乙型肝炎病毒表面大蛋白与HBV DNA检测的对比研究

目的 探讨检测乙型肝炎病毒表面大蛋白（LHBs）用于临床乙型肝炎诊断的实验价值及与乙肝病毒DNA定量的相关性。方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）和荧光定量PCR法对600例HBeAg阳性血清标本进行LHBs及HBV DNA平行检测。结果 ①在600例HBsAg阳性血清中HBV DNA阳性率为76．17％（457／600），LHBs的阳性率为77．33％（464／600），二者无显著差异（Х^2=0．696，P〉0．05）；②300份HBeAg阳性血清中，HBV DNA、LHBs阳性率分别为95．0％（285／300）、96．0％（288／300）；300份HBeAg阴性血清中，HBV DNA、IMBs阳性率分别为57．33％（172／300）、58．67％（176／300），二者差异均无统计学意义（Х^2=0．725，P〉0．05；Х^2=0．253，P〉0．05）。③LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关性，相关系数r=0．948。结论 定量检测LHBs有助于了解乙型肝炎病毒复制情况。     

定量PCR检测外周血EB病毒DNA在诊断鼻咽癌中的Meta分析

目的：系统评价定量PCR检测外周血EBV-DNA在诊断鼻咽癌中的作用。方法：检索国内外各数据库,用RevMan软件进行Meta分析。结果：NPC患者外周血EBV-DNA阳性率高于正常人,定量PCR诊断NPC的敏感性和特异性高于EBV-VCA-IgA检测,检测血清或血浆DNA的敏感性高于白细胞,比较均有统计学意义。结论：定量PCR检测外周血EBV DNA在诊断鼻咽癌中具有重要意义。     

EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌临床分期中的诊断价值

目的探讨EB病毒(EBV)DNA定量检测在鼻咽癌患者不同临床分期中的诊断价值。方法选取广东省汕头大学医学院附属粤北人民医院2013年3月至2015年12月500例病理诊断为鼻咽癌的患者作为研究组,同时选取200例健康体检人群作为对照组。2组同时采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测血浆EBV-DNA的表达量,并对2组之间及临床TNM分期I、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ的结果进行比较;再将其分别与酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测的血清EBV病毒壳抗原免疫球蛋白A(VCA-IgA)检测结果进行比较。结果荧光定量PCR方法检测EBV-DNA表达量中,研究组阳性率75.00%,对照组阳性率9.00%,两者差异有统计学意义(P0.05)。鼻咽癌患者血浆EBV-DNA拷贝数与临床TNM分期呈正相关,差异有统计学意义(P0.05);鼻咽癌分期越晚,血浆EBV-DNA拷贝数越高。结论血浆EBV-DNA水平与鼻咽癌患者临床TNM分期有显著相关性,可作为评估鼻咽癌患者临床分期的1种辅助性分子生物指标,具有较高应用价值。     

儿童慢性活动性EB病毒感染的相关血液疾病特征

本研究通过4个病例分析儿童慢性活动性EB病毒（CAEBV）感染相关的血液学病征。总结了临床特点，应用显微镜观察骨髓涂片的细胞形态，流式细胞仪分析淋巴细胞亚群，免疫组织化学检测肝穿刺组织，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆EBV抗体，实时定量PCR检测血浆EBV—DNA，原位杂交检测外周血单个核细胞（PBMNCs）EBV编码小RNA-1（EBER-1）。结果显示：4例患儿有持续或反复的发热、肝脾肿大、肝功能异常、贫血、血小板减少症、全身炎症反应；骨髓象表现增生减低、成熟障碍、病态造血和噬血细胞增多；4例患者均有CD8^＋T淋巴细胞增多，其中1例进展为T细胞淋巴瘤；2例EBV—VCA-IgG滴度≥1：5120，1例血浆EBV-DNA拷贝数为3．26×10^3／ml，1例PBMNC的EBER1阳性率为1．7％；最后，4例患者均被诊断为CAEBV。结论：免疫相关性血细胞减少、巨噬细胞活化综合征和淋巴细胞增殖性疾病等是本研究中4例CAEBV患儿的血液学病征。     

鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EB病毒DNA载量与临床分期的关系研究

目的检测鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EB病毒DNA载量．并分析其与鼻咽癌临床分期的关系。方法选取2012年1月至2013年1月我院肿瘤科收治住院的87例鼻咽癌患者．采用实时荧光定量PCR法检测外周血淋巴细胞EB病毒DNA含量;统计学分析其与患者临床分期的关系。结果鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EB病毒DNA检出率为82．76％（72／87）,EB病毒DNA拷贝数的中位数为7．58×106拷贝数／ml,I、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者每毫升DNA拷贝数分别为f4．25±1．141x10^3、（4．56±0．68）×10^4、（7．88±1．65）×10^5和（8．09±1．65）x106;EB病毒DNA载量随着疾病临床分期的增加呈现逐步升高的趋势。且差异显著（P〈0．05）。结论鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EB病毒DNA载量与患者临床分期相关．提示EB病毒DNA载量与鼻咽癌病情进展关系密切．在临床上可作为鼻咽癌患者病情监测及判断疗效的一种有效手段。     

全血中EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌患者预后中的临床意义

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者全血中EB病毒(EBV)DNA定量检测对NPC的治疗及预后的评估价值。方法收集2015年1-12月在本院初诊的NPC患者168例(初诊NPC组),NPC放疗患者142例(NPC放疗组),NPC伴转移患者28例(NPC伴转移组),以及NPC治愈后复查患者86例,分别采集全血标本,采用实时荧光定量PCR方法检测标本中EBV DNA含量,计算各组EBV阳性率及平均拷贝数,并分析NPC患病率与EBV感染率之间的关系,比较各组间EBV DNA拷贝数对数之间的差异。结果各组EBV DNA阳性检出率分别为初诊NPC组89.3%(150/168),NPC放疗组55.0%(78/142),NPC伴转移组100.0%(28/28),前3组明显高于NPC治愈后复查组6.9%(6/86);另外,各组EBV DNA平均拷贝数分别是初诊NPC组3.52×104,NPC放疗组1.12×102,NPC伴转移组8.68×104,NPC治愈后复查组2.21×10。结论 EBV DNA检测不仅是诊断NPC的一个重要因素,而且是评估患者治疗效果,疾病进展和预后的重要因素。     

降钙素原(PCT),hs-CRP及血培养在新生儿败血症诊断中的应用价值

目的探讨血清降钙素原（PCT）、超敏C-反应蛋白（hS-CRP）及血培养在新生儿败血症确定诊断中的应用价值。方法采用免疫色谱法、免疫比浊法、血培养分别检测93例临床诊断为新生儿败血症血液中的PCT,hs—CRP,细菌阳性率。结果PCT阳性率95．69％（正常参考值〈0．5ng／m1）。hs—CRP阳性率91．4％（正常参考值0～3mg／L）,血培养阳性率60．22％。PCT阳性率高于血培养阳性率（Х^2=31．03,P〈0．05）,hs-CRP阳性率高于血培养阳性率（Х^2=25．29,P〈0．05）,PCT阳性卒与hs—CRP阳性率比较差畀无统计学意义（Х^2=1．5,P〉0．05）。结论血清PCT,hs—CRP可作为新生儿败血症确定诊断的检测指标,都具有比血培养更高的诊断价值,在做血培养的同时,应尽早开展PCT和hs—CRP检测。     

不同样本类型对EBV DNA检测结果的影响

目的探讨不同样本类型[外周血单个核细胞(PBMC)和血浆]对EB病毒(EBV)DNA检测结果的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)同时检测2 694例不同疾病患者的PBMC及血浆中的EBV DNA,分析不同疾病患者不同样本类型之间EBV DNA阳性率的差异。结果在2 694例检测EBV DNA的患者中,PBMC和血浆均阳性的有131例(4.86%),血浆阴性而PBMC阳性的有1 045例(38.79%),血浆阳性而PBMC阴性的有3例(0.11%)。一致性检验结果显示,2种样本检测结果的一致性差(Kappa0.4)。84例鼻咽癌患者中有24例(28.57%)PBMC EBV DNA阳性,血浆EBV DNA均为阴性。119例霍奇金淋巴瘤患者中有45例(37.82%)PBMC EBV DNA阳性,有39例(32.77%)血浆EBV DNA阴性而PBMC EBV DNA阳性。466例非霍奇金淋巴瘤患者中有193例(41.42%)PBMC EBV DNA阳性,有169例(36.27%)血浆EBV DNA阴性而PBMC EBV DNA阳性。不同疾病患者PBMC EBV DNA拷贝数均高于血浆(P0.001)。结论 PBMC EBV DNA阳性率及拷贝数均高于血浆,建议结合疾病类型选用合适的样本类型。     

