3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

低剂量拓扑替康诱导肺癌脑转移HTB-56／DDP细胞株凋亡机制的研究

目的探讨低剂量拓扑替康（TPT）治疗肺癌脑转移的机制。方法采用体外培养耐顺铂肺腺癌细胞HTB-56／DDP,并用Annexin V-FITC染色法检测细胞的早期凋亡;PI单染色法检测细胞周期。结果Caspase-3、8特异性抑制剂和TPT联用组与单用TPT组相比其存活率较高（P〈0．05）;TPT组（6．4μmol·L-1）于12h出现早期凋亡,caspase抑制剂组出现延迟,凋亡率降低;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变,G1期细胞较对照组增多（P〈0．05）,S期细胞减少（P〈0．05）。结论低剂量TPT治疗肺癌脑转移的机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡相关,该过程与caspase-3、8的相关活化过程有关。     

拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56凋亡早期线粒体膜电位的改变。方法选择人肺癌细胞HTB-56细胞株,JC-1荧光染色标记线粒体,用早期流式细胞仪检测拓扑替康作用于HTB．56细胞不同时间细胞线粒体膜电位。采用琼脂糖凝胶电泳检测拓扑替康作用不同时间引起HTB-56细胞凋亡情况。结果经拓扑替康处理后48h、72hHTB-56细胞出现了明显的凋亡带,对照组未见明显亮带影。4h后细胞线粒体膜电位下降,8h后细胞膜电位明显下降,且下降程度随时间延长而增大。且药物组绿／红荧光比值与对照组比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56可使之凋亡,其机制可能与线粒体膜电位在凋亡极早期发生改变有关。     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

转基因肝星状细胞株对肝细胞生长的支持作用

目的 探讨转基因肝星状细胞株CFSC／HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用。方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC／HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲哚氰绿摄取排泌功能的变化,同时与传统胶原贴壁培养的肝细胞进行比较,并通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGF受体c-Met表达的变化。结果共培养的肝细胞体外培养至7～10d时细胞增殖、白蛋白分泌及尿素合成达到峰值,以后逐渐下降,至35d时仍保持一定的存活和功能。与传统胶原上培养的肝细胞相比,其寿命、形态和功能的维持时间明显延长;RT-PCR结果显示,与CFSC／HGF饲养层细胞共培养1周后,肝细胞表面c-Met表达上调2．23倍。结论转基因肝星状细胞株CFSC／HGF对肝细胞较长时间内保持高活性、高密度的生长有显著的支持作用,CFSC／HGF诱导的肝细胞表面c-Met表达上调可能参与了该支持作用。     

三丁酸甘油酯对白血病细胞株和实体瘤细胞株的增殖抑制作用的研究

目的 探讨三丁酸甘油酯（TB）对人急性粒系白血病细胞株（HL-60）、红白血病细胞株（K562）以及人实体瘤细胞株胃癌细胞（SGC-7901）、鼻咽癌细胞（CNE）的增殖抑制作用.方法 利用台盼蓝拒染法、MTT比色法,观察TB对细胞增殖的影响,利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期.采用免疫组化法检测抑癌基因P16的表达.结果 TB作用72 h后,HL-60、SGC-7901细胞阻滞在G0/G1期,K562细胞阻滞在G2/M期,并伴有分布于S期细胞明显下降.HL-60细胞、SGC-7901细胞的p16蛋白表达均有上调.结论 TB能抑制HL-60细胞株、K562细胞株、SGC-7901细胞株的细胞增殖,使HL-60、SGC-7901细胞株的p16蛋白表达上调,改变细胞周期而实现细胞增殖抑制.     

