山茱萸、生地有效部位及配伍组合抑制糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的研究

目的:通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC),建立糖基化终末产物(AGEs)致肾小球系膜细胞增殖的细胞模型,观察山茱萸有效部位、生地有效部位及其配伍组合对糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的抑制作用,以确定最佳配伍组合物。方法:体外培养肾系膜细胞,当细胞贴壁生长至80%~90%时,(1),用浓度为50、100、200、400mg/L的山茱萸各部位(环烯醚萜苷、三萜酸、多糖)、生地各部位(环烯醚萜苷、多糖、寡糖)进行干预,然后加入200mg/L的糖基化终末产物刺激,24 h后检测细胞增殖情况,筛选出活性较强的部位。(2),将活性较强的部位山茱萸环烯醚萜苷和三萜酸(A)、生地环烯醚萜苷(B)按1:0、0:1、1:1、1:2、2:1进行配伍组合(分别为A1、B1、A1B1、A1B2、A2B1),以浓度为25、50、100mg/L生药及含药血清进行干预,加入200mg/L的AGEs刺激,24 h后检测细胞增殖情况以及细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Coll-Ⅳ)水平。结果:(1)山茱萸环烯醚萜苷部位、山茱萸三萜酸部位与生地环烯醚萜苷部位活性较强,具有显著抑制糖基化终末产物致肾小球系膜细胞增殖的作用。(2)配伍组合物(A1、B1、A1B1、A1B2、A2B1)生药及含药血清均能够抑制肾小球系膜细胞增殖及其分泌纤维连接蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的水平,并呈一定量效关系。结论:山茱萸环烯醚萜苷部位、山茱萸三萜酸部位、生地环烯醚萜苷部位及其配伍组合能够明显抑制糖基化终末产物致肾系膜细胞增殖及其分泌的纤维连接蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原水平,减少细胞外基质沉积,其中配伍组合A2B1抑制效应最强,为最佳配伍组合。     

2型糖尿病血管病变与血浆ET NO相关性及心血康干预治疗的影响

目的 :观察 2型糖尿病血管病变与血管内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)的相关性及心血康干预治疗的影响。方法 :检测治疗前后 2型糖尿病血管病变及 2型糖尿病无血管病变患者ET、NO、IAI(胰岛素敏感指数 )。结果 :2型糖尿病血管病变患者ET水平升高 ,NO水平下降 ,IAI与ET呈负相关 ,与NO呈正相关。结论 :2型糖尿病血管病变与ET、NO的异常密切相关。心血康可有效的防治 2型糖尿病血管病变     

2型糖尿病血管病变与血浆ET、NO相关性及心血康干预治疗的影响

目的观察2型糖尿病血管病变与血浆内皮素（ET）、一氧化氮（NO）的相关性及心血康干预治疗的影响。方法检测治疗前后2型糖尿病血管病变及2型糖尿病无血管病变患者ET、NO、IAI（胰岛素敏感指数）。结果2型糖尿病血管病变患者ET水平升高，NO水平下降，IAI与ET呈负相关，与NO呈正相关。结论2型糖尿病血管病变与ET、NO的异常密切相关。心血康可有效的防治2型糖尿病血管病变。     

2型糖尿病血管病变与血浆ET、NO相关性及红花注射液干预治疗的影响分析

目的观察2型糖尿病血管病变与血浆内皮素（ET）、一氧化氮（NO）的相关性及心血康干预治疗的影响。方法检测治疗前后2型糖尿病血管病变及2型糖尿病无血管病变患者ET、NO、IAI（胰岛素敏感指数）。结果2型糖尿病血管病变患者ET水平升高，NO水平下降，IAI与ET呈负相关，与NO呈正相关。结论2型糖尿病血管病变与ET、NO的异常密切相关。红花注射液可有效的防治2型糖尿病血管病变。     

风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞的保护作用研究

目的 研究风轮菜乙醇提取物(EJCT)对血管内皮细胞的保护作用及机制.方法 分别用过氧化氢 (H2O2 )和高糖建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型.MTT法检测细胞存活率;用试剂盒方法检测细胞超氧化物歧化酶 (SOD)和乳酸脱氢酶 (LDH)活力;用Griess 法测定上清液中NO2-浓度反映内皮细胞释放的一氧化氮 (NO).结果 不同浓度的EJCT能明显提高H2O2和高糖损伤的内皮细胞存活率,使H2O2 损伤的内皮细胞内低下的SOD活力回升,降低高糖诱导的内皮细胞LDH释放.另外,EJCT(3,10,30,100 mg/L)能增加HUVECs培养液中NO含量.结论 风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞具有保护作用,机制可能与其抗氧化和促进NO的合成有关.     

