);生理盐水+高氧组在生后第7天最高;LPS+高氧组在生后第14天表达明显高于其他3组(对照组:20.53±4.51;LPS组:13.99±1.69;生理盐水+高氧组:35.08±4.96;LPS+高氧组:49.92±7.93;P=0.005,0.002,0.048).③BaxmRNA的表达:LPS组在生后1 d明显高于其他3组(LPS组:0.73±0.06;对照组:0.16±0.03;生理盐水+高氧组:0.23±0.03;LPS+高氧组:0.24±0.13;P=0.001,0.002,0.002);生理盐水+高氧组在生后第7天表达明显高于对照组(0.58±0.06 vs 0.19±0.05,P=0.002);LPS+高氧组在出生后第14天明显高于对照组(0.58±0.01 vs 0.29±0.09,P=0.009).④Bcl-2 mRNA的表达:LPS组在生后在第1天明显低于其他3组(LPS组:0.18±0.02;对照组:0.41±0.09;生理盐水+高氧组:0.48±0.03;LPS+高氧组:0.59±0.05;P=0.019,0.007,0.012);生理盐水+高氧组及LPS+高氧组在生后第7天明显低于对照组(0.28±0.05/0.21±0.02 vs 0.49±0.09,P=0.02,0.008).结论 宫内炎性预敏及生后高氧暴露可抑制肺细胞增殖,可能通过提高Bax/Bcl-2的表达途径使肺组织细胞过度凋亡,进而导致BPD的发生.     

银杏叶提取物对氧诱导视网膜病新生鼠视网膜血管形态和密度的影响

目的探讨银杏叶提取物(金纳多)对氧诱导早产儿视网膜病变(ROP)新生鼠视网膜血管形态和密度的影响。方法将48只SD新生鼠随机分为对照组、模型组、治疗组各16只,模型组与治疗组建立波动氧诱导的新生鼠ROP模型,治疗组于造模第7天开始予以金纳多50mg/(kg·d)腹腔注射7天。各组分别于第14天和第19天随机抽取8只新生鼠,一侧眼球采用视网膜铺片ADP酶染色,观察视网膜血管形态改变,另一侧眼球行组织切片HE染色,观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。结果视网膜铺片ADP酶染色显示,第14天和第19天时,模型组较对照组血管主干变细、形态异常,而治疗组血管形态和密度较模型组明显好转。HE染色显示模型组第14天和第19天视网膜各层细胞排列紊乱;第19天突破内界膜的细胞核数对照组、模型组、治疗组分别为(5.0±2.1)、(34.6±5.3)、(12.6±3.4),模型组高于对照组和治疗组,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论高幅度氧浓度波动可成功构建ROP动物模型。金纳多在氧诱导视网膜病变新生鼠模型中对视网膜发挥保护作用。     

波动氧诱导的新生大鼠视网膜病变模型

目的制备80%至10%的波动氧所致SD新生大鼠视网膜病变的模型。方法新生SD大鼠随机分成两组,模型组(n=12)置于氧箱中,80%至10%的波动氧24 h交替,持续7天后转入空气中饲养5天。对照组(n=12)置于空气中。应用腺苷二磷酸酶染色组织化学法进行视网膜铺片观察视网膜血管改变,眼球切片HE染色观察突破视网膜内界膜的内皮细胞核,免疫组织化学法检测视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达。对两组进行比较,判断波动氧诱导模型的可靠性。结果与对照组相比,模型组新生大鼠视网膜周边血管走形迂曲,神经节细胞排列紊乱,细胞数目减少。模型组视网膜内皮细胞核数目较对照组明显升高,差异有统计学意义[(31.2±6.2)比(1.5±1.0),P<0.01]。模型组VEGF在视网膜神经节层、内核层、外丛状层及色素细胞层均有强表达,对照组仅在神经节细胞层、内核层有较弱表达。结论吸入高幅波动氧可导致新生大鼠视网膜血管增生性病变,血管增生性视网膜组织中VEGF表达明显增强,证实80%至10%的波动氧诱导SD新生大鼠视网膜病变模型可靠。     

