人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建

目的应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减cDNA文库。方法分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA．合成双链cDNA，经RsaI酶切后，将胰腺癌双链cDNA分为两组，分别加上不同的接头，再与正常胰腺组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段。将该差异表达片段克隆至T／A载体，并转化大肠杆菌TOP10F’，经蓝白斑筛选后，再用PcR方法筛选阳性克隆，从而构建胰腺癌抑制消减cDNA文库。结果文库扩增后得到257个白色克隆，随机挑取50个阳性克隆进行PCR扩增分析，其中47个克隆有插入片段．克隆阳性率为94％，片段大小主要集中在300～600bp之间。结论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库，为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础。     

五株白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性生物测定和生化检测的研究

目的检测采自野外株和实验室驯化株白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性水平,探讨实验室抗性株(R-lab)的抗性机理。方法以采自深圳、广州龙洞和东莞庄的三株白纹伊蚊(SZ,LD和DW)和两株实验室驯化白纹伊蚊(S-lab和R-lab)为研究对象,采用WHO推荐的幼虫浸渍法分别测定它们的抗药性水平,并采用PBO增效实验和生化检测方法测定R-lab株代谢酶活性。结果与S-lab株相比,R-lab株抗性倍数最高(RR50:480),而采自野外的三株抗性倍数较低(LD:6.6;DW:8.5;SZ:2.0)。对R-lab株活体增效实验和离体解毒酶实验结果表明PBO增效作用显著,增效倍数为120倍,GST酶活性上升1.29倍,EST酶活性没有改变。结论R-lab株和野外的三个种群对溴氰菊酯均有一定的抗性水平,以R-lab株抗性水平最高;代谢抗性是R-lab株抗药性形成的主要机理之一,其中细胞色素P450单加氧酶活性升高占据主导地位。     

人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建

目的应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减cDNA文库.方法分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA,合成双链cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将胰腺癌双链cDNA分为两组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段.将该差异表达片段克隆至T/A载体,并转化大肠杆菌TOP 10F',经蓝白斑筛选后,再用PCR方法筛选阳性克隆,从而构建胰腺癌抑制消减cDNA文库.结果文库扩增后得到257个白色克隆,随机挑取50个阳性克隆进行PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94%,片段大小主要集中在300～600bp之间.结论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础.     

胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建及质量分析

目的构建人胰腺癌抑制消减cDNA文库.方法从来源于同一标本的胰腺癌和癌旁正常组织分离poly(A)+ RNA,经反转录后,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次抑制PCR构建了两种组织间差异表达基因的cDNA消减文库.结果挑取500个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示其中 457个克隆有插入片段,片段大小范围为 250～750 pb.结论应用消减杂交的方法,再经适当的改进,在去除相同遗传背景的条件下,可以建立较特异的胰腺癌cDNA消减文库,该文库为进一步批量筛选胰腺癌发生的相关基因群并克隆胰腺癌相关表达基因,研究其胰腺癌发生的分子机理与生物学特性间的关系奠定了基础.     

胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建及质量分析

目的：构建人胰腺癌抑制消减cDNA库。方法：从来源于同一标本的胰腺癌的和癌旁正常组织分离poly(A)^ RNA,经反转录后，利用抑制消减杂交（SSH）方法，通过两轮杂交和两次抑制PCR构建了两种组织间差异表达基因的cDNA消减库。结果：挑取500个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段，结果显示其中457个克隆有插入片段，片段大小范围为250－750pb。结论：应用消减杂交的方法，再经适当的改进，在去除相同遗传背景的条件下，可以建立较特异的胰腺癌cDNA消减库，该库为进一步批量筛选胰腺癌发生的相关基因群并克隆胰腺癌相关表达基因，研究其胰腺癌发生的分子机理与生物学特性间的关系奠定了基础。     

江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

目的 了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法 用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、 2、 4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10～25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代(F1代),取10～25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA, PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序,用Bioedit、 Seqman等软件分析kdr基因突变情况,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ²检验。结果 用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%,淮阴区...     

正常肝组织与肝癌组织差异表达基因消减cDNA文库的构建

目的 构建人正常肝组织与肝癌组织差异表达基因的消减cDNA文库。方法 采用新近建立的抑制消减杂交技术,以癌旁正常肝组织及肝癌组织作为对比材料,分离肝癌组织中不表达或低表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用电穿孔法转化大肠杆菌进行文库扩增后,随机挑取100个白色克隆进行酶切鉴定。结果 扩增消减cDNA文库获得4000余个白色阳性克隆,随机挑取的100个白色克隆进行酶切鉴定。结果 扩增消减cDNA文库获得4000余个白色阳性克隆,随机挑取的100个白色克隆经酶切后均有200-600bp的插入片段。结论 用SSH法及T/A克隆技术成功构建了正常肝组织与肝癌组织差异表达基因的消减cDNA文库,该文库的建立为进一步筛选、克隆肝癌组织中失活或低表达的新的抑癌基因奠定了基因。     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株基因组中CYP6基因片段的分离与鉴定

