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1.
目的:探讨人重组骨形态发生蛋白(rhBMP)-2对骨骼肌卫星细胞增殖与粘附的影响。方法:体外分离与培养骨骼肌卫星细胞,分别用0、50、100、500、1000ng/ml的rhBMP-2诱导培养基培养48h。利用MTT法测定细胞增殖能力的变化,通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率。结果:rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖,这种作用从BMP浓度为500ng/ml即可表现出来,并随着浓度的增加而越发明显。在rhBMP-2作用下骨骼肌卫星细胞的粘附率增高,在500ng/ml的浓度时达到最高,但当BMP浓度进一步增大时,细胞粘附率却不再增加。结论:rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖,增强其粘附特性。  相似文献   

2.
目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)对骨骼肌卫星细胞粘附特性的影响。方法:体外获取与培养骨骼肌卫星细胞,分别用0、50、100、500、1000μg/L的BMP诱导培养基诱导培养48h。通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率,利用放射免疫法测定细胞层粘连蛋白的含量。结果:BMP可促进骨骼肌卫星细胞的粘附,在500μg/L的浓度时粘附率最高,当BMP浓度进一步增加时,细胞粘附率不再增加;BMP诱导后可促进骨骼肌卫星细胞层粘连蛋白的表达,当BMP浓度为500μg/L时这种作用最强。结论:BMP可增强骨骼肌卫星细胞的粘附特性,其机制与层粘连蛋白的表达增高有关。  相似文献   

3.
骨形成蛋白对骨骼肌卫星细胞增殖与胶原蛋白合成的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨骨形成蛋白 (BMP)对骨骼肌卫星细胞增殖与胶原蛋白合成的影响。 方法 体外获取与培养 Wistar大鼠骨骼肌卫星细胞 ,分别用含 BMP浓度为 0、50、1 0 0、50 0和 1 0 0 0 ng/ml的诱导培养基培养 72小时。通过 MTT法测定细胞的增殖 ,光镜观察细胞融合率 ,3 H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原蛋白合成量。 结果  BMP可促进骨骼肌卫星细胞的增殖 ,降低其细胞融合率 ,同时增加胶原蛋白的合成量。这种作用在 BMP浓度为 50 0 ng/ml即可表现出来 ,并随着浓度的增加越明显。 结论  BMP可促进骨骼肌卫星细胞的增殖 ,抑制成肌表型促进向成骨细胞分化  相似文献   

4.
目的 了解重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402肝癌细胞生长激素受体(GHR)的调控作用.方法 采用放射配体法了解7402肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达情况,检测不同浓度(0,1,10,100,1000,10 000 ng/ml)rhGH对肝癌细胞GHR表达的影响,用辣根过氧化酶法了解7402肝癌细胞培养上清液的胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的变化,采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法了解肝癌细胞在不同浓度rhGH作用下药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞计了解肝癌细胞在上述浓度rhGH作用下细胞周期各时相细胞比率、细胞增殖指数(PI)以及凋亡率变化.结果 放射配体法发现7402肝癌细胞表达GHR,在rhGH作用后24 h,7402肝癌细胞GHR的位点数量在10与100 ng/ml实验组较对照组增加(P<0.05),在10 000 ng/ml组较对照组降低(P<0.05);rhGH作用后的24 h与48 h,7402肝癌细胞上清液IGF-Ⅰ浓度在100 ng/ml组较对照组显著增高(P<0.05);与此同时,rhGH对体外培养的7402肝癌细胞增殖具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在100 ng/ml浓度时促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其它浓度(1,10,1000,10 000 ng/ml)对肝癌细胞的增殖虽能表现出一定程度促进作用,但总体效果较rhGH在100 ng/ml浓度为弱.rhGH作用48 h流式细胞检测发现各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G2-M细胞所占比率,10 ng/ml组与100 ng/ml组较对照组显著增高(P<0.05);各实验组凋亡率与对照组比较无显著差异.结论 rhGH可促进7402肝癌细胞DNA的合成,提高肿瘤细胞分裂增殖能力,原因可能与7402肝癌细胞表达GHR,rhGH可在一定浓度范围内上调7402肝癌细胞GHR的表达,促进肿瘤细胞合成IGF-Ⅰ有关,其确切途径仍有待进一步验证.  相似文献   

