恶性肿瘤组织的端粒酶活性分析

目的 :检测端粒酶活性在恶性肿瘤和良性肿瘤及正常组织的表达 ,以探讨端粒酶活性对恶性肿瘤检测的意义。方法 :采用端粒重复序列扩增分析法 (telomericrepeatamplificationprotocolassay ,TRAP)检测 87例恶性肿瘤和 4 7例对照组织中端粒酶的活性。结果 :恶性肿瘤端粒酶活性阳性检出 85 .0 6 % (74 / 87) ,明显高于对照组织 ,(P<0 .0 1) ;端粒酶活性与组织类型无明显相关性。结论 :与对照组织相比 ,恶性肿瘤组织中端粒酶活性明显升高 ,端粒酶活性可能作为恶性肿瘤检测的一个重要指标     

甲状腺肿瘤端粒酶活性的检测及其临床意义

目的　探讨甲状腺肿瘤组织以及同组织细针穿刺标本中端粒酶活性的表达及其临床价值。方法　应用端粒重复序列扩增法结合酶联免疫吸附实验 (TRAP -PCR -ELISA)半定量方法对经病理确诊的 12例甲状腺癌、12例甲状腺腺瘤、8例甲状腺增生性结节、12例正常甲状腺组织标本及其细针穿刺标本中端粒酶活性进行检测。结果　甲状腺癌组织及其细针穿刺标本中端粒酶活性水平和阳性率均显著高于腺瘤、增生性结节和正常甲状腺组织及细针穿刺标本的端粒酶活性水平和阳性率 (P <0 .0 1)。结论　端粒酶活性在甲状腺癌中高度表达提示其可能是一个特异性较强的甲状腺恶性肿瘤标记物 ,甲状腺细针穿刺标本中端粒酶活性的检测有助于手术前鉴别诊断甲状腺瘤的良恶性 ,对临床诊疗具有一定的指导意义     

卵巢恶性肿瘤端粒酶活性的研究

目的 探讨端粒酶活性与卵巢恶性肿瘤发生发展的关系以及端粒酶活化作为卵巢肿瘤标志物的可能性。方法 应用端粒重复序列扩增（TRAP－PCR）技术检测36例卵巢组织，包括17例卵巢恶性肿瘤及其盆腔相关组织、淋巴结，4例交界性肿瘤，10例良性肿瘤，5例正常卵巢组织中端粒酶活性。结果 端粒酶活性表达在恶性肿瘤组织中阳性率为88．2％（15／17），弱阳性（＋）者3例，中等阳性（ )4例，强阳性（ )者8例；4例交界性肿瘤阳性率75．0％（3／4），均为弱阳性（ )；10例卵巢良性组织中阳性率为10．0％（1／10），为弱阳性（ )；5例正常卵巢组织全部为阴性。统计学分析表明端粒酶活性表达在卵巢恶性肿瘤、交界性肿瘤与良性肿瘤组织及正常卵巢组织之间存在非常显著性差异（P＜0．05）。但与卵巢恶性肿瘤的病理类型、组织分化、分期均无关。结论 端粒酶活性表达在卵巢恶性肿瘤组织中普遍存在，端粒酶活性检测有可能成为卵巢恶性肿瘤诊断的重要辅助手段，同时对卵巢恶性肿瘤细胞减灭术效果的判定可能具有一定的参考价值。     

膀胱癌端粒酶活性测定的研究

目的：探讨端粒酶活性与膀胱癌之间的关系。方法：采用TRAP-ELISA法对膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织中端粒酶活性进行检测。结果：膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织中端粒酶活性阳性率差异有统计学意义（P〈0.01）;高分化组与低分化组差异有统计学意义（P〈0.05）;早期膀胱癌组与中晚期膀胱癌组端粒酶活性差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：膀胱癌组织中端粒酶活性较正常组织活性高,膀胱癌端粒酶活性与其恶性程度有相关性,故端粒酶活性测定可作为早期诊断膀胱癌的标志物。     

