人脑原发性肿瘤中p53基因PCR—SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤，１例为脑膜瘤，且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

急性白血病患者p53和MGMT基因突变检测

目的：研究p53和MGMT基因突变在急性白血病发病中的意衣以及p53基因突变与MGMT基因突变的关系。方法：应用聚合酶链反应－单莲构象多态性（PCR－SSCP）技术，对36例急性非淋巴细胞白血病（ANLL），26例急性淋巴细胞白血病（ALL）和23例健康对照组骨髓细胞的p53和MGMT基因突变进行了分析。结果：p53基因突变率在ANLL中为16．7％、ALL中为19．2％，MGMT基因突变率在ANLL中为13．9％、ALL中为15．4％；62例急性白血病中有4例为p53和MGMT2个基因同时发生突变；正常对照组均未发生p53和MGMT基因突变。结论：p53和MGMT基因突变在急性白血病发生与发展中起到一定作用，急性白血病中p53基因突变和MGMT基因突变密切相关。     

银染PCR-SSCP法检测52例白血病患者p53基因点突变

目的通过检测白血病患者p53基因点突变,了解其与白血病的发展、治疗及预后的关系。方法用银染PCR-SSCP法检测52例不同类型白血病p53基因第5、6、7、8外显子的点突变。结果在45例急性白血病患者中有5例发生p53基因突变,其中3例对化疗不敏感;6例慢性粒细胞白血病中1例有p53基因突变,此例患者在住院1个月内死亡,1例毛细胞白血病发生p53基因点突变。结论p53基因点突变的检测对指导临床治疗及判断预后有一定价值。     

应用SSCP-PCR技术研究非小细胞肺癌p53基因突变

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) p5 3基因突变与临床病理及预后的关系 ,评价检测 p5 3基因点突变作为基因标记物在判断患者预后中的意义 .方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术 ,检测 31例NSCLC及5例肺良性病变石蜡包埋标本 p5 3基因的点突变 .结果 :肺癌组织 p5 3基因点突变率为 4 8% (15 / 31) ,肺良性病变未检出该基因突变 ,两组相比有显著性差异 .各组织学类型肺癌p5 3基因 5～ 8外显子点突变检出频率为 :鳞状细胞癌 9例(9/ 16 ) ,腺癌 3例 (3/ 10 ) ,肺泡细胞癌 1例 (1/ 3) ,大细胞癌 2例 (2 / 2 ) .肺腺癌组织 p5 3基因点突变率比鳞状细胞癌低 .Ⅲ Ⅳ期肺癌点突变率明显高于Ⅰ期肺癌 (P <0 .0 5 ) ,p5 3基因点突变与临床分期有关 ,在低分化肺癌其突变频率明显高于分化好的肺癌 (高分化和中分化肺癌 ) ,p5 3基因突变率与年龄、性别、肿瘤大小和组织学类型无相关性 .结论 :应用PCR SSCP技术检测 p5 3基因突变能够反映肺癌的进展情况、临床分期及肿瘤分化程度 ,是判断肺癌预后的重要生物学指标 .     

用非同位素PCR－SSCP方法检测p53基因第4外显子多态性

本研究通过对比不同凝胶组成成分及电泳条件，建立了非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法以检测ｐ５３基因第４外显子第７２密码子的多态性。对３５例正常组织ＤＮＡ的研究结果显示，ｐ５３基因这位点的杂合率和纯合率分别为４８．６％（ＣＣＣ／ＣＧＣ），４５．７％（ＣＧＣ／ＣＧＣ）和５．７％（ＣＣＣ／ＣＣＣ）．本法简单、快速，能有效地检测基因多态性，并可进一步应用于对肿瘤细胞ｐ５３基因杂合性缺失的分析。     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

用PCR-SSCP及DNA测序法研究胃癌p53基因突变

目的 探讨p53基因突变与人类胃癌发生的关系。方法 运用PCR、PCR－SSCP结合银染法对25例胃癌组织p53基因第4、第5－6和第7外显子进行突变检测;运用双脱氧链终止法对第7外显子阳性突变标本进行DNA测序。结果 在25例胃癌组织中检出突变5例,突变率为20％;在第7外显子阳性突变标本中发现了18bp的大片段缺失。结论 p53基因突变与人类胃癌的发生具有明显相关性,并且这种突变可能不仅仅局限于点突变,大片段缺失也是p53基因突变方式之一。     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌，分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶ ＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达，结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬     

PCR-SSCP技术检测2型糖尿病患者脂联素基因3号外显子编码区突变

目的观察人脂联素(apM1)基因3号外显子编码区突变情况并探讨其与2型糖尿病的关系.方法选取435例无亲缘关系的中国安徽地区汉族人,其中正常糖耐量(NGT)者150例,2型糖尿病(T2DM)者285例.采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对apM1基因突变进行初筛分析后,对不同带型的标本进行DNA直接测序.结果①SSCP分析共发现3种异常带型,测序后知为H142P、R221S及H241P3种杂合突变.②apM1基因H142P及R221S突变在T2DM组与NGT组间频率差异无统计学意义(P>0.05),H 241 P突变在T 2 DM组中的频率明显高于NGT组(P=0.038).结论 apM1基因3号外显子编码区存在3种突变,其中H241P突变是2型糖尿病的危险因素.     

