CD11c细胞的改良法磁珠分离及诱导T细胞增殖研究

目的:改良CD11c细胞的磁珠分离方法,并观察CD11c细胞诱导同源CD4 T和CD8 T细胞增殖的作用.方法:使用胶原酶、DNase I和EDTA处理脾组织,以及小鼠血清和抗CD16/32抗体阻断CD11c磁珠与脾细胞非特异结合后分离CD11c细胞:流式细胞术分析CD11c细胞的纯度;淋巴细胞混合培养和ELISA检测CD11c细胞诱导同源T细胞增殖及分泌细胞因子的作用.结果:改良后的磁珠分离法获得了平均(4.52±0.05)×106/鼠的CD11c细胞,纯度高达98%.重组肿瘤疫苗E.coli LLO/OVA免疫小鼠的CD11c细胞明显促进了CD4 T和CD8 T细胞增殖并分泌IL-2和IFN-γ.结论:改良法磁珠分离获得了较多高纯度的CD11c细胞,活化的CD11c细胞具有诱导同源T细胞增殖及分泌细胞因子的作用.     

重组E.coli LLO/WT1诱导树突状细胞成熟并促进特异性抗肿瘤免疫

目的:观察重组疫苗E.coli LLO/WT1诱导人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟及其致敏的T细胞对WT1+肿瘤细胞的杀伤作用.方法:以E.coli为对照,采用E.coliLLO/WT1刺激健康人外周血树突状细胞后,流式细胞术分析DC的CD83,CD86和HLA-DR的表达,MTT法观察活化DC促进T细胞增殖和杀伤WT1+人胃癌细胞SGC-7901的效果,ELISA检测DC及DC和T细胞混合培养上清液内IL-12和IFN-γ的含量.结果:E.coliLLO/WT1较E.coli刺激的DC表达更高水平的CD83,CD86和HLA-DR,其阳性率分别为78.1%,83.4%,93.2%和65.8%,61.2%,75.8%;两组DC培养上清内IL-12的含量分别为(270.42±3.85)ng/L和(204.17±4.23)ng/L(P<0.05);E.coli LLO/WT1活化的DC较E.coli活化的DC更明显地促进了同源T细胞增殖,混合培养细胞上清液内IFN-γ的含量也更高,分别为(86.32±2.00)ng/L和(44.71±1.45)ng/L(P<0.05);活化的T细胞发挥...     

重组疫苗E.coli LLO／OVA诱导树突状细胞成熟并表达趋化因子及受体

目的：探讨重组疫苗E．coli LLO／OVA诱导树突状细胞成熟和表达趋化因子及其受体的作用．方法：采用基因芯片杂交及RT—PCR检测经Ecoli LLO／OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞（BMDC）的NF-KB信号通路相关分子和趋化因子及其受体mRNA的表达,流式细胞分析BMDC活化状况及趋化因子受体CXCR4的表达．结果：未成熟BMDC表达趋化因子基因Ccl2,Ccl4,Ccl6,Ccl9,Ccl17,Ccl22,Cxcl2,Cxcl4和趋化因子受体基因Ccr2,Ccr5和Ccr7．经E．coli LLO／OVA刺激后4～8h,BMDC明显上调表达基因Myd88,Nf-κbl,Ccl3,Ccl5,Ccl7,Ccl22,Cxcll,Cxcl9和Ccrl2,同时下调表达趋化因子受体基因Ccr2和Ccr5,但持续表达Ccr7．经该疫苗刺激后8h,BMDC上调表达基因Tlr2,Myd88,Nf-κbl和Cxcr4．该疫苗刺激后12h,BMDC下调一系列趋化因子和趋化因子受体基因表达,仅持续表达基因Ccl5和Cxcr4．经疫苗刺激24h后BMDC上调表达CIMO,CD80,CD86,MHC—Ⅱ类分子及CXCR4．结论：重组疫苗E．coli LLO／OVA可能通过Myd88／NF—κB信号途径诱导了小鼠骨髓树突状细胞成熟并表达一系列趋化因子及趋化因子受体基因,尤其上调了趋化因子受体CXCR4的表达．     

重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫学活性

目的:实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵,并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应. 方法:利用自控发酵罐发酵,采用溶氧反馈,分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵,从菌体中纯化MAGE3/HSP70融合蛋白,并用所纯化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了融合蛋白激活机体细胞免疫反应的状况. 结果:高密度发酵取得成功,发酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表达量与摇瓶中的相当,摸索出发酵水平纯化MAGE3/HSP70融合蛋白工艺,ELISPOT和LDH显示MAGE3/HSP70可以激活机体免疫反应,并产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞. 结论:MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功实现高密度发酵,MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活机体免疫反应,产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,免疫学活性良好,为新型抗肿瘤疫苗临床前研究奠定了良好基础.