端粒酶活性在非小细胞肺癌不同组织细胞中表达的研究

目的 对比研究端粒酶活性在非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的表达 ,以了解其临床意义。 方法 应用聚合酶联反应 -端粒重复序列扩增法 (PCR -TRAP)检测30例肺癌手术患者癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的端粒酶活性 ,并以25例肺部良性疾病手术患者为对照组。结果 肺癌患者肺癌组织端粒酶活性阳性率83.3% (25/30) ,癌旁组织端粒酶活性阴性 ,外周血中端粒酶活性阳性率33.3 % (10/30) ,痰液标本中端粒酶活性阳性率56.7% (17/30)。对照组正常肺组织标本和外周血中端粒酶活性均阴性 ,痰液标本中端粒酶活性阳性率24.0% (6/25) ;两组病变组织、血液和痰液中端粒酶活性阳性率的差别均有显著性意义 (均P<0.05)。 结论 (1)非小细胞肺癌患者在肺癌组织、血液及痰液中均有端粒酶活性表达 ,其活性表达强度依次为肺癌组织、痰液、血液。 (2)痰液中端粒酶活性检测对肺部良恶性疾病的鉴别具有一定的诊断意义。     

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的：研究胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法：采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测了５１例胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活笥表达。结果：５１例胃癌组织中端粒酶阳性表达４８例（９４．１％）,癌旁组织为１７例（３３．３％）,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论：端粒酶是特异较强的恶性肿瘤其因标志,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。     

端粒酶活性测定在膀胱癌诊断中的作用

目的：评估端粒酶活性测定对膀胱癌诊断的临床意义。方法：采用端粒重复序列扩增－银染色法，对54例膀胱癌组织及尿沉渣进行端粒酶活性测定，并与对照组及尿脱落细胞病理学检查进行比较。结果：组织端粒酶活性的阳性率达89％；尿沉渣的阳性率达81％，而尿脱落细胞学检查的阳性率为46％。尿端粒酶活性明显高于尿脱落细胞病理学检查，尤其在肿瘤早期差异更为显著。结论：组织端粒酶活性测定的临床意义尚有待进一步研究；而尿沉渣端粒酶活性测定阳性率高、特异性好，且各级膀胱癌之间无明显差异，可以替代尿脱落细胞病理学检查，该方法尤其适用于膀胱癌的早期诊断。     

端粒重复扩增-微孔板杂交法检测妇科肿瘤端粒酶活性的研究

目的：探讨妇科几种常见恶性肿瘤与端粒酶活性的关系。方法：采用端粒重复扩增（TRAP）扩增端粒酶产物，通过生物素－亲和素将扩增产物结合于微孔板，并与荧光素（FITC）标记的特异性探针杂交，经酶标抗荧光素抗体结合面显色。结果：妇科恶性肿瘤端粒酶活性检出25例（89．3％），而肿瘤边缘组织检出14例（50．0％），正常对照组织检出10例（35．7％）。恶性肿瘤端粒酶活性显著高于肿瘤远端组织和正常对照组织（P＜0．05）。结论：端粒酶激活可能在妇科恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。TRAP－微孔板杂交法是检测端粒酶活性灵敏而特异的一种方法。     

微孔板杂交法检测端粒酶活性

目的 利用微孔板反向杂交法对端粒酶重复序列扩增法加以改进,建立一种快速、简便、量人的端粒酶活性检测方法。方法将端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）与微孔板交法相结合,并采用蜡珠包埋活性酶及引物的方法,使ＴＲＡＰ反应单管一次完成。结果 与ＴＲＡＰ法相比,该方法检测鼠骨髓瘤细胞株的敏感为１０个细胞,检测肝癌来阳性酶及引物的 经ＲＮａｓｅ处理及加热处理的细胞和标本及正常细胞均呈阴性。结论 应用该方法可简便、快     

微孔板杂交法检测端粒酶活性

目的　利用微孔板反向杂交法对端粒酶重复序列扩增法加以改进 ,建立一种快速、简便、量化的端粒酶活性检测方法。方法　将端粒重复序列扩增法 (TRAP)与微孔板杂交法相结合 ,并采用蜡珠包埋活性酶及引物的方法 ,使TRAP反应单管一次完成。结果　与TRAP法相比 ,该方法检测鼠骨髓瘤细胞株的敏感性为 10个细胞 ,检测肝癌标本为阳性 ,经RNase处理及加热处理的细胞和标本及正常细胞均呈阴性。结论　应用该方法可简便、快速检测端粒酶活性 ,1日内完成并可单人份操作 ,对临床试剂的建立具有一定的参考价值。     

胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系

目的研究人胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系。方法采用实时定量荧光PCR分析不同胃黏膜细胞POT1 mRNA的表达,采用TRAP-ELISA半定量分析不同细胞端粒酶活性。结果与癌旁正常黏膜相比,晚期胃癌癌组织POT1 mRNA增高,中重度不典型增生胃黏膜与其正常胃黏膜比较其POT1 mRNA表达也明显增高,肠上皮化生胃黏膜及其正常胃黏膜POT1 mRNA表达无明显差异。晚期胃癌及中重度不典型增生胃黏膜上皮中端粒酶活性明显高于肠上皮化生组织和正常胃黏膜上皮,但是胃癌和中重度不典型增生及肠上皮化生组织和正常胃黏膜间端粒酶活性无明显变化。结论尽管胃癌细胞和中重度不典型增生端粒酶活性高于正常和肠上皮化生胃黏膜细胞,但是POT1 mRNA的表达与之无关。     

生存素基因mRNA和蛋白在胃癌中表达及其意义

目的探讨生存素(survivin)基因mRNA和蛋白表达与胃癌发生发展的关系。方法应用原位杂交和免疫组化技术检测30例胃癌及20例良性胃组织(5例慢性胃炎、5例胃溃疡、10例癌旁正常组织)标本中survivin mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理参数的关系。原位末端标记技术(TUNEL法)检测细胞凋亡。结果良性胃组织中无survivin的表达,而胃癌组织中survivin mRNA阳性表达率36.67%(P<0.01),蛋白阳性率46.67%(P<0.01),并且其表达在不同的TNM分期、有无淋巴结转移之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin在胃癌中显著表达,并明显抑制凋亡,在胃癌的发生发展过程中起重要作用。     

Expression of telomerase activity， telomerase RNA component and telomerase catalytic subunit gene in lung cancer

目的：探讨hTR、hTERT与端粒酶活性的表达是否与肺癌的发生发展有关,深入了解端粒酶基因对端粒酶活性的调控是在基因水平还是在转录水平。方法：采用TRAP-PCR和RT-PCR方法分别检测68例肺癌组织、68例癌旁组织端粒酶活性、端粒酶基因hTR和hTERT的表达。结果：68例肺癌组织中端粒酶阳性率79%,HTR阳性率为98.5％,HTERT阳性率为91.2%。68例癌旁组织中,无一例表达端粒酶阳性,且大多数癌旁组织均表达HTR(91.2%),而HTERT在68例癌旁组织中仅7例为阳性。结论：肺癌组织中表达高频率的端粒酶活性而癌旁组织无一例表达端粒酶阳性说明了端粒酶的活性是肺癌发生发展所必须的。与HTR相比,HTERT同端粒酶具有更市制一致性,其一致率为88.9％。HTR与HTERT可能是在转录后或翻译水平对端粒酶进行调控的。     

Expression of telomerase and its RNA in nasopharyngeal carcinoma

Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ,ａｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｅｌｏｍｅｒｅｌｅｎｇｔｈ ,ｈａｓｂｅｅｎｆｏｕｎｄｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｅｌｌｉｍｍｏｒｔａｌｉｔｙａｎｄｍａｌｉｇｎａｎｃｙ Ｒｅｃｅｎｔｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｉｓａｈｉｇｈａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎｍｏｓｔｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｓａｓｗｅｌｌａｓｉｎｉｍｍｏｒｔａｌａｎｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉ…     

喉癌组织中E-钙黏附素mRNA的表达及意义

目的探讨E-钙黏附素（E-CD）mRNA在喉鳞状细胞癌中的表达及其与喉癌发生发展的关系.方法应用逆转录聚合酶链反应技术对43例喉癌和23例癌旁正常黏膜组织中的E-CD mRNA表达进行检测,并分析检测结果与临床病理因素的关系.结果与癌旁正常黏膜组织相比,喉癌组织中E-CD mRNA表达指数明显降低（P＜0.01）,并与颈淋巴结转移、肿瘤大小（T分期）、临床分期、肿瘤组织分化程度相关,颈淋巴结转移者低于无颈淋巴结转移者（P＜0.01）,T3-4低于T1-2（P＜0.05）,Ⅲ～Ⅳ期低于Ⅰ～Ⅱ期（P＜0.01）,中分化喉癌组织低于高分化组织（P＜0.05）.结论E-CD mRNA低表达与喉癌发生发展相关.     