5.
目的:观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)对肾小球系膜细胞(GMC)增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的作用。方法:以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果:(1)不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用(P〉0.05),100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖(P〈0.01),100ng/ml作用最明显。(2)HB-EGF(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)能刺激系膜细胞TGF-β1的表达(P〈0.01),100ng/ml时作用最强。(3)100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显(P〈0.05)。结论:一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。  相似文献   

6.
目的 研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)生物学特性的影响.方法 抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞.培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200ug/ml,以不加EMPs为对照.用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs粘附性的影响.通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在1h、3.5h、6.5h的伸展率.MTT法测定各组细胞的增殖活性.结果 猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好.对照组以及不同浓度EMPs对细胞粘附性的影响无统计学差异.在1h、3.5h、6.5h,各组细胞的伸展率无显著不同.EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200ug/ml浓度的EMPs从实验的第三天开始显著促进猪BMSCs的增殖.结论 EMPs对体外培养的猪BMSCs的粘附性和伸展率无影响,200ug/ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,提示可尝试联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损.  相似文献   

7.
rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞向成骨细胞分化的量效作用   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨体外条件下rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞(adipose-derived adult stem cells,ADASCs)向成骨细胞分化和增殖的情况,并观察其量效关系.方法 从成年兔颈后部获取脂肪组织,采用酶消化法分离并培养脂肪成体干细胞.稳定传代后,用不同浓度rhBMP-2对ADASCs进行诱导分化,采用碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色进行成骨细胞鉴定,采用碱性磷酸酶活性测定及MTT比色法进行分化和增殖活性比较.结果 碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色为阳性;当rhBMP-2浓度在100~400 ng/ml时,各组碱性磷酸酶活性提高明显(P<0.05),在400 ng/ml以上各组则无明显差异(P>0.05);当rhBMP-2浓度在800 ng/ml以下时,各组增殖活性无明显差异(P>0.05),在800 ng/ml以上则存在明显的抑制作用,各组存在明显差异(P<0.05).结论 研究表明,在体外条件下rhBMP-2能诱导脂肪来源干细胞向成骨细胞分化;并且当其浓度在400~800 ng/ml时,能促进脂肪来源干细胞的增殖和分化.  相似文献   

8.
目的研究地塞米松、重组人成纤维细胞生长因子(recombinant human fibroblast growth factor,rhFGF)及重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)对兔骨髓基质干细胞(marrow slromal stem cells,MSCs)生长及分化的量效作用,为其在骨组织上程中的应用提供实验基础。方法体外分离培养免MSCs,分为1个空白对照组及9个实验组。实验组分别与终浓度为10^-8、10^-7、10^-6mol/L地塞米松;终浓度为50、200、500ngng/ml FGF;终浓度为50、500、1000ng/ml rhBMP-2培养。于4、7d终止培养并测定细胞总蛋白及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase。ALP)活性。结果与空白对照组比较,10mol/L地塞米松显著抑制细胞蛋白合成(P〈0.05),而10^-8、10^-7mol/L地塞米松对细胞蛋白合成无明显影响;10^-6,10^-7mol/L地塞米松刺激MSCs高度表达ALP(P〈0.05)。rhFGF各浓度组显著促进细胞蛋白合成量差异有统计学意义(P〈0.05),表现ALP活性抑制。rhBMP-2符浓度组对细胞蛋白合成九明显影响;50ng/ml rhBMP2不影响MSCs的ALP活性;当浓度增至500ng/ml与1000ng/ml时,ALP活性显苦增加(P〈0.05)。结论10^-7mol/L地塞米松及500、1000ng/ml rhBMP-2在不影响MSCs增殖的前提下,适当浓度能显著促进MSCs向成骨细胞转化,在骨组织工程的研究中有重要的应用价值。  相似文献   

