缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响

目的　探讨缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响。方法　 2 4只 Wistar大鼠 ,雌雄各半 ,按体重随机分为 A(缺锌组 ) ,B(自由进食组 ) ,C(配对饲养组 )三组 ,每组 8只 ,实验期 40天 ,测定脑锌和血锌含量 ,并观察缺锌对大鼠脑组织内磷脂酶 C(PLC)活性 ,蛋白激酶 C(PKC)活性 ,钙调蛋白 (Ca M)含量 ,及钙依赖性蛋白激酶 (Ca MK )活性的影响。结果　 A组大鼠血清和脑锌含量明显降低 ,同时 A组大鼠大脑皮层和海马中 PLC,PKC,Ca MK 活性亦明显低于 B组和 C组。A组大鼠脑组织 Ca M含量明显低于 B组 ,与 C组无显著性差异。结论　缺锌可以抑制肌醇磷脂信号转导系统     

磷脂酰肌醇3激酶和蛋白激酶B在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达和临床意义.方法 运用Western Blot和免疫组化法检测41例EOC(EOC组)、20例正常卵巢(NO,NO组)和20例良性卵巢上皮性肿瘤(BEOT,BEOT组)组织中PI3K和Akt蛋白的表达.结果 PI3K在EOC组中阳性表达率为70.7％(29/41),显著高于NO组和BEOT组[10.0％(2/20)、20.0％(4/20)],差异有统计学意义(P＜ 0.01);Akt在EOC组中阳性表达率为73.2％(30/41),显著高于NO组和BEOT组[10.0％(2/20)、30.0％(6/20)],差异有统计学意义(P＜0.01).在EOC患者中,临床分期Ⅰ～Ⅱ期PI3K和Akt蛋白的表达与Ⅲ～Ⅳ期比较差异有统计学意义(P＜0.05);浆液性囊腺癌中PI3K和Akt蛋白的表达与黏液性囊腺癌比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PI3K和Akt蛋白在EOC组织中表达显著增强,它们在EOC发生、发展中起到～定的作用,PI3K/Akt通路有望作为抗肿瘤治疗的有效新靶点.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路在苯醌致HL-60细胞增殖过程中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路在苯醌(BQ)致HL-60细胞增殖中的作用.方法 取对数生长期的HL-60细胞,分为对照组(PBS处理细胞)、BQ染毒组(3 μmol/L BQ染毒)、LY294002+BQ染毒组(3μmol/L BQ染毒前加20 μmol/L LY294002),用alamar blue 法检测细胞增殖率,免疫印迹(Western blot)法检测细胞内p-Akt、Akt蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期情况.结果 BQ染毒组细胞增殖率(185.00%±30.00%)和S、G2期细胞比例(分别为48.23%±1.37%、15.40%±1.21%)均高于对照组(分别为100.00%±0.00%、42.47%±0.45%、5.40%±0.40%),G1期细胞比例(36.37%±0.40%)低于对照组(52.13%±0.75%),差异均有统计学意义(P＜0.05);BQ染毒组细胞内p-Akt蛋白表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Akt表达量与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).LY294002+BQ染毒组细胞增殖率(82.59%±15.00%)和S、G2期细胞比例(分别为42.03%±0.50%、3.87%±0.47%)比BQ染毒组低,G1期细胞比例(54.43%±0.40%)比BQ染毒组高,差异均有统计学意义(P<0.05),细胞内p-Akt蛋白表达量明显低于BQ染毒组,差异有统计学意义(P<0.05);Akt蛋白表达量与BQ染毒组的差异无统计学意义(P>0.05).结论 PI3K/Akt信号转导通路在BQ致HL-60细胞增殖过程中可能起着重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effects of phosphatidylinositol 3-kinase/ Serine-threonine kinase (PI3K/Akt) signal pathway on the proliferation of HL-60 cells exposed to benzoquinone (BQ). Methods HL-60 cells were divided into 3 groups: control group (treated with PBS), BQ group (treated with 3 μmol/L BQ) and LY294002 plus BQ group (treated with 20 μmol/L LY294002 plus 3 μmol/L BQ). The cell proliferation was measured with alamar blue dye assay. Western blot assay was used to detect the expression of p-Akt and Akt proteins and flow cytometer was used to observe the cell cycle. Results The cell proliferation rate and the cell proportion in the S, G2 phase of BQ group were 185.00%±30.00%, 48.23%±1.37% and 15.40%±1.21%, respectively, which were significantly higher than those ( 100.00%±0.00%, 42.47%±0.45% and 5.40%±0.40%) of control group (P<0.05 ). But the cell proportion rate (36.37%±0.40% ) in the G1 phase in BQ group was significantly lower than that (52.13%±0.75% ) in control group (P<0.05). The expression level of p-Akt protein in BQ group was significantly higher than that in control group (P<0.05). The cell proliferation rate and the cell proportion in the S, G2 phase of LY294002 plus BQ group were 82.59%±15.00%, 42.03%±0.50% and 3.87%± 0.47%, respectively, which were significantly lower than those of BQ group (P<0.05). But the cell proportion rate (54.43%±0.40%) in the G1 phase in LY294002 plus BQ group was significantly higher than that in BQ group (P<0.05 ). Conclusion The PI3K/Akt signal pathway may play an important role in the proliferation of HL-60 cells exposed to BQ.     

锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的调节

为了研究锌对大鼠成骨细胞膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＾＋Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活尾及其机制,实验设计照组和３个补锌组。采用孔雀绿比色法同步测定膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＾２＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性,以研究Ｚｎ＾２＋对酶活性的影响。     

锌促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

目的　研究锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法　从大鼠颅骨分离出成骨细胞,于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验设置４ 个组,分别为对照组和１０ μｍｏｌ／ Ｌ、２５ μｍｏｌ／ Ｌ及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ ３ 个剂量组,采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入法确定成骨细胞在不同时点 Ｄ Ｎ Ａ 的合成状况,应用流式细胞仪技术分析细胞周期、３ Ｈ脯氨酸参入法测定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果　３ 个锌剂量组细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量在各个时点均明显高于对照组;２５ μｍｏｌ／ Ｌ 及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 可以促进成骨细胞从 Ｇ０／ Ｇ１ 期向 Ｓ期转化。３ 个锌剂量组胶原蛋白、骨钙素的合成量、碱性磷酸酶活性均高于对照组。结论　锌能够促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

葡萄糖刺激胰岛素分泌中活性氧及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化情况

目的 研究葡萄糖刺激后胰岛素分泌过程中活性氧(ROS)及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化.方法 不同浓度葡萄糖(0、5、10、15、20、25 mmol/L)分别干预胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)细胞24、48 h后,采用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)荧光法检测细胞内ROS水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测胰岛素分泌,采用蛋白印迹(Western blot)法检测磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达.结果 随葡萄糖浓度的升高,INS-1细胞分泌胰岛素水平增加,细胞内ROS水平上升,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相同刺激条件下,细胞内PTEN蛋白表达逐渐下降,P-AKT表达逐渐升高,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路可能为参与调节葡萄糖刺激胰岛素分泌的信号通路之一.     

铅对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶影响

目的观察慢性铅暴露对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)表达的影响。方法昆明系小鼠出生第1 d通过饮水饲以不同浓度醋酸铅(1.2,2.4,4.8,7.2,9.6 mmol/L)制备染铅模型,对照组饲以等量自来水;6周后用石墨炉原子吸收光谱法测血铅脑铅浓度;用蛋白印迹(Western blot)法观察各组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks的表达状况。结果慢性染铅组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks表达水平呈下降趋势,各染铅组PI3Ks表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(P<0.05);PI3Ks表达与血铅浓度呈负相关(r=-0.82,P<0.01)。结论慢性染铅可使大脑皮层神经元细胞PI3Ks表达水平下降;这可能是铅导致学习记忆功能损伤的原因之一。     

