α-干扰素对血管瘤血管内皮细胞周期、凋亡的影响

目的 观察α-干扰素对体外培养血管瘤内皮细胞周期、凋亡的影响,探讨干扰素治疗血管瘤的机制.方法 用组织块法培养增生期血管瘤内皮细胞,分别用1×104U,1×105U,1×106Uα-干扰素干预,对照组不加任何药物,继续培养24h后,用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡变化.结果 α-干扰素作用24 h后血管瘤内皮细胞G1期前出现二倍体凋亡峰;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组G1期百分率分别为(63.68±0.66)%、(72.97±1.56)%、(63.27±5.64)%,对照组为(58.75±0.32)%,与对照组比较,P＜0.05;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组S期百分率分别为(32.99±2.01)%、(25.02±1.31)%、(37.93±5.31)%,对照组为(26.46±1.94)%,与对照组比较,P＞0.05;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组G2/M期百分率分别为(0.01±0.05)%、(2.43±0.27)%、(3.99±1.27)%,其百分率随α-干扰素浓度升高而增高.细胞凋亡百分率随α-干扰素浓度增加而增高,1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组凋亡百分率分别为(11.89±0.56)%、(18.88±3.04)%、(31.92±1.92)%,对照组凋亡率为(3.25±0.23)%,与对照组比较,P＜0.01.结论 α-干扰素能导致血管瘤血管内皮细胞G1、G2期阻滞和凋亡,细胞凋亡率与药物浓度存在剂量依赖关系.干扰素可能通过血管内皮细胞G1、G2期阻滞,抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖、诱导血管内皮细胞凋亡而达到治疗血管瘤的作用.     

Caspase-8、Fas在体外培养血管瘤血管内皮细胞中的表达

目的 观察体外培养血管瘤血管内皮细胞的凋亡与Caspase-8、Fas的关系,探讨血管瘤血管内皮细胞的凋亡通路.方法 应用组织块法培养血管瘤血管内皮细胞,待长成单层细胞以后传代,建立血管瘤血管内皮细胞系,观察其增殖特征,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定.收集以上培养的细胞,顺序加入膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素及碘化丙锭溶液双染色上机,Cell Quest软件分析结果,同期取相同状态细胞,用流式细胞仪检测Caspase-8的表达,免疫组织化学法检测Fas的表达,Fas以细胞膜及细胞质出现红色为阳性细胞.比较Caspase-8、Fas在血管瘤血管内皮细胞离体培养过程中不同时期的表达情况.结果 培养的血管瘤血管内皮细胞于24 h后开始贴壁生长,1周后只有少最细胞铺展贴壁生长,2周后开始生长分裂,3周后开始快速生长,4周后细胞铺满板底.相差倒置显微镜观察,发现所分离的内皮细胞呈上皮细胞形态.培养细胞第Ⅷ凝血因子相关抗原表达为阳性.血管瘤血管内皮细胞凋亡率高时[(18.88±3.32)%],Caspase-8、Fas呈高表达;血管瘤血管内皮细胞凋亡率低时[(3.25±0.23)%],Cagpase-8、Fas呈低表达,血管瘤血管内皮细胞高凋亡率与低凋亡率比较差异有统计学意义(t=10.34 P<0.01).结论 Cagpase-8、Fas参与了体外培养人血管瘤内皮细胞凋亡的调节,体外培养血管瘤内皮细胞的凋亡可能是通过死亡受体通路来实现的.     

