神经球石蜡包埋和巢蛋白免疫组化染色

目的应用细胞团石蜡包埋技术,检测神经球内部的神经干细胞标记物巢蛋白(nestin)表达.方法从孕17 d的SD大鼠胚胎大脑海马部位分离,培养神经干细胞,石蜡包埋神经球,通过免疫组化方法检测神经球内部的nestin表达.结果培养中的神经球均显示nestin阳性表达,但阳性细胞比例和细胞团中阳性细胞所处部位有较大差异.结论细胞团石蜡包埋技术检测神经球内部的nestin表达,能全面反映神经球中神经干细胞存在的比例,可作为优化培养技术的实验基础.     

大鼠脑神经干细胞神经巢蛋白表达的流式细胞术检测

检测胎鼠及成年大鼠脑内神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白的表达,判明啮齿类哺乳动物脑内神经干细胞存在的可能性及相应的部位。方法：显微手术下采取胎鼠及成年大鼠大脑与皮质下脑组织,间接荧光法标记ｎｅｓｔｉｎ,以流式细胞术检测。结果胎鼠脑内普遍存在ｎｅｓｔｉｎ阳性细胞,成年大鼠脑室旁组织中也存在ｎｅｓｔｉｎ阳性细胞。     

巢蛋白在中枢神经系统发育及损伤后再生过程中的作用

巢蛋白(Nestin)属于第Ⅵ类中间丝蛋白，是哺乳动物神经系统先祖细胞中一种主要的细胞骨架蛋白，能被anti-nestin(rat 401)抗体特异性识别。研究发现，巢蛋白由Neslin基因编码，是神经干细胞独特的标记，神经胚形成开始，神经干细胞增殖时，巢蛋白表达，随着神经细胞的迁移，神经干细胞逐渐向祖细胞分化，巢蛋白表达逐渐减弱，至神经细胞迁移完成，     

大脑巢蛋白的研究进展

巢蛋白属于一种胚胎性中间丝蛋白,被认为是神经干细胞的标志物之一。巢蛋白被中枢神经系统和周围神经系统大多数增殖活跃的前体细胞所表达,发育成熟的神经系统巢蛋白表达降低。然而不少实验表明,损伤的神经系统巢蛋白表达又重新升高。提示其与提高脑的抗损伤能力有关。     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的：探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞（NSCs）体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定。方法：分别取孕14-16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养，用光学显微镜观察NSCs的生长情况，并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达，经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白．2的检测。结果：①培养出来的细胞可以扩增生长；②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性；③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后，免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性。结论：采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术，可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs。     

巢蛋白在胰腺癌中的研究进展

巢蛋白是第Ⅵ类中间丝蛋白,分布于细胞浆内,参与细胞骨架的构成,以前被认为是一种神经干细胞的标志。近年来研究发现,巢蛋白表达于胰腺干细胞及胰腺肿瘤干细胞中,并且与胰腺癌肿瘤发生、肿瘤血管生成,肿瘤转移、预后等有关。巢蛋白也可能是评估微脉管密度的血管标志物之一。该文就巢蛋白在胰腺癌中的研究进展予以综述。     

体外培养神经干细胞球的离散:一种安全有效的方法

目的:探讨一种安全有效地对体外培养神经干细胞球进行离散的方法.方法:采用常规胰蛋白酶消化、单纯巴斯德吸管吹打、滤网研磨、控制神经球体积的胰酶短时消化4种方法,比较其各自的离散效果和离散后细胞存活情况.结果:胰酶消化较长时间虽然可以得到单细胞但是细胞难以存活,单纯巴斯德吸管吹打不能完全离散神经球,不锈钢滤网研磨细胞损伤大,存活率低下,而采用控制神经球体积结合胰蛋白酶短时消化可以轻易获得单细胞并且细胞存活率明显高于其他方法(93.2%,P<0.05).结论:控制神经球体积的胰酶短时消化法是离散神经干细胞球的一种安全有效的方法.     

