三氧化二砷诱导C6胶质瘤细胞凋亡实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）在体外是否具有抗鼠胶质瘤作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法：应用不同浓度As2O3,且在不同时间点分别处理C6胶质瘤细胞株及原代培养的正常鼠神经胶质细胞,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法,观察As2O3对C6胶质瘤细胞株及正常鼠神经胶质细胞生长的影响,以透射电镜、Hoechst33342和碘化丙啶（PI）双重荧光染色检测两种细胞凋亡的形态变化,并用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的Annexin-V和PI双标记法通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：MTT法发现,As2O30.5～8.0μmol/L的浓度均可显著抑制C6胶质瘤细胞株的生长,而对正常原代神经胶质细胞株的抑制作用较弱。经As2O3作用后,透射电镜、Hoechst33342/PI双染荧光均观察到C6胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;运用Annexin-V-FITC/PI双标记法在流式细胞仪检测显示,随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而正常神经胶质细胞的凋亡率要明显小于C6胶质瘤细胞株。结论：As2O3在体外可显著抑制C6胶质瘤细胞株生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关,且凋亡率随As2O3作用的时间和剂量的增加而增加。但As2O3对正常神经胶质细胞生长的抑制作用较弱,提示As2O3抑制细胞生长的作用具有一定的选择性。     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。     

X-刀治疗大鼠C6脑胶质瘤诱发的细胞凋亡

目的：观察X-刀治疗胶质瘤的作用，并探讨诱发细胞凋亡效应。方法：采用DNA琼脂糖凝胶电泳、超微结构观察及新兴的DNA片段末端标记方法对各组C6大鼠脑胶质瘤发生的细胞凋亡进行研究。结果：15、20及30Gy各组在治疗后24h内均出现明显的细胞凋亡，DNA末端标记法检测的结果不但与前述方法结果相符，还显示出其准确性高等特性。研究中还发现各治疗组均有坏死同时出现。结论：X-刀治疗后诱发细胞凋亡的同时还致细胞坏死，这种效应随剂量增加渐趋明显，构成SRS治疗胶质瘤发挥作用的两个方面。     

125IUdR靶点内照射与C6胶质瘤细胞的增殖抑制和细胞周期变化

目的　研究1 2 5IUdRDNA靶点放疗对大鼠C6 胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外采用C6 细胞单层指数生长模型 ,体内运用脑胶质瘤C6 大鼠 (肿瘤增殖高峰期局部缓慢三次注射药物 ,8 1× 10 3kBq·次- 1 ·天- 1 ) 3 0只 ,结合MTT法、平板克隆形成试验和流式细胞仪 (FCM)检测肿瘤细胞的增殖情况和细胞周期分布 ,研究1 2 5IUdR治疗脑胶质瘤的作用机理。结果　1 2 5IUdR可显著抑制C6 细胞增殖 ,具有时间和浓度依赖性。细胞存活曲线呈无肩区曲线 (直线 ) ,C37=9 0 6kBq/mL ;MTT法中 15 0kBq/mL1 2 5IUdR作用 5d后抑制率达 93 0 6% ;而Na1 2 5I和1 2 7IUdR对C6 细胞生长无明显抑制作用 ;1 2 5IUdR治疗胶质瘤C6 大鼠 5d后 ,肿瘤重量低于对照组 (P <0 0 1)。1 2 5IUdR可使C6 细胞停滞于G0 /G1 期 ,G0 /G1 期比例上升 ,S期比例降低。体外经 2 5 0kBq/mL1 2 5IUdR作用 7d,G0 /G1 期和S期分别占 76 2 3 %和 12 84% ,与空白组比较P <0 0 1:体内C6 胶质瘤经1 2 5IUdR治疗后 ,G0 /G1 期和S期分别为 85 19%和 10 5 1% ,与对照组及空白组比较 ,均P <0 0 5。结论　1 2 5IUdR可显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖 ,导致细胞周期调控紊乱 ,G0 /G1 期阻滞。1 2 5IUdR在治疗脑胶质瘤方面具有潜力。     

