5-氟胞嘧啶在体外对转导胞嘧啶脱氨酶基因的肝癌细胞的细胞毒作用

As to investigate the cytotoxic effects of 5-fluorocytosine on hepatocarcinoma cells genetically modified with cytosine deaminase gene, the gene was transduced into the tumour cells with retroviral method. The cytotoxicity and the bystanding killing effects of 5-fluorocytosine on the tumour cells were measured with MTT assay. It was found that the prodrug 5-fluorocytosine had significant cytotoxic effects on human hepatocarcinoma cells which were transduced with cytosine deaminase in vitro. The IC₅₀ value of 5-
fluorocytosine on transgenic and non-transgenic hepatocarcinoma cells were 110 and 1 249 mg·L^-1, respectively. Moreover, the result showed that cytosine deaminase gene/5-fluorocytosine system possessed bystander killing effects on hepatocarcinoma. The experiment demonstrates the potential value of the cytosine deaminase gene/5-fluorocytosine system in the treatment of human hepatocarcinoma.     

5-氟胞嘧啶在体外对转导胞嘧啶脱氨酶基因的肝癌细胞的细胞毒作用

基因治疗为肿瘤治疗开创了一个新途径,其中自杀性基因疗法是肿瘤基因治疗中的一个重要方法．该方法利用复制缺陷型病毒载体将外源基因导入肿瘤细胞,在肿瘤细胞中外源基因表达出酶蛋白,可以将无毒的前体药物转化为细胞毒药物,选择性地杀伤肿瘤细胞．研究表明,自杀性基...     

AdCMVCD/5FC自杀基因系统治疗CABG术后再狭窄

目的研究胞嘧啶脱氨酶基因/5-氟胞嘧啶自杀基因系统对冠状动脉旁路移植术后再狭窄的治疗作用.方法将含AdCMVCD的病毒上清加压注人兔颈外静脉管腔,半小时后剪下该静脉并用Cuff技术移植于兔颈动脉上,以单纯移植组和AdCMVLacz为对照,通过光镜和电镜观察平滑肌细胞的形态变化,并对血管桥外径、管腔、内膜、中膜面积和外弹力膜周长及管腔相对丧失率进行定量分析,以观察抑制内膜和中膜增生、防止血管再狭窄的效果. 结果治疗组的内膜和中膜面积明显小于两个对照组;管腔丧失率亦明显减少,AdCMVCD组为3.68±0.42%,单纯移植组为9.68±0.41%,P＜0.01.结论AdCMVCD自杀基因系统对冠状动脉旁路移植术后再狭窄有明显的治疗作用.     

胞嘧啶脱氨酶基因与前体药物5-氟胞嘧啶联合应用对人乳腺癌裸鼠模型的实验治疗

探讨胞嘧啶脱氨酶（CD）基因与前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用. 应用细胞克隆形成实验及裸鼠移植瘤模型研究CD/5-FC体系的抗肿瘤作用. 5-FC 0.5和1.0 g·L^-1对转基因人乳腺癌细胞的克隆形成抑制率分别为90%和95%,显著高于未转基因的人乳腺癌细胞;5-FC (0.5 g·kg^-1·d^-1 ip, 14 d)治疗组的转基因人乳腺癌裸鼠移植瘤的瘤重和生长速度均显著低于未转基因的移植瘤. 结果表明CD/5-FC体系对人乳腺癌裸鼠移植瘤有显著的的抗肿瘤作用.     