免疫磁珠法分离纯化SD大鼠神经干细胞

目的应用微小免疫磁珠分离提纯SD胎鼠大脑皮层组织中的神经干细胞并进行培养,为研究神经干细胞的特性与神经干细胞的培养和移植研究创造有利条件。方法取SD胎鼠的大脑皮层组织制成单细胞悬液,用微小磁珠（平均直径≤50nm）分选出神经巢蛋白（nestin）阳性的细胞群,以流式细胞术检测阳性细胞纯度,以台盼蓝染色法检测细胞活性。结果分离的神经干细胞流式细胞仪检测细胞nestin阳性表达率为（88．5&#177;3．6）％,细胞存活率为（96．3&#177;1．8）％。结论微小免疫磁珠法分离胎鼠脑神经干细胞群落简便、有效,可以为神经干细胞的细胞培养和移槽提供细胞来源。     

大鼠脂肪干细胞源性神经球分化为雪旺细胞样细胞

目的:体外诱导大鼠脂肪干细胞为雪旺细胞样细胞?方法:分离?培养和鉴定大鼠脂肪干细胞;表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导大鼠脂肪干细胞为神经球,并对神经球进行鉴定;视黄酸?forskolin?血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)及heregulin等诱导神经球为雪旺细胞样细胞,并对雪旺细胞样细胞的形态和表面标志物进行鉴定?结果:大鼠脂肪干细胞为成纤维细胞样单层贴壁细胞,表达间质细胞标志物fibronectin,不表达神经干细胞标志物nestin,并能进行成脂和成骨分化?大鼠脂肪干细胞能被诱导为悬浮生长的神经球;神经球表达nestin,不表达fibronectin,并能进一步分化为雪旺细胞样细胞?雪旺细胞样细胞呈双极或三极,并表达雪旺细胞经典标志物胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)?S100和p75?结论:大鼠脂肪干细胞能在体外分化为雪旺细胞样细胞?这种雪旺细胞样细胞对于治疗神经系统疾病具有重要意义?     

一种新的将神经球分散为单细胞悬液的方法

目的比较3种将神经球打散成单细胞悬液的方法对神经干细胞活性的影响。方法将16~20周人胚胎神经干细胞体外培养扩增形成神经球,分别用胰蛋白酶消化法、巴斯德管吹打法和消化振荡法,将神经球打散成单细胞悬液,通过台盼蓝染色测定细胞活性及接种后增生情况,观察3种方法对神经干细胞活性的影响。结果消化振荡法打散神经球,细胞存活率(96.20%)和再次成球率(19.24%)都较其他2种方法高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论消化振荡法对人胚胎神经干细胞的活性影响较小,是一种有效、安全的将神经球打散成单细胞悬液的实验方法。     

BMSCs移植联合电针治疗对脑出血大鼠巢蛋白表达的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植联合电针（electroacupuncture,Ea）治疗对脑出血大鼠脑内巢蛋白（Nestin）表达的影响.方法 取健康SD大鼠110只,随机分为正常组、假手术组、生理盐水组、电针组、BMSCs移植组和BMSCs移植联合电针治疗组.通过向SD大鼠尾壳核注射Ⅰ型胶原酶和肝素制备脑出血模型,并通过BMSCs移植和电针刺激进行治疗,采用免疫组织化学法观察大鼠脑内Nestin的表达.结果 正常组、假手术组、生理盐水组Nestin均有少量表达,三组之间无明显差异.相同时相点电针组、BMSCs组、BMSCs-Ea组Nestin表达依次升高,均高于生理盐水组（P〈0.01）;各治疗组出血侧较正常侧高（P〈0.01）;在正常侧,同一时相点各治疗组高于对照生理盐水组（P〈0.01）.结论 BMSCs移植联合电针治疗脑出血大鼠可上调大鼠脑内Nestin的表达,从而有助于神经组织的修复.     

