siRNA 靶向沉默 Lipocalin-2基因下调 MMP-9表达对降低人肺癌 A549细胞的侵袭、迁移能力的影响

目的：利用针对 Lipocalin-2的小干扰 RNA（siRNA）,观察 Lipocalin-2基因沉默对人肺癌 A549细胞MMP-9表达及侵袭、迁移能力的影响。方法采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测 Lipocalin-2在3种肺癌细胞株（A549、NCI-H661、NCI-H446）及正常人支气管上皮细胞（HBE）的表达情况。设计并构建靶向 Lipocalin-2的 siRNA 转染 A549细胞,采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测转染效率及 Lipocalin-2基因沉默对 MMP-9 mRNA 和蛋白表达的影响。Transwell 小室检测细胞侵袭能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白在肺癌A549、NCI-H661、NCI-H446细胞株中的表达水平均显著高于 HBE 细胞,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。siRNA-Li-pocalin-2转染组 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组 MMP-9 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组穿膜细胞数、平均迁移距离与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。结论 Lipocalin-2基因沉默通过下调 MMP-9表达降低了人肺癌 A549细胞的侵袭和迁移能力。     

siRNA 靶向沉默 Lipocalin-2基因增加人肺癌 A549细胞对顺铂的敏感性

目的：利用针对 Lipocalin-2的小干扰 RNA（siRNA）沉默人肺癌 A549细胞中 Lipocalin-2基因表达,观察其对顺铂化疗敏感性的影响。方法分别采用免疫组织化学 SP 法和 Western blot 检测 Lipocalin-2在肺癌组织和3种肺癌细胞株（A549、NCI-H661、NCI-H446）中的表达情况。设计并构建靶向 Lipocalin-2的 siRNA 转染 A549细胞,采用Real-time PCR 和 Western blot 检测转染效率。MTT 法检测顺铂处理后细胞存活率及半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术检测顺铂处理后细胞凋亡率。结果 Lipocalin-2蛋白在肺癌组织和肺癌 A549、NCI-H661、NCI-H446细胞中均异常高表达（ P ＜0.05）。siRNA-Lipocalin-2转染 A549细胞能在 mRNA 和蛋白水平显著抑制 Lipocalin-2表达,同时顺铂诱导的细胞存活率显著降低,凋亡率显著增高（ P ＜0.05）。结论利用特异性 siRNA 能有效抑制人肺癌 A549细胞中Lipocalin-2 mRNA 和蛋白表达,增强细胞对顺铂的敏感性。     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

TNF-α对人肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TNF-α对人肺癌A549细胞凋亡的影响;方法培养人肺癌A549细胞,与TNF-α(10、100U·ml-1)共孵育,通过Western blot分析P53蛋白表达的变化,同时利用Annexin V/PI双染色流式细胞仪,检测人肺癌A549细胞凋亡率的变化。结果与空白组相比,TNF-α组的P53蛋白表达明显升高,且细胞凋亡率也明显升高,分别为1.22±0.62和1.65±0.38(P<0.01)。结论TNF-α可以诱导人肺癌A549细胞凋亡,从而可能起到抗肿瘤的疗效。     

美洲大蠊提取物YS-F对人非小细胞肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的:探讨美洲大蠊提取物对人非小细胞肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法:将美洲大蠊干燥虫体以90%乙醇冷浸提取后,经聚酰胺柱色谱以水-甲醇梯度洗脱,得20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%甲醇洗脱部位(YS-A～H)。采用MTT法筛选活性部位,并检测不同剂量活性部位作用后的细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同剂量活性部位作用后的细胞凋亡、细胞周期和线粒体膜电位变化情况。结果:YS-A～H的半数抑制浓度分别为(95.25±8.42)、(129.93±7.24)、(221.28±12.68)、(275.39±14.87)、(276.76±16.32)、(31.90±5.34)、(163.15±6.97)、(122.81±8.36)μg/mL,以YS-F的活性最强。经YS-F 3、9、27、81μg/mL作用24、48、72 h后,各时间点的细胞增殖抑制率均显著升高,且药物作用48、72 h时的细胞增殖抑制率显著高于同组24 h,作用72 h时的细胞增殖抑制率均显著高于同组48 h(P<0.01)。除YS-F 3μg/mL作用24 h、YS-F...     

醌茜素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及初步机制研究

<正>醌茜素是一种具有高效性、高选择性和细胞能透性的药物。虽然醌茜素能够有效抑制前列腺癌细胞的增殖~[1],但醌茜素对肺癌细胞的作用机制尚不清楚。本文研究了醌茜素对人肺癌A549细胞周期及细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。1材料与方法1.1材料3种人肺癌A549、NCI-H23、NCI-H460细胞株及     

SDZ诱导肺癌A549细胞凋亡

目的旨在探讨SDZ体外对肺癌A549细胞生长的作用。方法采用hoechst染色、荧光显微镜下观察SDZ诱导肺癌A549细胞凋亡的作用。结果经SDZ1000μg／ml作用24h肿瘤细胞即可发生凋亡,凋亡率达31．7％。结论SDZ体外可诱导肺癌A549细胞凋亡。     

