苦瓜种子提取一种活性成份——“降糖多肽”

本文采用了从印度引进的专用苦瓜种子为原料，从种子的胚芽中，按Khanna院士授权使用的专利技术提取了“降糖多肽”，经小鼠实验证明“降糖多肽”对小鼠无毒性作用并可使四氧嘧啶所导致的高血糖小鼠的空腹血糖降低。     

热休克蛋白90α多肽疫苗的抗肿瘤效应研究

目的探讨动物实验中热休克蛋白90α（HSP90α）多肽疫苗的抗肿瘤作用。方法通过液相等电聚焦电泳从接种S-180细胞的昆明小鼠中制备HSP90α多肽疫苗。将20只昆明小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠在接种S-180细胞前24 h注射HSP90α多肽疫苗,对照组小鼠注射生理盐水,通过流式细胞仪检测腹水中细胞增殖、细胞凋亡指数和外周血中T细胞亚群含量,评价HSP90α多肽疫苗的抗肿瘤免疫反应。结果与对照组比较,实验组小鼠体质量降低,外周血中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞含量明显升高。结论液相等电聚焦电泳技术是一种分离纯化蛋白的相对简单、快速、有效的方法,HSP90α多肽疫苗能够刺激动物体内抗肿瘤免疫应答,这种免疫应答通过激活T淋巴细胞得以实现。     

新型蛙皮素多肽QUB2995的重组表达及其促胰岛素分泌活性鉴定

目的从阔褶水蛙皮肤分泌物中发现新型蛙皮素多肽, 并鉴定其对胰岛细胞的促胰岛素分泌作用。方法通过电刺激法提取阔褶水蛙皮肤分泌物, 以分子克隆大量制备蛙皮素多肽单链并测序。通过固相合成法合成已知序列多肽QUB2995, 并以反相高效液相色谱(HPLC)纯化合成多肽, 通过基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF)确认合成多肽是否为之前发现的新型多肽QUB2995。用qPCR以及ELISA检测QUB2995对小鼠胰岛细胞MIN6及大鼠胰岛细胞INS-1的促胰岛素分泌作用。结果通过分子克隆技术, 在亚洲阔褶水蛙的皮肤分泌物中发现了一种新型蛙皮素多肽, 命名为QUB2995(GAFGDFLKGAAKAGALKILSIAQCKLSGTC)。该蛙皮素多肽对小鼠胰岛细胞MIN6及大鼠胰岛细胞INS-1具有显著的促进胰岛细胞增殖以及胰岛素分泌作用, 在10-5 mol/L浓度下效果最为显著。结论从阔褶水蛙中发现了新型蛙皮素多肽并命名为QUB2995, 其对小鼠胰岛MIN6及大鼠胰岛INS-1细胞具有显著促胰岛素分泌作用, 显示出作为治疗糖尿病药物的潜在价值。     

大豆多肽螯合锌对自然衰老小鼠的作用

目的 探讨大豆多肽螯合锌对自然衰老小鼠模型的影响及其机制.方法 自然衰老的小鼠分别给予400 mg/kg大豆多肽、40 mg/kg硫酸锌和400 mg/kg大豆多肽螯合锌溶液连续灌服4 w.采用酶化学方法检测肝组织匀浆的丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂褐质(LPO)、总抗氧化能力(T-AOC)的含量等指标.结果 成功建立了小鼠衰老模型.大豆多肽鳌合锌可以明显增加衰老小鼠的进食量和进水量(P＜0.01),可以明显地降低衰老小鼠肝脏中的MDA(P＜0.05)、SOD(P＜0.01),可以明显地增强衰老小鼠肝脏总氧化能力(P＜0.05).结论 大豆多肽鳌合锌可以通过抗氧化机制达到对抗衰老的作用.     