不同年龄大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶表达水平的研究

目的：探讨大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶（P13K）的表达随增龄的变化。方法：35只健康sD大鼠按月龄分为五组,分别为1月龄组7只,6月龄组7只,12月龄组7只,18月龄组7只,24月龄组7只。提取胰腺组织蛋白后用Western-Blot方法检测胰岛素受体和P13K的蛋白水平,应用免疫组化方法检测胰岛素受体的分布。结果：（1）胰腺组织内胰岛索受体集中分布在胰岛细胞表面,腺泡细胞也有表达。（2）1月龄组及18月龄组大鼠胰腺组织中的胰岛素受体蛋白表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。1月龄组P13K蛋白质表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。结论：进入老年期,大鼠胰腺组织中胰岛素受体及P13K的表达升高。     

缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,从大鼠颅骨分离出成骨细胞,并于ＤＭＥＭ培养基中进行传代培养。锌特异性络合剂ＴＰＥＮ络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型。采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法确定成骨细胞在不同时点ＤＮＡ的合成状况,同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析;采用组织学方法观察细胞骨架的变化、３Ｈ－脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果表明,缺锌组成骨细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量在各个时点明显低于对照组,细胞被阻滞于细胞周期中Ｇ２／Ｍ期,这与细胞骨架受损密切相关。缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组。但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异。因此,缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化。     

酒精联合高脂饮食对大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的研究酒精和高脂饮食对雄性大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)P85αmRNA及蛋白水平表达的影响。方法酒精灌胃和高脂饮食方法建立动物模型。测定空腹血糖和血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。通过RT-PCR和Western blotting方法测定P85αmRNA及蛋白水平。结果与普通对照组相比,高脂对照组HOMA-IR指数升高;与高脂对照组相比,各剂量酒精和高脂饮食组血糖升高,胰岛素抵抗指数在低中剂量组升高,各剂量酒精联合高脂饮食组脂肪组织PI-3KP85αmRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论高脂饮食导致胰岛素抵抗;与单独高脂饮食相比,酒精联合高脂饮食加剧胰岛素抵抗程度。磷脂酰肌醇3激酶P85α mRNA及蛋白水平改变。     

过量锌对鼠胶质瘤细胞体外生长的影响

目的：研究过量锌对神经细胞生存能力的影响,以期为锌生理功能的进一步研究提供资料。方法：采用体外细胞培养,台盼兰排斥和平板克隆形成法研究不同剂量锌对鼠胶质瘤细胞生长的作用。结果：不同剂量的锌（0．3025、0．4025、0．5025、0．6025和0．7025mmol）对鼠胶质瘤细胞有明显抑制作用,各组24h细胞存活率分别为62．7％、59．3％、56．5％、53％和47．3％,克隆形成率分别是64．8％、60．3％、58．3％、50．3％和44．8％,24小时MTT法检测细胞活力分别为77．9％、63．3％、56．2％、49．6％和47．3％并呈量效关系。结论：高锌可抑制鼠胶质瘤细胞生长。     

锌对仔鼠中枢神经系统胶质酸性纤维蛋白表达的影响

目的　探讨微量元素锌缺乏与胶质酸性纤维蛋白 ( GFAP)表达的关系及锌调节胶质细胞分化的机制。方法　给处于孕期及哺乳期的 ICR母鼠喂饲含不同锌水平饲料 ,采用 West-ern blot技术检测其仔代胚胎、大脑、小脑及肝组织中 GFAP的表达情况 ;同时在穿梭箱内检测成年仔鼠 ( 70日龄 )的学习能力 ;行为实验结束后 ,在仔鼠的海马脑片上进行诱导长时程增强 ( LTP)实验。结果　实验仔鼠小脑在新生期 (出生第 1天 ,P1 )开始表达 GFAP,而大脑在出生后第 5天( P5)才开始有 GFAP印迹出现 :之后至成年小脑及大脑持续表达 GFAP;实验鼠肝组织在发育全过程中均未见有 GFAP印迹。比较各实验组 GFAP表达量为 :P1至 P5期非缺锌组 ( 30 mg/kg及1 0 0 mg/kg) GFAP杂交条带明显强于缺锌组 ( 1 mg/kg及 5mg/kg) ;P1 0至成年期 ,缺锌组 ( 1 mg/kg及 5mg/kg)大脑及小脑 GFAP的杂交条带反而强于非缺锌组 ( 30 mg/kg及 1 0 0 mg/kg) ,其强度与膳食锌呈负依赖关系。行为学检测表明 ,轻度缺锌组 ( 5mg/kg)达到学会标准所需次数明显多于高锌组 ( 1 0 0 mg/kg) ;电生理检测表明 ,轻度缺锌组仔鼠海马脑片上诱导的 LTP明显低于高锌组上所诱导的。结论　补充锌在发育早期可促进神经前体细胞向神经胶质细胞分化及 GFAP表达 ;神经胶质细胞分化     