高压氧治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的不良反应

目的 探讨高压氧治疗对HIBD新生大鼠视网膜血管和肺组织的不良反应.方法 将出生7日的SD新生大鼠162只随机分为6组:正常对照组(n=22),HIBD组(n=20),高体积分数氧组(高氧组,n=32),高压空气组(n=16),高压氧组(n=36),高氧加高压氧组(n=36).高压空气组和高压氧组于HIBD模型制作后2 h分别给予高压空气和高压氧(2个大气压)处理1 h,1次/d,连续7 d.高氧组于HIBD制作后给予900～950 mL/L氧,连续7 d.高氧加高压氧组于HIBD模型制作后进行高氧处理,同时予高压氧治疗,1次/d,连续7 d.21日龄处死动物,TUNEL法检测各组海马CAI区神经细胞凋亡;HE染色观察其眼球和肺组织病变;墨汁染色视网膜铺片观察其血管增生情况;免疫组织化学观察其血管内皮生长因子(VEGF)表达;ELISA法检测其脑组织8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平.结果 1.HIBD组、高压空气组、高氧组和高氧加高压氧组脑组织海马CA1区凋亡细胞数较正常对照组明显增多(Pa <0.01),高压氧组无明显增加.2.高氧组和高氧加高压氧组视网膜新生血管细胞核计数较正常对照组明显增多(Pa <0.01),高压氧组增加不明显.3.视网膜铺片显示高氧组和高氧加高压氧组视网膜血管明显增生,但HIBD组、高压空气组、高压氧组无明显血管增生现象.4.高氧组和高氧加高压氧组视网膜VEGF较正常对照组明显表达(Pa <0.01).5.肺组织HE染色观察到HIBD组、高压空气组和高压氧组结构均与正常对照组相似;高氧组和高氧加高压氧组肺泡样结构明显遭破坏,后者程度稍轻.6.脑组织8-iso-PGF2α水平在HIBD组、高压空气组和高压氧组均较正常对照组增加(Pa <0.01);高氧组和高氧加高压氧组均较高压氧组显著增高(Pa <0.01).结论 高压氧治疗对HIBD新生大鼠脑损伤有保护作用;高氧有刺激新生大鼠视网膜血管增生和肺组织损伤作用,而高压氧则无眼和肺的不良反应;高氧可加重HIBD后脑组织脂质过氧化物的产生,而高压氧无此作用.     

血管内皮生长因子及其受体在早产儿视网膜病大鼠模型中的表达和作用

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及受体 (flt 1和flk 1)的表达规律与早产儿视网膜病 (ROP)视网膜血管变化的关系。方法　 86例新生未成熟SD大鼠随机分为高氧组和对照组 ,各组再随机分为 1、3、7及 14天 4个组。高氧组吸入 75 %的氧 ( 7天后置入空气中饲养 )建立ROP大鼠模型 ,对照组则在空气中饲养。取视网膜组织制作标本 ,HE染色及CD34标记血管内皮细胞观察视网膜血管改变 ,采用免疫组织化学方法测定VEGF、flt 1及flk 1在视网膜的表达。结果　①随着天数增加对照组毛细血管密度指数 (RCDI)呈逐渐上升趋势 (F =2 1 5 89,P <0 0 1) ,7天时高氧组RCDI最低 ,停氧 7天 (即 14天 )时增加 ,(F =6 7 885 ,P <0 0 1) ;② 7天时VEGF及flk 1在对照组视网膜中表达最强 ,与第 1天和第 14天比较 ,表达强度差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ;③高氧组 7天时与对照组比较 ,VEGF及flk 1的表达明显减弱 ,统计学处理差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;而高氧组 14天VEGF及flk 1的表达增强 ,与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;④flt 1随着血管的改变 ,其表达部位有所变化 ,但高氧组和对照组总体表达强度变化不明显 ,P >0 0 5。结论　当未成熟的视网膜处于高氧状态时 ,VEGF及flk 1表达减弱 ,视网膜血管减少 ;当视网     

