Ghrelin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响及相关机制探讨

目的：探讨ghrelin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响及作用机制。方法：体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法检测不同浓度ghrelin对其增殖活力的影响,半定量RT-PCR检测ghrelin对c-myc和胸苷激酶mRNA表达水平的影响;同时在利用胰岛素或ghrelin诱导分化的不同时段,通过油红O染色测定细胞分化程度,半定量RT-PCR检测过氧化物体增殖剂活化受体γ（PPARγ）、CAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）mRNA的表达。结果：10-7~10-15 mol/L ghrelin作用24 h明显促进前脂肪细胞增殖,ghrelin组c-myc和胸苷激酶mRNA表达水平明显升高,与对照组相比差异均有显著性意义（P<0.05）。Ghrelin干预后,可诱导前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的形态转变,但诱导分化率仍少于胰岛素;同时其PPARγ和C/EBPα mRNA表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,ghrelin组和胰岛素组PPARγ和C/EBPα mRNA表达量随着分化时间的延长而增加,分化8 d与2 d相比,差异均有显著性意义（P<0.01）。结论：Ghrelin明显促进3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化。Ghrelin可能通过增加c-myc的含量,进而引起胸苷激酶的活化,从而导致细胞周期的激活,促进细胞增殖;同时ghrelin可能通过增加PPAR-γ、C/EBP-α mRNA的表达,促进细胞分化,从而提高脂肪细胞对胰岛素的敏感性。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：69-73］     

肥胖相关新基因NYGGF4对3T3-L1脂肪前体细胞的增殖调节作用

目的 观察NYGGF4基因过表达对3T3-L1脂肪前体细胞增殖的影响,探讨该基因在肥胖发生发展中的作用.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增NYGGF4开放阅读框(ORF)的全长,通过双酶切连接法构建NYGGF4-pcDNA3.1真核表达载体.采用脂体法转染3T3-L1前体脂肪细胞,以pcDNA3.1空载和未转染细胞为对照.遗传霉素(G418)压力筛选稳定转染细胞株,PCR鉴定转染细胞的NYGGF4的mRNA水平.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测稳定转染细胞株连续7 d的生长状态,以转染空载和未转染正常3T3-L1为对照,绘制生长曲线.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.稳定转染细胞株有NYGGF4基因的表达,而pcDNA3.1空载未见人源性NYGGF4的表达;2.转染NYGGF4基因的3T3-L1细胞增殖速度明显较未转染和转染空载的3T3-L1细胞加快.结论 新基因NYGGF4可明显促进3T3-L1脂肪前体细胞的增殖,可能影响肥胖的发生发展.     

一氧化碳对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨一氧化碳（CO）对缺氧性大鼠肺血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将大鼠随机分为4组：常氧对照组（7只）、低氧组（6只）、低氧＋锌原卟啉组（低氧＋ZnPP组）（6只）及低氧＋低浓度一氧化碳组（低氧＋低浓度CO组）（5只）。应用增殖细胞核抗原（PCNA）单克隆抗体、Fas多克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法（TUNEL）对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行增殖与凋亡定位及半定量分析。结果 1．低氧＋低浓度CO组肺动脉平滑肌细胞增殖指数（PI）明显低于低氧组和低氧＋ZnPP组（P＜0．01）,低氧＋ZnPP组PI高于低氧组（P＜0．01）;2．TUNEL检测低氧＋低浓度CO组凋亡指数（AI）明显高于其余三组（P＜0．01）;3．低氧＋低浓度CO组Fas表达高于其余三组（P＜0．01）;4．低氧＋低浓度CO组PI／AI与常氧对照组PI／AI相近约等于1。结论 CO对缺氧大鼠肺血管平滑肌细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