替莫唑胺联合放疗治疗恶性脑胶质瘤的疗效观察

目的:探讨替莫唑胺联合放疗治疗恶性脑胶质瘤的安全性和临床疗效。方法:纳入2012年1月—2015年12月在菏泽市立医院神经外科治疗的138例恶性脑胶质瘤术后患者,以随机数字表法分为替莫唑胺联合放疗组(n=63)与单一放疗组(n=55)。所有患者均在术后第15~30日进行治疗,替莫唑胺联合放疗组患者在接受放疗2周后,同时接受替莫唑胺序贯/辅助化疗治疗,单一放疗组患者仅接受放疗。记录患者耐药、症状、体征和不良反应发生情况,每周进行血生化与血常规检查,评价患者耐药与不良反应发生情况,并进行用药调整。用药期间收集并记录患者的体征、症状、卡氏评分。结果:2组患者疗效的差异无统计学意义(P=0.846);与单一放疗组相比,替莫唑胺联合放疗组患者2、3年生存率、疾病复发时间、卡氏评分均显著改善意义,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:替莫唑胺联合放疗治疗恶性脑胶质瘤与单一放疗的近期疗效相近,但可显著延缓患者的疾病复发时间,提高2、3年生存率,且不良反应较少,安全性高,值得临床推广。     

一条脑胶质瘤相关的全长基因的生物信息学分析

目的报道一条脑胶质瘤相关的全长新基因的生物信息学分析及其研究的结果。方法对507E08克隆子进行了测序,生物信息学分析和Northern blot分析。结果507E08基因为全长基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸,命名为人核糖体蛋白L14．22。经Northern blot证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。结论生物信息学是一种有效分析未知基因的工具。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

Ad-Egr-hTrail联合放射线对脑胶质瘤细胞杀伤作用的实验性研究

目的探讨重组腺病毒联合X射线对U251脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法实验分6组:空白对照组(A组),Ad-Egr-hTrail组(B组),Ad-CMV-hTrail组(C组),单独照射组(D组),Ad-Egr-hTrail+照射组(E组),Ad-CMV-hTrail+照射组(F组)。取对数生长期的U251细胞接种于96孔细胞培养板中,48h后重组腺病毒感染U25细胞,感染2d后分别给予D、E、F组12GyX射线一次性照射,照射后3d,MTS法测定细胞抑制率。结果①B组与A组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。②两种腺病毒重组载体单独使用时,C组的抑制率明显高于B组(P<0.01),两者联合放疗时,抑制率均明显提高(P<0.01),E组是B组的7.43倍,F组是C组的1.84倍。③与D组相比,E组、F组的抑制率明显提高(P<0.01),E组的放疗增敏比为1.38倍,F组的放疗增敏比为1.53倍。结论①Ad-Egr-hTrail具有很强的辐射诱导特性。②TRAIL基因具有辐射增敏作用。③两种腺病毒重组载体与放射治疗有正协同增敏作用.     

肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD，pH2／UPRT的构建

目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应，构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD和pH2／UPRT。方法用PcR的方法从质粒pGEX／CD和pGEX／UPRT中扩增出CD基因和UPRT基因，用内切酶BamHI和SalI酶切CD基因，UPRT基因和质粒pH2，分别连接后重组于大肠杆菌中。用电转化的方法将重组质粒转人婴儿双歧杆菌中。通过双酶切和基因测序的方法检验质粒pH2／CD和pH2／UPRT的正确性，RT—PCR检测该系统的mRNA表达。在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果。结果成功地将CD基因和UPRT基因转入了乳酸菌表达质粒pH2，在纯化后的质粒被双酶切后，CD基因被分割为6．9kb和1．3kb的两部分，UPRT基因被分割为6．9kb和620bp的两部分。CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致。RT—PCR检测到CD和UPRTmRNA的明显表达。黑色素瘤细胞的低存活率证明pH2／CD，pH2／UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的强大杀伤作用。结论肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD，pH2／UPRT构建成功并显示出强大的杀伤肿瘤细胞的作用。     

MGMT基因在脑胶质瘤治疗中的意义

胶质瘤是颅内肿瘤中发病率最高的肿瘤,目前临床上多采取以手术治疗为主辅以化学治疗和放射治疗。氯乙基亚硝脲类烷化剂（CNUs）,以其高脂溶性和易于透过血脑屏障的特性,长期以来被看为治疗脑胶质的最有效的化疗药物。但抗药性的产生使其临床有效率不足30％,而成为脑胶质瘤化疗失败的主要原因。06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）修复亚硝类药物所造成的DNA损伤,是肿瘤细胞对亚硝类耐药的主要分子机制。     