天麻首乌片治疗偏头痛的作用机理的实验研究

目的：从血管内皮细胞的角度寻找天麻首乌片与偏头痛的联系。方法：体外培养大鼠脑微血管内皮细胞中加入含天麻首乌片的血清并观察培养液中NO和ET的含量变化以及ET mRNA和iNOSmRNA表达的影响。结果：天麻首乌片显著下调iNOSmRNA,rCMECs和ETmRNA表达，降低培养液中NO和ET的含量。结论：天麻首乌片可降低脑鼠微血管内皮细胞的凋亡达到治疗偏头痛的作用。     

蝇蛆壳聚糖对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究蝇蛆壳聚糖(HMC)对ox - LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 利用正常及ox - LDL诱导的内皮细胞损伤模型,采用不同剂量蝇蛆壳聚糖共同孵育,通过MTT法检测细胞存活率,生化法和放免法检测细胞培养液一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平,考察蝇蛆壳聚糖对内皮细胞的保护作用.结果 MTT实验壳聚糖各剂量组OD值与正常对照组无显著性差异(P＞0.05);细胞上清液中NO水平升高(P＜0.01),ET含量与正常对照组无显著性差异(P＞0.05).壳聚糖+ ox - LDL各剂量组OD值高于ox - LDL处理组(P＜0.01).细胞上清液中NO水平均升高(P＜0.01),ET含量降低(P＜0.01),各剂量组之间有显著性差异(P＜0.01).结论 HMC具有保护血管内皮细胞的作用.机制可能是:提高细胞生存率,减轻ox - LDL诱导的受损内皮细胞NO释放减少,ET释放增加,保护内皮细胞结构和功能的完整性.提高细胞内SOD活性,增强其抗氧化能力,从而清除活性氧,产生内皮保护作用.     

三草降压汤含药血清对人脐静脉内皮细胞活性及NO分泌的影响

目的：观察三草降压汤（SCD）含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及NO分泌水平的影响,探讨其降压作用的有效组分和作用机制。方法：采用大孔树脂富集纯化技术制备SCD的4种组分（SCD-DW、SCD-10ET、SCD-50ET、SCD-95ET）,分别用血清药理学方法制备SHR大鼠含药血清,以5%、10%、15%的血清浓度作用于HUVEC,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,Griess比色法检测培养液中NO含量。同时观察eNOS抑制剂L-NAME对其作用的影响。结果：SHR空白血清可显著抑制HUVEC活性（P〈0.05）,降低NO含量（P〈0.01）。SCD-DW、SCD-10ET含药血清可增强被SHR空白血清抑制的HUVEC的活性（P〈0.05,P〈0.01）,SCD-10ET可以提高HUVEC的NO分泌水平（P〈0.05）,此效应在15%血清浓度下可被L-NAME明显抑制（P〈0.01）。结论：SCD-10ET可以通过调节内皮细胞NO分泌,减少血管内皮细胞损伤,eNOS-NO途径可能是该组分降低血压的机制之一。     

一氧化氮和内皮素作用机制及其与脑出血的相关性研究进展

综述了NO和ET作用机制及与脑出血的相关性研究进展。血管内皮细胞通过释放ET收缩血管和促进内皮细胞增殖 ,释放NO松弛血管和抑制内皮细胞增殖。ET和受体结合主要通过激活与G -蛋相偶联的磷脂酶C产生作用。NO可介导神经性血管舒张及调节胃肠、呼吸道及泌尿生殖功能 ,对呼吸链中的关键酶及靶细DNA合成有抑制作用 ,可激活GC而CGM升高。NO与氧原性自由基反应则产生毒性物质 ,亦可直接作用于钾通道。生理条件下 ,ET与NO处于动态平衡状态 ,使血管张力保持正常。脑出血与NO和ET的平衡破坏相关 ,脑出血时血清NO含量发生改变 ,与出血量呈负相关。脑出血时ET升高 ,且与病情轻重、病灶大小、病变部位密切相关     

