苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制

目的 探讨苦参碱对人神经母细胞瘤( NB) SH-SY5Y细胞的作用机制.方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0g·L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-8的相对活性.采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析.结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)％、(11.01±0.85)％、(15.22±0.71)％和(22.31±1.45)％;FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)％、(10.74±1.65)％、(14.00±0.98)％和(17.81±1.06)％;比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)％、(10.69±1.10)％、(14.80±1.44)％和(19.80±0.97)％;以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强.     

细胞色素C1对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖作用的研究

目的分析细胞色素C1(CYC1)在神经母细胞瘤(NB)增殖中的作用,探讨神经母细胞瘤增殖的分子机制。方法首先采用在SH-SY5Y细胞系中慢病毒介导敲减CYC1基因方法,建立神经母细胞瘤CYC1敲减模型,并利用实时定量RT-PCR方法验证敲减效率;随后利用荧光显微镜观察及细胞分析系统连续检测慢病毒感染SH-SY5Y细胞后连续5 d细胞增殖数。结果慢病毒介导的SH-SY5Y细胞中CYC1基因敲减效率达77.0%±4%,具极显著差异(P<0.01);通过细胞分析系统连续检测SH-SY5Y细胞慢病毒感染敲减CYC1后0~5 d细胞数发现细胞增殖速度明显降低,对照组/敲减CYC1组细胞数1~5 d比值分别为(1.00±0.11)、(1.61±0.16)、(1.58±0.17)、(1.97±0.13)、(1.44±0.13),具极显著差异(P<0.01)。结论 CYC1基因沉默可抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖,CYC1在调节神经母细胞瘤生长增殖方面发挥重要作用。     

三氧化二砷对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响

目的：三氧化二砷(As2O3 )通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化效应治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)患者已取得很好疗效。与APL细胞相似,神经母细胞瘤(NB)细胞也是分化成熟受阻,该文对As2O3 在体外对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响及可能的机制进行探讨。方法：比色法观察As2O3 对神经母细胞瘤SK N SH细胞增殖的影响;Giemsa染色观察细胞形态学改变;Annexinⅴ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学染色方法检测bcl 2蛋白表达变化。结果：As2O3 明显抑制SK N SH细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应,并出现细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测4. 0μmol/LAs2O3 作用SK N SH细胞72h后,早期凋亡细胞比例( 9. 9±0. 8 )%,与对照组( 3. 7±0. 2 )%相比明显增多,差异有显著性(P< 0. 05 );分别以1. 0, 2. 0,4. 0μmol/L的As2O3 处理SK N SH细胞72h后,bcl 2表达随As2O3 浓度增加呈降低趋势,bcl 2表达阳性率分别为(26. 3±8. 0)%, (15. 0±4. 5)%和(4. 8±3. 2)%,与对照组(73. 6±6. 1)%相比,差异有显著性(P<0. 01)。结论：As2O3 可在体外抑制神经母细胞瘤细胞增殖,诱导凋亡,bcl 2参与了其调节作用。     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞调亡机理的研究

基于三氧化二砷(ａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ,Ａｓ2Ｏ3)可与细胞重要酶类的疏基结合使酶失活,引起细胞代谢紊乱,造成细胞损伤的特点,本实验在研究Ａｓ2Ｏ3对神经母细胞瘤(ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＮＢ)细胞系ＳＪＮＳＨ生长的影响及其作用机制时,初步探讨了抗氧化剂谷胱甘肽(ＧＳＨ)与细胞凋亡及ｂｃｌ2基因调控的关系,现报告如下。材料和方法1.材料:ＮＢ细胞株ＳＪＮＳＨ由日本三重大学惠赠;Ａｓ2Ｏ3由上海第二医科大学附属瑞金医院血液研究所惠赠。2.凋亡细胞形态学观察:于6孔培养板内放入盖玻片,每孔加3ｍｌＲＰＭＩ1640培养基,3…     