伊立替康治疗脑胶质瘤的研究进展

目前治疗恶性脑胶质瘤的方案都无法显著改善患者总生存期。伊立替康可透过血脑屏障,强烈杀伤恶性胶质瘤细胞。近年来,伊立替康在单用或联用其他药物治疗恶性脑胶质瘤方面取得了较多的进展,但相关的临床研究结果尚未进行归纳总结,本文对此作一综述。从目前的研究结果看,伊立替康单药治疗恶性脑胶质瘤效果不甚理想,具有临床应用前景的联合用药选择有替莫唑胺、塞来昔布和舒尼替尼等。     

牛蒡子苷元对大鼠脑胶质瘤的作用及初步作用机制探讨

目的观察牛蒡子苷元对大鼠C6胶质瘤的作用及作用机制的研究。同时探讨牛蒡子苷元与替莫唑胺合用对脑胶质瘤是否有协同作用。方法采用脑内注射C6胶质瘤细胞建立大鼠C6胶质瘤模型;牛蒡子苷元连续皮下给药15 d,替莫唑胺从d 5开始给药,连续灌胃给药5 d;测量肿瘤的长短径,计算肿瘤体积;采用免疫组化方法检测脑瘤组织中GFAP、PCNA和CD40的表达。结果与模型组相比,牛蒡子苷元均能明显降低大鼠C6胶质瘤的肿瘤体积(P<0.05),给予牛蒡子苷元可使脑胶质瘤大鼠的PCNA和CD40表达明显降低(P<0.05),GFAP表达明显升高(P<0.05);牛蒡子苷元与替莫唑胺合用能明显减少脑胶质瘤大鼠的肿瘤体积(P<0.01),其肿瘤抑制率均高于单独牛蒡子苷元和替莫唑胺;与模型组相比,联合用药组的PCNA和CD40表达均明显降低(P<0.05),GFAP明显升高(P<0.05),均好于单独用药。结论牛蒡子苷元能明显抑制大鼠C6胶质瘤生长,并且与替莫唑胺合用具有协同作用,作用机制与影响脑胶质瘤相关蛋白(PCNA和GFAP)表达和调节机体免疫(抑制CD40表达)相关,为牛蒡子苷元上报新药提供临床前药理试验支持。     

胞嘧啶脱氨酶基因与前体药物5—氟胞嘧啶对人肝癌的基因治疗作用

目的 探讨胞嘧啶脱氨酶基因（ＣＤ）与前体药物５－氟胞嘧啶（Ｆｌｕ）对肝癌的抗肿瘤作用。方法 应用逆转录病毒法,将ＣＤ基因转导入肿瘤细胞,体外应用克隆分析法测定Ｆｌｕ对肿瘤细胞的细胞毒性;应用裸鼠移植瘤模型研究ＣＤ基因／Ｆｌｕ体系对肝癌的抗肿瘤作用。结果：前体药物Ｆｌｕ对人肝癌在体外和裸鼠体内具有明显的抗癌作用。与５－氟尿嘧啶１０ｍｇ．ｋｇ＾－１相比,前体药物Ｆｌｕ５００ｍｇ．ｋｇ＾－１对裸鼠肝癌移     

胞嘧啶脱氨酶基因与前体药物5-氟胞嘧啶联合应用对人乳腺癌裸鼠模型的实验治疗

探讨胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与前体药物５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用．应用细胞克隆形成实验及裸鼠移植瘤模型研究ＣＤ／５－ＦＣ体系的抗肿瘤作用．５－ＦＣ０．５和１．０ｇ·Ｌ－１对转基因人乳腺癌细胞的克隆形成抑制率分别为９０％和９５％,显著高于未转基因的人乳腺癌细胞;５－ＦＣ（０．５ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１ｉｐ,１４ｄ）治疗组的转基因人乳腺癌裸鼠移植瘤的瘤重和生长速度均显著低于未转基因的移植瘤．结果表明ＣＤ／５－ＦＣ体系对人乳腺癌裸鼠移植瘤有显著的的抗肿瘤作用．     