降糖颗粒急性毒性实验安全性结果报告

[目的]测评降糖颗粒急性毒性实验的最大耐受量,为临床应用提供安全性报告。[方法]观察小鼠24h内在给予大剂量降糖颗粒治疗后所产生的急性毒性反应。[结果]小鼠经口服大剂量降糖颗粒其最大耐受量〉180g生药／妇,无毒性反应。[结论]临床给予降糖颗粒是安全的。     

小柴胡汤剂作用日本血吸虫感染小鼠的血清多肽变化

目的  分析小柴胡汤剂作用于日本血吸虫感染小鼠后的血清多肽变化,评价其治疗效应。 方法  构建日本血吸虫感染小鼠模型及小柴胡汤剂治疗组,利用弱阳离子磁珠纯化血清多肽,应用时间飞行质谱（MALDI-TOF-MS）检测并结合ClinProTool数据处理软件进行分析。 结果  在Mr 800~17 000区段,与感染组小鼠血清多肽指纹图谱比较,对照组小鼠与小柴胡治疗组血清中均检测到3个差异表达的多肽峰,即Mr 2 924、8 210的表达呈极显著上调（P<0.01）;Mr 11 690呈显著下调（P<0.05）。 结论  小柴胡汤对治疗日本血吸虫病具有潜在的应用价值,并为从蛋白水平上筛选治疗靶点提供理论依据。     

融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDⅢ区的登革病毒四价疫苗的构建及免疫效应研究

目的构建编码免疫佐剂Lipo多肽与登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的重组甲病毒载体,并在小鼠体内研究其免疫效应,为研制新型的登革病毒四价疫苗奠定基础。方法先通过GS linker将编码免疫佐剂Lipo多肽的基因序列与编码登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的基因序列进行串联获得LipoEDIII;然后将LipoEDIII基因插入甲病毒载体DREP的多克隆位点,构建重组甲病毒载体DREP-LipoEDIII;将DREP-LipoEDIII转染293细胞,Western blot检测融合蛋白的表达;随后将DREP-LipoEDIII免疫ICR小鼠,不加任何佐剂,再加强免疫2次后,通过ELISA检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果成功构建了含有"融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDIII区"的重组甲病毒质粒DREP-LipoEDIII。DREP-LipoEDIII免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗体,抗体效价为1∶160。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以产生IFN-r、IL-4、IL-10细胞因子,实验组的浓度明显高于对照组。结论在不需要加入任何外源佐剂的情况下,本研究构建的融合免疫佐剂Lipo多肽的登革四价疫苗能够诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,且以细胞免疫应答为主,为今后新型登革病毒四价疫苗的研究奠定了基础。     

左归降糖清肝方对小鼠糖尿病合并脂肪肝脂代谢相关基因mRNA表达的影响

目的 探讨以滋阴益气、清热利湿、化痰消瘀组方的左归降糖清肝方对高脂饮食2型糖尿病(T2DM)转基因MKR小鼠脂肪肝发生中脂代谢相关基因mRNA表达的影响.方法 30只MKR小鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖清肝方组,左归降糖清肝方干预治疗高脂饮食诱发脂肪肝的MKR鼠4w;观察各组小鼠肝脏形态,RT-PCR检测小鼠肝脏脂代谢相关基因mRNA表达变化.结果 ①MKR高脂组较MKR组小鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶(ACC-α)、脂肪酸合酶(FAS)和内质网甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)的mRNA表达增加,apoB100 mRNA表达降低;②左归降糖清肝方降低高脂饮食MKR小鼠肝脏ACC-α、FAS和EDEMl的mRNA表达,增加apoB100mRNA的表达.结论 左归降糖清肝方能通过调节肝脏脂代谢相关基因mRNA表达,缓解肝脏脂肪性变.     