survivin mRNA及蛋白在舌鳞癌中的表达

目的:检测舌鳞癌组织中生存素(survivin)mRNA及其蛋白的表达,探讨舌鳞癌发生、发展过程中survivin的作用。方法:应用原位杂交及免疫组织化学方法检测10例正常舌黏膜,13例高分化舌鳞状细胞癌,20例中分化舌鳞状细胞癌,12例低分化舌鳞状细胞癌标本中survivinmRNA及其蛋白的表达情况。结果:舌鳞癌标本中survivin mRNA及蛋白阳性表达率显著高于正常舌黏膜标本(P<0.01),高、低分化的舌鳞癌标本之间survivin mRNA及蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:survivinmRNA及其蛋白在舌鳞癌不同阶段中明显增加,与舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

乳癌组织中端粒酶活性与端粒酶RNA的表达

目的:分析乳癌组织中端粒酶(telomerase)活性和端粒酶mRNA(hTR)的表达.方法:采用PCR-TRAP-ELISA法对54例乳癌、配对癌旁及30例乳腺良性病变组织中端粒酶活性进行半定量检测,运用原位杂交方法检测hTR的表达.结果:癌组织中端粒酶活性及hTR表达率高于癌旁及良性病变组织(P＜0.01).乳癌组织中端粒酶活性的表达与患者年龄、肿块大小、分化程度无关(P＞0.05),但与组织学类型及淋巴结转移关系密切(P＜0.05).结论:端粒酶激活与乳癌的发生关系密切.     

鼻咽癌端粒酶各组分基因表达与端粒酶活性的关系

目的明确鼻咽癌组织端粒酶各组分(hTR、TP1、hTERT)基因表达及其与端粒酶活性关系.方法采用RT-PCR和PCR-ELISA方法分别检测同一标本,包括鼻咽癌(NPC)组织、慢性鼻咽炎(CINE)组织端粒酶各组分基因表达和端粒酶活性.结果(1)43例NPC组织中,38例(88%)可检测到hTERTmRNA表达;16例CINE组织中均未能检测到hTERTmRNA表达,hTETRmRNA在NPC组织中表达显著高于CINE组织中hTERTmRNA的表达(P<0.05).(2)43例NPC组织中,39例(90.7%)表达hTR,38例(88%)表达TP1mRNA;16例CINE组织中,14例(87.5%)分别表达hTR和TP1mRNA.hTR或TP1mRNA在NPC和CINE组织中表达比较差异无显著意义(P>0.05).(3)NPC组织端粒酶活性(86%)显著高于CINE组织端粒酶的活性(0%)(P<0.05).(4)hTERTmRNA表达与端粒酶活性显著相关(P<0.05);而hTR或TP1mRNA的表达与端粒酶活性无关(P>0.05).(5)端粒酶各组分基因表达均与NPC临床分期和有无颈淋巴结转移无关(P>0.05).结论hTR和TP1mRNA在NPC和CINE组织中均高阳性率表达,并与端粒酶活性无关,hTERTmRNA仅在NPC组织中表达,与端粒酶活性呈高度一致性,提示hTERT在端粒酶活性调节中可能起决定性作用,对hTERTmRNA检测可以作为NPC临床诊断指标之一.     

生存素表达与肺癌多药耐药株H460/cDDP化疗敏感性的关系

目的探讨生存素（survivin）与人肺癌多药耐药株H460／cDDP获得性耐药的关系。方法采用RT-PCR、Western印迹法检测耐药株H460／cDDP与敏感株H460的生存素表达;用针对生存素的小干扰RNA（siRNA）经脂质体介导转染入耐药株H460／cDDP,抑制生存素表达;用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测顺铂（DDP）、紫杉醇（Taxol）对耐药株H460／cDDP的细胞毒作用。结果耐药株H460／cDDP的生存素mRNA和蛋白质表达均高于敏感株H460。生存素siRNA转染耐药株H460／cDDP后72h,生存素蛋白质的抑制率为92、3％。耐药株H460／cDDP和敏感株H460对DDP的Ic50分别为（6.3±0．6）mg／L、（0.8±0．1）mg／L,对Taxol的Ic50分别为（12．7±1．2）mg／L、（1．5±0．3）mg／L;生存素siRNA作用后,H460／cDDP对DDP、Taxol的IC50分别为（4．0±0.9）mg／L（P=0．002）、（8．1±1．7）mg／L（P=0．003）。结论生存素高表达与耐药株H460／cDDP的获得性耐药有关,生存素有可能成为逆转肺癌耐药性的有效靶点。