伽玛刀联合外放疗治疗儿童桥脑弥漫性胶质瘤1例

患儿,男,8岁。因间断性头痛3个月,复视1周就诊当地县医院,体格检查：体温（T）：36.5°,脉搏（P）：80次/min,呼吸（R）：18次/minBP110/80mmHg（1mmHg=0.133kPa）双眼外展受限,心肺未见异常,四肢肌力,肌张力正常。头颅MRI示：桥脑弥漫性增大,边界模糊,无增强,无囊性变及钙化。     

整合生物信息学法与加权基因共表达网络分析联合分析脑胶质瘤特征基因

目的 利用脑胶质瘤（glioblastoma,GBM）芯片数据,采用整合生物信息学法和加权基因共表达网络分析（weighted gene correlation network analysis,WGCNA）法,寻找肿瘤发病特征基因、关键通路以及转录调控机制。方法 利用GEO数据库中高通量基因芯片数据,通过整合生物信息学法筛选出差异基因;利用WGCNA分析GBM关键基因hub基因;采用维恩分析法,整合这些差异基因与hub基因,筛选出GBM特征基因。采用基因本体论（Gene Ontology,GO）基因功能注释,京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集,分析GBM特征基因所富集的功能和通路。利用Kaplan-Meier分析特征基因与GBM生成率的关系。利用基因云生物信息平台（GCBI）,分析调控这些特征基因的转录因子。结果 经分析,发现273个特征基因。这些特征基因主要可影响离子通道、蛋白激酶、γ-氨基丁酸受体功能。CHD5,SYP,PHYHIP表达水平与GBM生存率显著相关;转录因子Sp1、Sp3、REST可能是调控这些特征基因的关键因子。结论 本研究从多种角度定义了GBM的特征基因及调控机制,为其精准治疗提供了依据。     

沙培林治疗鼠脑胶质瘤基因的PCR检测

目的 研究沙培林治疗裸鼠脑胶质瘤基因的PCR检测.方法 16只BALB/C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分为4组,每组四只.接种后10 d,肿瘤长至约3～4 mm大小时开始给药,对照组0.2 ml生理盐水,低剂量组沙培林0.2 KE、中剂量组0.4 KE、高荆量组0.8 KE,隔日1次,瘤周注射.给药8次后解瘤实验.从组织中提取总RNA,取20 mg组织加液氮,匀浆研磨,加入TRIZOL裂解液1 ml,采用一步法抽取总RNA,经由紫外分光光度计比色鉴定RNA纯度与浓度,结果 在1.9～2.0之间.逆转录(RT):各取总RNA 1.5、、μg,在终体积为20μl反应条件下,-37℃逆转录1 h,-94℃预变性5 min,获得单链cDNA模板.PCR:各取模板cDNA 2μl,据不同检测对象设计引物,分别进行终体积为30μl的PCR反应,扩增30～50个循环.结果 不同组U251瘤细胞Fas、Bc1-2、Bcl-x、Bax、P53的mRNA从左至右依次为C1、C2、L1、L2、M1、M2、H1、H2、Marker,Bcl-2及P53(突变型)的表达由C至L、M、H逐渐下降,而Bax、Fas及Bcl-xs的表达则又由C至L、M、H逐渐升高.结论 不同基因rt-PCR的检测结果 同样证实了沙培林对脑胶质瘤患者瘤细胞凋亡的调控作用.它是通过上调促凋亡基因Bax、Fas、Bcl-xs及下调抗凋亡基因Bcl-2、P53(突变型)而发挥杀伤瘤细胞、抑制其生长的.     