神经母细胞瘤的凋亡研究

研究临床神经母细胞瘤凋亡情况,了解其与预后的关系。方法取神经母细胞瘤石腊切片,运用原位DNA末端标记法,检测凋亡细胞,计算凋亡细胞占肿瘤细胞百分比,求得凋亡指数。结果预后好的神经母细胞瘤大于预后差的神经母细胞瘤的凋亡指数。若凋亡指数大于9％,提示自发性消退。结论凋亡指数对神经母细胞瘤判断预后、指导治疗有重要价值。     

TRAIL途径在神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）是起源于交感神经系统的小儿恶性肿瘤，是儿童最常见的实体瘤之一。根据诊断时的年龄、分期及组织学特点，肿瘤有自发转化为良性肿瘤的可能，特别是婴儿早期NB。然而年龄较大的晚期患儿，其肿瘤具有侵袭性，对化疗不敏感。目前对引起这种不同临床现象的机制尚不清楚，许多报道提示凋亡在肿瘤自发转化和药物诱导的肿瘤缓解中起作用。凋亡是一种活性细胞的自然机制，是细胞在一定生理或病理条件下遵循自身的程序，由基因调控的主动死亡过程。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

小白菊内酯诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖抑制的影响,同时计算IC50,根据IC50选取实验组小白菊内酯浓度(10、15μmol/L);流式细胞仪分析对照组及实验组肿瘤细胞凋亡率;EMSA检测NF-κB的活性;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达.结果 小白菊内酯抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系.用10、15μmol/L小白菊内酯处理细胞48 h后凋亡率分别为(35.63±0.98)％,(53.32±1.08)％,与对照组(6.42±1.26)％比较,差异显著(P＜0.01).EMSA结果表明,小白菊内酯处理组细胞NF-κB活性降低.Western Blot结果显示,小白菊内酯使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 小白菊内酯促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡,可能与抑制NF-κB活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

p27KIP1基因表达对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及意义

细胞增殖失控或 /和凋亡受抑与肿瘤的发生发展关系密切。近年来发现 ,细胞周期素 细胞周期素依赖激酶 (ｃｙ ｃｌｉｎ ＣＤＫ)在细胞增殖周期中发挥正性调控作用 ,增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)具有参与和促进ＤＮＡ合成之功能 ,细胞周期素依赖激酶抑制因子 (ＣＫＩ) ｐ2 7ＫＩＰ1则能抑制它们的活性 ,进而减慢或阻止ＤＮＡ合成及细胞周期Ｇ1→Ｓ的演进。此外 ,ｐ2 7ＫＩＰ1 尚有诱导细胞凋亡之功能。本文通过检测神经母细胞瘤 (ＮＢ)中 ｐ2 7ＫＩＰ1 、ＰＣＮＡ、ｃｙｃｌｉｎＤ1基因表达和细胞凋亡发生情况 ,探讨 ｐ2 7ＫＩＰ1 对ＮＢ细胞增…     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

三氧化二砷联合长春瑞滨、多西他赛对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系杀伤作用和细胞周期的影响

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)、长春瑞滨(vinorelbine)、多西他赛(docetaxel)对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系的杀伤作用和细胞周期的影响,为临床寻找新的治疗手段及合理用药提供依据。方法采用流式细胞术检测经过As_2O_3、vinorelbine或docetaxel作用后SK-N-SH细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化,探讨它们对SK-N-SH细胞的杀伤作用和细胞周期的影响。结果As_2O_3作用48h、72h、96h和120h时SK-N-SH细胞的凋亡率分别为(10.91±2.27)%、(23.85±5.52)%、(36.61±14.75)%、(52.93±2.47)%;As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M,作用48h时处于G2/M期阻滞的细胞比例最高(26.54%±5.67%);Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞具有杀伤作用,它们各自作用于SK-N-SH细胞的IC50分别为35nmol/L和90nmol/L;以不同浓度的vinorelbine或docetaxel作用于SK-N-SHI细胞48h,随着G2/M期阻滞的比例增高,SK-N-SH细胞的凋亡率随之升高。结论 As_2O_3对SK-N-SH细胞的杀伤作用具有时间依赖性,As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M期。Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞的杀伤作用和G2/M期阻滞有关,属于G2/M期特异性杀伤药物。     