9.
目的探讨不同浓度转化生长因子(TGF)-β_1对人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMCs)增殖及迁移的影响。方法体外培养人主动脉平滑肌细胞,用0、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10ng/ml浓度的重组人TGF-β_1进行干预,分别在干预后第0、6、12、24、36小时5个不同时间点进行CCK-8试验,或24小时后进行Transwell迁移试验,观察细胞增殖及迁移情况。结果当TGF-β_1浓度5ng/ml时,随着刺激浓度增加,人主动脉VSMCs增殖水平逐渐升高,当TGF-β_1浓度5 ng/ml时,细胞增殖水平降低。不同浓度TGF-β_1(0、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10 ng/ml)干预细胞,随着作用时间延长,细胞增殖水平逐渐升高,在24小时时达到高峰,之后逐渐降低。TGF-β_1浓度为5 ng/ml且培养时间为24小时时细胞增殖水平最高(OD值:0.843±0.016)(P0.01)。当TGF-β_1浓度≤5ng/ml(0、0.05、0.1、0.5、1、2、5 ng/ml)且作用时间为24小时时,随着TGF-β_1浓度增加,人主动脉VSMCs迁移水平不断升高,其中以TGF-β_1浓度为5 ng/ml时细胞迁移水平最高,迁移细胞数为84.667±0.577;TGF-β_1浓度5 ng/ml时,细胞迁移水平降低,迁移细胞数为69.667±1.528。与其余各组TGF-β_1浓度作用下的迁移细胞数比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 5ng/ml的TGF-β_1作用24小时更能刺激人主动脉平滑肌细胞发生增殖及迁移。  相似文献   

10.
目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对人雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 以不同浓度的雷公藤内酯醇作用于体外培养的DU145细胞不同的时间,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml TP作用DU145细胞24h、48h、72h后对DU145细胞均有抑制作用,各组间有显著差异(P<0.05);24h、48h、72h IC50分别为117.95 ng/ml、47.60 ng/ml、14.43 ng/ml,TP作用DU145细胞72min后,DU145细胞被阻滞于S期,并且随浓度的加大,阻滞效果越显著;凋亡率逐渐增加.结论 TP能抑制DU145细胞的增殖,阻滞DU145细胞于S期,诱导DU145细胞调亡.  相似文献   

11.
Since bone morphogenetic proteins (BMPs) are highly homologous, we investigated the hypothesis that recombinant BMP-4 of the genome of Xenopus laevis (rxBMP-4) may influence the proliferation or differentiation of human primary osteoblast-like cells (HPOC), as occurs with recombinant human BMP (rhBMP-2). HPOC were incubated in the presence of either rxBMP-4, rhBMP-2 or basic fibroblast growth factor (rh-bFGF). The last two were used as positive controls and are known to induce differentiation or proliferation of HPOC, respectively. rxBMP-4 (50 ng/ml and 100 ng/ml) induced a differentiation of HPOC to almost the same extent as rhBMP-2, whereas the addition of rh-bFGF, applied in the same concentration, failed to have any influence on cell differentiation. rh-bFGF however, provoked an increase in cell proliferation of up to 150% when compared with non-stimulated HPOC, while rhBMP-2 and rxBMP-4 had no such effect. Our results indicate an equipotent effect of rhBMP-2 and rxBMP-4 obtained from Xenopus laevis on the differentiation and proliferation of human primary osteoblast-like cells.  相似文献   

12.
Bone metabolism is influenced by systemic and local acting hormons. Bone morphogenetic proteins (BMPs) as representatives of the latter substances are known to have the ability for ectopic bone formation. Within this study, we investigated the influence of different growth factors on the proliferation- and differentiation rate of osteoblast-like cells. For that purpose, human osteoblast-like cells (HPOC) were incubated in the presence of either recombinant BMP-4 of the genome of xenopus laevis (rxBMP-4), recombinant human BMP 2 (rhBMP-2), transforming growth factor-beta (TGF-beta) or basic fibroblast growth factor (rh-bFGF) in two different concentrations each (10 ng/ml and 50 ng/ml). Cell proliferation was measured within a MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromid] assay, the amount of cell differentiation by the activity of alcaline phosphatase. Rx-BMP-4 induced a differentiation of HPOC to almost the same extent as rhBMP-2, whereas the addition of rh-bFGF, applied at the same concentration, failed to have any influence on cell differentiation. However, rh-bFGF provoked an increase in cell proliferation when compared with unstimulated HPOC, while rhBMP-2 and rxBMP-4 showed no effect on proliferation. TGF-beta influenced bone proliferation as well as differentiation significantly. The equipotent effect of recombinant human BMP-2 and recombinant BMP-4 obtained from Xenopus laevis with regard to differentiation and proliferation of human primary osteoblast-like cells originates either in the fact that target cells have receptors for BMP 2 as well as BMP 4, or that both BMP's link to the same receptor with almost the same affinity.  相似文献   