虎杖苷对THP-1细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制研究北大核心CSCD

目的探讨虎杖苷对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖及凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同梯度浓度的虎杖苷处理THP-1细胞24 h、48 h,CCK-8法检测细胞增殖活力,并计算半数抑制浓度。取对数生长期的THP-1细胞,分为虎杖苷处理组(处理浓度为半数抑制浓度)和空白对照组(细胞中未施加虎杖苷溶液处理),培养48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白的表达。结果虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,48 h的半数抑制浓度为1800μmol/L。经1800μmol/L的虎杖苷溶液作用48 h后,THP-1细胞的凋亡率较空白对照组显著增加(P<0.05);细胞周期出现G0/G1期至S期的阻滞,表现为G0/G1期的细胞比例较空白对照组明显上升,S期的细胞比例较空白对照组显著下降(P<0.05);PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制表达有关。     

术前介入治疗对肾母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨介入治疗 (动脉化疗栓塞 )对肾母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法　观察术前介入组 17例和单纯手术组 2 2例肾母细胞瘤标本的分裂指数和凋亡指数的差异 ,细胞凋亡的检测采用DNA转移酶dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)。结果　术前介入组肿瘤细胞平均分裂指数为 0 .4 2± 0 .2 1,明显低于单纯手术组 2 .4 0± 1.0 1(P <0 .0 1) ;术前介入组肿瘤细胞平均凋亡指数为5 0 .6± 4 8.1,明显高于单纯手术组 19.7± 2 .82 (P <0 .0 1)。结论　抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡是肾母细胞瘤术前介入治疗产生疗效的重要机制。     

重组人白细胞介素6对SW872脂肪细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨白细胞介素 6(IL 6)对SW872脂肪细胞增殖及凋亡的影响。方法　体外培养SW872脂肪细胞 ,0 .6mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化 ,化学比色法检测细胞内三酰甘油的总量 ;油红O染色观察细胞内脂肪的聚积 ;MTT法检测不同浓度IL 6对SW872前脂肪细胞增殖活力的影响 ;流式细胞仪分析IL 6对SW872成熟脂肪细胞凋亡的影响。结果　 0 .6mmol/L油酸刺激 72h ,几乎 10 0 %SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞 ,细胞内三酰甘油的含量明显增加 ,油红O染色胞浆内可见丰富的脂滴 ;5 μg/LIL 6对SW872前脂肪细胞的增殖没有影响 ,10～ 5 0 μg/LIL 6明显抑制SW872前脂肪细胞的增殖 ;IL 6对SW872成熟脂肪细胞的凋亡无影响。结论　IL 6能明显抑制SW872前脂肪细胞的增殖 ,其抑制效应呈剂量依赖性 ,表明IL 6可能与肥胖有关 ,高剂量IL 6可降低肥胖的程度。     

p27KIP1基因表达对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及意义

细胞增殖失控或 /和凋亡受抑与肿瘤的发生发展关系密切。近年来发现 ,细胞周期素 细胞周期素依赖激酶 (ｃｙ ｃｌｉｎ ＣＤＫ)在细胞增殖周期中发挥正性调控作用 ,增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)具有参与和促进ＤＮＡ合成之功能 ,细胞周期素依赖激酶抑制因子 (ＣＫＩ) ｐ2 7ＫＩＰ1则能抑制它们的活性 ,进而减慢或阻止ＤＮＡ合成及细胞周期Ｇ1→Ｓ的演进。此外 ,ｐ2 7ＫＩＰ1 尚有诱导细胞凋亡之功能。本文通过检测神经母细胞瘤 (ＮＢ)中 ｐ2 7ＫＩＰ1 、ＰＣＮＡ、ｃｙｃｌｉｎＤ1基因表达和细胞凋亡发生情况 ,探讨 ｐ2 7ＫＩＰ1 对ＮＢ细胞增…     