硒对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的影响

目的研究硒对于H2O2诱导大鼠肝细胞(BRL)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法采用0.1mmol/L的H2O2建立氧化损伤的细胞模型,并施加不同剂量的补硒干预。通过测定细胞活力(MTT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞凋亡率,研究硒对氧化损伤肝细胞的保护作用,采用实时定量PCR技术检测细胞GPH-Px和凋亡信号调节激酶1(ASK1)的mRNA表达水平,并通过Western blot技术检测ASK1的蛋白表达水平。结果补硒组细胞MTT(OD)值和GSH-Px活力高于损伤组,MDA的含量和细胞凋亡率低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。补硒组GPH-Px的mRNA表达水平高于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05),补硒组ASK1的mRNA和蛋白表达水平低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论硒可能通过增加细胞GSH-Px的mRNA表达和酶活性、下调ASK1 mRNA和蛋白的表达、降低细胞中MDA含量等作用,对氧化损伤所致的肝细胞凋亡起到一定的保护作用。[营养学报,2010,32(5):466-469]     

孕期膳食补锌对胎盘及母鼠小肠锌转运体mRNA表达谱的影响

目的:探讨孕期膳食补锌对胎盘及母鼠小肠中ZnT1、2、5和6mRNA表达谱的影响。方法:18只SD孕鼠随机分为正常对照组(ZC)和补锌组(ZS)。两组进食常规饲料,ZC组(n=9)饮用去离子水,ZS组(n=9)饮用补锌水(含锌1.26mmol/L)。分别于孕D9.5和孕D17.5时取胎盘和小肠。以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定胎盘和母鼠小肠中ZnT1、2、5和6mRNA的相对表达量。结果:在孕D9.5时,孕期膳食补锌可显著上调胎盘ZnT1、2及小肠ZnT1、2和6mRNA的表达,下调胎盘ZnT5mRNA的表达,对胎盘ZnT6及小肠ZnT5mRNA的表达则无影响;在孕17.5d时,膳食补锌可显著上向调控胎盘ZnT5和ZnT6mRNA的表达,对胎盘及小肠ZnT1、2mRNA的表达无影响,小肠ZnT5mRNA检测不到。结论:妊娠不同时期膳食不同锌摄入水平显著影响胎盘和母体小肠中锌转运体mRNA的表达谱。     

镧对仔鼠大脑海马星形胶质细胞兴奋性影响

  目的  观察氯化镧（LaCl₃）对星形胶质细胞兴奋性的影响,探讨其神经毒作用机制。  方法  雌性Wistar大鼠40只,随机分为5组,对照组饮用蒸馏水,染镧组分别饮用含有不同浓度氯化镧（0.125 %、0.250 %、0.500 %和1.000 %）的蒸馏水溶液,从雌鼠妊娠起到仔鼠断乳后1个月结束。采用Fura-2荧光探针法检测仔鼠大脑海马神经细胞内Ca²⁺浓度;酶联免疫分析（ELISA）法测定1,4,5 – 三磷酸肌醇（IP₃）含量;实时定量PCR法测定促代谢性谷氨酸受体5（mGluR5）、磷脂酶C（PLC）和缝隙连接蛋白（Cx43）mRNA转录水平;Western blot法测定mGluR5、PLC和Cx43蛋白表达水平。  结果  与对照组比较,随氯化镧染毒剂量增加,染镧组仔鼠海马神经细胞内Ca²⁺浓度与IP₃含量趋势性升高,呈剂量效应关系（P < 0.05）;与对照组比较,各剂量染镧组大鼠仔鼠海马神经元内mGluR5、PLC和Cx43 mRNA表达上调,mGluR5、PLC和Cx43蛋白表达水平显著上调,呈剂量效应关系（P < 0.05）。  结论  氯化镧可致大鼠仔鼠脑海马星形胶质细胞过度兴奋,诱发兴奋性毒性,进而造成神经元损伤。     