HBV—DNA检出情况与乙肝五项结果之间的相关性研究

[目的]探讨HBV—DNA的检测结果与乙肝两对半结果之间的相关性。[方法]运用荧光定量PCR法检测225例疑似乙肝患者血清中的HBV—DNA含量,同时采用ELISA法检测乙肝两对半标志物,并对结果进行相关性分析。[结果]HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组（大三阳组）患者血清中HBVDNA的阳性率为85％（51／60）,平均拷贝数为2．24×10^7 copies／mt;HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）组（小三阳组）患者血清中HBVDNA的阳性率为31％（31／98）,平均拷贝数为3．86×10^5copies／ml;HBsAg（＋）HBcAb（＋）组患者血清中HBVDNA的阳性率为38％（5／13）,平均拷贝数为6．93×10^5copies／ml。[结论]大三阳组和小三阳组阳性率相比差异有统计学意义（x^2=42．458,P〈0．005）;大三阳组和HBsAg（＋）HBcAb（＋）组阳性率相比差异有统计学意义（x^2=12．954,P〈0．005）;HBVDNA病毒含量检测更能准确反映患者HBV感染情况,因此在检测中应该联合使用两种方法,提高检测的准确性,指导临床对患者的病情进行诊断、指导治疗和观察疗效。     

HBsAg阳性患者乙型肝炎病毒表面大蛋白的检测及其意义

目的探讨检测乙型肝炎病毒表面大蛋白（LHBs）用于反映HBsAg阳性患者体内乙型肝炎病毒复制的临床意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）和荧光定量PCR法对1066例HBsAg阳性血清标本进行LHBs及HBV DNA检测。结果①在1066例HBsAg阳性血清中HBV DNA阳性率为63．23％（674／1066），LHBs的阳性率为66．42％（708／1066），二者比较无显著性差异（x^2=2．240，P〉0．05），两者总体符合率为91．93％；②不同HBV—M模式的HBV—DNA与LHBs检出结果均无显著性差异（P〉0．05）。③LHBs含量与HBVDNA拷贝数呈正相关（r=0．927，P〈0．001）。结论血清中LHBs含量与HBV—DNA的拷贝数具有较好的相关性，LHBs能够反映HBV的复制情况。     

荧光定量聚合酶链反应法检测咽拭子EBV—DNA在早期诊断EBV感染中的作用

目的 探讨咽拭子荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测非洲淋巴细胞瘤病毒脱氧核糖核（EBV—DNA）在早期诊断EBV感染中的应用价值。方法对于疑诊EBV感染的患儿在疾病初期分别采用咽拭子PCR法检测EBV—DNA,同时用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测静脉血EBV—VCA—IgM和（或）IgG,对于前者阳性而后者阴性的病例在1周后复查EBV—VCAIgM和IgG,比较两者在早期诊断EBV感染中的价值。同期检测健康儿童50例作为对照组。结果①共检测疑诊病例985例,其中EBV—DNA阳性344例,阳性率34．9％,EBV—VCA—IgM和（或）IgG阳性164例,阳性率16．6％;健康对照组检测50例,仅1例EBVDNA阳性,所有病例EBV—VCA—IgM和（或）IgG均阴性。②在纳入研究病例中,诊断为传染性单核细胞增多症者38例,其中EBV—DNA37例阳性、EBV—VCAIgM和（或）IgG27例阳性（P〈0．05）。诊断为非典型EBV感染的312例,其中EBVDNA阳性307例,阳性率98．4％,EBV—VCA—IgM和（或）IgG阳性137例,阳性率43．9％（P〈0．01）。结论咽拭子PCR法检测EBV—DNA敏感度高,特异度强,且取材简单,方法无创,家长易于接受,与检测EBV-VCA—IgM、IgG相比,在早期诊断EBV感染性疾病,尤其是非典型EBV感染很有应用价值。     

乙型肝炎病毒DNA与"乙肝两对半"模式关系的临床研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA与＂乙肝两对半＂模式的关系.方法 选择240例乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分别采用酶联免疫吸附测定（ELISA）及荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测＂乙肝两对半＂及HBV-DNA,并对二者的相关性进行分析.结果 不同＂乙肝两对半＂模式的患者HBV-DNA阳性率及含量不同,差异均有统计学意义（P〈0.05）.HBsAg（阳性）、HBeAg（阳性）和HBcAb（阳性）模式的患者HBV-DNA阳性率及含量最高,分别为95.68%、（6.72±1.56）pg/mL.两两比较,HBeAg（阳性）模式的患者HBV-DNA阳性率及含量均高于HBeAg（阴性）模式（P〈0.05）.＂乙肝两对半＂模式与HBV-DNA阳性率有明显相关性（χ^2=36.78,r=0.30,P〈0.05）.结论 ＂乙肝两对半＂模式与HBV-DNA相互弥补,可作为乙型病毒性肝炎早期诊断、疗效评估的可靠指标.     