脑胶质瘤中pRB及其相关基因的异常表达

目的　研究视网膜母细胞瘤蛋白 (pRB)及其相关基因在脑胶质瘤中的异常表达情况。方法　用免疫组化的方法对 2 3例脑胶质瘤 (包括 14例星形细胞瘤和 9例胶质母细胞瘤 )以及 6例正常脑组织中 pRB以及cyclinD1、p16基因的表达进行检测。 结果　 2 3例肿瘤中有 8例 pRB缺失(34 8% ) ,17例cyclinD1过度表达 (73 9% ) ,13例 p16缺失 (5 6 5 % ) ,三种因子的异常均与肿瘤分型有关 (P <0 0 1)。由它们组成的调控路径作为整体在肿瘤组织中异常率为 82 6 % (19/ 2 3) ,与正常脑组织 (1/ 6 ,16 7% )相比有显著性差异 (P =0 0 0 6 ) ,而星形细胞瘤 (10 / 14,71 4% )和胶质母细胞瘤(9/ 9,10 0 % )之间并无统计学差别 (P =0 12 4) ,说明此路径异常与肿瘤发生有关而与分型无关。pRB在此调控路径中处于中心位置 ,与肿瘤的恶化有关。 结论　pRB及其相关基因的异常与脑胶质瘤发生关系密切 ,可以作为探讨肿瘤病因 ,诊断和治疗的重要靶位。     

木犀草素联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠VEGF表达的影响

目的研究木犀草素联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠VEGF表达的影响。方法建立大鼠U87-MG脑胶质瘤模型,以随机数字表法分为四组,每组20只。接种14d后给予替莫唑胺组替莫唑胺25mg/(kg·d),木犀草素组木犀草素20mg/(kg·d),联合组给予木犀草素20mg/(kg·d)、替莫唑胺25mg/(kg·d),均配置为2m L生理盐水溶液后腹部注射,空白组每天给予等量生理盐水。给药5周后将脑胶质瘤细胞切片染色,免疫组化法检测各组大鼠脑胶质瘤细胞中VEGF水平。结果联合组VEGF阳性与强阳性表达数量之和所占比例为20%,与空白组、木犀草素组、替莫唑胺组85%(χ2=16.942)、70%(χ2=10.101)、55%(χ2=5.227)相比均明显下降(P0.05)。结论木犀草素联合替莫唑胺治疗U87-MG脑胶质瘤,可有效抑制肿瘤VEGF表达,对脑胶质瘤的化疗效果起增敏作用。     

c-myc反义寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用

目的　探讨c myc反义寡核苷酸 (c mycASON)对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用的影响。方法　立体定向法将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾壳核建立鼠脑胶质瘤模型 ,采用人工合成的c mycASON和c myc正义寡核苷酸 (c mycSON)注射于瘤区。按接种后给药的种类、浓度及给药间隔时间将动物随机分成ASON 1组、2组、3组 ;SON 1组、2组、3组 ;生理盐水 1组、2组 (NS1组、2组 )。电镜观察凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果　 (1)反义组出现较多的凋亡细胞 ,正义组与生理盐水组凋亡细胞少。 (2 )各治疗组均显示凋亡峰 ,ASON 1组、2组、3组细胞凋亡率分别为 (18 8± 1 3) %、(2 0 3± 1 4 ) %、(17 8± 1 1) % ,各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (3)反义组肿瘤细胞在细胞周期G0 /G1期所占比例较大 ,各反义组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　c myc反义寡核苷酸能诱导鼠脑胶质瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖。     

9L/Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型的建立

目的建立稳定的9L/Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型。方法24只近交系雄性Wistar大鼠,采用立体定向技术在大鼠右尾状核接种1×106个9L细胞,观察大鼠生存状态;接种后8天行MRI检查,观测颅内肿瘤生长情况。大鼠死亡后,取脑制作病理切片,行HE染色后观察肿瘤组织形态。结果大鼠接种肿瘤细胞30天内全部死亡,平均生存时间23.38±1.60天。脑内均见肿瘤形成,未见肿瘤颅外生长。肿瘤周边界线明显,未见包膜。瘤内新生血管丰富,可见出血坏死。结论该方法建立的大鼠脑胶质瘤动物模型稳定可靠,符合恶性胶质肉瘤生物学特性。该模型是理想的脑胶质瘤实验研究材料。