不同日龄新生小鼠视网膜血管对氧疗的敏感性

目的观察不同日龄新生小鼠对氧疗的敏感性,研究视网膜血管的发育程度与新生血管形成的关系。方法选择4、7、9、11日龄C57BL/6J新生小鼠各48只,分为高氧组和空气组,通过视网膜铺片(ADP酶染色)和视网膜切片(HE染色),定性和定量观察视网膜血管的增生情况。结果与各空气组相比,4、7、9日龄高氧组小鼠吸高氧5d,返回空气第5天时,大量新生血管形成。而11日龄高氧组小鼠在返回空气第5天未见新生血管形成。4、7、9、11日龄高氧组小鼠出氧箱第5天突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目分别为25.0±3.7、47.7±5.0、18.7±2.0、2.6±1.4个,4、7、9、11日龄空气组分别为0.7±1.1、1.2±1.2、0.8±1.0、1.6±1.0个,4、7、9日龄高氧组细胞核数目明显增多,与相应的空气组比较,差异有显著性(P<0.001);11日龄高氧组细胞核数无明显增多,与11日龄空气组比较,差异无显著性。结论视网膜血管的发育程度与新生血管形成有关,视网膜血管发育越不成熟越易发生视网膜病变,而发育成熟的视网膜则不会发生视网膜病变。     

线粒体ATP敏感钾通道对早产鼠高体积分数氧肺损伤的保护作用

目的探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)在早产鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤中的保护作用。方法早产Wistar大鼠72只,随机分为对照组、高氧组和二氮嗪组。二氮嗪组在高氧暴露前30 min,按10 mg·kg-1腹腔注射二氮嗪,其余2组在相同时点腹腔注射等量9 g·L-1盐水,高氧组和二氮嗪组置于950 mL·L-1氧气中,对照组置于同一条件常压空气中。分别于空气或高氧暴露1 d、3 d、7 d时收集肺组织,HE染色观察其肺组织病理形态变化,原位末端标记法检测其肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测其肺组织Caspase-9和Omi/HtrA2的表达,激光共聚集显微镜下观察间接免疫荧光双染色Omi/HtrA2的胞内转位。结果与对照组比较,高氧组肺组织受损明显,形态改变,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),Caspase-9、Omi/HtrA2表达增多(P<0.01),Omi/HtrA2胞内转位率明显增高(P<0.01)。与高氧组比较,二氮嗪组肺组织受损得到改善,细胞凋亡率减少(P<0.01),Caspase-9、Omi/HtrA2表达显著减少(Pa<0.01),Omi/HtrA2胞内转位率明显减少(P<0.01)。结论二氮嗪可能通过开放mi-toKATP减少Caspase-9和Omi/HtrA2的表达,减少Omi/HtrA2在细胞内的转位,从而减轻早产鼠高氧肺损伤。     