3T3-L1前脂肪细胞中烟碱样乙酰胆碱受体α7对脂肪因子肾上腺髓质素mRNA表达的影响

目的研究3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有胆碱能系统物质mRNA的表达,及烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)α7功能状态对脂肪因子肾上腺髓质素(AM)mRNA表达的影响,初步阐明脂肪细胞中非神经胆碱能系统与肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢性疾病的关系。方法以3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和nAChR α7三种胆碱能系统主要组分的mRNA表达;对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞分别予不同水平的广谱nAChR激动剂尼古丁、特异性nAChR α7激动剂氯化胆碱及特异性nAChRα7拮抗剂甲基牛扁亭碱处理12、24、36h,并设立相应处理时间的空白对照组,应用RT-PCR方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA的表达。结果1.RT-PCR方法证实在3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中均有AChE、ChAT、AChR α7的mRNA表达。2.给予不同剂量的尼古丁和氯化胆碱,干预作用不同时间,3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达水平与相应的空白对照组比较均呈剂量依赖性升高(P<0.05或P<0.01),但随干预作用时间延长,这种剂量依赖性上调效应减弱。二种激动剂以氯化胆碱的剂量依赖性上调效应更明显。而相同剂量下不同作用时间的处理组间无统计学差异(Pa>0.05)。3.拮抗剂甲基牛扁亭碱对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达则呈明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中存在非神经元型胆碱能系统,其中nAChR α7调节脂肪因子AM mRNA的表达,脂肪组织中非神经元型胆碱能系统的重要组分nAChR α7可能在肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢相关疾病的病理生理过程中发挥重要作用。     

U937巨噬细胞对SW872脂肪细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨U937巨噬细胞与SW872脂肪细胞混合培养状态下对脂肪细胞增殖及凋亡的影响,及巨噬细胞在脂肪细胞胰岛素抵抗形成中的意义.方法 以SW872前脂肪细胞,0.6、1.2 mmol/L油酸诱导分化成熟SW872脂肪细胞为研究对象,分别与U937巨噬细胞混合培养,采用酶联免疫吸附法测定各组混合培养前后TNF-α、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)分泌水平的变化,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测对前脂肪细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测各组脂肪细胞在不同炎性反应状态下对细胞凋亡的影响.采用配对t检验对数据进行分析处理.结果 随着油酸诱导水平的增加及SW872前脂肪细胞分化成熟,TNF-α、MCP-1分泌水平均明显升高,脂肪细胞凋亡率亦逐渐增加(Pa<0.05);在与U937巨噬细胞混合培养后,TNF-α、MCP-1分泌水平进一步升高,但炎性反应状态改变对各脂肪细胞组混合培养前后的凋亡率无明显影响(Pa>0.05);U937巨噬细胞的混合培养对SW872前脂肪细胞的增殖率有明显抑制作用(P<0.05).结论 油酸诱导SW872前脂肪细胞成熟分化,在高脂负荷下,炎性反应因子分泌水平急剧升高,同时脂肪细胞凋亡率增加.炎性反应负荷改变对脂肪细胞凋亡率无明显影响.巨噬细胞的趋化加重了其炎性反应状态,并抑制了前脂肪细胞的增殖.     

内源性一氧化碳对培养的肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的调节

目的 探讨内源性一氧化碳（CO）对低氧性肺血管平滑肌细胞（PASMC）增殖与凋亡的影响及机制。方法 体外培养Wistar大鼠PASMC,进行低氧并予以血红素氧合酶抑制剂卟啉锌－9（zinc protoporphyrin IX,ZnPP-9)处理,分为常氧12h组（N1组）、常氧24h组（N2组）、低氧12h组（H1组）、低氧24h组（H2组）、低氧12h ZnPP组（H1＋ZnPP组）、低氧24h ZnPP组（H2＋ZnPP组）,采用流式细胞术、免疫细胞化学方法检测PASMC增殖与凋亡情况。结果 1．碳氧血红蛋白（HbCO)检测：采用双波长法测定细胞培养液中HbCO的吸光度,用以代替培养液中CO的相对含量。低氧12h培养液中HbCO较常氧时显著增高（P＜0．01）,至24h恢复至常氧水平（P＞0．05）;而低氧同时进行干预,H1＋ZnPP及H2＋ZnPP两组HbCO水平均下降,且明显低于单纯低氧组（P＜0．01）,两组与常氧组相比亦有差异（P＜0．001）。2．流式细胞仪检测PASMC增殖指数（PI）与凋亡指数（AI）：H1组PI较N1组下降（P＜0．01）,H2组则较N2组增高（P＜0．001）;H1＋ZnPP组较H1组PI显著增高（P＜0．001）,H2＋ZnPP组与H2组比则无明显变化（P＞0．05）;H1组AI低于H2组（P＜0．01）,H1＋ZnPP组AI高于H1组（P＜0．001）,H2＋ZnPP组则低于H2组（P＜0．001）。3．PCNA免疫细胞化学染色,H1组及H2组PASMC细胞核阳性反应颗粒分别按N1及N2组明显增加（P分别＜0．01及P＜0．001）,H1＋ZnPP组及H2＋ZnPP组分别较H1及H2组增强（P＜0．01）。4．Caspase 3免疫细胞化学：H2组与H1组比胞浆着色增强（P＜0．05）,ZnPP处理12h及24h分别较H1及H2减弱（P＜0．05）。5．NF－κK免疫细胞化学：H1及H2组核染色分别较N1及N2组增强（P＜0．001）,而H1＋ZnPP组及H2＋ZnPP组则又分别较H1、H2组阳性核表达增多（P＜0．01）。结论 1．低氧12h内源性CO对PASMC增殖抑制作用显著,对凋亡可能无直接影响;低氧24h CO促进PASMC凋亡作用明显,而对增殖的影响不显著。2．NF－κB可能参与了内源性CO抑制PASMC增殖的调控机制。     