不同牛PrP合成肽段的抗原性研究

目的研究PrP多肽的抗原性以及不同偶联方法对多肽免疫原性的影响。方法选择4段牛PrP多肽(BoP1、BoP2、BoP3、BoP4)为半抗原,KLH为载体,MBS、戊二醛两种偶联方法进行偶联,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体效价,并对两种偶联方法进行比较。结果两组动物均出现死亡,戊二醛偶联多肽免疫小鼠出现不同程度的腹水,MBS偶联多肽免疫小鼠未见其它异常反应;戊二醛偶联的4种多肽产生的抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP3抗体效价低于其它3种多肽(P<0.05);对同一种多肽而言,不同偶联方法KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4所产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),戊二醛偶联KLH-BoP3产生的抗体效价明显高于MBS偶联KLH-BoP3产生的抗体效价(P<0.05)。结论PrP多肽可作为半抗原刺激小鼠强烈的免疫反应,不同偶联方法,不同肽段抗原性不同,为抗PrP多克隆及单克隆抗体的制备奠定了基础。     

桑银降糖胶囊对糖尿病模型小鼠免疫功能的影响

目的将桑叶多糖、银杏黄酮、牛磺酸、生物铬等按一定比例组成桑银降糖胶囊，并对链脲酶素所致昆明鼠糖尿病模型进行降糖治疗，观察桑银降糖胶囊对糖尿病模型小鼠免疫功能的影响。方法小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验和体外抗体形成细胞检测（溶血分光光度法）。结果实验表明桑银胶囊能明显提高单核细胞的吞噬活性（吞噬指数和吞噬百分率）促进小鼠的细胞免疫功能。经统计学分析，实验大、小、剂量组与正常对照组相比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。桑银降糖胶囊大剂量组和小剂量组与正常对照组相比体外抗体形成细胞均增加（P〈0．05），差异具有统计学意义。说明桑银降糖胶囊可以明显增强小鼠B淋巴细胞产生抗体的功能。结论桑银胶囊大、小剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及明显增强小鼠淋巴细胞产生抗体的功能，起到了促进非特异免疫防御体系的扶正固本作用，提示有提高细胞免疫及体液免疫的功能。     

谷氨酸脱羧酶特异调节的T细胞抑制NOD小鼠的自身免疫性糖尿病

目的 探讨抗原特异调节的T细胞在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠自发性糖尿病中的作用。方法 应用流式细胞计数仪辅以荧光标记组织相容性抗原Ⅱ类分子四聚体染色，从自发性糖尿病的NOD小鼠和非糖尿病的BALB／c小鼠中分离出谷氨酸脱羧酶(GAD)多肽特异性T细胞。分别应用抗原刺激试验、酶联免疫反应、细胞内细胞因子染色检测上述T细胞的细胞因子表达。最后将上述T细胞给NOD／scid小鼠静脉注射，检测这些T细胞对糖尿病发生的影响。结果 当用不同多肽诱导同一品系时，NOD小鼠T细胞分泌不等量的干扰素-γ，相似量的白介素(IL)-4和IL-10；BALB／c小鼠T细胞分泌类似量的细胞因子。当同一多肽诱导不同品系时，NOD小鼠T细胞较BALB／c小鼠T细胞分泌较少量的IL-2但较大量的IL-4和IL-10。这些NOD小鼠T细胞均可以有效地抑制NOD／scid小鼠的糖尿病发生。结论 两种毗邻的GAD多肽诱导NOD小鼠产生的T细胞表达不同的细胞因子分泌类型，但这些NOD小鼠T细胞均可以有效地抑制NOD／scid小鼠的糖尿病，因此推论这些细胞为分泌独特细胞因子且抑制糖尿病的T调节细胞。     