ASO血瘀证血清对血管内皮细胞损伤的影响及桃红四物汤的调节作用

目的 探讨动脉硬化闭塞症（arteriosclerosis obliterans, ASO）血瘀证血清对血管内皮细胞损伤的影响及桃红四物汤的调节作用。 方法 建立脐静脉内皮细胞培养体系,制成ASO血瘀证血清内皮细胞损伤模型,分别加入桃红四物汤低、中、高浓度大鼠含药血清,MTT法观察内皮细胞增殖活性,透射电镜观察内皮细胞超微结构,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度和细胞骨架的变化,酶联免疫吸附（ELISA）观察各组内皮细胞培养液上清中内皮素（ET）、一氧化氮（NO）和转化生长因子β1（transforming growth factor β1, TGF-β1）的含量。 结果 ASO血瘀证血清组内皮细胞增殖活性下降,细胞结构破坏明显,钙离子浓度升高,培养液中ET、NO 及TGF-β1含量明显升高 （ P <0.01）,ET/NO比例失衡。与桃红四物汤含药血清共孵育后,内皮细胞增殖活性和细胞结构的损伤明显改善,ET、NO及TGF-β1水平下降 （ P <0.05,  P <0.01）,ET/NO比例趋于正常。 结论 桃红四物汤治疗血瘀证ASO的主要机制为改善血管内皮细胞的损伤和分泌功能失调。     

蛇床子素对高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究蛇床子素对高糖诱导原代培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)炎症的保护作用。方法将HUVEC细胞分为对照组、高糖组、对照+蛇床子素组和高糖+蛇床子素组。培养5 d后,采用硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮(NO),荧光酶标仪测定细胞内活性氧(ROS),并通过real-time PCR和Western blot法检测趋化因子CCL5及其受体CCR5 mRNA和蛋白的表达。结果高糖明显降低对照组细胞上清液中NO水平同时升高ROS,蛇床子素能增加高糖组细胞上清液中NO水平同时降低高糖组细胞内ROS;real-time PCR和Western blot结果显示蛇床子素可以降低高糖组细胞CCL5及其受体CCR5 mRNA和蛋白的表达量。结论蛇床子素对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞的损害具有保护作用是与其抗氧化应激及抗炎作用有关。     

通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的：观察通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法：分离大鼠脑微血管内皮细胞培养鉴定,采用氧糖剥夺法建立模拟体外脑缺血再灌注内皮细胞损伤模型,利用制备的通心络含药血清干预,CCK-8法检测细胞活性;硝酸酶还原法测定细胞上清液NO的含量;Elisa法检测细胞上清液vWF的含量。结果：与正常组比较,模型组细胞OD值明显降低（P〈0．01）,细胞上清液NO和vWF（P〈0．05或P〈0．01）含量明显升高;与模型组比较,10％的通心络含药血清作用24h,细胞OD值明显增高（P〈0．01）,细胞上清液NO含量和vWF含量明显降低（P均〈0．01）。结论：通心络含药血清可能是通过减少NO和vWF分泌保护脑缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。     

扇贝裙边糖胺聚糖对高糖致ECV-304损伤的保护作用

 目的探讨扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对高糖所致ECV-304损伤的保护作用及其机理。方法体外培养生长良好的ECV-304,建立高糖诱导的细胞损伤模型,在高浓度葡萄糖(G lu55.5 mmol·L^-1)状态下加入不同质量浓度SS-GAG,采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性,特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO、放射免疫法测定内皮素-1(ET-1)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)。结果高糖损伤组,细胞增殖活性受到明显抑制,细胞培养上清液ET-1、AⅡ的含量明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)),细胞内NO分泌明显降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。SS-GAG明显减轻高糖对细胞损伤,细胞增殖活性、ET-1、AⅡ、NO均趋于正常,且随SS-GAG浓度增高保护效果越明显。结论高糖对ECV-304细胞具有明显的损伤作用,可导致ECV-304细胞形态和功能的紊乱,引起ET-1、AⅡ产生增多,NO分泌失调;SS-GAG通过调节ET、AⅡ和NO分泌,减轻高糖对ECV-304细胞的损伤,保护ECV-304。提示SS-GAG对防治心血管疾病和糖尿病(DM)血管病变及动脉粥样硬化(AS)的发生发展具有积极的意义。     