功能性消化不良患儿血浆ghrelin变化及其与胃排空的关系

目的 通过研究功能性消化不良(FD)患儿血浆ghrelin水平变化及其与FD患儿胃排空的相关性,探讨shrelin水平与FD发病及其胃肠动力改变的关系.方法 测定35例FD患儿和15例健康体检儿童空腹及餐后2 h血浆ghrelin水平;通过核素胃排空法测定FD患儿胃2 h排空率及胃半排空时间(GET1/2).比较FD组与正常对照组ghrelin水平差异,分析ghrelin水平与FD患儿胃排空的相关性.结果 FD组与正常对照组空腹血浆ghrelin水平比较差异有统计学意义(P<0.05),餐后比较差异无统计学意义(P>0.05);FD组空腹与餐后血浆ghrelin水平比较差异无统计学意义(P>0.05),正常对照组空腹与餐后血浆ghrelin水平比较差异有统计学意义(P<0.05).FD患儿shrelin水平与胃2 h排空率及GET1/2均有明显相关性(P<0.05).结论 空腹血浆ghrelin水平下降与FD患儿胃排空功能障碍有一定相关性,其可能是FD发病的因素之一.     

PRNP基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的 探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用.方法 体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各时段细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段3T3-L1细胞PRNP基因表达水平;同时在成功诱导3T3-L1细胞分化成熟的基础上,应用不同水平TNF-α(0.1、1.0、10.0 μg/L)干预分化后的成熟脂肪细胞(第10天),收集TNF-α刺激前(0 h)及刺激后0.5、2.0、6.0、12.0、24.0 h的脂肪细胞,通过RT-PCR测定TNF-α干预前后不同时间点脂肪细胞中PRNP基因表达水平.采用Excel软件进行统计学分析.结果 1.PRNP基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,至分化第10天其表达水平最高.PRNP基因表达水平除在诱导分化前(第-1天)至第4天、第2～5天、第6～10天时段内无显著性差异外(Pa＞0.05),其余各时段间表达水平均有显著性差异(Pa＜0.05);2.在分化前的3T3-L1脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,不同水平TNF-α(0.1、1.0、10.0 μg/L)均能在短时间内明显抑制PRNP基因mRNA的表达,且呈时间依赖性.结论 PRNP基因可能参与3T3-L1脂肪细胞分化及脂质积聚过程;不同水平重组TNF-α对成熟脂肪细胞的PRNP基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈时间依赖性.     