注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:研究注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、25、50、100、200、400 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞24、48、72 h后,用MTT法检测并计算细胞增殖抑制率。以0(空白对照)、50、100 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:与空白对照比较,注射用胸腺法新作用后A549细胞的增殖抑制率增加,与浓度和作用时间呈正相关(P<0.05);50、100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞的凋亡率增加(P<0.05);100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞中Caspase-3表达增强、Bcl-2/Bax和Akt磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:注射用胸腺法新可通过激活Caspase-3、下调Bcl-2/Bax比例、抑制Akt信号通路来抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡。     

丹参酮ⅡA对人肺腺癌细胞A549生物学行为的影响初探

目的探讨丹参酮Ⅱ_A对人肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(A组,等体积培养基),顺铂组(B组,10μg/mL顺铂),丹参酮Ⅱ_A低、中、高剂量组(C₁组、C₂组、C₃组,5,10,20μmol/L),各组细胞以加入相应药物或培养基处理。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验法观察细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、整合素(integrin)α₂、integrin β₁、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果与A组比较,B组及C₁组、C₂组、C₃组细胞处理24,48,72 h时的增殖率均显著降低,24 h时的...     

白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和CXCR4表达的影响

<正>肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,临床以早期转移和预后极差为特点。由于CXCR4表达于多种肿瘤细胞中[1],并且与肿瘤细胞远处转移密切相关[2],因此,CXCR4的作用越来越受到人们的重视。白藜芦醇(reveratrol,Res)可以抑制多种癌细胞的生长[3],本实验拟通过研究白藜芦醇     

夏枯草乙醇提取物体外诱导肺癌细胞A549凋亡的研究

目的探讨夏枯草乙醇提取物对人肺癌细胞系A549细胞的增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响。方法不同质量浓度夏枯草提取物作用于人肺癌A549细胞,采用MTT比色法、细胞划痕实验等检测其对肿瘤细胞的生长及迁移的抑制作用,应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化情况,并使用Annexin-V FITC和PI双染试剂盒进行凋亡分析。结果一定质量浓度的夏枯草提取物可明显抑制肺癌细胞的增殖和迁移,并呈量效和时效关系,可诱导细胞发生G0/G1期或G2/M期细胞周期阻滞,且Sub G1峰比例明显上升,在低、中质量浓度(1.0和2.0mg·L-1)时以晚期凋亡为主,在高质量浓度(4.0mg·L-1)时主要发生早期凋亡。结论夏枯草提取物可抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移,改变细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡。     

消积饮对人A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的观察消积饮对人肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法选取人A549肺癌细胞株作为研究对象,生长于RPMI 1640培养液中,细胞传代24 h进入对数生长期后分别加入低、中、高剂量含药血清(灌胃给予消积饮后的大鼠血清)及对照组大鼠血清进行细胞诱导。MTS法测定消积饮对A549细胞增殖的抑制作用。结果不同剂量的消积饮血清均可抑制人A549肺癌细胞的增殖,抑制率明显高于对照组(P<0.01)。消积饮高、中剂量组抑制率明显高于低剂量组(P<0.05),但高剂量组与中剂量组之间无明显差异。结论消积饮可在体外有效抑制人肺癌细胞株A549细胞的生长,在一定浓度范围内,具有量效关系。     

西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响。方法通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;Western blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性。结论西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.     

姜黄素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的观察姜黄素对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用,并探索其机制。方法四氮唑蓝法测定姜黄素作用于肺腺癌细胞A549的吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定40μmol.L-1姜黄素或空白对照培养液的肺腺癌细胞凋亡率与凋亡相关蛋白Caspase-9表达;比色法测定凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8表达;观察加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3的表达。结果姜黄素对肺腺癌A549细胞有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.619;P<0.01)与时间依赖(r=0.618;P<0.01);姜黄素对肺腺癌A549的凋亡率(30.25%)明显高于对照组(1.32%)(P<0.001);姜黄素组肺腺癌细胞A549的凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达明显高于对照组(P<0.001);姜黄素组加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3表达明显下降,仍高于对照组(P<0.001)。结论姜黄素诱导肺腺癌A549细胞凋亡可能与激活Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3有关。     

雷公藤甲素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究雷公藤甲素对人肺腺癌‰细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人肺腺癌A谢细胞增殖的影响，运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带检测细胞凋亡，采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-9，3的活化。结果：雷公藤甲素对体外培养的A谢细胞具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示雷公藤甲素可以显著诱导‰细胞凋亡，DNA电泳显示雷公藤甲素作用于A谢细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。雷公藤甲素作用后‰细胞caspase-9，caspase-3活性明显升高。结论：雷公藤甲素可能通过线粒体信号通路抑制肺腺癌A谢细胞的生长并诱导其凋亡。     

黄芪多糖对人肺癌A549 细胞增殖的作用及其机制的实验研究

目的探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对人肺癌A549细胞增殖的作用及其机制。方法用不同浓度的APS（25μg.mL-1、50μg.mL-1、10μg.mL-1、200μg.mL-1、400μg.mL-1）作用于人肺癌A549细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学法检测bcl-2和bax的表达。结果 APS的浓度在25μg.mL-1～400μg.mL-1范围内均可抑制人肺癌A549细胞的增殖,100μg.mL-1的APS对A549细胞增殖的抑制率达最高,100μg.mL-1的APS作用于人肺癌A549细胞48和72小时后,均可下调bcl-2和上调bax的表达。结论 APS能够可抑制人肺癌A549细胞的增殖,可能与其下调bcl-2和上调bax的表达有关。