丙型肝炎病毒核心区多肽对细胞毒T细胞的作用

目的 探讨丙型肝炎病毒（HCV）感染者体内细胞毒T细胞（CTL）功能缺陷的原因。方法 将HCV核心区多肽皮下注射免疫BALB/c小鼠，用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾细胞CTL活性，选择上述多肽中对CTL有抑制作用和增强作用的多肽各2条，交叉组合后共同免疫BALB/c小鼠检测其CTL活性。结果 经单因素方差分析显示，HCV核心区多肽CPA9（39-74位氨基酸），CPB7（67-76位氨基酸），CPB8（71-80位氨基酸）对小鼠CTL有抑制作用，CPA10（5-23位氨基酸），CPB6（63-72位氨基酸），CPB2（131-140位氨基酸），对小鼠CTL有增强作用，CPB2 CPB8，CPB6 CPB8组中效靶比10：1，20：1的CTL活性显著高于对照组，CPB2 CPB7，CPB6 CPB7组与对照组无明显差异。双因素方差分析显示HCV核心区抑制性多肽和增强性多肽有交互作用。结论 HCV核心区多肽CPA9，CPB7，CPB8对小鼠CTL有抑制作用。CPA10，CPB6，CPB2对小鼠CTL有增强作用，HCV核心区抑制性和增强性多肽有交互作用。     

在“以患者为中心”治疗理念新思考下探讨钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂的治疗地位

"以患者为中心"的个体化治疗始终是临床医师不懈追求的目标。降糖药物的选择早已从单一强调血糖控制逐渐过渡至同时关注患者合并症等多因素个体化治疗新时代。随着钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)等新型降糖药物的问世及其心肾获益证据和机制的明确, 极大推动了中外糖尿病指南的变迁和治疗理念的更新, 基于心肾获益的"以患者为中心"的治疗理念得到进一步升华。该文拟对新型口服降糖药SGLT2i的降糖疗效、心肾获益等相关研究及用药注意事项展开综述, 并对其目前在指南中的治疗地位和未来进一步提升的可能性展开探讨。     

NBD多肽对小鼠移植心存活时间的影响及机制探讨

目的探讨NBD多肽对小鼠移植心脏存活时间的影响及机制。方法以BALB/c小鼠为供体、C57BL/6小鼠为受体,采用Cuff技术建立小鼠颈部异位心脏移植模型。随机分为对照组及NBD多肽组,各9只。NBD多肽组于心脏移植术中和术后第2、3天全身给予NBD多肽600μg/d,而对照组仅给予等体积PBS0.2ml。记录移植心脏存活时间,排斥反应程度,用混合淋巴细胞反应（MLR）测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性。ELISA法测定受者血清肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（INF）-γ和白细胞介素（IL）-12。免疫组化法检测移植心脏NF-κB。结果NBD多肽组移植心脏存活（14.17&#177;2.93）d,与PBS对照组的（7.00&#177;1.41）d相比,P〈0.01。NBD多肽组排斥反应分级降低,诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,受者小鼠血清Th1型细胞因子（TNF-α、INF-γ和IL-12）水平显著降低（P均〈0.01）,移植心脏NF-κB的表达下调。结论NBD多肽能有效抑制小鼠心脏移植排斥反应,使同种异体的心脏移植存活时间延长。其机制可能与诱导受者T细胞的抗原特异性低反应性及抑制Th1型细胞因子分泌有关。     

重组人胰岛素样生长因子1的促糖代谢作用研究

目的 研究胰岛素样生长因子１对糖代谢的影响。方法 分别以Ｂａｌｂ／ｃ ３Ｔ３成纤维细胞和昆明种小鼠为对象,研究重组人胰岛素样生长因子１的降糖作用。结果 （１）ＩＧＦ１使Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞培养液和葡萄糖浓度降到对照组的６５％,与胰岛素的降糖能力相似;（２）ＩＧＦ１能使小鼠血糖降到正常值２０％左右,降糖作用呈剂量－效应曲线。     

