基因检测在儿童严重急性呼吸综合征疑似病例诊断中的应用

目的 通过病原学检测鉴别诊断严重急性呼吸综合征(SARS)。方法 对1例没有明确SARS接触史,入院时临床诊断疑为“支原体肺炎”的患儿进行病原学鉴别诊断。(1)对患儿的咽拭子标本进行常见呼吸道病毒(包括呼吸道合胞病毒、甲、乙型流感病毒、腺病毒和I、Ⅱ、Ⅲ型副流感病毒)的抗原检测。(2)用RT-PCR进行人类偏肺病毒、肠道病毒和鼻病毒的检测。(3)采用巢式RT-PCR方法,进行SARS病毒基因检测。根据WHO在网上公布的SARS冠状病毒复制酶基因1b区合成3对引物,其中I对为所有冠状病毒所保守的,用来进行第一次PCR,另2对为SARS冠状病毒所特异的,分别用于第二次PCR,这2对引物可分别扩增368和348bp的基因片段。结果 患儿咽拭子标本7种常见呼吸道病毒和人类偏肺病毒、肠道病毒和鼻病毒的检测结果均为阴性,而用不同引物对检测,SARS冠状病毒基因均为阳性。经测序显示,该基因片段与GenBank已公布的17株SARS冠状病毒的序列同源性为100％,而与人冠状病毒的标准株有很低的同源性。同时该患儿的恢复期血清SARS冠状病毒特异性IgM和IgG均为阳性。结论 从患儿标本中未检测到常见的7种呼吸道病毒、人类偏肺病毒、肠道病毒和鼻病毒,而检测到了SARS冠状病毒。经病原学检测,确诊患儿为SARS,,在SARS流行期间,用检测常见呼吸道病毒抗原或基因的方法,可以将儿科的急性呼吸道病毒感染与SAPS进行区别。     

呼吸道合胞病毒检测方法比较

为使临床治疗更及时有效，以通过不同方法的比较得到更快速，敏感，特异的早期从临床标本中检测呼吸道合胞病毒的方法，对收集的80份疑为病毒性急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本应用不同方法进行了RSV检测，包括病毒分离，间接免疫荧光，巢械PCR及核酸杂交，80份标本都进行了病毒分离及巢式PCR：80份标本沉淀分为两组，第1组32份（32/80份）进行间接免疫荧光；第2组48份（48/80份）进行杂交，结果显示，80份标本中除外9份在病毒分离过程中出现污染，RSV分离组阳性标本22份（22/71份，31.0%)；间接免疫荧光组阳性标本14份（14/32份，43.8%)；核酸杂交组阳性标本22例（22/48，45.8%)。其中A亚型13份，B亚型9份；巢式PCR检测方法中共有66份（66/80份，82.5%)有目的基因片段扩增，A亚型45份，B亚型21份。结果表明，从临床标本中检测RSV以巢式PCR灵敏度最高；杂交法与免疫荧光法阳性率大致相同；病毒分离特异性好。但由于其他原因导致了分离率低。巢式PCR及核酸杂交可以对临床标本直接分型。     

1165例急性下呼吸道感染住院儿童的病毒病原学分析

目的：了解长沙地区急性下呼吸道感染(ALRTI) 住院儿童中常见呼吸道病毒的流行特点,为本地区儿童ALRTI的防治提供依据。方法：收集2007年9月至2008年8月诊断为ALRTI的住院患儿鼻咽抽吸物标本1165份,采用RT-PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、流感病毒A(IFVA)、流感病毒B(IFVB)、副流感病毒1~3(PIV1~3)、偏肺病毒(hMPV)、冠状病毒NL63(HCoV-NL63)及冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1);PCR方法检测腺病毒(ADV)、博卡病毒(HBoV);巢式PCR方法检测多瘤病毒WU(WUPyV）和多瘤病毒KI(KIPyV)。并对阳性标本进行基因测序以证实。结果：1165份标本中有871份检出了病毒,总检出率74.76%,其中RSV最为常见,检出率为27.03%,其次为HRV（17.33%）、PIV3（13.73%）及新发现病毒HBoV(8.67%)和hMPV(6.52%)。病毒总检出率在男女之间差异无统计学意义,但男性PIV3、hMPV和HBoV的阳性检出率高于女性。病毒阳性检出率在各年龄组之间差异有统计学意义（χ2=10.934,P=0.027）,以6个月至1岁以内年龄组检出率最高。病毒总检出率在四季分布差异有统计学意义（χ2=12.307,P=0.006）,以冬季检出率最高。结论：病毒病原在长沙地区儿童ALRTI中占重要地位,其中RSV、HRV及PIV3是主要病毒病原,近年新发现的HBoV和hMPV也占较高比例;病毒检出率以6个月至1岁以内年龄组最高;冬季病毒总检出率高于其他季节。     

