芫花根乙醇提取物的抗炎活性

目的 阐明芫花根乙醇提取物(EERD)的抗炎活性。方法 EERD对急性炎症的抑制作用采用组胺诱导的小鼠毛细血管通透性增加、角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀以及小鼠网状内皮系统(RES)对异物的吞噬作用进行分析。对慢性炎症的抑制作用以福氏完全佐剂诱导的多发性关节炎和棉球诱导的大鼠肉芽肿进行分析。结果 EERD在剂量为40mg／kg时能明显地抑制小鼠毛细血管通透性增加和抑制大鼠足肿胀；在剂量为30mg／kg时对RES的吞噬能力有提升作用、对大鼠肉芽肿和多发性关节炎表现出显著抑制作用。EERD也能抑制丙二醛(MDA)、前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF—α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的形成，增强超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力并钝化诱导型氮氧化物合酶(iNOS)的活性。结论 EERD的抗炎活性主要是通过抑制脂质过氧化反应和炎症介质的释放、增强SOD和CAT的活力、钝化iNOS的活性以及提升RES的吞噬作用实现的。     

菝葜抗炎有效部位群的效应成分研究

目的探讨菝葜抗炎有效部位群中落新妇苷、花旗松素、槲皮素、芦丁、白藜芦醇、黄杞苷、薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元、菝葜皂苷元、甲基原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、纤维薯蓣皂苷的体外抗炎活性与免疫调节作用,为诠释菝葜的药效物质基础提供依据。方法采用脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,酶联免疫法(ELISA)检测12个单体成分对白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)释放的影响,考察其抗炎活性;采用CCK-8法检测各成分对小鼠脾淋巴细胞体外增殖水平及ELISA检测LPS刺激脾淋巴细胞后各成分对白介素-2(IL-2)、TNF-α和干扰素-γ(IFN-γ)释放的影响,考察其免疫调节活性。结果在LPS诱导的RAW264.7细胞模型中,除白藜芦醇外,其余11种化合物对IL-6都有一定的抑制作用,而落新妇苷还呈现出双向调节作用;落新妇苷、槲皮素、白藜芦醇、原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷及菝葜皂苷元6种化合物对IL-1β具有抑制作用;5种黄酮类单体及白藜芦醇对TNF-α的抑制作用极为显著,而6种皂苷类成分对TNF-α则有促进作用;在脾淋巴细胞模型中,12个单体成分对脾淋巴细胞均有明显的增殖作用,对相应的炎症因子也有明显的抑制作用。结论落新妇苷等12个单体成分均具有抗炎及免疫调节作用,可能是菝葜抗炎有效部位群发挥作用的的主要效应成分。     

COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖诱导下巨噬细胞炎症因子表达的影响

研究COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖(LPS)诱导下RAW 264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用LPS (1μg/mL)刺激生长良好的RAW 264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,在不同浓度的ZLJ-6( 3,10,30 μmol/L)作用下,用Griess法检测细胞培养液中NO的含量,用ELISA法检测TNF-α、IL-6含量,并用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮激酶(iNOS) 的表达。ZLJ-6能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6等炎症因子的生成,同时抑制COX-2和iNOS的表达。结果表明,ZLJ-6具有抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达以及炎症介质NO以及TNF-α、IL-6的产生。     

鞣料云实素的体外抗炎作用

目的:初步探讨鞣料云实素在细胞模型上的抗炎机制。方法:采用脂多糖(LPS)刺激的小鼠巨噬细胞瘤细胞RAW 264.7建立炎症模型,同时用鞣料云实素进行干预,ELISA法检测细胞上清中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量,Real-time PCR法检测细胞中TNF-α,COX-2mRNA的表达情况。结果:鞣料云实素可以通过在基因和蛋白水平上下调促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达。结论:鞣料云实素对促炎细胞因子和炎性介质TNF-α,IL-1β,IL-6,COX-2均有不同程度的抑制作用,说明鞣料云实素对炎症的起始阶段有明显的抑制作用。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