反义IGF-IR基因片段诱导C6胶质瘤细胞凋亡

一、材料与方法1 .寡核苷酸的设计、合成 :根据ＩＧＦ ＩＲｃＤＮＡ序列 ,设计的正义寡核苷酸为 5 Ａ Ａ ＧＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧ ＧＡＧ Ｇ Ａ 3 ,反义寡核苷酸为 5 Ｔ Ｃ ＣＴＣＣＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣ Ｔ Ｔ 3 ( 为硫代磷酸修饰的碱基 ) ,由中科院上海细胞所合成和纯化。2 .细胞培养 :大鼠Ｃ6胶质瘤细胞培养于 1 0 %ＣＳＤＭＥＭ中 ,置 37℃、5 %ＣＯ2 培养箱中培养。3 .光镜 :细胞悬液接种于含无菌玻片的培养瓶中 ,培养 6ｈ。分组如下 :反义组 ,加入反义寡核苷酸1 0 μｍｏｌ/Ｌ ;正义组 ,加入正义寡核苷酸 1 0 μｍｏｌ/Ｌ ;空白组 ,…     

砷剂对胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对不同胶质瘤细胞系的作用以及机制.方法 应用MTT法观察As2O3对细胞生长的影响,并用透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察C6胶质瘤细胞与9L胶质肉瘤细胞凋亡的形态变化;Annexin-v-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率.结果 MTF法发现As2O3在0.5-8.0μmol/L的浓度均可显著抑制C6与9L胶质瘤细胞株的生长;透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察均显示两种胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;Annexin-v-FITC/PI法检测显示随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6与9L胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而在相同时间及浓度下9L胶质瘤细胞株凋亡率要小于C6胶质瘤细胞株.结论 As3O3可诱导C6和9L胶质瘤细胞株产生凋亡,并且其作用具有选择性.     

TSA联合HSV-1对C6鼠胶质瘤细胞株细胞增殖、细胞凋亡的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)联合Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)对C6鼠胶质瘤细胞株细胞增殖、细胞凋亡的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,设对照组(加入等体积培养基)、TSA组(加入0.5×10^-3μmol/L TSA处理)、HSV-1(加入10 MOI HSV-1处理)及TSA+HSV-1组(加入0.5×10^-3μmol/L TSA和10 MOI HSV-1处理)共4组,每组设5个复孔。CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR、免疫印迹法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达水平。结果作用48、72 h,与对照组相比,TSA组、HSV-1组、TSA+HSV-1组C6细胞增殖活性显著降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),VEGF mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而且,TSA+HSV-1组明显优于TSA组和HSV-1组(P<0.05)。结论TSA联合HSV-1对体外培养的C6细胞可产生协同或叠加杀伤作用,抑制VEGF表达可能是作用机制之一。     

华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及凋亡的影响

目的初步探讨华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖、细胞周期分布及凋亡的影响机制。方法利用MTT法、流式细胞仪检测华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及细胞周期变化的影响。AO／EB染色、透射电镜观察人脑胶质瘤细胞SHG44凋亡细胞形态学的变化。Westernblot检测Bcl-2与Caspase8蛋白的表达。结果华蟾素（1μg／ml、10μg／ml）对细胞株增殖具有显著抑制作用（P〈0．05）,并呈时间和浓度依赖性。沆式细胞仪检测可见凋亡峰,Go／G。期细胞明显增多（P〈0．05）;华蟾素作用后可使Bcl-2蛋白表达降低．Caspase8蛋白表达升高。结论华蟾素可调控人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase8差异性表达,且具有抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用。     