100例重症社区获得性肺炎住院儿童的病毒病原学分析

目的了解重症社区获得性肺炎(CAP)儿童中常见呼吸道病毒的流行特征。方法收集2007年9月至2008年8月诊断为重症CAP的住院患儿鼻咽抽吸物标本100份,采用RT-PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、流感病毒A(IFVA)、流感病毒B(IFVB)、副流感病毒1～3(PIV1～3)、偏肺病毒(hMPV)、冠状病毒NL63(HCoV-NL63)及冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1),PCR方法检测腺病毒(ADV)、博卡病毒(HBoV),巢式PCR方法检测多瘤病毒WU(WUPyV)和多瘤病毒KI(KIPyV),并对阳性标本进行基因测序以证实。结果 100份重症CAP住院患儿鼻咽抽吸物标本中病毒总检出例数为82例(82.0%),其中RSV检出率最高,为37.0%,其次为HBoV 25.0%和HRV 18.0%。病毒总检出率在男女之间差异无统计学意义;HBoV阳性检出率女性高于男性,差异有统计学意义(P<0.05),其他病毒检出率男女比较差异无统计学意义。阳性检出率在各年龄组之间差异有统计学意义(χ2=19.676,P<0.01),尤以0～6月龄组检出率最高。病毒总检出率在四季分布差异有统计学意义(χ2=9.729,P=0.021),以秋冬季检出率最高。有2种及以上病毒协同感染率为32.0%,RSV的协同感染率最高,依次是HBoV、HRV、PIV-3。结论病毒感染是重症CAP患儿的重要病因,其中RSV是最常见病毒病原,其次为HBoV和HRV;病毒检出率以0～6月龄组最高;秋冬季病毒总检出率高于其他季节;且病毒协同感染率较高。     

人博卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立人博卡病毒(human Bocavirus,HBoV)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quanti-tative PCR,FQ-PCR)检测方法,检测呼吸道感染患儿标本的HBoV。方法设计HBoV NP1基因的引物和Taqman探针,扩增NP1基因片段,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品,建立FQ-PCR检测方法,进行敏感性、特异性试验,检测195份临床标本。结果所建立的FQ-PCR方法对临床其他呼吸道病毒不出现特异性扩增曲线,特异性好,线性范围为10～108copies/μl。195份临床标本中HBoV阳性12份,阳性率为6.2%。结论成功建立了HBoV实时荧光定量PCR检测方法并检测临床标本,为人博卡病毒感染的临床治疗提供快速、可靠的诊断依据。     

保定地区儿童偏肺病毒感染的研究

目的了解保定地区婴幼儿呼吸道感染与人类偏肺病毒的关系。方法采用RT—PCR方法，对收集的547例呼吸道感染常见病原体检测阴性的标本，进行偏肺病毒（hMPV）基因检测。抽取10份阳性扩增产物进行测序和比较。结果315份标本中共检测到82份阳性扩增产物，阳性率为26．0％。占总检测例数的15．0％。结论保定地区部分患儿的急性呼吸道感染与hMPV有关。     

近年北京儿科急性呼吸道感染患儿中腺病毒的型别监测

目的 了解近年北京地区儿科急性呼吸道感染患儿中人腺病毒(ADV)感染状况及ADV的型别.方法 2003年至2008年,连续6年通过病毒分离和(或)间接免疫荧光法,对收集的首都儿科研究所就诊的急性呼吸道感染患儿的17 941份标本进行ADV检测,对其中285份毒株或阳性标本提取DNA,通过3、7、11和21型4对分型引物的多重聚合酶链反应,确定3、7、11和21型ADV,对少数扩增阴性的标本或毒株,再使用2对可扩增所有ADV的通用引物对其DNA进行扩增,将PCR产物直接测序,结果与GenBank上的序列比较,确定其型别.结果 在17 941份呼吸道标本中,经病毒分离和(或)间接免疫荧光法确定为ADV阳性的标本304份,总阳性率为1.69%.对其中285份毒株或阳性标本的PCR分型结果:272例用3、7、11、21型分型引物扩增确定了型别:3型ADV 174例,占61.1%(174/285),7型ADV 92例,占32.3%,11型ADV 6例,占2.1%;有13例经分型引物扩增为阴性,经过通用引物扩增后的PCR产物测序确定为2型ADV 9例,占3.2%(9/285);6型ADV2例,占0.7%,1型和5型ADV各1例,各占0.4%.结论 本组ADV阳性检出率为1.69%.近年来北京地区ADV感染以3、7型为主,其次为2型和11型,1、5和6型较为少见,尚未发现其他型别.     