子宫内膜癌组织IGF-1与其受体表达及意义

目的 探讨子宫内膜癌组织中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其受体（IGF-1R）表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测20例正常子宫内膜组织（对照组）及46例子宫内膜癌组织中IGF-1、IGF-1R的表达。结果 IGF-1在对照组和子宫内膜癌组阳性表达率分别为60.00%和60.87%,两者差异无显著性（χ^2=0.004,P〉0.05）;过度阳性表达率分别为0和23.91%,差异有显著性（χ^2=4.147,P〈0.01）;子宫内膜癌组织中IGF-1阳性表达及过度表达与手术病理分期无关（χ^=25.434、4.328,P〉0.05）,而过度表达在不同病理分级之间的差异有显著性（χ^2=7.163,P〈0.05）。IGF-1R在两种组织中的阳性表达率分别为70.00%和60.87%,差异无显著性（χ^2=.511,P〉0.05）;过度表达率分别为0和36.96%,差异有显著性（χ^2=.117,P〈0.01）;子宫内膜癌组织中IGF-1R阳性表达及过度表达与手术病理分期无关（χ^2=.550、4.369,P〉0.05）,而在高分化与中、低分化内膜癌组织之间差异有显著性（χ^2=.859、8.584,P〈0.05）。结论 IGF-1I、GF-1R表达与子宫内膜癌发病有关,并可作为子宫内膜癌预后预测的一个指标。     

p62蛋白的自身免疫反应及其在结肠癌中的表达研究

目的探讨肿瘤相关抗原p62的自身免疫反应及其在结肠癌中的表达,评估其在结肠癌早期诊断、恶性程度及预后评估中的应用价值。方法收集64例结肠癌患者、42例结肠腺瘤患者和30例正常对照者的结肠组织及血清标本,采用免疫组化方法检测受检者p62蛋白的表达情况;用ELISA和western blotting方法对血清中p62抗体进行检测;血清抗核抗体（antinuclear antibody,ANA）采用间接免疫荧光方法检测。结果三组患者血清中p62抗体阳性率差异有统计学意义钟=0．291,B0．003）,结肠癌患者血清p62抗体的阳性率为23．4％,明显高于结肠腺瘤组（4．8％）和正常对照组（2．9％）,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）;不同结肠组织中p62阳性率差异有统计学意义钟=0．695,P=0．000）,64例结肠癌组织标本中有48例（75．0％）出现p62阳性表达,均高于结肠腺瘤组织（14.3％）和正常对照组织（0．0％）,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）;三组患者血清中ANA阳性率差异有统计学意义（r=0．629．P=0．000）,ANA在结肠癌组中的阳性率为82．8％,明显高于结肠腺瘤组（21．4％）和正常对照组（17．6％）,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）。其中结肠癌组ANA阳性核型以胞核为主47．2％（25／53）,其次是核仁型24．5％（13／53）和胞浆型28．3％（15／53）,其核仁和胞浆核型比例均高于对照组和结肠腺瘤组。结论抗p62抗体和ANA的联合检测对于结肠癌的早期诊断、疾病预防和监测具有重要意义。     

FQ-PCR检测肠黏膜结核杆菌DNA对肠结核的诊断价值

目的建立一种实时定量检测结核分枝杆菌（MTB）插入序列IS6110 DNA的方法,探讨其在肠结核（ITB）诊断中的价值。方法采用FQ-PCR技术对36例内镜活检ITB标本（30例石蜡、6例新鲜组织）、36例Crohn’s disease标本（16例石蜡手术标本,15例石蜡内镜活检标本,5例新鲜内镜活检组织）及34例阴性对照标本进行IS6110 DNA的实时定量检测,并比较上述标本抗酸染色结果。结果13例ITB抗酸染色阳性,CD无1例阳性,抗酸染色对ITB诊断的敏感性36.11%。MTBIS6110DNA检测结果：23例ITB（63.89%）阳性,6例CD（16.67%）阳性,另有1例阳性为升结肠腺癌癌旁正常组织。MTBIS6110 DNA在ITB与CD中的阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。FQ-PCR对ITB诊断的敏感性为63.89%,特异性83.33%。FQ-PCR敏感性显著高于抗酸染色（P〈0.05）。MTBIS6110 DNA阳性的ITB标本其定量结果范围为2.44×10^-4-2.26×10^1拷贝/细胞。结论FQ-PCR检测MTBIS6110 DNA是一种快速有效的ITB诊断方法,其定量范围广,检测灵敏度高。对活检组织少、病理改变不典型、抗酸染色阴性组织的诊断和鉴别诊断尤有意义。     

