玉米紫色植株色素对染氟MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度的玉米紫色植株色素（Maize Purple Plant Pigment,MPPP）对体外染氟的MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。方法：通过MTT法分别观察浓度范围均为10-10~10-2mol/L的MPPP和NaF对细胞增殖情况的影响,根据上述结果选择两者适宜浓度,再进行联合培养,最终观察MPPP对染氟的MC3T3-E1细胞增殖的影响。结果：氟对MC3T3-E1细胞增殖无促进作用,较高浓度的氟可抑制细胞增殖（P〈0.05）;培养48 h,终浓度为10-5mol/L的MPPP可促进染氟（10-3mol/L）MC3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）。结论：MPPP可增强染氟MC3T3-E1细胞的增殖能力。     

不同浓度的维生素C对C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察不同浓度的维生素C（VitC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞（C2C12）增殖、凋亡的影响。方法：取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,调整细胞密度,按200 μL/孔接种,常规培养,待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,将细胞分6组：阴性对照组（C2C12 细胞中加入单纯无血清培养基）、H2O2组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基）和VitC 1,2,3,4组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基的基础上,分别加入不同浓度的VitC：10,20,60,100 mg/L）。分别在干预0,6,24,36,48,72 h后采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测各组C2C12细胞的增殖。在干预36 h后采用Annexin V-PI双染法检测各组C2C12细胞凋亡率。结果：在干预36和72 h时,各浓度的VitC组的吸光度（OD）值均较H2O2组显著升高（P＜0.001）,其中以VitC 4组升高最为显著,而且VitC 4组在干预36 h时的吸光度值高于阴性对照组（P＜0.05）;在干预36 h时,VitC 2,3和4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于H2O2组;VitC 2和3组的C2C12成肌细胞凋亡率高于阴性对照组,而VitC 4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：VitC能够有效抑制H2O2诱导的C2C12成肌细胞的凋亡,高浓度的VitC可能在干预36 h时对C2C12成肌细胞有促增殖的作用。     

慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

活性维生素D3对肌炎模型小鼠脾脏中调节性T细胞相关因子的影响

目的：通过观察活性维生素 D3对实验性自身免疫性肌炎小鼠是否有抑制作用,通过测量调节性 T细胞（Treg）转录因子 Foxp3和其相关的 IL －10和 TGF －β的 mRNA 表达,探讨其可能的作用及机制。方法将10只 BALB／c 小鼠随机分为模型组5只及活性维生素 D3干预组（干预组）5只,均制备肌炎模型;干预组小鼠行活性维生素 D3腹腔注射,同期模型组腹腔注射等体积生理盐水。在第十四天处死并取材,采用实时荧光定量 PCR 法检测二组脾脏组织中的 Foxp3、IL －10和 TGF －βmRNA 表达。结果与模型组比较,干预组小鼠脾脏中的 IL －10、TGF －β mRNA 的表达增加（P ＜0．01）;Foxp3 mRNA 的表达无区别（P＞0．05）。结论活性维生素 D3可能通过增加 Treg 细胞相关因子 IL －10和 TGF －β的表达对肌炎小鼠发挥免疫保护作用。     

三七三醇皂苷对MC3T3-E1细胞分化和凋亡的影响

观察了三七三醇皂苷（PTS）对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1成骨功能、间质矿化及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。MTT法显示PTS对成骨细胞增殖没有明显的影响;对硝基苯磷酸盐法(PNPP)显示,成骨细胞分化早期,高浓度PTS可使碱性磷酸酶活性增高,其中10 μg/mL组效应最强,且这一作用可被雌激素受体阻断剂ICI 182780所阻断;RT-PCR实验证实,较高浓度PTS可显著增强骨钙素的基因表达;Von Kossa染色法显示,连续给药处理细胞28 d,PTS各组矿化结节形成数量均有增多趋势;用流式细胞仪检测PTS对血清饥饿诱导的成骨细胞凋亡的影响,1,10 μg/mL的PTS凋亡细胞百分率明显下降。结果表明,PTS具有促进成骨细胞分化、矿化和抑制凋亡的活性,且其促分化作用可能与雌激素样作用有关,提示PTS具有潜在的抗骨质疏松作用。     

伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响

目的观察伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响。方法取BALB/c小鼠30只,随机分为药物+细胞组:伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;细胞组:单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;阴性对照组:单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。每组10只。在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,药物+细胞组和细胞组用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液、阴性对照组用无菌明胶海绵吸附生理盐水后植入肌袋内。术后3天,药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/m L的混悬液,按2.0mg/(g·d)剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予2.0mg/(g·d)的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组各处死小鼠5只,取材后分别作大体、切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。结果术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,药物+细胞组形成的板层骨结构较细胞组更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。结论伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。     

PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用

[目的]探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用.[方法]将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120 h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检测细胞内和培养基中是否存在胰岛素.[结果]GLP-1可以直接诱导C2C12细胞表达PDX-1;PDX-1瞬时转染C2C12细胞后,胰岛素分泌细胞阳性率比值(1.19±0.10)、培养基中的胰岛素含量(2.45±1.48)×10-6U/mL均明显升高(P＜0.05);单独的40 nmol/L GLP-1诱导与瞬间转染PDX-1相比,阳性率比值及胰岛素浓度的差别均无统计学意义.[结论]GLP-1可以诱导C2C12表达PDX-1,而且PDX-1可以促进C2C12分泌胰岛素.提示GLP-1诱导C2C12分化为胰岛素分泌细胞可能与PDX-1有关.     

补肾中药成分配伍调控RUNX2、OSX对大鼠BMSCs成骨分化的影响

目的观察补肾代表中药淫羊藿、补骨脂、女贞子、何首乌有效成分对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及向成骨细胞定向分化的影响。方法将65只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常对照组、阳性转化液对照组、补肾中药配伍组(补肾中药1组、2组、3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组)、非补肾中药对照组(黄芪甲苷组、川芎嗪组)。通过血清药理学方法,对实验大鼠连续灌胃给药3 d后,取材获得含药血清,使用各组大鼠含药血清培养骨髓间充质干细胞6 d、12 d、18 d;用茜素红染色对钙化结节进行成骨细胞鉴定;应用MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖率,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,用实时定量PCR法检测核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)的基因表达。结果补肾中药有效成分不同配伍含药血清作用于体外培养骨髓间充质干细胞72 h,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖。ALP在12 d达到高峰值。Real-Time PCR结果显示补肾中药有效成分能上调RUNX2、OSX的基因表达。结论补肾中药有效成分配伍能提高骨髓间充质干细胞增殖率,促进骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其机制与补肾中药有效成分配伍能上调RUNX2、OSX的基因表达相关。     

骨碎补、续断、西洋参对成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响

骨碎补、续断是中医骨伤科中常用药物,具有促进骨折愈合、强骨补肾的功效,但其作用机制不明。西洋参为补气血常用药,对骨细胞增殖也有一定的促进作用,但对此研究较少。本文以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为细胞模型,用体外实验方法,研究了骨碎补、续断、西洋参水提液对成骨细胞增殖的作用,同时了解骨碎补、续断联合用药对成骨细胞增殖的影响,报道如下。     

组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9对myogenin基因表达的影响

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2C12细胞,Western blot技术验证其表达;利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测SET7/9对myogenin基因mRNA水平的影响;利用双荧光素酶报告系统检测SET7/9对myogenin基因启动子活性的影响;转染SET7/9的siRNA质粒,利用Real-time PCR技术检测其抑制效果以及对myogenin mRNA水平的影响。结果 SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9可在C2C12细胞中有效表达;SET7/9可使myogenin mRNA水平升高并能够促进myogenin启动子活性升高;干扰SET7/9表达可使myogenin mRNA水平降低。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9可激活肌肉分化关键基因myogenin的转录。     

32例小儿横纹肌肉瘤生肌因子的表达

目的：探讨小儿横纹肌肉瘤中生肌因子（MyoD1、Myogenin)的表达及意义。方法：应用免疫组化Envision法检测32例小儿横纹肌MyoD1、Myogenin、Des、Sr-A、MG标记物的表达。结果：5种标记物在小儿RMS表达的阳性率依次为：Myogenin 90.6%、MyoD1 81.1%、Des 65.5%、Sr-A 50.0%、MG 46．8％。结论：Myogenin与MyoD1较Des、Sr-A、MG在诊断小儿RMS中灵敏度及特异性方面具有显著的优越性，有很高的诊断价值。Myogenin特异性略高于MyoD1,是目前诊断小儿RMS的最佳免疫组化标记物。     