应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.     

北京地区急性呼吸道感染婴幼儿中人副流感病毒感染状况的研究

目的了解北京地区急性呼吸道感染患儿中人副流感病毒（HPIV）的感染状况。方法（1）根据HPIV血凝素蛋白（HA）的基因保守区序列,合成能够区分HPIV 1～4型的多重巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定多重PCR方法的特异性;（2）收集2003年8月-2006年4月急性呼吸道感染患儿的临床标本3519例,应用逆转录多重PCR方法,对标本同时进行HPIV 1～4的检测。（3）随机选取不同型别的HPIV基因检测阳性标本共10例,对其PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定,并将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较。结果（1）多重PCR方法的特异性检测显示,HPIV的分离株cDNA有预期大小的扩增片段,与其他常见呼吸道病毒无交叉反应性。（2）3519例标本中多重PCR检测阳性的为349例,占本组检测标本的9．9％（349／3519）,明显高于间接免疫荧光方法和（或）病毒分离4．8％的阳性率（170／3519）;应用多重PCR方法还检测到HPIV1与HPIV3以及HPIV3与HPIV4的混合感染;在上呼吸道及下呼吸道感染的患儿中均有较高的HPIV阳性检出率;季节性分布分析显示,HPIV感染无明显的规律性,以HPIV1、3为主,HPIV2、4仅散发存在。（3）序列分析结果提示,所选取的多重PCR方法检测阳性的10例标本确实是HPIV阳性,其中有两份分别属于HPIV4A、4B亚型。结论HPIV在儿童感染中除了单．亚型感染外还可存在混合型感染。未发现其感染的季节性特点。所应用的逆转录多重RT-PCR方法不仅检出率高于常用的方法（间接免疫荧光方法和病毒分离）,而且能够直接进行亚型分析。除了检出常见的1、2、3型外,还检出了较少见的4型,属国内首次报道。     

重庆地区急性下呼吸道感染住院患儿人偏肺病毒感染的流行病学研究

目的了解重庆地区急性下呼吸道感染(ALRTI)住院患儿人偏肺病毒(hMPV)感染的流行病学特点和临床特征。方法收集2006年4月至2008年3月重庆医科大学附属儿童医院呼吸科病房每周一、三、五因ALRTI住院患儿住院当日白天的鼻咽吸取物(NPA),采用荧光定量PCR方法检测hMPV基因组RNA,阳性标本采用传统PCR方法扩增F基因,进一步确定是否存在hMPV感染,扩增G基因用于遗传进化分析。同时采用传统PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)和冠状病毒NL-63(HCoV-NL63),直接免疫荧光法(DFA)检测流感病毒A、B亚型,副流感病毒1、2、3型和腺病毒。分析hMPV感染的流行病学特点和临床特征。结果研究期间共收集878份标本,占同期ALRTI入院病例的13.9%(878/6296例)。hMPV阳性227/878例(25.9%)。男∶女为1.9∶1。hMPV阳性227例中,6个月119例(52.4%),～2岁72例(31.7%),～6岁34例(15.0%),6岁2例(0.9%)。hMPV流行特点为全年散发,好发季节为冬春季。hMPV阳性率2006年4月至2007年3月为18.5%(72/390例),2007年4月至2008年3月为31.8%(155/488例)。227例hMPV阳性患儿临床诊断以肺炎(148例,65.2%)和毛细支气管炎(65例,28.6%)为主。hMPV可与常见呼吸道病毒协同感染,其中与RSV协同感染率最高(41.9%,95/227例)。遗传进化分析显示,研究期间重庆地区hMPVA和B基因型均流行,以A2亚型为优势株。结论 hMPV是重庆地区ALRTI住院患儿重要的呼吸道病毒病原之一,以6个月婴儿为主要感染人群。     

Clinical manifestations of human coronavirus NL63 infection in children in Taiwan