通心络干预心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的保护作用

目的 观察心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的影响及通心络的干预作用。 方法 制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液：正常内皮细胞条件培养液（N-CM）,同型半胱氨酸诱导损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液（H-CM）和通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液（T-CM）。将心肌细胞随机分为4组：正常对照组、N-CM组、T-CM组及H-CM组,采用相应培养液培养。倒置显微镜观察心肌细胞形态,酶联免疫吸附法检测细胞上清液心肌肌钙蛋白T（cTnT）含量,JC-1试剂盒测定细胞中线粒体膜电位（MMP）,Western blot法检测细胞色素C（Cyt C）和钙网蛋白（CRT）蛋白表达。 结果 与正常对照组比较,N-CM组细胞形态无明显变化,细胞上清液cTnT含量、MMP水平、CRT及Cyt C蛋白表达无明显变化（P>0.05）;与N-CM组比较,H-CM组细胞皱缩,细胞边缘模糊,有大量坏死细胞漂浮,细胞上清液cTnT含量、CRT及Cyt C蛋白表达升高,MMP水平降低（P<0.01）;与H-CM组比较,T-CM组细胞无明显皱缩,细胞边缘较清楚,坏死漂浮细胞减少,细胞上清液cTnT含量、CRT及Cyt C蛋白表达降低,MMP水平升高（P<0.05, P<0.01）。结论 受损心肌微血管内皮细胞的条件培养液可损伤心肌细胞,其损伤机制可能与CRT介导的线粒体功能受损有关,通心络可抑制该损伤过程。     

基于内皮损伤学说的通阳化浊方干预冠心病细胞实验研究

目的基于内皮损伤学说,探讨通阳化浊方干预冠心病的作用机制。方法培养人主动脉血管内皮细胞,以灌服蒸馏水的大鼠血清为对照,在人主动脉血管内皮细胞培养基中加入H_2O_2,并在实验体系中加入灌服通阳化浊方、四妙勇安汤灌胃处理的大鼠血清。收集各组细胞上清液,用酶联免疫吸附双抗体夹心法测各组细胞培养液上清中SOD、MDA和NO的含量;流式细胞仪Annexin V-PI双染检测人主动脉血管内皮细胞的凋亡发生率,噻唑蓝(MTT)法检测人主动脉血管内皮细胞的增殖活性,鬼笔环肽染色细胞骨架。结果 H_2O_2显著降低人主动脉血管内皮细胞培养上清液中NO、SOD的含量,升高MDA含量,降低人主动脉血管内皮细胞增殖活性,促进内皮细胞凋亡,使内皮细胞皱缩、细胞骨架排列紊乱。给药组能显著降低MDA含量,升高NO、SOD含量,与四妙勇安汤相比,通阳化浊方组血清增加内皮细胞活性效果更好,降低内皮细胞凋亡率,使内皮细胞骨架更加清晰;而灌服蒸馏水的大鼠血清则无此作用。结论通阳化浊方组的大鼠血清对H_2O_2造成的人主动脉内皮细胞损伤具有更好保护作用。     

凉血通瘀方对细菌内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的：研究凉血通瘀方对细菌内毒素致损伤的血管内皮细胞超微结构的影响。方法：应用体外细胞培养方法。以细菌内毒素（LPS）造成人静脉血管内皮细胞（HUVECs）损伤模型,通过MTT法和细胞上清液中NO含量的检测,研究凉血通瘀方对细菌内毒素致损伤的血管内皮细胞的保护作用。结果：给予LPS刺激24h、36h、48h后。HUVECs对MTT的还原能力下降,培养液中的MTT还原产物含量减少,OD值显著低于正常对照组;凉血通瘀方大、中、小剂量组HUVECs对MTT的还原能力均明显优于模型组。同时．凉血通瘀方在不影响细胞存活率的情况下,可以明显降低LPS刺激血管内皮细胞24h后NO的释放量。结论：凉血通瘀方能明显拮抗血管内皮细胞由于LPS刺激引起的直接损伤作用。     