Avastin对神经母细胞瘤株SK-N-SH增殖影响的体外研究

目的 以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株为研究对象探讨Avastin对其增殖的影响及可能机制.方法测定不同 Avastin浓度对SK-N-SH细胞上清液VEGF水平的影响,对该株细胞的细胞毒作用及对其细胞周期及凋亡的影响.结果 随着Avastin浓度升高,细胞上清液中游离VEGF水平逐渐下降;在一定剂量范围内,Avastin对该株细胞无明显细胞毒性作用;不同浓度Avastin作用于该株细胞,呈时间依赖性,影响细胞周期分布.结论 Avastin可中和SK-N-SH细胞分泌的VEGF,无明显细胞毒性作用,但可影响细胞周期分布,提示Avastin与化疗药物联合应用可能有协同作用.     

The effect on cell growth by Wnt1 RNAi in human neuroblastoma SH-SY5Y cell line

Purpose  

We tested the hypothesis that Wnt signaling pathways are critical to neuroblastoma development. Our objective was to explore the novel role that Wnt/β-catenin plays in human neuroblastoma cell line SH-SY5Y, including detection of expression of wnt1 and β-catenin in SH-SY5Y, and the morphological and proliferative changes after Wnt1 RNAi in SH-SY5Y.     

肿瘤细胞来源的外泌体对神经母细胞瘤细胞增殖和转移的影响

目的:探讨肿瘤细胞来源的外泌体对神经母细胞瘤细胞增殖和转移的影响。方法:使用外泌体提取纯化试剂盒对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞培养上清液中的外泌体进行提取和纯化,通过透射电子显微镜、蛋白免疫印记法对外泌体的形态、大小和标志蛋白进行鉴定。根据细胞培养基中是否加入外泌体,分为外泌体组和对照组,利用CCK-8法和Tran...     

雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株生长抑制及诱导凋亡的研究

目的 研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,并设立对照组,以CCK-8检测细胞生长活性,流式细胞法(FCM)检测细胞周期,DNA梯度条带(DNA Ladder)和罗丹明123-碘化丙啶(Rhodamine 123/PI)染色法分析细胞凋亡.结果 雷帕霉素处理后,神经母细胞瘤细胞呈浓度依赖性生长抑制.20μM雷帕霉素处理12 h后,细胞周期出现G2/M期、S期阻滞,G2/M期(24.22±2.89)%、S期(22.05±0.96)%的细胞百分比明显高于对照组.罗丹明123-碘化丙啶检测细胞凋亡率(54.35±5.39)%也明显高于对照组,并有明显的凋亡条带出现.结论 雷帕霉素具有抑制神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长、诱导其凋亡的作用.     

Eg5蛋白靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine对神经母细胞瘤增殖和分裂的影响

目的 研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-三苯甲基-L-半胱氨酸(S-Trityl-L-Cysteine,STLC)对神经母细胞瘤的诱导作用.方法 通过免疫荧光及Western-blot检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤中的表达水平,通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学的影响,采用CCK-8法、流式细胞术检测STLC对细胞增值、凋亡及周期的影响,采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,并经DAPI细胞核染色实验观察STLC对细胞核形态变化的影响.结果 免疫荧光及Western-blot结果显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤中稳定表达.细胞形态学观察结果表明,细胞经不同浓度的STLC诱导,当浓度≥5μmol/L,诱导时间为72 h时,细胞形态变圆,出现大量凋亡样小体.CCK-8细胞增殖能力检测及流式细胞术分析结果显示,STLC具有促进细胞凋亡,抑制细胞分裂与增殖的作用,将细胞周期阻滞在G2/M期,且其诱导作用呈时间剂量依赖性.FISH实验证实STLC对MYCN基因扩增无影响.结论 神经母细胞瘤组织及细胞株中均表达Eg5蛋白,STLC通过抑制Eg5,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增值,从而促进细胞凋亡.结果表明Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点.