The influence of propranolol on expression of vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinases-2 from in vitro hemangioma endothelial cells

目的 观察普萘洛尔对体外培养血管瘤内皮细胞血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的影响,探讨普萘洛尔治疗血管瘤的机制.方法 用组织块结合酶消化法原代培养血管瘤内皮细胞,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定.待细胞处于对数生长期,换无血清培养基孵育48h使细胞同步化,然后分别加入0.5 μmol/L和1μmol/L的普萘洛尔作为干预组,而对照组不加任何干预因素,继续孵育24 h,用Real-time PCR法检测血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达水平,同期检测血管瘤血管内皮细胞凋亡率,并分析血管内皮生长因子mRNA、基质金属蛋白酶-2 mRNA的表达水平与血管瘤血管内皮细胞凋亡的相关性.结果 0.5 μmol/L普萘洛尔组和1.0μmol/L普萘洛尔组血管瘤内皮细胞凋亡率分别为(22.42±0.83)％,(24.36±1.42)％,比对照组(15.72±0.59)％明显升高(P＜0.01);血管内皮生长因子mRNA相对表达量分别为1.02±0.42、0.93±0.22,比对照组1.61±0.52降低(P＜0.05),基质金属蛋白酶-2mRNA相对表达量分别为0.77±0.18、0.67±0.27,比对照组1.47±0.57降低(P＜0.05),但0.5μmol/L普萘洛尔组血管内皮生长因子mRNA、基质金属蛋白酶2 mRNA与1.0 μmol/L普萘洛尔组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 普萘洛尔可以促进体外培养的血管瘤内皮细胞凋亡,其机制可能是通过下调血管瘤内皮细胞血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达,从而促进血管瘤内皮细胞凋亡.     

Caspase-8、Fas/FasL在小儿血管瘤中的表达

目的 观察Caspase-8、Fas/FasL在小儿血管瘤中的表达,探讨血管瘤内皮细胞的凋亡途径.方法 收集未经其他治疗、单纯行手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本44例,结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原(PCNA)表达对血管瘤进行分期,采用免疫组织化学Evision二步法检测PCNA、Caspnse-8、Fas、FasL的表达.采集图像并分析,计算积分吸光度(IA),应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 结合Mulliken分类法与PCNA表达将44例血管瘤的标本分为增生期血管瘤25例,消退期血管瘤19例.25例增殖期血管瘤Caspase-8、Fns、FasL的IA分别为1186.42±863.86、99.08±54.80、538.65±344.41.19例消退期血管瘤Caspnse-8、Fas、FasL的IA分别为20 544.18±7 556.04、714.34±288.38、1 917.12±507.21.血管瘤增殖期Caspase-8、Fas、FasL的IA明显低于消退期,差异均有统计学意义(Pa<0.01).Fas与Caspase-8的表达呈正相关(r=0.644 P<0.01).结论 Caspase-8、Fas/FasL参与了小儿血管瘤内皮细胞凋亡的调节,在血管瘤内皮细胞的凋亡调控中起作用的可能是Fas/FasL介导的死亡受体通路.     

普萘洛尔对体外培养的血管瘤内皮细胞凋亡的影响

目的观察普萘洛尔对体外培养的血管瘤内皮细胞凋亡的影响。方法取婴幼儿增殖期血管瘤标本,用组织块法原代培养血管瘤内皮细胞,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。待细胞处于对数生长期,换无血清培养基孵育48 h,使细胞同步化,然后分别加入0.5μmol·L-1和1.0μmol·L-1的普萘洛尔作为干预组,而对照组不加任何干预因素,继续孵育24 h,检测血管瘤血管内皮细胞凋亡率。结果血管瘤内皮细胞于组织块接种后3～4 d开始贴壁生长,内皮细胞呈多角形态,3～4周细胞开始快速生长,并铺满板底。培养细胞第Ⅷ凝血因子相关抗原表达为阳性。普萘洛尔作用24 h后,0.5μmol·L-1普萘洛尔组和1.0μmol·L-1普萘洛尔组血管瘤内皮细胞凋亡率分别为(22.42±0.83)%、(24.36±1.42)%,较对照组[(15.72±0.59)%]均明显升高(Pa<0.01)。结论普萘洛尔可以促进体外培养的血管瘤内皮细胞凋亡或抑制其增殖。     

The expression of mTOR and p70S6K in hemangioma vascular endothelial cell in vitro