左归降糖灵提取物改善葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的研究

目的：探讨左归降糖灵改善葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的作用。方法：采用2型糖尿病血管并发症细胞研究模型，观察不同剂量左归降糖灵及达美康作用后细胞形态学、细胞生长活力及条件培养液中一氧化氮（NO）、内皮紊1（ET-1）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）含量的变化。结果：模型组细胞普遍回缩变圆，细胞内出现粗糙样颗粒变化，细胞活力明显下降（P〈0．01），条件培养液中PAI和ET-1含量明显升高（P〈0．01、0．05），NO含量明显降低（P〈0．05），而tPA含量变化不明显（P〉0．05）；三个剂量的左归降糖灵组及达美康组均可不同程度改善细胞形态变化，提高细胞活力，降低PAI和ET含量，升高NO含量；除达美康组能提高tPA含量外，其余各组tPA变化不显著（P〉0．05）。结论：左归降糖灵对葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导的血管内皮细胞形态学异常、细胞活力下降及调节血管舒缩和纤溶功能异常有显著的改善作用。     

自拟益气健脾行血颗粒剂对2型糖尿病并下肢血管病变患者一氧化氮和血管内皮素的干预作用

目的:分析研究自拟益气健脾行血颗粒剂对2型糖尿病并下肢血管病变患者一氧化氮(NO)和血管内皮素(ET)的干预作用。方法:将60例2型糖尿病合并下肢血管病变患者随机分为观察组、对照组,两组均在相同的基础治疗的基础上,观察组加自拟益气健脾行血颗粒,对照组加阿司匹林肠溶片,对两组患者的血糖、血浆ET及NO水平给予对比分析。结果:临床治疗以后,观察组患者的临床治疗效果显著优于对照组(P0.05);治疗前,两组患者的FBG和PBG水平差异无统计学意义(P0.05);两组患者的ET和NO水平差异无统计学意义(P0.05);治疗后,观察组患者的FBG和PBG水平明显低于对照组(P0.05);观察组患者的ET明显低于对照组,NO明显高于对照组(P0.05)。结论:益气健脾行血颗粒剂能够降低患者血浆血管内皮素水平,使一氧化氮水平明显提高,同时对患者内皮细胞功能给予有效保护,对防治糖尿病合并下肢血管病变具有重要意义。     

冠心康对脂质损伤的人血管内皮细胞保护机制的研究

目的：探讨中药复方制剂冠心康对损伤血管内皮细胞的保护作用．寻找其抗动脉粥样硬化、防治冠心病可能的作用机制。方法：建立细胞损伤模型．用氟伐他汀及冠心康药物血清处理损伤的内皮细胞72h后，分别用硝酸还原酶法、放射免疫法以及ELISA法测定培养上清液中NO、ET以及sICAM-1水平．RT—PCR法测各组细胞sICAM—1mRNA表达水平。结果：中药复方制剂冠心康能明显上调NO水平．降低ET、sICAM-1及其mRNA水平．与模型组比较有显著性差异（P〈0．01）。与西药氟伐他汀比较，在下调ET、sICAM-1及其mRNA水平方面．冠心康明显优于氟伐他汀（P〈0．01）；在上调NO水平方面．西药则明显强于冠心康（P〈0．01）。结论：冠心康能改善受损的内皮细胞分泌功能．减少内皮细胞与单核细胞的黏附，从而减少血管内皮损伤，防止动脉粥样硬化的发生与发展。     

益气养阴活血方对气阴两虚血瘀型糖尿病患者血浆内皮素与一氧化氮水平的影响

目的 :探讨益气养阴活血方对气阴两虚血瘀型糖尿病患者血浆内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)水平的影响。方法 :将 80例 2型糖尿病患者随机分为治疗组及对照组 ,观察益气养阴活血方对气阴两虚血瘀型糖尿病患者血糖、临床症状及血浆ET、NO水平的影响 ,并与糖适平对照组进行对比研究。结果 :治疗组治疗后血浆ET水平明显下降 ,有显著性意义 (P <0 0 1) ,NO水平无明显改变 ,益气养阴活血方降低血糖的总有效率为空腹血糖 (FBG) 87 80 % ,餐后 2h血糖 (PBG) 90 2 4 %。结论 :益气养阴活血方可降低患者血浆ET水平 ,有一定保护糖尿病患者内皮细胞功能的作用 ,并可降低血糖、改善临床症状 ,对治疗糖尿病及预防其血管并发症有积极意义。