髓系细胞触发受体1结合多肽与脓毒症炎症反应

目的 研究髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1,TREM-1)结合多肽对脓毒症小鼠保护作用.方法 经噬菌体表面展示肽库筛选出的TREM-1结合多肽,42只健康雄性Balb/c小鼠随机分为空白组,脂多糖(LPS)组,对照1(多肽)组,对照2(LPS+TREM-1单抗)组,对照3(LPS+多肽+TREM-1单抗)组,早期治疗(LPs+LPS前1h多肽)组,延迟治疗(LPS+LPS后4 h多肽)组,各组分别于设定时间点麻醉处死小鼠,取肝组织提mRNA行逆转录、荧光定量PCR检测TREM-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,并取肺组织病理组织学观察.结果 LPS能增加小鼠肝细胞TREM-1 mRNA表达,早期治疗组可抑制LPS引起的肝组织TNF-α、IL-1β mRNA增加且能减轻LPS导致的肺病理组织炎症反应而延迟治疗组并未见以上抑制作用,此抑制作用能为TREM-1单抗所拮抗.结论 LPS诱导的脓毒症可见TREM-1 mRNA表达上调.TREM-1结合多肽对脓毒症小鼠具有保护作用,阻断TREM-1介导的全身炎症反应综合征可能足其发挥作用的机制.     

人髓系细胞触发受体-1模拟多肽的筛选和鉴定

目的寻找能特异性与人髓系细胞触发受体-1（TREM-1）蛋白结合并抑制其传导通路的多肽。方法克隆、表达和纯化TREM-1功能区蛋白，并以之为诱饵蛋白，筛选随机噬菌体展示肽库。经过4轮生物淘洗，通过ELISA方法和单核细胞ELISA方法分析噬菌体克隆与TREM-1蛋白的亲和力。化学合成模拟多肽，检测其对盲肠结扎穿刺（CLP）小鼠的治疗效果。结果成功找到5种噬菌体克隆，ELISA法和细胞ELISA均阳性。应用化学方法合成的模拟多肽HYGMTHPNTMsH能降低CLP小鼠的死亡率。结论模拟多肽HYGMTHPNTMSH对脓毒症小鼠有保护作用。     

苦瓜甙的降血糖作用

目的 采用动物实验研究苦瓜甙的降血糖功能和机制.方法 采用正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠为模型,以体重、空腹血糖值和糖耐量为指标,研究不同剂量苦瓜甙对糖尿病小鼠的降糖作用,测定血清丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原性谷胱甘肽(GSH)水平,研究不同剂量苦瓜甙对糖尿病小鼠氧化应激的作用.结果 苦瓜甙高剂量组糖尿小鼠的空腹血糖值和糖耐量明显降低(P＜0.05),苦瓜甙试验组小鼠的体重有所回升；血清MDA水平下降,血清SOD活性和GSH水平有所提高.结论 苦瓜甙对糖尿小鼠有较好的降血糖作用,苦瓜甙能够降低糖尿病小鼠的氧化应激反应,其降糖机制可能与苦瓜甙有修复或减弱四氧嘧啶对胰岛β细胞损伤的作用有关.     

表皮生长因子对雄性生殖功能的生理作用

由下颌下腺产生的表皮生长因子(EGF)是分子量为6045的多肽,对雌性小鼠的乳腺发育和肿瘤发生上具有一定作用。雄性小鼠下颌下腺的EGF至少比雌性小鼠高10倍。为确定EGF在雄性小鼠的生理作用,作者将小鼠涎腺切除;对术后小鼠用EGF进行替代疗法,对雄性小鼠生殖功能的几个参数所受的影响进行了研究。     

HCV核心区多肽对细胞毒T细胞作用的初步观察

目的：探讨HCV感染者体内细胞毒T细胞（CTL）功能缺陷的原因，为深入研究HCV感染的发病机制和指导疫苗研制提供理论和实验依据。方法：采用多肽固相合成法选择性合成HCV核心区多肽，并将皮下注射免疫Balb/c小鼠，用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测小鼠脾细胞（CTL）活性。结果：经单因素方差分析显示，HCV核心区多肽CPA9（39－74位氨基酸），CPB7（67－76位氨基酸），CPB8（71－80位氨基酸）对小鼠CTL有抑制作用，CPA10（5－23位氨基酸），CPB6（63－72位氨基酸）和CPB2（131－140位氨基酸）对小鼠CTL有增强作用，结论：经初步观察，HCV核心区多肽对CTL有抑制作用及增强作用。