CXCR4抑制剂AMD3465调节肺癌细胞株增殖、侵袭的实验研究

目的探讨CXCR4抑制剂AMD3465对肺癌细胞株增殖、侵袭的影响。方法培养肺癌细胞株A549并分为AMD3465组、对照组;分别用含有三种不同剂量(50、100、200 mg/L)AMD3465的DMEM处理以及用不含药物的DMEM处理。处理后12、24、48 h,检测细胞的增殖活力和侵袭数目;处理后48 h,检测细胞中增殖及侵袭基因的mRNA表达量。结果处理后12、24、48 h,三种不同剂量(50、100、200 mg/L)AMD3465组细胞的OD值均显著低于对照组、侵袭数目均显著少于对照组,AMD3456剂量较低时OD值、侵袭数目与对照组差距均大于AMD3456剂量较高时(P0.05);处理后48 h,50 mg/L AMD3465组、100 mg/L AMD3465组、200 mg/L AMD3465组细胞中Cyclin D1、PCNA、Ki-67、Cat B、MMP2、MMP9、MMP13的mRNA表达量均显著低于对照组;AMD3456剂量较低时细胞中Cyclin D1、PCNA、Ki-67、Cat B、MMP2、MMP9、MMP13的mRNA表达量与对照组差距均大于AMD3456剂量较高时(P0.05)。结论 CXCR4抑制剂AMD3465能够有效抑制肺癌细胞株的增殖、侵袭。     

血栓标志物vWF、GMP-140、TpP、Hey对肺癌诊断的研究

目的探讨血管性假性血友病因子（vWF）、血小板颗粒膜蛋白（GMP-140）、血栓前体蛋白（TpP）、同型半胱氨酸（Hcy）在诊断肺癌血栓前状态的临床价值。方法 1.选取30例Ⅰ～Ⅲa期手术患者作为手术组,30例体检正常者作为对照组。ELISA方法检测vWF、GMP-140、TpP,荧光生化法定量检测Hcy。2.Ⅱ期、Ⅲa期手术病人,取癌旁2cm肺组织,病理组织学检查,寻找微小血栓,比较找到微小血栓的血管根数及相应血液标志物水平变化。结果 1.手术组vWF、GMP-140、TpP、Hcy水平高于对照组（P〈0.01）,术后明显高于术前（P〈0.01）;2.Ⅱ期、Ⅲa期手术标本找到微小血栓的血管根数有统计学差异（P〈0.01）,相应血液标志物水平有统计学差异（P〈0.05）。结论肺癌患者存在血栓前状态,随着肺癌TNM分期,血液指标逐渐升高,肺内存在的微小血栓数目逐渐增多。2.vWF、GMP-140、TpP、Hcy均可作为早期诊断血栓前状态的血液标志物,其中TpP、Hcy具有较高的敏感性与特异性。     

虎杖粗提物对人肺癌A549细胞株诱导凋亡作用的形态学观察

应用MTT法检测虎杖提取物对体外培养的人肺癌A549细胞株的抑制增殖作用的影响,通过倒置显微镜、HE染色、AO/EB荧光显微镜的方法观察肿瘤细胞的形态改变.结果 显示,虎杖提取物在体外对A549人肺癌细胞株有明显的抑制增殖作用,而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性.细胞的形态学观察发现,虎杖提取物作用后出现凋亡细胞.认为虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用.     

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。     

bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响

目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂(DDP)诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组(AS-PS-ODNs转染组)]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组(NS-PS-ODNs转染组)]和对照组(H446细胞组、H446/DDP细胞组)。结果(1)W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 221,P<0.05)。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白(灰度值0.854±0.016),与对照H446细胞组(灰度值为0.103±0.005)相比差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 028,P<0.01)。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平(灰度值为0.695±0.014),与对照H446/DDP细胞组(灰度值为0.942±0.018)相比,显著下降(t=2.26,P<0.01),但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平(t=2.31,P<0.01)。(2)流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为(20.9±0.2)%,明显低于对照H446细胞组的(31.1±0.21)%,差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为(31.5±0.4)%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为(9.0±0.1)%,转染细胞的凋亡率显著增加(P<0.05)。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。     