Human coronavirus NL63 (HCoV-NL63) is a global respiratory tract pathogen; however, the epidemiology of this virus in subtropical area is not well known. To evaluate the epidemics and disease spectrum of HCoV-NL63 infection in children in Taiwan, we prospectively screened children admitted to the hospital with respiratory tract infection from May 2004 to April 2005. Every enrolled child had a nasopharyngeal aspirate (NPA) sample taken. Quantitative RT-PCR was used to detect 1b gene of HCoV-NL63. A total of 539 NPAs were collected. Seven (1.3%) were positive for HCoV-NL63. All cases were boys younger than 3 years of age and most cases occurred in autumn. Co-infection with other pathogens was observed in three cases. The most common symptoms/signs of HCoV-NL63 infection were cough, fever, and inspiratory stridor. HCoV-NL63 was the most common pathogen (14.7%) in children with croup and was the cause of three cases of croup in October. The odds ratio of croup in children infected with HCoV-NL63 was 43.4 (95% CI 8.1∼233.1). In conclusion, HCoV-NL63 is an important respiratory tract pathogen as the main cause in children admitted to the hospital in Taiwan.     

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??Abstract??Objective??To establish a real-time fluorescent quantitative PCR assay to detect the human coronavirus NL63 from nasopharyngeal samples of children with acute respiratory tract infections in Fuzhou. Methods??The specific primers and Tap-man probes were designed targeting the 1a gene. The aimed fragment of 1a gene was amplified with PCR and ligated into a PMD18-T Easy vector for standards. A total of 151 clinical specimens were subsequently tested after determination of the sensitivity and specificity of the established real-time PCR. Amplify and preliminarily analyse the N gene. Results??The specificity of this assay was excellent. The linear amplification of the assay ranged from 101 copies/μL to 1010 copies/μL. Two of 151 clinical specimens??1.3%?? were tested positive for HCoV-NL63. Conclusion??The real-time fluorescent quantitative PCR assay is successfully established to detect HCoV- NL63 .     

北京地区六岁以下儿童急性呼吸道偏肺病毒感染

目的 了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与人类偏肺病毒(Human Metapneumovirus,HMPV)的关系。方法对2002年11月～2003年3月,收集的247份经过间接免疫荧光法和病毒分离排除了常见的呼吸道病毒感染的鼻咽洗液标本进行了HMPV基因的检测。用针对HMPV N基因序列设计的特异引物对这247份标本进行RT-PCR扩增,扩增片段经1.2％琼脂糖凝胶电泳检测。挑选10份阳性扩增产物直接进行核苷酸序列测定,并将所测序列在GeneBank中进行比较分析。结果 247份标本中共检测到74份RT-PCR阳性扩增产物,阳性率为30.0％(74／247)。74例中临床诊断为肺炎者36例,占48.6％;其次为毛细支气管炎21例,占28.4％;年龄2个月～5岁7个月不等,≤2岁者占83.8％。所挑选的10份N基因扩增产物与GeneBank中同源性最高的均为HMPV(87％～99％)。10份标本中9份标本的扩增产物之间的核苷酸和氨基酸同源性在95.8％～100％和98.6％～100％,1份标本的扩增产物与其他标本同源性较低,仅为87.3％～89.7％和95.8％～97.2％。结论 (1)北京地区部分儿科患者的急性呼吸道感染与HMPV有关;(2)北京地区的HMPV中可能存在不同的基因型。     

Common WU polyomavirus infection in a Beijing population indicated by surveillance for serum IgG antibody against capsid protein VP2

Background

WU polyomavirus (WU virus) was identified as a novel polyomavirus in 2007 from specimens of pediatric patients with acute respiratory infection (ARI). A lack of permissive cell lines has limited investigations into WU virus pathogenesis and prevalence.

Methods

The encoding region of the capsid protein VP2 gene was amplified from a WU virus DNA-positive clinical specimen and expressed as a recombinant Histagged protein in Escherichia coli BL21 (DE3). The expressed VP2 was identified by expected molecular weight and immunoreactivity with anti-His monoclonal antibody in Western blotting assay. Serum samples collected from 455 individuals of all ages in Beijing without symptoms of ARI were tested for IgG antibodies against the affinity-purified recombinant VP2 protein by Western blotting to investigate the prevalence of natural WU virus infection. In addition, serum samples from four ARI pediatric patients, whose nasopharyngeal aspirates were positive for WU virus DNA and negative for all other respiratory-related viruses, were tested for IgM antibody against the recombinant VP2.

Results

Of the 455 serum samples, 238 reacted with the recombinant VP2, yielding an overall positive rate of 52.3% for IgG against VP2 of WU virus. The positive rate was the highest in serum samples from infants and children between 1 to 4 years of age. One of four ARI pediatric patients was positive for IgM against WU virus VP2, implicating WU virus as the causative disease agent.

Conclusions

The high prevalence of IgG against WU polyomavirus in Beijing-based study population indicates that WU virus infection is common in Beijing. WU virus may be responsible for some pediatric ARI cases, and primary infection of this virus may occur mostly in childhood.     