PCR－SSCP银染法检测胃和结、直肠癌APC基因突变

目的：探讨国人胃癌和结、直肠癌的ＡＰＣ基因突变情况。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术，分析了１４例胃癌和１４例散发性结、直肠癌的ＡＰＣ基因第１５外显子第６段和第７段的突变情况。结果：１４份结直肠癌原发灶样品中有１份ＡＰＣ基因第１５外显子第７段出现异常电泳条带，而１４份胃癌及其６份胃癌转移性淋巴结样品中却未观察到ＡＰＣ基因的异常电泳条带。结论：本组胃癌及淋巴结转移灶中未发现ＡＰＣ基因突变，而结、直肠癌的ＡＰＣ基因突变率为７％。     

p53基因PCR-SSCP银染检查痰标本诊断肺癌

目的　了解痰标本检测肺癌患者p53基因突变的可行性及其对临床诊断的意义。方法　采用改良Saccomanno法浓缩及保存痰标本,部分涂片找癌细胞,其余标本进行痰细胞DNA提取及多聚酶链反应(PCR)单链构象多态性分析(SSCP)。共检测22例患者,其中确诊肺癌患者15例(涂片或活检找到癌细胞),临床高度怀疑肺癌患者5例(涂片或活检均阴性),2例非肿瘤患者(1例为结节病,另1为右中叶肺炎),同时采用正常肺组织标本作对照。结果　p53外显子6、7、8的PCRSSCP银染阳性率在肺癌组及癌疑组分别为6/15(40%)和2/5(40%)。非肿瘤患者痰标本及正常肺组织均未发现p53基因异常。结论　改良Saccomanno法不仅能贮存、浓缩痰细胞,而且方便痰标本DNA提取;PCRSSCP银染方法可用来检测肺癌患者痰细胞的p53基因突变。     

利用PCR-SSCP技术检测中国汉族人PKD2基因的突变

目的:检测中国汉族人Ⅱ型多囊肾病基因PKD2的突变.方法:筛选临床确诊的26个中国汉族家系中31例常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)患者,提取外周血白细胞DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),取异常条带标本进行核苷酸序列测定,判别PKD2外显子突变位置及类型.结果:以20例健康志愿者为对照,从31例患者中成功检测出2种突变.1种为无义突变,系PKD2外显子13的第2407位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,形成1个终止密码子;另1种为错义突变,系PKD2外显子4的第964位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,使编码氨基酸由精氨酸变为色氨酸.结论:本研究建立了PCR-SSCP直接检测我国汉族人PKD2突变方法,检测出2种基因突变,为今后开展ADPKD患者囊肿前诊断提供了实验基础.     

应用PCR-SSCP方法检测肺癌、肠癌中p53基因突变

目的　研究ＰＣＲ－ ＳＳＣＰ 检测肺癌、肠癌中ｐ５３ 基因突变的方法改进及突变率。方法　用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,银染技术检测４ 例肺癌和７ 例大肠癌组织标本中ｐ５３ 基因外显子５ ～８ 。结果　肺癌ｐ５３ 基因突变率为７５％ （３／４ 例）,肠癌ｐ５３ 基因突变率为４２．９％ （３／７ 例） 。结论　ｐ５３ 基因突变与肺癌、肠癌的发生密切相关,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术简便快速、灵敏安全的基因突变检测方法,可应用于肿瘤的临床基因诊断。     

应用聚合酶链单链构象多态技术检测葡萄糖6磷酸脱氢酶基因突变

为了探索一种快速、灵敏及准确的检测红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因点突变方法，我们采用单链构象多态技术（ＳＳＣＰ），对２０例Ｇ６ＰＤ变异型基因外显子２进行分析。发现有４例患者双链ＤＮＡ中有一条链出现泳动变位，明显慢于正常人及其他患者，用ＰＣＲ直接侧序表明在ｃＤＮＡ第９５位核苷酸发生碱基置换（Ｔ→Ｃ）。结果说明ＳＳＣＰ技术检测点突变具有广泛的应用前景，比现行的点突变检测方法简便易行。作者还对ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的优点和所检测突变的特点进行了探讨。     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测瘢痕疙瘩成纤维细胞p53基因突变

目的：分析瘢痕疙瘩成纤维细胞p53基因突变高发区第4～8外显子的突变及其意义。方法：取手术切除的瘢痕疙瘩和非增生瘢痕各12例，分别采用相应正常皮肤对照，体外培养成纤维细胞，采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测p53基因的突变情况。结果：12例瘢痕疙瘩成纤维细胞标本中有9例p53基因外显子4、5、6、7出现突变，非增生瘢痕标本和正常皮肤标本均未检出突变。结论：p53基因突变是瘢痕疙瘩形成和发展的重要因素之一。     

下咽癌中P53基因点突变的PCR—SSCP检测

为探讨下咽癌中P~(53)基因突变的规律与特征,采用PCR—SSCP方法检测40例下咽癌新鲜手术标本组织,分析P~(53)基因突变与下咽癌有关病理指标的关系。40例下咽癌有28例(70％)出现P~53基因第5～8外显子突变。P~(53)基因突变与下咽癌TNM分期、病理分级及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结果显示P~(53)基因突变与下咽癌的生物学行为有关且具有预后价值。     

应用寡核苷酸芯片检测白血病患者P53和K-ras基因点突变

目的 研究白血病病例中P53、K—ras基因点突变情况。方法 采用寡核苷酸芯片技术对临床收集的白血病标本进行P53、K—ras突变热点检测。结果 共检测出P53突变8例、K—RAS突变4例。其中P53突变包括ANLL—M3 2例，M2 3例，ANLL—M5、ALL、CML各1例。K—ras突变包括CML3例，ALL1例。结论 P53、K—ras突变在白血病发生、发展中起到一定作用。应用寡核苷酸芯片进行P53、K—ras点突变检测，优缺点并存，具有一定临床实用价值。