目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株ＣＹＰ６基因家族中某个成员的一个基因片段。方法 根据家蝇ＣＹＰ６Ａ１、ＣＹＰ６Ｄ１以及致倦库蚊ＣＹＰ６Ｅ１同源区氨基酸序列,设计１对筒并引物,进行ＰＣＲ,获得与设计的细胞色素Ｐ４５０基因片段大小相符合的基因片段。将该片与ＰＵＣ１９质粒重组,并克隆至ＪＭ１０９大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用ＰＣ／ＧＥＮＥ软件绘制和系统树。结果 获得了１     

温度对白纹伊蚊氯氰菊酯品抗性品系与敏感品系生物学特性的影响

目的 目的 实验室条件下比较不同温度对白纹伊蚊氯氰菊酯抗性品系和敏感品系生物学特性的影响和差异。方 方 法 法 选择20、 25 ℃和28 ℃ 3个不同温度条件下饲养的白纹伊蚊氯氰菊酯敏感和抗性品系, 观察2个品系的繁殖、 发育及 平均寿命等生物学特性, 并对结果进行统计分析。结果 结果 25 ℃下抗性品系卵的孵化率 （69.37%±0.01%） 和化蛹率 （77.04%±0.07%） 显著低于敏感品系 （孵化率和化蛹率分别为85.24%±0.03%和88.23%±0.05%）, 分别下降了25.88%和 11.18%; 在实验温度下各品系成蚊预期寿命随温度增加而缩短, 敏感品系在28、 25 ℃和20 ℃下历期分别为19.75±0.10、 23.65±0.07 d和25.08±0.08 d, 而抗性品系在上述3种温度下则分别降为17.21±0.09、 20.95±0.09 d和22.58±0.10 d; 同时, 抗性品系成蚊平均寿命低于敏感品系; 同一实验温度下抗性品系幼虫发育周期较敏感品系延长, 28 ℃下差异最大, 抗性 品系和敏感品系分别为156.2 h和137.1 h; 不同品系幼虫发育历期随温度升高而缩短, 28、 25 ℃和20 ℃下敏感品系和抗 性品系幼虫发育历期分别为137.1、 163.3、 247.7 d和156.2、 182.3、 263.2 d, 上述指标两者之间差异均有统计学意义 （P均< 0.05）。结论 结论 不同温度下, 白纹伊蚊抗氯氰菊酯品系环境适应能力和生殖力水平均低于敏感品系     

日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝星状细胞差异表达cDNA文库的构建和筛选

目的构建日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝星状细胞差异表达基因的消减cDNA文库,并筛选差异表达基因。方法取日本血吸虫尾蚴经腹部感染小鼠致肝纤维化。采用抑制性消减杂交技术(SSH),分离小鼠肝星状细胞(HSC)及正常小鼠HSC,通过对比寻找差异表达基因。将其与T载体连接(T/A克隆),其产物转化大肠埃希菌DH5α,经文库扩增后,随机挑取白色克隆进行酶切鉴定,克隆经过正、反向杂交,阳性克隆经过测序和BLAST(局部相似性基本查询工具)进行表达序列标签(ESTs)差异基因分析。最后经模拟Northern印迹确认基因表达差异。结果扩增消减cDNA文库获得400余个白色阳性克隆,随机挑取的克隆经酶切鉴定后均有200～600 bp插入片段。ESTs分析获得76个序列,其中70个序列提示与血吸虫病肝纤维化或与其相关的基因,6个在公共数据库中未找到同源序列片段。结论用SSH法及T/A克隆技术成功构建了肝纤维化小鼠HSC与正常小鼠HSC差异表达基因的消减cDNA文库。     

白纹伊蚊对登革热病毒易感性研究

白纹伊蚊(Aedes albopictus)是登革热的主要传播媒介之一,分布于世界各地.白纹伊蚊的易感性主要涉及白纹伊蚊和登革病毒之间的相互作用.该文主要从遗传效应和环境因子方面对白纹伊蚊种群遗传、生理遗传、环境因素对虫媒病毒传播的影响及控制易感性的基因等研究进行综述.     