实时荧光聚合酶链反应方法在2006年广州地区儿童流行性感冒病毒监测中的应用

目的 应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法检测流感病毒,并对2006年广州地区儿童感染流感病毒进行流行病学分析.方法 以流感病毒的NP基因序列为参考,综合分析GenBank上的NP基因序列,使用引物和探针设计软件Primer Express设计A/B型流感病毒及A亚型流感病毒各1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,用于分别检测A/B型流感病毒及A亚型流感病毒,建立实时荧光PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.采用实时荧光PCR方法,对来自2006年门诊或住院呼吸道感染患儿的12 301份咽拭子或鼻腔抽洗液样本进行检测,并与病毒分离方法进行对照.结果 实时荧光PCR方法共检出1687份阳性样本,总阳性率为13.71%,其中A型773份(45.8%),全部为H1N1型;B型914份(54.2%).1-4月份检出流感病毒阳性525例,其中B型流感病毒455例(86.7%),A型(H1N1)流感病毒70例(13.3%);5-8月份检出流感病毒阳性1118例,其中B型流感病毒419例(37.5%),A型(H1N1)流感病毒699例(62.5%).病毒培养分离阳性为1380份,均为实时荧光PCR方法阳性,占实时荧光PCR方法阳性者的81.80%.结论 实时荧光PCR方法应用于流感病毒的检测具有简便快捷、特异、敏感的特点,2006年广州地区儿童流行性感冒病毒的流行1-4月份以B型流感病毒为主,5-8月份以H1N1亚型流感病毒为主.     

2009 甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的 了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。 方法 设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡病毒(HBoV)在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。 结果 新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10~300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV 13.9%（118份）,HBoV 2.7%（23份）。 RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。 结论 除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。     

天津地区KI和WU多瘤病毒在儿童急性呼吸道感染中的分子流行病学研究

目的了解KI和WU多瘤病毒(KIPy V和WUPy V)与天津地区儿童急性呼吸道感染的关系。方法采用PCR扩增方法对2011年1月至2013年12月收集的3 730份来自天津地区的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行KIPy V和WUPy V基因检测,同时所有标本均用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒。选取部分KIPy V和WUPy V PCR阳性产物进行测序,利用测序序列与已知序列比对并绘制进化树。再从中选取两株KIPy V VP1基因克隆到T载体上,进行序列测定和分析,并将核苷酸序列提交Gen Bank。结果 3 730份标本中,KIPy V阳性检出453份(12.14%),WUPy V阳性检出63份(1.69%)。KIPy V平均感染率在6~7月明显偏高,WUPy V平均感染率在2~3月达到一个小高峰。两种多瘤病毒感染的阳性患儿年龄主要集中在3岁以内。KIPy V和WUPy V与其他7种呼吸道病毒存在混合感染,混合感染率为2.31%(86/3 730);WUPy V和KIPy V混合感染9份。选取的35份KIPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的KIPy V序列的同源性在94%~100%之间;选取的12份WUPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的WUPy V序列的同源性在95%~100%之间。两株KIPy V VP1基因序列已被Gen Bank收录,登录号为KY465925和KY465926。结论天津地区部分儿童的急性呼吸道感染可能与WUPy V和KIPy V感染相关。KIPy V感染多发于夏季,WUPy V感染多发于春季。KIPy V和WUPy V与国内外流行株间差异较小,基因组相对稳定。     

南京地区急性呼吸道感染儿童支原体、衣原体和常见呼吸道病毒病原学分析

目的：了解南京地区急性呼吸道感染（acute respiratory infection, ARI）儿童除细菌外的其他病原微生物感染情况,指导临床诊断和治疗。方法应用荧光定量PCR法检测肺炎支原体（MP）和沙眼衣原体（CT）,直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、甲型和乙型流感病毒（IVA和IVB）、副流感病毒1、2、3型（PIV-1、2、3）、人偏肺病毒（hMPV）。结果1 592例标本中,MP和CT阳性率分别为25.7%、2.4%;总呼吸道病毒阳性率为40.9%,其中RSV最常见,占阳性病毒株的61.3%,其次为PIV-3、hMPV,分别为6.7%、4.9%。病原体的混合感染率为6.7%,混合感染主要发生在1岁以内婴儿,有68例,占混合感染的63.6%。结论病毒感染是南京地区婴幼儿ARI的主要原因,RSV是首要病毒病原,MP也是常见的ARI病原体,1岁以内婴儿混合感染率高。［中国当代儿科杂志,2010,12（6）：450-454］