The influence of physical activity on ghrelin and IGF‐1/IGFBP‐3 levels in children and adolescents with type 1 diabetes mellitus

Huber J, Fröhlich‐Reiterer EE, Sudi K, Suppan E, Weinhandl G, Jasser‐Nitsche H, Aigner R, Borkenstein MH. The influence of physical activity on ghrelin and IGF‐1/IGFBP‐3 levels in children and adolescents with type 1 diabetes mellitus. Objectives: The aim of the study was to determine the influence of regular physical activity on ghrelin and IGF‐1/IGFBP‐3 levels during a diabetes camp. Methods: Twenty‐eight children and adolescents (14 boys; mean age 12.1 yr) with type 1 diabetes mellitus (T1DM, mean duration of diabetes 4.8 yr) attending a 2‐wk diabetes camp that features increased regular physical activities have been studied. Serum levels of ghrelin (total and acylated), growth hormone (GH), insulin‐like growth factor‐1 (IGF‐1), insulin‐like growth factor‐bindng protein‐3 (IGFBP‐3) and insulin were measured in fasting state on day 1 and day 14. Improvement of metabolic control was documented by haemoglobin A1c (HbA1c). Glucose levels and insulin doses were determined daily. Results: Mean insulin dosage decreased from 0.87 to 0.78 U/kg/d, mean HbA1c levels decreased from 8.6 to 8.3%, but the changes were not statistical. There was a significant decline in total ghrelin. IGFBP‐3 and IGF‐1 decreased also significantly. Total basal ghrelin was inversely related to the change in IGFBP‐3. Conclusions: We hypothesize an association between ghrelin and metabolic control in T1DM. Higher ghrelin levels might be associated with poor metabolic control. The dynamic of IGFBP‐3 levels appears to be under the influence of basal ghrelin concentrations in T1DM.     

鞘氨醇激酶基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中的表达水平

目的 探讨鞘氨醇激酶基因(SPHK）在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化。方法采用细胞培养和RT-PCR技术检测细胞分化不同阶段脂肪细胞中SPHK基因表达水平。结果1．SPHK基因在3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化初期表达呈明显上调趋势；2．随着脂肪前体细胞分化成熟，该基因表达水平明显低于诱导分化初期的基因表达水平。结论 SPHK基因可能参与脂肪细胞分化的调控过程，与肥胖发生有一定联系。     

3T3-L1脂肪细胞分化中促酰化蛋白对脂肪因子肾上腺髓质素mRNA表达的影响

目的 研究3T3-L1脂肪细胞分化过程中脂肪因子肾上腺髓质索(AM)mRNA表达变化及促酰化蛋白(ASP)对细胞分化过程中AM mRNA表达的影响,探讨ASP在脂肪代谢中的作用.方法 1.应用反转录(RT) -PCR法检测诱导分化4个时点(0d、1d、2d、3d)的3T3-L1脂肪细胞中AM mRNA的表达水平;2.对诱导分化过程中不同时间点(0h、12 h、24h、48 h)的3T3-L1脂肪细胞给予适合浓度的ASP处理,并设立相应空白对照,应用RT-PCR法检测细胞中AM mRNA的表达.结果 (1)脂肪细胞诱导分化各时间点(0d、1d、2d、3 d)AM mRNA均明显表达,且表达水平呈时间依赖性递减;(2)0 h、12 h和24h3个时点ASP组细胞中AMmRNA表达水平较空白对照组均显著下降(P＜0.05,0.01),而48 h时间点ASP组细胞中AM mRNA表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ASP促成脂作用可能与其调节脂肪细胞分化过程中脂肪因子AM mRNA表达密切相关.     

反复热性惊厥对大鼠学习记忆的影响及其机制

目的 观察热性惊厥对学习记忆的影响及其与海马苔藓纤维发芽的关系。方法 采用热水浴诱导惊厥模型，诱导生后22dSD大鼠发生15次热性惊厥。采用Morris水迷宫方法检测大鼠惊厥后近期和远期（3个月后）空间学习记忆能力；采用Timm染色观察海马颗粒细胞苔藓纤维发芽现象。结果 热性惊厥组大鼠在惊厥后早期和3个月后的寻找平台潜伏期均较对照对照组明显延长。Timm染色显示惊厥15次大鼠海马区有明显的苔藓纤维发芽现象，持续至3个月后。结论 反复热性惊厥可造成学习记忆损伤，海马苔藓纤维发芽可能是其发生的潜在基础。