13.
目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)单独及联合应用对骨骼肌源性干细胞(muscle derived stem cells,MDSCs)生长的影响。方法取出生24h内的昆明小鼠15只,采用连续预贴壁法从小鼠后肢肌分离培养MDSCs,用含2%胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化。取原代MDSCs及MDSCs分化细胞,采用免疫细胞化学染色检测干细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志α-Sarcomeric肌动蛋白的表达。HE染色观察细胞肌管形成。MTT比色法检测不同浓度(6.25、12.50、25.00、50.00、100.00ng/ml)的bFGF和EGF单独应用96h对MDSCs增殖的影响以及二者(100.00ng/ml)联合作用24、48、72和96h对MDSCs增殖的影响。结果从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,免疫细胞化学染色90%以上的MDSCs呈Sca-1阳性,分化形成的肌管呈α—Sarcomeric肌动蛋白阳性。HE染色可见肌管形成。bFGF、EGF对MDSCs的促增殖效应随浓度的增加而增加。与阴性对照组比较,bFGF于12.50ng/ml出现促增殖效应(P〈0.05);25.00ng/ml组与12.50ng/ml组比较,作用提高(P〈0.01);50.00、100.00ng/ml组较25.00ng/ml组无明显提升(P〉0.05);EGF的作用与bFGF类似,但于50.00ng/ml时趋于饱和。与阴性对照组比较,EGF于72h、bFGF于96h表现促增殖效应(P〈0.01),而二者联合应用于24h即表现促增殖效应(P〈0.01),并于48、72和96h增殖效应均较单独应用显著提高(P〈0.05)。结论bFGF和EGF都能促进MDSCs的增殖,联合作用更快、更强。  相似文献   

14.
Recombinant human bone morphogenetic protein (rhBMP) is a promising therapeutic cytokine for the induction of bone formation, but a weak response in humans remains a major hurdle in its therapeutic application. We have previously reported an rhBMP-2-induced increase in the bone mass of mice receiving systemic rolipram, a specific inhibitor of phosphodiesterase-4. To overcome the side effects of systemic administration of rolipram, we examined the effects of its local release. Polyethylene glycol discs were used as a delivery system. The discs were impregnated with rhBMP-2 and rolipram and implanted into the dorsal muscle pouches in mice. Bone formation was assessed by measuring the bone mineral content (BMC) of the formed bone. First, to determine the optimal dose of rolipram, we added 0–5000 nmol rolipram and 5 μg rhBMP-2 to the pellets and found that 500 nmol rolipram was the most effective concentration for inducing bone formation after 4 weeks. Second, to examine the time course of bone formation, we implanted 5 μg rhBMP-2 with 0 or 500 nmol rolipram and killed mice 5, 7, 10, 14, or 21 days after implantation. Bone formation was accelerated in the rolipram group. Finally, to determine the rolipram-induced increase in the effect of BMP, BMC obtained after treatment with 5 μg rhBMP-2 and 500 nmol rolipram was compared with that obtained after treatment with 5–9 μg rhBMP-2 without rolipram, 4 weeks after implantation. The results indicated that 500 nmol rolipram enhanced the effect of rhBMP-2 by almost 1.5-fold. In summary, locally released rolipram enhanced the capacity of rhBMP-2 to induce bone formation, an effect previously reported with systemic administration. These findings may decrease the cost and increase the efficacy of rhBMP-2 treatment.  相似文献   

15.
骨形成蛋白-2诱导脊髓神经干细胞分化的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究不同浓度的骨形成蛋白-2(bone norphogenetic protein-2,BMP-2)对脊髓源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导分化成为神经细胞(神经元和神经胶质细胞)的影响。方法:取孕14d的胚胎小鼠脊髓,原代培养出脊髓NSCs。培养四代后,分别在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在与否的不同条件下,加入不同浓度的BMP-2.观察细胞的增殖、分化情况,用免疫组织化学的方法进行鉴定,并进行统计学分析:结果:低浓度的BMP-2(1~10ng/ml)与bFGF(20ng/ml)联合作用,可促进脊髓NSCs向神经元和星形胶质细胞分化,抑制其向少突胶质细胞分化。较高浓度BMP-2(100ng/ml)可抑制脊髓NSCs的增殖甚至导致细胞死亡。结论:脊髓NSCs在低浓度BMP和bFGF联合作用下能有效地分化成具有多种特性的神经样细胞,并与脊髓具有良好的同源性,可为脊髓损伤的修复研究提供良好的细胞学基础。  相似文献   