人大肠癌和癌旁组织消减cDNA文库的构建和鉴定

背景：抑制消减杂交(SSH)是一种较成熟的分离差异表达基因的方法，但用该方法构建大肠癌特异性基因消减cDNA文库和筛选相关基因的研究较少。目的：构建人大肠癌和癌旁组织的消减cDNA文库。方法：应用SSH技术分离大肠癌和癌旁正常组织差异表达基因的cDNA片段，将其与pGEM-T Easy载体连接，构建消减cDNA文库。将连接产物转化大肠杆菌DH5α进行文库扩增。随机挑取200个白色克隆，以聚合酶链反应(PCR)进行鉴定。结果：进行PCR扩增的200个克隆中，176个克隆有插入片段，片段分布于200～700bp。结论：成功构建了人大肠癌组织和癌旁组织差异表达基因的消减cDNA文库，为高通量筛选、克隆大肠癌特异性基因奠定了基础。     

不同温度下白纹伊蚊发育情况的观察

目的 目的 观察不同温度下白纹伊蚊各虫期的发育情况。方法 方法 在温度为10、 15、 20、 25、 30、 35 ℃和40 ℃的条件 下, 观察实验室饲养的白纹伊蚊卵期、 幼虫、 蛹期和生殖营养周期变化情况, 比较不同温度下全发育时期之间的区别。结 结 果 果 白纹伊蚊在10 ℃时各虫期均不能发育; 在15、 20、 25、 30、 35 ℃和40 ℃下其孵化率分别为0、 32%、 82%、 83%、 82%和 59%; 蛹化率分别为38%、 53%、 84%、 88%、 72%和42%; 羽化率分别为92%、 95%、 97%、 97%、 83%和17%; 在20、 25、 30 ℃和 35 ℃下全代发育时间分别为37.73、 18.50、 16.92 d和13.66 d。结论 结论 白纹伊蚊的发育周期随着温度升高而缩短, 最适宜 发育温度为25 ~ 30 ℃, 温度过高和过低均对蚊虫发育起到抑制作用。     

白纹伊蚊吸血特性的观察

用云南白纹伊蚊建立的实验种群，进行了吸血特性的观察。结果表明，白纹伊蚊具有再次吸血的特性，第一次吸血后６－７天再次吸血率高达１００％。每只蚊虫平均吸血量为１．３５７０－１．４８２０ｍｇ。吸血温度在１５－４０℃之间，最适吸血湿度－３０℃。每次吸血所需时间２－１９分种。     

α-三噻吩对白纹伊蚊幼虫的毒杀作用

目的　研究α三噻吩对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果、影响因素及其对白纹伊蚊幼虫生长发育的影响。　方法　在实验室特定近紫外光 (UVA)下,计数不同药物浓度、不同黑暗处理时间的α三噻吩作用后蚊幼虫的死亡数、化蛹数及蛹的羽化数;在户外自然光下,观测不同药物浓度、不同施药时间的α三噻吩作用后蚊幼虫的死亡数。　结果　实验室特定UVA下,α 三噻吩对白纹伊蚊幼虫的半数致死量为2.37μg/L;药物与幼虫在黑暗中作用3h后再施以UVA照射能发挥其最大毒杀作用;α三噻吩能够显著抑制白纹伊蚊幼虫的发育和蛹的羽化。户外自然光下,高浓度α 三噻吩在强烈阳光辐射下可以快速杀灭白纹伊蚊幼虫,上午5时施药后24h的毒杀作用显著优于上午10时和下午1时。　结论α三噻吩是一种高效、实用、并能够抑制蚊幼虫生长发育的杀虫剂。     

Evaluation of Aedes aegypti,Aedes albopictus,and Culex quinquefasciatus Mosquitoes Competence to Oropouche virus Infection

The emergence of new human viral pathogens and re-emergence of several diseases are of particular concern in the last decades. Oropouche orthobunyavirus (OROV) is an arbovirus endemic to South and Central America tropical regions, responsible to several epidemic events in the last decades. There is little information regarding the ability of OROV to be transmitted by urban/peri-urban mosquitoes, which has limited the predictability of the emergence of permanent urban transmission cycles. Here, we evaluated the ability of OROV to infect, replicate, and be transmitted by three anthropophilic and urban species of mosquitoes, Aedes aegypti, Aedes albopictus, and Culex quinquefasciatus. We show that OROV is able to infect and efficiently replicate when systemically injected in all three species tested, but not when orally ingested. Moreover, we find that, once OROV replication has occurred in the mosquito body, all three species were able to transmit the virus to immunocompromised mice during blood feeding. These data provide evidence that OROV is restricted by the midgut barrier of three major urban mosquito species, but, if this restriction is overcome, could be efficiently transmitted to vertebrate hosts. This poses a great risk for the emergence of permanent urban cycles and geographic expansion of OROV to other continents.     

两个标准化cNDA差减文库的构建

目的 构建2个标准化cDNA差减文库,方法 以淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系为Tester、敏感性品系为Driver,进行正向抑制性差减杂交;以敏感吕系为Tester、抗性品系为Driver,进行反向抑制性差减杂交,分别将获取的2组抑制性差减杂交产物克隆入质粒表达载体（Pin-Point^TMXa-1TVector),并以PCR扩增鉴定插入片段。结果 获得2个标准化cDAN差减文库,其中抗性相关基因（抗性品系高表达或特异表达）文库含523个重组子,敏感相关基因（敏感品系高表达或特异表达）文库含286个重组子,插入片段大小平均约360bp。结论 所建的2个差减文库适合做进一步研究。