柚皮苷对H_2O_2处理小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的影响

目的 :研究柚皮苷对体外培养过氧化氢(H_2O_2)处理的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的作用及抗氧化机制。方法:在体外培养的MC3T3-E1s细胞培养基中分别加入不同浓度(0.01 mmol·L-1、0.02 mmol·L-1、0.04 mmol·L-1)的柚皮苷作用48 h,接着加入0.5 mmol·L-1H_2O_2作用4 h,采用CCK-8法检测柚皮苷对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)、细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测MC3T3-E1成骨细胞内ALP、SOD活性和MDA、GSH含量及细胞上清LDH活性;用茜素红S染色法检测矿化结节数目;用Real time RT-PCR的方法检测成骨细胞内I型胶原(COL-I)、骨钙素(OCN)、转录因子Osterix和骨形态发生蛋白2(BMP-2)m RNA表达。结果:柚皮苷可增加H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞ALP活力(P0.05,P0.01)和矿化结节数目(P0.05,P0.01),促进骨形成相关指标COL-I、Osterix、BMP-2和OCN m RNA表达(P0.01);柚皮苷提高H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞活力(P0.05,P0.01),上调细胞内SOD活性和GSH含量并降低细胞中MDA含量和上清中LDH活性(P0.01)。结论:一定浓度(0.01,0.02,0.04 mmol·L-1)的柚皮苷可以促进H_2O_2处理后MC3T3-E1细胞的骨形成,这种促进作用可能是通过降低氧化应激发挥抗氧化作用实现的。     

胰岛素受体底物1在前成骨细胞分化过程中的表达

目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-1)在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中的表达.方法 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,分别在不同时点收集细胞及上清液.骨钙素含量用放射免疫法测定;碱性磷酸酶活性用α-磷酸奈酚法测定;Ⅰ型胶原、骨涎蛋白、骨桥素和IRS-1的mRNA表达应用半定量RT-PCR检测;免疫印迹法测定IRS-1蛋白水平.结果 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中,IRS-1的表达量逐渐增加,而且与Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎素和骨桥素呈正相关.结论 IRS-1参与MC3T3-E1细胞的增殖、成熟与矿化的全过程.     

持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序分析

目的：通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法 ：采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、GSVA分析,利用NCBI GEO数据库、Genecards数据库、molecular signatures database数据库,分析对比持续静压力环境下MC3T3-E1细胞差异表达基因,筛选Hub基因,对比分析其与骨质疏松症信号通路关联的分子学机制。结果：在持续静压力环境下,MC3T3-E1细胞增殖显著降低,在1.0 MPa处理8 h和0.5 MPa处理24 h细胞模型组的细胞骨架中,微管蛋白和肌动蛋白的抑制作用显著。通过空白组与模型组基因测序对比后发现29 164个差异基因,其中14 489个上调、14 675个下调。这些差异基因涉及1 658个GO功能,包括1 096 GO＿BP（生物过程）,255 GO＿CC（细胞组分）,307 GO＿MF（分子功能）,MC3T3-E1细胞在持续静压力作用下受到差异基因调控的信号转导通路有305...     

静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 观察静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 通过静电纺丝法制备薄膜支架,扫描电镜观察薄膜网状结构,通过薄膜支架作为载体,观察其对成骨细胞的增殖、分化并观察细胞骨架的形态变化。结果 扫描电镜显示:静电纺丝薄膜网状结构有利于细胞的黏附;CCK-8细胞增殖检测与碱性磷酸酶活性检测结果显示,培养1 d、4 d、7 d对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05);细胞骨架染色显示静电纺丝组细胞铺展面积增大且数目增多。结论 静电纺丝薄膜支架对成骨细胞增殖、分化以及细胞黏附具有促进作用。     

神经营养因子3抑制地塞米松诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡的作用及机制

目的:研究神经营养因子3(NT-3)抑制地塞米松(DEX)诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡的作用及机制。方法:培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞并分组,对照组用不含药物的DMEM处理,DEX组用含有5μmol/L地塞米松的DMEM处理、NT-3组用含有5μmol/L地塞米松及100 ng/mL NT-3的DMEM处理。检测细胞凋亡率、增殖活力、成骨标志物的含量、凋亡基因及PI3K/AKT/mTOR信号通路分子的表达量。结果:DEX组的细胞凋亡率及细胞中bax、caspase-3的表达量明显高于对照组,增殖活力值、培养基中ALP、OCN、COL-I的含量及细胞中bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量明显低于对照组(P<0.05);NT-3组的细胞凋亡率及细胞中bax、caspase-3的表达量明显低于DEX组,增殖活力值、培养基中ALP、OCN、COL-I的含量及细胞中bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量明显高于DEX组(P<0.05)。结论:NT-3对地塞米松诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡具有抑制作用且该作用可能的机制是激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。