白藜芦醇对C6鼠胶质瘤细胞抑制生长和诱导凋亡的作用

白藜芦醇（resveratrol，Res）是一种广泛存在于植物中的植物补体，Res不但可以作为一种抗氧化剂，有防治心血管疾病的功效。而且具有抗炎和抗癌的作用，它可以在肿瘤的起始、发生、进展等各个阶段通过多种途径起到抑制肿瘤的作用。近年来有关胶质瘤的大量研究证实，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的基因扩增和过表达是恶性胶质瘤发生、发展的重要始动事件之一，其介导的信号转导通路发挥着关键的作用旧J。本实验进一步就Res对C6鼠脑胶质瘤细胞生长增殖的抑制、诱导细胞凋亡及其与胶质瘤增殖、凋亡相关的EGFR等重要基因变化进行了探讨。     

125IUdR靶点内照射与C6胶质瘤细胞的增殖抑制和细胞周期变化

目的研究125IUdR DNA靶点放疗对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响.方法体外采用C6细胞单层指数生长模型,体内运用脑胶质瘤C6大鼠(肿瘤增殖高峰期局部缓慢三次注射药物,8.1×103kBq@次-1@天-1)30只,结合MTT法、平板克隆形成试验和流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的增殖情况和细胞周期分布,研究125IUdR治疗脑胶质瘤的作用机理.结果125IUdR可显著抑制C6细胞增殖,具有时间和浓度依赖性.细胞存活曲线呈无肩区曲线(直线),C37=9.06kBq/mL;MTT法中150kBq/mL125IUdR作用5 d后抑制率达93.06%;而Na125I和127IUdR对C6细胞生长无明显抑制作用;125IUdR治疗胶质瘤C6大鼠5 d后,肿瘤重量低于对照组(P＜0.01). 125lUdR可使C6细胞停滞于G0/G1期,G0/G1期比例上升,S期比例降低.体外经250 kBq/mL 125lUdR作用7 d,G0/G1期和S期分别占76.23%和12.84%,与空白组比较P＜0.01体内C6胶质瘤经125IUdR治疗后,G0/G1期和S期分别为85.19%和10.51%,与对照组及空白组比较.均P＜0.05.结论 125IUdR可显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖,导致细胞周期调控紊乱,G0/G1期阻滞.125lUdR在治疗脑胶质瘤方面具有潜力.     

2-甲氧基雌二醇对C6脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用

目的 探讨2-甲氧基雌二醇对C6脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法 以不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别作用C6胶质瘤细胞不同时间,采用甲基噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并用光镜及电镜观察细胞形态学变化。结果 经2-甲氧基雌二醇作用后,C6胶质瘤细胞活性受抑制,且呈时间依赖性,作用组与对照组之间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。此外,2-甲氧基雌二醇还可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在作用组与对照组之间存在显著差异（P〈0.05）;细胞周期检测发现作用组G1及S期细胞减少,G2期细胞增多,与对照组存在显著差异（P〈0.05）。结论 2-甲氧基雌二醇可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度塞来昔布分别作用于C6胶质瘤细胞不同时间段,采用甲基噻唑蓝比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,并用光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化。结果经不同浓度塞来昔布作用后,C6胶质瘤细胞活性受到抑制,且呈剂量时间依赖性,实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异（P〈0.05）。细胞周期检测发现实验组S期细胞减少,G2期细胞显著增加,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）;同时,塞来昔布还可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在实验组与对照组之间有显著性差异（P〈0.05）。结论选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布可抑制C6胶质瘤细胞增殖,诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

C6大鼠胶质瘤模型及其在脑胶质瘤治疗研究中应用的缺陷

C6细胞是大鼠经化学致癌剂N-亚硝基甲脲体内诱发产生的脑胶质瘤细胞。具有较典型的人脑胶质瘤组织学特点。大鼠脑内立体定向接种C6细胞建立的动物模型。因成瘤高，动物手术死亡率低。所以广泛应用于脑胶质瘤治疗的研究中。国外研究发现，来源于非纯种大鼠的C6细胞具有有强的免疫原性；其主要组织相容性基因复合体中存在与大鼠是异源性的基因；C6细胞接种于大鼠体内引发强烈的免疫排斥反应可使肿瘤不能持续生长甚至自行消退，因此混淆了治疗所产生的效应。尤其当用于免疫和基因免疫治疗的研究时，存在较大缺陷。     