苗药头花蓼提取物血清药理学研究方法的建立及验证

目的：建立并验证头花蓼提取物血清药理学研究方法。方法以大鼠为含药血清的供体,MTT法确定空白血清及含药血清对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)活性的影响,采用10 ng/mL脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞炎症损伤模型,Griess试剂法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的释放量,以确定体系中的血清添加量和大鼠取血时间。以NO、TNF-α为指标测定含药血清的抗炎活性。结果大鼠按人临床用药等效剂量的27倍给予头花蓼水提醇沉提取物,与模型组相比,体系中加入1.5%(V/V)末次给药后90 min的含药血清能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO (P<0.001)。同时,该方法制备的含药血清能够显著抑制细胞释放NO和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。结论本实验条件下制备的头花蓼含药血清具有明显的抗炎作用,该血清药理学方法可用于头花蓼提取物含药血清药效及作用机制研究。     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

小白菊内酯对巨噬细胞抗氧化能力的影响研究

目的 探讨小白菊内酯(PTN)对炎症模型小鼠的巨噬细胞抗氧化能力的影响.方法 对15只8周Balb/c小鼠灌服大肠杆菌脂多糖构建炎症模型动物,对成功获取的15只炎症模型动物进行腹腔冲击收集巨噬细胞进行编号和体外共培养,然后体外培养巨噬细胞,随机分为对照组、A组、B组、C组、D组,每组3只,分别对应为空白对照、7.5μmol/L PTN+1 mg/L LPS、15μmol/L PTN+1 mg/L LPS、30μmol/L PTN+1 mg/L LPS及200μmol/L维生素C+1 mg/L LPS.上述各组细胞在相同的培养条件下实施体外共培养试验,在培养第24、48及72小时收集细胞上清液进行炎性因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)酶联免疫吸附试验检测,同时对细胞抗氧化能力指标(SOD、MDA、GSH-Px)水平进行检测.结果 炎症模型动物的体外分离获得的巨噬细胞墨汁吞噬染色的吞噬率为95.5％,碱性磷酸酶染色阳性率为91.5％;在与PNT共培养24 h,C组TNF-α均显著高于其他各组(P<0.05);共培养24、48 h,C组IL-1β显著低于其他各组(P<0.05),C组GSH-Px水平显著高于其他各组(P<0.05),C组MDA水平显著低于其他各组(P<0.05);共培养72 h,对照组IL-1β、TNF-α水平均显著高于其他各组(P<0.05),且对照组SOD水平均显著低于其他各组(P<0.05),C组TNF-α、MDA均显著低于其他各组(P<0.05),且C组GSH-Px水平均显著高于其他各组(P<0.05).各组在与PNT共培养第24、48及72小时期间的IL-6水平比较差异均无统计学意义.结论 小白菊内脂可提升巨噬细胞的抗氧化活力,抑制炎性因子分泌,以30μmol/L PTN+1 mg/L LPS进行体外抗氧化效果最佳.     

异鼠李素对LPS诱导下THP-1细胞炎症因子释放的影响

目的了解异鼠李素对LPS刺激下THP-1细胞炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α释放的影响及其抗炎特征。方法用PI单染色法检测其细胞存活率;用ELISA法检测THP-1细胞炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α释放。结果不同浓度的LPS均能使炎症因子IL-6释放增高,且24 h及48 h间水平无差异,但随着LPS刺激浓度的增高,细胞的坏死数量也会随之升高;不同浓度的异鼠李素能在不同时间点不同程度地抑制炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-6的释放。结论异鼠李素能抑制LPS刺激下THP-1细胞炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1的释放,并呈浓度依赖性。     

sh-RNA沉默HMGB1对脓毒症小鼠肺损伤保护作用研究

目的 探讨短发夹RNA(sh-RNA)沉默高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脓毒症小鼠肺损伤的保护作用。方法 采用脂多糖(LPS)诱导小鼠脓毒症模型,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、LPS组、LPS+sh-RNA阴性对照(sh-NC)组和LPS+sh-HMGB1组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清前列腺素E2(PGE2)及炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β)和IL-6]表达水平,并且检测各组小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及组织细胞凋亡情况。结果 LPS组小鼠PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均明显高于PBS组,LPS+sh-HMGB1组小鼠PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均明显低于LPS+sh-NC组,LPS组小鼠肺组织MPO活性、凋亡细胞比例均明显高于PBS组,LPS+sh-HMGB1组小鼠肺组织MPO活性、凋亡细胞比例均明显低于LPS+sh-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS诱导的脓毒症可刺激炎性反应,并对肺组织造成明显损伤。而体内沉默HMGB1可抑制炎性反应,对...