大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡的影响及机制。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为四组,大蒜素组加入40μg/mL的大蒜素,顺铂组加入40μg/mL的顺铂,联合组加入大蒜素和顺铂各40μg/mL,对照组不干预。各组分别培养24、48 h。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2mRNA表达;Western blot法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果顺铂组、大蒜素组、联合组各时点(24 h、48 h)增殖抑制率明显高于对照组,联合组明显高于大蒜素组、顺铂组,P均<0.05。顺铂组、大蒜素组、联合组各时点Bax mR-NA和蛋白水平明显高于对照组,大蒜素组、联合组Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05;顺铂组48 h Bcl-2蛋白明显高于对照组,P<0.05;联合组各时点Bax mRNA和蛋白水平明显高于、Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05。结论大蒜素诱导SKOV-3/DDP凋亡作用优于顺铂,两者联合具有协同作用,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

嗜酸粒细胞增高在晚期肺癌预后中的临床意义

目的 探讨嗜酸粒细胞增高在晚期肺癌预后评估中的价值.方法 选择2010年1月至2011年11月在宝鸡市中心医院确诊的756例肺癌患者,根据患者嗜酸粒细胞正常与否分为嗜酸粒细胞增高肺癌组（增高组）121例和嗜酸粒细胞正常肺癌组（正常组）635例.将肺癌的临床分期、病理分型及一年生存率与一年后幸存患者的肿瘤生存质量评分（KPS）进行统计学分析.结果 肺癌的临床分期,增高组Ⅳ期的比例明显高于正常组,差异有统计学意义（P＜0.01）,而正常组Ⅲ期的比例高于增高组,差异有统计学意义（0.01＜P＜0.05）,但增高组晚期（Ⅲ期＋Ⅳ期）与正常组比较,无明显差异,差异无统计学意义.肺癌的病理分型,增高组与正常组差异无统计学意义.经过一年的随访,增高组晚期（Ⅲ期＋Ⅳ期）的一年生存率、KPS均高于正常组,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 嗜酸粒细胞增高可能为预测晚期肺癌预后良好的标志.     

癌胚抗原在不同驱动基因肺癌患者中的差异性

目的 通过回顾性分析不同驱动基因肺癌患者的血清癌胚抗原(CEA)水平,探讨CEA在不同驱动基因肺癌患者中的差异性.方法 选择2015年9月至2018年12月唐都医院呼吸与危重症医学科经治的210例肺癌患者,分别采用电化学发光免疫分析法和探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应法检测CEA水平及基因突变状况,分析不同驱动基因肺癌...     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

外周血单核细胞数量与肺癌放疗近、远期疗效的相关性分析

目的基于外周血单核细胞（pbMXD）迁徙在肿瘤放疗后复发中的重要作用,探讨pbMXD在监测肺癌放疗近、远期疗效中的价值。方法回顾性分析肺癌放疗患者,随访观察其放疗前后血象变化、pbMXD变化与近、远期疗效的相关性。结果105例肺癌患者,整体客观缓解率（RR）61．9％（65／105）,中位无进展生存期（PFS）5．0个月（1～20．3个月）;28例局部晚期非小细胞肺癌（NSCLC）,同步放化疗组RR为66．7％（8／12）,PFS6．5个月（1．5—14．2个月）。两类资料中,放疗前、后pbMXD绝对值、相对值及变化值与RR和PFS均无显著相关性（P〉0．05）;pbMXD最低值与整体NSCLC和局部晚期NSCLC单纯放疗组的近期疗效相关（P〈0．05）。结论NSCLC放疗中,pbMXD最低值对预判近期疗效有一定价值,阻断pbMXD迁徙或有较好临床前景。     

恩度联合顺铂胸腔内注射治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液临床观察

目的 观察恩度联合顺铂胸腔内灌注治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液的临床疗效和安全性.方法 8例肺癌恶性胸腔积液患者,予顺铂、恩度联合注入,视胸水吸收情况一周后可以重复.使用后评价临床疗效、生活质量并观察毒副反应.结果 8例患者治疗胸水有效率为87.5％,生活质量改善率为87.5％.毒副反应较少.结论 恩度联合顺铂治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液是一种安全、可行的治疗手段,有较好的近期疗效,值得临床推广应用.