Differential activation of host cell signalling pathways through infection with two variants of influenza A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) in MDCK cells

In cell culture-based influenza vaccine production, few efforts have been undertaken to characterise virus–host cell interactions in detail. Two influenza virus strains that grew to different virus titres, and differed in virus dynamics, apoptosis induction and proteome changes were observed.     

An inhibitory effect of resveratrol in the mitotic clonal expansion and insulin signaling pathway in the early phase of adipogenesis

Resveratrol is known as a potent antiobesity compound that acts partly through inhibition of adipogenesis. However, the direct targets responsible for its antiadipogenic action are unclear. Our hypothesis is that resveratrol inhibits adipogenesis through modulation of mitotic clonal expansion (MCE) and cell signaling pathways in the early phase of differentiation. To test this, we examined the effects of resveratrol on MCE and insulin signaling pathway in the early phase of adipogenesis in murine preadipocytes. We observed that the antiadipogenic action of resveratrol is largely limited to the early phase of adipogenesis. Specifically, the presence of resveratrol in the first 24 hours of adipogenesis was required for its antiadipogenic effect. During the first 24 hours of adipogenesis, resveratrol impaired the progression of MCE by suppressing the cell cycle entry of preadipocytes to G2/M phase, and expression of cell cycle regulators cyclin A and cyclin-dependent kinase 2. Concomitantly, resveratrol inhibited insulin signaling pathway in the early phase of adipogenesis. Furthermore, we revealed an inhibitory effect of resveratrol on insulin receptor (IR) activity, and this is likely through a direct physical interaction between resveratrol and IR. The antiadipogenic effect of resveratrol is through inhibition of the MCE and IR-dependent insulin signaling pathway in the early phase of adipogenesis.     

Acute exposure to high-fat diets increases hepatic expression of genes related to cell repair and remodeling in female rats

High-fat diets (HFD) promote the development of both obesity and fatty liver disease through the up-regulation of hepatic lipogenesis. Insulin resistance, a hallmark of both conditions, causes dysfunctional fuel partitioning and increases in lipogenesis. Recent work has demonstrated that systemic insulin resistance occurs in as little as the first 72 hours of an HFD, suggesting the potential for hepatic disruption with HFD at this time point. The current study sought to determine differences in expression of lipogenic genes between sexes in 3-month-old male and female Long-Evans rats after 72 hours of a 40% HFD or a 17% fat (chow) diet. Owing to the response of estrogen on hepatic signaling, we hypothesized that a sexual dimorphic response would occur in the expression of lipogenic enzymes, inflammatory cytokines, apoptotic, and cell repair and remodeling genes. Both sexes consumed more energy when fed an HFD compared with their low fat–fed controls. However, only the males fed the HFD had a significant increase in body fat. Regardless of sex, HFD caused down-regulation of lipogenic and inflammatory genes. Interestingly, females fed an HFD had up-regulated expression of apoptotic and cell repair–related genes compared with the males. This may suggest that females are more responsive to the acute hepatic injury effects caused by HFDs. In summary, neither male nor female rats displayed disrupted hepatic metabolic pathways after 72 hours of the HFD treatment. In addition, female rats appear to have protection from increases in fat deposition, possibly due to increased caloric expenditure; male rats fed an HFD were less active, as demonstrated by distance traveled in their home cage.