16.
Objective: To investigate the effect of basic fibroblast growth factor (bFGF) and hyaluronic acid (HA) on the proliferation of rabbit chondrocytes in vitro. Methods: Chondrocytes from the knee joints of New Zealand white rabbits were cultured, bFGF or HA or both were added into the culture medium respectively, and the proliferation of the ehondrocytes was measured with MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyl-tetra-zolium bromide. (MTT, Sigma, M2128). Results: Basic fibroblast growth factor (10ng/ml) with low concentration of fetal bovine serum in the culture medium promoted the proliferation of chondrocytes significantly, and this effect reached its maximum when concentration of bFGF reached 50ng/ml. HA itself had no effect on the proliferation of chondrocytcs. However, when bFGF was used in combination with HA, especially when the concentration of bFGF was 50-500ng/ml and that of HA was 10-50ng/ml, the effect on the proliferation of chondrocytes was much more than when bFGF or HA was used alone. Conclusions: bFGF can promote the proliferation of chondrocytes. HA, which has no effect on the proliferation of the cells, can maintain a normal growth of chondrocytcs.When bFGF is used in combination with HA, more proliferation is obtained.  相似文献   

17.
rhBMP-2对兔骨髓基质细胞VEGF表达及成骨潜能的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:观察经不同剂量重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogeneti protein-2,rhBMP-2)刺激后的兔骨髓基质细胞(marrow stromal cell,MSC),其血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及成骨潜能变化的情况。方法:取兔双侧股骨骨髓基质细胞体外培养,分别以不同剂量rhBMP-一2刺激细胞,并设立空白对照组。培养5d后,进行细胞形态(胍染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(组化染色与活性测定)、钙化结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果:不同剂量组间在碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率三项观测指标上差异显著,rhBMP-2剂量为100ng/ml左右时效果最佳;在细胞记数与MTT检测上各组差别不显著。结论:应用rhBMP-2在促进基质细胞成骨潜能的同时,还可促进VEGF的表达,其应用剂量与效果之间存在明显相关关系,应用剂量为100ng/ml左右时,其促进VEGF表达及成骨潜能作用同时达到最佳效果,超过此应用剂量,两者则有下降趋势。应用rhBMP-2对促进骨髓基质细胞增殖无明显影响。  相似文献   

18.
目的研究转化生长因子β(transformin ggrowth factorβ,TGF-β)、重组人骨形成蛋白2(recom binant humanbonemor phogenetic protein2,rhBMP-2)对雪旺细胞生物学行为的影响。方法体外培养SD乳鼠雪旺细胞,按5×103/孔接种96孔板,分为3组。A组:加入50ng/mlTGF-β;B组:加入50ng/mlrhBMP-2;C组不作任何处理,作为空白对照组。采用MTT法每天取4孔连测9d细胞数,并绘制生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期以观察雪旺细胞增殖情况;ELISA双夹心法测定培养液中神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)含量。结果MTT法检测显示A、B组细胞生长曲线远离C组,逐渐上升到第8、9天差异明显,A组较B组上升趋势更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪测定显示A组和B组细胞增殖指数较C组高(P<0.05)。ELISA法检测A组上清NGF含量最高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性TGF-β、rhBMP-2均能促进雪旺细胞增殖和分泌NGF的功能,而TGF-β更优于rhBMP-2。  相似文献   

19.
目的 针对骨组织工程中成骨细胞与基质材料间促粘附问题,研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成骨细胞粘附特性的影响。方法 取兔骨髓基质干细胞来源的成骨细胞体外培养,分别用5、10、50、100及200ng/ml浓度的bFGF诱导培养24小时作为实验组;不含bFGF的培养基作为对照组。观察接种后0.5、1、2、4、及8小时各时间点成骨细胞粘附情况,体现学计量粘附细胞数量。结果 10ng/mlbFG  相似文献   

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