子宫内膜癌组织中VEGF与突变型p53基因表达的关系

目的 了解子宫内膜癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）与突变型抑癌基因p53的表达情况,以探讨其在子宫内膜癌发生及转移中的作用。方法 应用免疫组化PV法检测45例子宫内膜癌及10例正常子宫内膜组织中VEGF和突变型p53基因的表达及其相关性,分析其与各临床病理参数之间的关系。结果 子宫内膜癌组织中VEGF及突变型P53蛋白表达阳性率均高于正常子宫内膜,两者呈显著正相关（r=0.585,P〈0.01）;两者表达均与临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关（χ^2=4.148～11.383,P〈0.05）,VEGF表达与肌层浸润深度无明显相关性（χ^2=0.220,P〉0.05）,而突变型p53基因表达则与肌层浸润深度有关（χ^2=5.494,P〈0.05）。结论 VEGF和突变型p53基因在子宫内膜癌的发生、侵袭、转移和预后过程中可能起着十分重要的作用。     

幽门螺杆菌抗体组分与特发性血小板减少性紫癜发病的相关性分析

目的分析幽门螺杆菌（HP）抗体组分与特发性血小板减少性紫癜（ITP）发病的相关性。方法应用免疫印记法检测73例ITP患者和51例对照者的血清HP抗体组分：细胞毒素相关基因A（CagA）128、CagA116、CagA110、空泡毒素蛋白A（VacA）95、VacA91、尿素酶A（UreA）、尿素酶B（UreB）,同时进行14C尿素呼气试验（14C-UBT）。结果ITP组患者14C-UBT检测阳性率高于对照组,差异有统计学意义（χ^2=3.88,P〈0.05）;两组HP抗体组分CagA110、VacA91水平比较,差异均有统计学意义（χ^2分别=13.51、12.49,P均〈0.05）;而两组CagA128、CagA116、VacA95、UreA、UreB水平比较,差异均无统计学意义（χ^2分别=1.65、3.41、1.59、0.63、3.37,P均〉0.05）。结论HP抗体组分CagA110、VacA91与ITP发病相关。     

三种肺炎支原体检测方法的比较

目的比较3种检测肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，Mp）的方法，寻求肺炎支原体的快速、准确和特异的检测手段。方法选择198例社区获得性肺炎（CAP）患者中临床证实的45例肺炎支原体感染者的痰液、血清标本，分别经肺炎支原体培养、肺炎支原体核酸PCR扩增和血清学检测（IgM和IgG），采用Х^2检验比较3种方法的检测结果。结果3种方法检测Mp的阳性率分别为44．4％、71．1％和86．7％和，PCR法与培养法比较差异有显著性（Х^2=17．764，P〈0．001）；血清学与培养法比较差异有显著性（Х^2=6．559，P〈0．01）；PCR法与血清学比较差异无显著性（Х^2=3．269，P=0．071）。结论PCR法和血清学检测是肺炎支原体病原体诊断的有效手段。     

核酸纯化柱提取核酸定量检测丙型肝炎病毒RNA的临床应用

目的观察核酸纯化柱提取法（简称柱提法）对血浆标本中丙型肝炎（简称丙肝）病毒核糖核酸（HCV-RNA）进行定量检测的临床应用效果。方法分别用柱提法和酚-氯仿提取法提取血浆标本中的HCV-RNA，用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对117例抗-HCV阳性的丙肝患者同时进行HCV-RNA定量检测，并对结果进行比较分析。结果117例抗-HCV阳性丙肝患者以酚-氯仿提取法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为66．7％（78／117），以柱提法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为79．5％（93／117）。两法比较，差异有统计学意义（X^2=4．26，P〈O．05）。将两法所测浓度结果换算成对数值，经“检验两者差异无统计学意义（μ=1．61，P〉0．05）。结论采用核酸柱提法提取血浆标本中HCV-RNA进行定量检测简单、快速，分离效率高，容易掌握，适于临床常规应用。