目的 观察mTOR、p70S6K在体外培养血管瘤血管内皮细胞中的表达,探讨其与血管瘤血管内皮细胞周期分布的关系.方法 用组织块法培养血管瘤内皮细胞,同步化培养血管瘤内皮细胞后,采用Western blot法检测血管瘤内皮细胞mTOR、p70S6K-α的表达水平,同期用流式细胞仪检测血管瘤血管内皮细胞周期的变化;并分析mTOR、p70S6K-α的表达水平与血管瘤血管内皮细胞周期分布的关系.结果 mTOR蛋白表达水平较高0.20±0.01,p70S6K-α蛋白表达水平较低时0.25±0.01,处于G0/G1期的细胞较少(55.95±4.38)％; mTOR蛋白表达水平下降至0.16±0.02,p70S6K-α蛋白表达水平升高至0.29±0.01,处于G0/G1期的细胞明显增多(77.86±8.18)％;二者比较差异有统计学意义(t=- 5.781,P＜0.01).结论 mTOR和p70S6K参与了体外培养的血管瘤血管内皮细胞细胞周期G0/G1阻滞.     

过敏性紫癜患儿血清IgA1对人脐血管内皮细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨过敏性紫癜(HSP)患儿血清IgA1对脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 培养人HUVEC,分为HSP组、正常对照组和空白对照组.亲和层析法分离HSP患儿及正常儿童血清IgA1,分别用50、100、200 μg/ml予以刺激HUVEC,空白对照组采用RPMI-1640培养.6、12、24 h后分别行流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡率.Real time PCR和Western blot检测HUVEC中Fas和Caspase-3表达情况.结果 HSP患儿的IgA1(200 μg/ml)可诱导脐静脉内皮细胞发生凋亡,其凋亡率显著高于空白对照组[(14.77 ±2.23)％ vs.(2.25 ±0.77)％,P＜0.01];健康对照的IgA1(200μg/ml)也可诱导脐静脉内皮细胞发生凋亡,凋亡率也显著高于空白对照组[(7.97±1.48)％ vs.(2.25±0.77)％,P＜0.01].HSP患儿的IgA1诱导HUVEC的凋亡呈浓度依赖及时间依赖性.而且HSP患儿的IgA1能显著促进HUVEC中Caspase-3及Fas的表达(P＜0.01).结论 HSP患儿体内IgA1可诱导HUVEC凋亡,其可能参与了HSP发生发展的过程.     

重组人血管内皮抑素对鼠血管瘤内皮细胞株EOMA增殖的影响

目的 研究重组人血管内皮抑素(YH-16,恩度)对鼠源性血管瘤内皮细胞(EOMA)的抑制作用及其机制,并与血管瘤常用药物曲安缩松、平阳霉素(PYM)、干扰素α-2a相比较,观察单用及联合用药对EOMA细胞的抑制作用.方法 用MTT法检测不同浓度的YH-16对EOMA细胞作用24、48、72 h的抑制率,筛选出YH-16的最适抑制浓度.比较YH-16、曲安缩松、PYM、干扰素α2a四种药物单用以及YH-16、曲安缩松、平阳霉素两两联合作用对EOMA细胞的抑制率.采取流式细胞术测定YH-16作用EOMA细胞48h后,细胞凋亡率及Caspase-3的活性.结果 ①YH-16各浓度组在24h、48 h及72 h三个作用时段对EOMA细胞抑制作用显著(P＜0.01),并存在明显的剂量依赖关系;②选择200 gg/ml为YH-16的最适抑制浓度;③四种药物抑制作用由强到弱:PYM＞YH-16＞曲安缩松＞干扰素α-2a;④YH-16与曲安缩松或与PYM的联合效应均为拮抗效应,Q值均＜0.85;PYM与曲安缩松的联合效应为相加效应,0.85＜Q值＜1.15;⑤YH-16作用后细胞凋亡率随药物浓度增加而增高,Caspase-3表达在YH-16各浓度组均增强(P＜0.01).结论 YH-16对EOMA细胞有确切的抑制作用.该作用弱于PYM,而强于曲安缩松及干扰素α-2a,它主要是通过诱导细胞凋亡实现,且Caspase-3参与此过程.YH-16能拮抗曲安缩松及PYM抑制EOMA细胞增殖的作用,曲安缩松能增加PYM对EOMA的抑制增殖作用.     