化学致癌剂3''''-甲基-4-DAB影响巢蛋白Nestin在SD大鼠肝卵圆细胞中的表达

目的：采用免疫组化方法标记大鼠肝卵圆细胞中巢蛋白Nesin的表达，探讨肝卵圆细胞新的表面标记蛋白。方法：用化学致癌剂3’-甲基4-二甲基氨偶氮苯(3’-Methy-4-dimethylaminoazobenzen，3’-me-DAB)喂养SD大鼠4周，取大鼠肝脏，用免疫组化法标记神经前体细胞的特异性表面标记物巢蛋白Nestin在大鼠肝卵圆细胞中的表达。结果：汇管区靠近界板处卵圆细胞表达Nestin阳性，Nestin阳性细胞成簇状分布或呈双层排列成管状，主要集中在赫令氏管周围并见Nestin阳性细胞向肝小叶内迁移，散在分布于肝细胞索。结论：大鼠肝内存在Nestin表达阳性的卵圆细胞，Nestin可能是肝卵圆细胞新的标记蛋白。     

脊髓神经干细胞的培养和鉴定

目的：研究脊髓源性神经干细胞的培养和体外分化情况。方法采用细胞培养技术结合间接免疫光细胞化学法。结果①在只有ＥＧＦ存在的情况下，没有干细胞团的生成；而在只有ｂＦＧＦ存在的情况下，有少量干细胞团生成；在ＥＧＦ和ｂＦＧＦ同时存在时，有大量神经干细胞团生成。②体外存活时间越长，培养中的干细胞成分越多，分化后成分越少。③随诱导分化时间的加长，分化的细胞类型开始出现并增多，干细胞比率下降，结论脊髓神经干细胞     

CD133免疫磁珠分选脑肿瘤干细胞及其生物学特性

目的:从人脑肿瘤组织中分离、培养、纯化和鉴定脑肿瘤干细胞(BTSCs),探讨CD133免疫磁珠分选方法获取BTSCs的可行性及BTSCs的生物学特性.方法:留取人脑胶质母细胞瘤新鲜标本,分离获得脑肿瘤细胞.应用CD133免疫磁珠分选方法纯化BTSCs;流式细胞仪检测分选阳性率;神经球计数法分析CD133+/-亚群细胞神...     

Accutase 消化传代对人胚胎纹状体来源神经干细胞凋亡的影响

目的：观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否 发生了大量细胞凋亡。方法：提取人13~18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3~5 代。经消化酶accutase消化后传代,运用活性caspase-3染色、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色等方 法对多聚甲醛固定的NSCs进行凋亡检测,同时采用Annexin V和Hoechst33342/PI等联合染色方法对活细胞进行凋亡 鉴定,以确定NSCs在体外传代后的凋亡情况。结果：在传代后检测的3个时间点(1,24,72 h)中TUNEL染色和活 性caspase-3染色均高度重合。传代后1 h,TUNEL和活性caspase-3染色所检测到的凋亡率为20%~25%,传代后24 h增 高为75%~80%(P<0.01),而传代后72 h,由于存活下来的细胞开始增殖,所以整体凋亡率降为60%~70%,明显低于 24 h(P<0.01)。结论：由人类纹状体来源NSCs形成的神经球,经accutase消化传代后24 h内即发生大量细胞凋亡。对于 体外培养的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,最终起到提高细胞扩增能力的有效手段。     

C57胚胎小鼠神经干细胞的分离、培养与鉴定

目的体外分离、培养神经干细胞（NSCs）,并对其进行鉴定。方法采用手动法及胰蛋白酶消化法分离胎鼠脑细胞,用优化的无血清NSCs培养基进行培养。细胞免疫荧光法检测NSCs特异性标记分子的表达。结果分离的脑细胞体外培养48 h已大部分贴壁,3 d左右获得大量未分化呈巢状悬浮生长的神经干细胞团。第3代时,很少见到贴壁细胞,几乎全是神经球,神经球周围存在较多微刺。细胞表达一种中间丝蛋白,即巢蛋白（nestin）。结论成功分离、鉴定出C57小鼠NSCs,并可在体外条件下进行传代扩增培养。