I型γ-分泌酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞株增殖及凋亡的影响

目的 探讨I型γ-分泌酶抑制剂(GSI-I)对U87、U251胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法 应用GSI-I作用于U87、U251胶质瘤细胞,通过MTT法观察GSI-I对上述两种细胞的增殖抑制作用,通过流式细胞仪检测GSI-I对该两种细胞细胞周期的影响及诱导凋亡的作用.结果RT-PCR及实时定量荧光RT-PCR结果显示,GSI-T可明显抑制胶质瘤细胞中Notch通路的活性,主要体现为Notch通路的靶基因Hes-1表达明显下调.MTT检测结果显示2.5μmol/L及以上浓度的GSI-I对U87及U251胶质瘤细胞有明显的增殖抑制作用.与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且该抑制作用呈剂量依赖型增加.流式细胞检测结果显示GSI-I主要使U87胶质瘤细胞的细胞周期阻滞在G1期而抑制细胞增殖,对于U251胶质瘤细胞则主要通过诱导凋亡来抑制增殖.结论 GSI-I可明显抑制U87及U251胶质瘤细胞的增殖并诱导凋亡,为恶性胶质瘤的临床治疗提供了理论参考依据.     

Inhibitory effects of Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin on rat C6 glioma cell proliferation

BACKGROUND: Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin (PA-MSHA) parenteral injection is used as a broad-spectrum immunomodulator. It remains unclear whether PA-MSHA exhibits inhibitory effects on tumor cell growth. OBJECTIVE: To investigate inhibitory mechanisms of PA-MSHA-induced proliferation in rat C6 glioma cells in vitro. DESIGN, TIME AND SETTING: Comparative observation and in vitro experiments were performed at the Key Laboratory of Natural Medicine, Kunming Medical College, China from July 2008 to April 2009. MATERIALS: Rat C6 glioma cell line (Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, China) and PA-MSHA parenteral injection (Beijing Wanteer Bio-Pharmaceutical, China) were used in the present study. METHODS: Rat C6 glioma cells in logarithmic growth phase were harvested in vitro. Adherent monolayer cells were respectively treated with PA-MSHA at final colony-forming units (cfu) of 1 × 108 cfu/mL, 2 × 108 cfu/mL, 4 × 108 cfu/mL, 6 × 108 cfu/mL, and 8 × 108 cfu/mL following 24 hours of conventional culture. MAIN OUTCOME MEASURES: MTT colorimetric assay was utilized to determine the inhibitory rate of C6 glioma cells following treatment with various concentrations of PA-MSHA at different times. Cell apoptosis was detected by fluorescent microscopy following Hoechst 33258 staining. Flow cytometry was used to measure PA-MSHA effects on C6 cell cycle. RESULTS: Inhibitory rate of C6 glioma cells increased with prolonged time and increased dose. Hoechst 33258 staining revealed obvious morphological changes in apoptotic C6 glioma cells. Flow cytometry revealed hypodiploid peaks, i.e., apoptotic peak, and the apoptotic rate in cells during S-phase significantly increased with increased concentrations in the experimental groups. CONCLUSION: With in vitro experiments, PA-MSHA preparations inhibited C6 glioma cell proliferation in a time- and dose-dependent manner. These mechanisms are likely associated with cell apoptosis induction and inhibition of the S phase.     

Morphogenesis of measles virus on C6 rat glioma cells

Rat glioma cells (C₆) persistently infected with measles virus show a locally dissociated distribution of budding processes at the cell surface.