钙敏感受体对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

探讨在缺氧/复氧所诱导乳鼠心肌细胞凋亡中,钙敏感受体（calcium - sensing receptor,CaSR）对Fas/Fas配体（Fas L）途径的影响。方法对8只2日龄Wistar大鼠心肌细胞进行原代培养,后随机分为三组：(1)对照组：细胞不经缺氧/复氧处理,在其他组复氧开始时培养基内加入与用药组等体积的生理盐水;(2)缺氧/复氧组：心室肌细胞缺氧2h/复氧24h,细胞培养基内于复氧开始时加入与用药组等体积的生理盐水;(3) CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组：细胞培养基内于复氧开始时加入300μmol/L CaSR激动剂GdCl3。流式细胞仪分析细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构,蛋白印迹法检测CaSR、Fas和FasL蛋白的表达。结果流式细胞仪检测显示,缺氧/复氧组心肌细胞凋亡为12.18％±1.54％,与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01)。CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至20.25％±2.87％ (P＜0.01)。透射电镜下可见线粒体絮状变、线粒体嵴溶解、空泡样变;CaSR激动剂使CaSR、Fas和FasL表达进一步上调,明显高于缺氧/复氧组(P＜0.05)。结论CaSR激活参与了缺氧/复氧所诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,CaSR可通过激活Fas/FasL死亡受体途径导致乳鼠心肌细胞凋亡。     

凋亡相关蛋白在激素性幼兔股骨头缺血坏死动物模型中的表达及意义

目的 观察各凋亡相关蛋白在激素性幼兔股骨头缺血坏死动物模型股骨头组织中的表达情况,探讨该模型中调控凋亡的主要通路.方法 选用2月龄的新西兰大白兔,制作糖皮质激素性幼兔股骨头缺血坏死模型及对照组模型,根据是否发病将激素注射组分为未发病组和发病组.取股骨头软骨及软骨下骨组织用免疫组织化学法检测凋亡通路中凋亡相关蛋白天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-8、人结合凋亡蛋白酶活化因子-1(apaf-1)、钙蛋白酶-1(calpain-1)的表达情况.分别测定在单位视野中Caspase-3、Caspase-8、apaf-1、calpain-1的积分光密度(IOD)值.结果 1.Caspase-3的IOD值分别为发病组25 142.72 ±21 528.48,未发病组2 069.63±1 096.96,对照组301.80±99.66.Caspase-8的IOD值分别为发病组24 942.63±18 942.99,未发病组2016.31±1 518.70,对照组236.85±97.94.Apaf-1的IOD值分别为发病组8 514.23±6 384.20,未发病组1 118.49±1 360.59,对照组95.13±38.05.Calpain-1的IOD值分别为发病组9 636.71 ±9 123.81,未发病组1 881.10±3 277.86,对照组126.71±47.35.Caspase-3在发病组和未发病组、对照组间差异有统计学意义(H=11.470、23.996,p＜0.01);Caspase-8在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=22.178,P＜0.01);apaf-1在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=22.808,P＜0.01);calpain-1在发病组和对照组间差异有统计学意义(H=13.553,P ＜0.01).2.线性回归分析:Caspase-8能够显著的预测Caspase-3,且回归方程回归效应显著,回归方程能够解释40.3％的变异,而apaf-1和calpain-1对Caspase-3的回归效应不显著.结论 凋亡受体通路可能在股骨头缺血坏死的凋亡过程中发挥主要调控作用.     