HoxB5在高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织中的动态表达及其意义

目的 探讨生长调控基因HoxB5对正常肺泡发育的调控及其在肺泡损伤修复过程中的作用.方法新生大鼠80只,随机分为高体积分数氧(高氧)组和对照组.高氧组吸入850～900 mL/L氧气,建立慢性肺疾病(CLD)模型;对照组吸入空气,余控制因素相同.分别于实验第1、3、7、14、21天留取大鼠肺组织,应用免疫组织化学法测定二组大鼠肺组织HoxB5动态表达部位及强度,RT-PCR测定二组大鼠肺组织HoxB5 mRNA的动态表达,原位杂交技术测定HoxB5 mRNA在其肺组织的动态表达部位.SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果对照组新生大鼠出生第21天肺泡发育逐渐完成,而高氧组自第7天始肺泡发育受阻,随着时间的延长肺泡发育障碍明显加重.二组新生大鼠肺组织HoxB5蛋白在第1、3天表达均无差异(Pa>0.05),但高氧组在第7天后表达逐渐减少,对照组在第7天达高峰之后平稳表达,第14、21天对照组肺组织HoxB5均明显高于高氧组(Pa<0.05),HoxB5 mRNA高氧组在第7天后表达逐渐减少,对照组在第7天后平稳表达,均明显高于高氧组(Pa<0.05).免疫组织化学和原位杂交检测结果显示,对照组HoxB5蛋白及mRNA主要表达于肺泡上皮,且在肺泡连接处、肺泡拐角处及肺泡嵴表达更明显,而高氧组在上述部位表达明显减弱.结论高氧肺损伤新生大鼠肺泡上皮HoxB5随着肺泡化障碍及肺损伤的加重表达明显减少,HoxB5表达减少可能在高氧肺发育障碍和肺泡上皮细胞损伤修复中发挥重要作用.     

高浓度氧暴露导致发育期小鼠脑细胞的凋亡与增殖

目的 研究高浓度氧(高氧)吸入对发育期小鼠脑的影响,探讨高氧暴露后脑细胞凋亡和内源性神经干细胞增殖的变化.方法 将出生7 d的C57/BL6小鼠置于高氧(75%)箱中5 d,然后取出在正常环境中,腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(BrdU),1次/d,连续5 d.以同龄同室的小鼠作为空气对照组.用TUNEL方法检测脑组织凋亡细胞,免疫荧光法标记BrdU阳性的增殖细胞.结果 高氧暴露组脑细胞凋亡数目(240.0±25.8)明显增多,与空气对照组(182.1±17.0)比较差异有统计学意义(t=8.677,P＜0.001).高氧暴露组海马齿状回颗粒下层的新生细胞数目(59.2±10.7)较对照组(49.3±8.7)明显增多,差异有统计学意义(t=3.998,P＜0.001).结论 非生理性高氧暴露可介导发育期小鼠脑损伤,引起细胞调亡,并诱导脑内神经生发区的细胞增殖.     

高体积分数氧诱导幼鼠肺组织细胞凋亡情况及p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导机制

目的 探讨幼鼠高体积分数氧(高氧)暴露后肺组织细胞凋亡及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)对细胞凋亡的调控作用.方法 幼年Wiser大鼠40只随机分为空气对照组、高氧暴露组(高氧暴露第1、2、3天)和p38MAPK干预组,每组各8只.空气对照组大鼠置于同一室内空气中;高氧暴露组大鼠置于氧体积分数为900 mL/L的有机玻璃氧仓中;p38MAPK干预组大鼠尾静脉注射p38MAPK的抑制剂SB203580 2 h后置于高氧仓中3 d.应用Western blot法和末端标记法分别检测p38MAPK在大鼠肺组织中的表达及肺组织的细胞凋亡指数,并同时观察SB203580对肺组织细胞凋亡的影响.应用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析.结果 高氧暴露第1、2天组大鼠肺组织细胞凋亡指数与空气对照组比较无明显差异,高氧第3天组大鼠肺组织细胞凋亡指数较空气对照组明显增加(P<0.05),发生凋亡的主要靶细胞为肺泡、支气管上皮及血管内皮细胞.高氧暴露第1天,肺组织p38MAPK活性迅速升高,于第2天达高峰,高氧暴露第3天p38 MAPK活性有所下降,但仍高于空气对照组(Pa<0.05).使用SB203580干预后,肺组织p38MAPK活性被抑制,同时肺组织细胞凋亡指数降低.结论 高氧暴露可诱导肺组织发生细胞凋亡;p38MAPK参与了高氧诱导的肺组织细胞凋亡的调控,可能起促凋亡作用.