小白菊内酯诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖抑制的影响,同时计算IC50,根据IC50选取实验组小白菊内酯浓度(10、15μmol/L);流式细胞仪分析对照组及实验组肿瘤细胞凋亡率;EMSA检测NF-κB的活性;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达.结果 小白菊内酯抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系.用10、15μmol/L小白菊内酯处理细胞48 h后凋亡率分别为(35.63±0.98)％,(53.32±1.08)％,与对照组(6.42±1.26)％比较,差异显著(P＜0.01).EMSA结果表明,小白菊内酯处理组细胞NF-κB活性降低.Western Blot结果显示,小白菊内酯使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 小白菊内酯促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡,可能与抑制NF-κB活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

2009甲型H1N1流感患儿免疫功能改变初探

目的 探讨2009甲型H1N1流感(以下简称"甲流")患儿免疫功能及可能的免疫发病机制.方法 深圳市儿童医院2009年11月1日-2010年1月10日甲流住院患儿60例,轻症35例(轻症肺炎),重症25例(重症肺炎或甲流相关性脑病,死亡3例),同年龄正常对照组20例.采用real-time PCR、流式细胞术及ELISA检测外周血单个核细胞胞浆模式识别受体(PRRs)维甲酸诱导基因I/黑色素瘤分化相关基因5(RIG/MDA5)、胞膜PRRs Toll样受体(TLRs)分子及其信号途径传导分子、细胞因子/趋化因子及负性调节因子变化;T、B及NK细胞凋亡及凋亡相关基因TRAIL和CASPASE-3表达.结果 (1)甲流患儿RIG/MDA5表达、TLR2、TLR4表达明显高于正常对照组[TLR2(9.69±3.15)×10-2vs.(3.96±0.83)×10-2,t=10.16,P＜0.05;TLR4(10.23±2.85)×10-2vs.(7.46±2.18)×10-2,t=3.76,P＜0.05],以重症甲流患儿增高为著,RIG/MDA5表达增高最为明显;TLRs途径信号传导分子MyD88、TRAM等表达明显高于轻症甲流患儿.(2)甲流患儿CD3+[(1.22±0.38)×109/Lvs.(3.59±1.10)×109/L,t=9.21,P＜0.05]、CD4+、CD8+T细胞及NK细胞绝对计数明显低于正常对照组,B细胞无明显改变.(3)轻症甲流患儿TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症细胞因子血浓度或基因高于正常对照组,重症患儿炎症细胞因子TNF-α[(6.42±1.76)×10-2vs.(9.05±2.51)×10-2,t=4.55,P＜0.05]明显低于正常对照组.IFN-α/β表达持续高于正常对照组,尤以重症甲流患儿为著;IFN-I诱导基因IP-10[(20.52±6.09)×10-2vs(1.18±0.34)×10-2,t=18.74,P＜0.05]、RANTES或iNOS轻症患儿表达高于正常对照组,重症患儿表达则趋于减少.(4)甲流患儿CD3+[(32.90±7.66)%vs.(20.21±6.58)%,t=6.21,P＜0.05]、CD4+、CD8+T细胞、NK细胞凋亡高于正常对照组,以重症患儿更为显著.凋亡相关基因TRAIL和CASPASE-3表达明显高于正常对照组.(5)重症患儿PRRs负性凋节因子SOCS1、SOCS3、IRAK-M、TRAF4及FLN29表达明显高于轻症患儿,抗炎细胞因子IL-10及IL-10/TNFα比值随病情加重增高.结论 甲流患儿机体免疫功能紊乱,轻症患儿处于全身免疫激活状态,重症患儿同时存在免疫激活/免疫抑制反应.     

裸鼠皮下移植人神经母细胞瘤模型的建立和HIF-1α及其相关蛋白的表达

目的 探讨应用人神经母细胞瘤细胞株建立裸鼠皮下神经母细胞瘤模型,测定缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)及其相关蛋白在该模型中的表达,了解HIF-1α及其相关蛋白在神经母细胞瘤发生发展中的作用,为神经母细胞瘤(neuroblastoma NB)的发病机制研究和诊治提供新的思路与方法.方法 应用KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞株建立模型.采用S-P免疫组织化学方法检测裸小鼠皮下移植瘤、手术切除的神经母细胞瘤肿瘤标本、正常人肾上腺髓质组织中HIF-1α、VEGF及TGF-α的表达情况.结合免疫组化结果对HIF-1α阳性组与HIF-1α阴性组裸鼠的体重变化、瘤体重量、存活天数进行比较,并对实验结果进行统计学处理.结果 4周后解剖结果证实成模率80%;HIF-1α、VEGF及TGF-α在肿瘤组织中的阳性表达率显著高于正常组织(P＜0.01),肿瘤组与阳性对照组HIF-1α、VEGF、TGF-α三种蛋白的阳性染色的积分光密度(integrating optical density,IOD)值明显高于阴性对照组(P＜0.01).HIF-1α在肿瘤组与阳性对照组中的表达与VEGF的表达成正相关(P＜0.05),与TGF-α的表达无明显相关性(P＞0.05);HIF-1α阳性组与HIF-1α阴性组体重变化、瘤体重量及存活天数比较,差异有统计学意义(P＜0.01);HIF-1α阳性组较HIF-1α阴性组裸鼠生存时间短(P＜0.05).结论 该模型用于研究人类神经母细胞瘤,造模时间短,成瘤率高,生物学行为与人类神经母细胞瘤接近.HIF-1α、VEGF及TGF-α蛋白的阳性表达与神经母细胞瘤的浸润及转移有关.HIF-1α与VEGF在神经母细胞瘤的发生发展过程中可能存在一定的协同作用.HIF-1α的高表达是预后不良的一个重要指标.

Abstract：

Objective To study the HIF-1αand its related proteins' expression in an athymic mouse human neuroblastoma xenograft model. Methods The was established by subcutaneous injection of human adrenal neuroblastoma cells. The expressions of HIF-1α, VEGF and TGF-α were detected by S-P immunohistochemical techniques. The tumor group was divided into HIF-1α positive group and the HIF-1α negative group according to the immunohistochemistry results. The body weight,tumor weight and survival days of the HIF-1αpositive mice and HIF-1αnegative mice were statistically analyzed. Results Four weeks later, significant neuroblastoma growth occurred in 40 mice (80%).The positive HIF-1α, VEGF and TGF-α rate of the tumor group was (73. 70 ± 10. 68) %, (69. 80 ±9. 91) %, and (71.43 ± 8. 52) 0% , respectively. It is significantly increased compared with the control group (P＜0. 01 ), which were (9. 67 ± 4. 53) %, (6. 80 ± 3. 40) %, and (6. 50 ± 4. 44) %, respectively. The integrated optical density (IOD) of HIF-1α, VEGF and TGF-α was 141.97 ± 7. 98,151.85 ±14. 35, and 139. 94 ± 4. 50 in tumor group, and 141.34 ± 6. 44, 144. 06 ± 8. 51 and 149. 00 ± 13. 63 in positive control group. They were significantly higher than those of the negative control group (P＜0. 01 ). In the tumor group and positive control group, the expression of HIF-1α was positively correlated with the expression of VEGF (x2 = 7. 778,r= 0. 504,P＜0. 01). However, no correlation between the expression of HIF-1α and TGF-α was found(x2 = 0. 208,r= 0. 934,P＞0. 05). The body weight,tumor weight and survival days of HIF-1α positive mice were significantly different with those of HIF-1α negative mice (P＜0. 01 ). The mice with positive HIF-1α expression had shorter survival time than the mice with negative HIF-1α (x2 = 19. 013,P＜0. 05). Conclusions The athymic mouse human neuroblastoma xenograft model is a good model to research the biology behavior of human neuroblastoma.The overexpression of HIF-1α, VEGF and TGF-αwere found in neuroblastoma which may play important roles in tumor invasion and metastasis. HIF-1αis synergistic with VEGF to promote carcinogenesis. The overexpression of HIF-1αis correlated with poor prognosis.     

1,25(OH)2D3对载脂蛋白E缺乏鼠主动脉内皮细胞增生与凋亡及一氧化氮合酶表达的影响

目的 了解1,25(OH)2D3对载脂蛋白E缺乏鼠(apoE-/-)主动脉内皮细胞(EC)增生、凋亡及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 apoE-/-鼠主动脉EC分离培养,MTT法观察1,25(OH)2D3影响apoE-/-鼠EC生长,TUNEL检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bc1-2、Fas mRNA和eNOS mRNA表达.结果 细胞对照组与无水乙醇对照组EC增生率差异无统计学意义[(0.162±0.031)vs.(0.158±0.006),p＞0.05],1,25(OH)2D3在10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L时EC增生率高于对照组(P＜0.01),但不同浓度1,25( OH)2D3作用组之间差异无统计学意义[分别为(0.189±0.013)、(0.285±0.011)、(0.296±0.026)、(0.284±0.017)、(0.233±0.010),P ＞0.05],选定10-6mol/L 1,25(OH)2D3为研究浓度,干预分离培养apoE-/-鼠主动脉EC.1,25( OH)2D310-6mol/L组、细胞对照组、无水乙醇对照组凋亡指数分别为(15.14±3.19)、(18.94 ±4.22)、(19.27±4.58),Bcl-2 mRNA分别为(0.78±0.16)、(0.46±0.21)、(0.42±0.17),Fas mRNA分别为(0.43±0.12)、(0.79±0.21)、(0.81±0.20),eNOS mRNA分别为(0.56±0.16)、(0.39±0.13)、(0.35±0.11).25(OH)2D3干预组EC凋亡指数、Fas mRNA、eNOS mRNA降低,Bcl-2 mRNA增高(P均＜0.01),细胞对照组与无水乙醇对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析发现在1,25(OH)2D3干预组,eNOS表达量与凋亡指数、Fas mRNA呈负相关(r=-0.676、-0.758),与Bcl-2表达呈正相关(r =0.762),差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 1,25(OH)2D3刺激apoE-/-鼠主动脉EC增生、抑制主动脉EC凋亡,影响凋亡相关基因Bcl-2、Fas mRNA表达,上调eNOS mRNA表达.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的 研究Rho GDP解离抑制因子(Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)mRNA 及Bcl-2 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制.方法 30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD 6 h和48 h组,每组10只.采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real-time RT-PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2) HIBD6 h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(1.40±0.12)％.HIBD 48 h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到( 15.86±0.98)％.缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平较高(4.12±0.74、2.55±0.65),在HIBD 6 h后二者表达开始下降(3.19±0.77、1.96±0.36),48 h降低更加明显(1.04±0.18、1.06±0.17),与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2 mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)缺氧缺m后各时间点RhoGDI2 mRNA的表达和Bcl-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.831,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平降低,提示Rh0GDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生.     

缺氧诱导因子-1α在婴幼儿血管瘤及血管畸形中的表达与意义

目的 本研究拟通过检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞增殖核抗原Ki-67、血管内皮标志抗原CD34在婴幼儿血管瘤不同时期、血管畸形和儿童正常皮肤中的表达,探讨缺氧在血管瘤血管生成、细胞增殖中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P染色法,检测CD34、HIF-1α、VEGF和Ki-67在小儿血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织中的表达,并计算微血管密度(MVD).结果 不同时期血管瘤之间,血管瘤与血管畸形、正常皮肤之间HIF-1α、VEGF、Ki-67、MVD均有显著性差异(P<0.05).血管瘤中HIF-1α表达分别与VEGF、Ki-67、MVD表达呈正相关;而血管畸形HIF-1α与VEGF表达不存在相关关系.结论 缺氧是不同时期血管瘤的普遍现象.HIF-1α能促进血管瘤血管生成.而在血管畸形中可能不存在缺氧的微环境,是"血管内皮细胞生长正常的血管形态异常",因此在血管畸形中不会发生内皮细胞的增殖,也不存在类似血管瘤那样出现增生期和消退期.     

卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡调控蛋白影响

目的 观察卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Fas的影响,探讨其在免疫性心肌炎中的作用.方法 60只4～5周龄近交系雄性BALB/C小鼠,随机将小鼠分为3组:免疫性心肌炎模型组(模型组),卡维地洛干预组(干预组),空白对照组(对照组),每组20只.眼球取血后处死,留取心脏及血液标本.光镜观察各组小鼠心肌组织病理学改变,电镜观察心肌细胞超微结构,化学发光免疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达的含量;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况.结果 模型组小鼠心肌细胞光镜下见大量炎症细胞浸润,电镜下可见细胞核固缩、染色质边集,对照组小鼠心肌细胞光镜下未见炎症细胞浸润,电镜下染色质边集不明显.模型组Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达较对照组高(23.48±2.24 vs 6.64±1.60,26.15±2.02 vs 5.09±0.85,21.22±3.62 vs 5.86±1.37,P＜0.01);干预组与模型组比较,小鼠心肌组织炎症积分轻(2.60±0.3l vs 2.02±0.26,P＜0.05),电镜下细胞核固缩轻,心肌细胞Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达低(17.13±1.94 vs 23.48±2.24,17.66±2.62 vs26.15±2.02,16.79±2.83 vs 21.22±3.62,P＜0.05),凋亡指数低[(16.61±4.67)%vs(24.51±4.70)%,P＜0.05],cTn-I水平低[(1.878±0.48)ng/ml vs(1.102±0.23)ng/ml,P＜0.05].结论 卡维地洛可减轻免疫性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,对免疫性心肌炎起一定的保护作用.

Abstract：

Objective To observe the effects of carvedilol on the expression of Bcl-2, Bax and Fas in autoimmune myocarditis (AM).Methods A total of 60 inbred male BALB/C mice 4-5 weeks of age were divided at random into 3 groups as follows: AM group ( n = 20), carvedilol group ( n = 20 ) and control group (n = 20).The mice were sacrificed after gathering blood specimens by taking out the eyeballs and hearts tissue.The histological and ultrastructural changes were observed under light microscope and electron microscope.The concentrations of cardiac troponin Ⅰ (cTn Ⅰ ) were detected by chemiluminescence immunoassay (CLIA).Immunohistochemistry (IHC) was performed to analyze the contents of Bcl-2, Bax and Fas, TUNEL to detect the apoptotic index in myocardial cells.Results There were large number of lymphocyte and monocyte infiltrates under light microscope and karyopyknosis and chromatin gathered along the nuclear membrane under electron microscope in AM group.There were no inflammations and chromatin gathering in group C.Compared with control group, the Bcl-2, Bax and Fas protein expression significantly elevated in AM group ( 23.48 ± 2.24 vs.6.64 ± 1.60,26.15 ± 2.02 vs.5.09 ± 0.85,21.22 ± 3.62 vs.5.86 ± 1.37, P ＜ 0.0l ) . The histopathologic scores ( 2.60 ± 0.31 vs.2.02 ± 0.26, P ＜ 0.05 ) and karyopyknosis of carvedilol group decreased as compared with AM group.The Bcl-2, Bax and Fas protein expression (17.13 ±1.94 vs.23.48 ±2.24,17.66 ±2.62 vs.26.15 ±2.02,16.79 ±2.83 vs.21.22 ±3.62, P ＜ 0.05 ), AI [( 16.61 ± 4.67 ) % vs.( 24.51 ± 4.70) %, P ＜ 0.05]and contents of cTnI [( 1.878± 0.48 ) ng/ml vs. ( 1.102 ± 0.23 ) ng/ml, P ＜ 0.05]also decreased in carvedilol group compared with AM group.Conclusion Carvedilol could protect against AM by alleviating cardiomyocyte apoptosis.