miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T细胞的调控研究

目的 研究miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,探讨miRNA-146a在寻常性银屑病发病中的作用。 方法 收集寻常性银屑病患者和健康对照各30例。采用实时定量PCR检测外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a表达水平,ELISA检测血浆干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-4表达水平。免疫磁珠法分选外周血CD4+ T淋巴细胞,将分离的细胞分为对照组、miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组,分别转染阴性对照miRNA、miRNA-146a模拟物和miRNA-146a抑制物后进行细胞培养,流式细胞仪检测Th1和Th2细胞数量,蛋白免疫印迹法和实时定量PCR分别检测IFN-γ受体α（IFN-γRα）、T细胞表达T盒（T-bet）、GATA-3蛋白和mRNA的表达,ELISA检测细胞培养液上清液IFN-γ、IL-4水平。 结果 寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a［（243.81 ± 94.32）％］与血浆IFN-γ水平［（27.69 ± 7.64） ng/L］较健康对照组［分别为（105.74 ± 22.93）％和（9.75 ± 2.81） ng/L］升高,差异均有统计学意义（t值分别为6.653和4.237,均P < 0.01）,且miRNA-146a的表达与血清IFN-γ呈正相关（r = 0.837,P < 0.01）。体外CD4+ T淋巴细胞培养结果显示,与对照组比较,miRNA-146a组Th1数量、T-bet蛋白和mRNA表达、培养上清液IFN-γ水平均显著增加,IFN-γRα蛋白表达降低,差异均有统计学意义（均P < 0.01）;但是,与对照组比较,miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组Th2细胞数量、GATA-3蛋白、GATA-3 mRNA表达以及上清液中IL-4水平差异无统计学意义（均P > 0.05）。结论 miRNA-146a可能通过影响Th1细胞的分化和功能参与对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,在银屑病发病过程中发挥一定的作用。     

寻常型银屑病患者外周血CD4~+CD25~+及CD8~+CD25~+细胞的检测

目的研究进展期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞的数量变化及其在银屑病免疫病理学发病机制中的作用。方法应用流式细胞术对进展期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞进行检测。结果进展期寻常型银屑病外周血CD4+CD25+细胞及CD8+CD25+调节性T细胞数量与正常对照组相比,均显著降低(P<0.05,P<0.005),而CD4+CD25+/CD8+CD25+比值无显著性差异(P>0.05)。结论寻常型银屑病的发病与CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞的同步降低有关,与二者的比值无关。     

活化抗原CD69、HLA-DR在寻常性银屑病外周血单一核细胞和皮损中的表达

目的 探讨活化抗原CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞和皮损中的表达变化。 方法 流式细胞仪检测20例寻常性银屑病患者和20例健康对照外周血CD3+T细胞中CD69和HLA-DR的表达,同时采用免疫组化的方法检测15例寻常性银屑病患者和10例健康对照皮损组织中HLA-DR的表达并进行对比。两组统计学分析采用双侧t检验。 结果 CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T细胞中的表达率分别为（4.70 ± 1.90）%、（8.97 ± 1.79）%,比健康对照组［（1.56 ± 0.95）%、（3.02 ± 1.15）%］明显升高（均P < 0.01）。Pearson相关性分析发现,CD3+HLA-DR+细胞百分比与银屑病皮损和严重程度评分指数（PASI）评分呈正相关（r = 0.5626,P < 0.05）。与健康对照组比较,寻常性银屑病患者皮损真皮中HLA-DR表达升高,但表皮中HLA-DR表达降低（均P < 0.05）,HLA-DR在健康人主要分布在血管周围,而在寻常性银屑病患者则广泛表达于真皮组织。 结论 寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞及皮损中的炎症细胞存在异常活化,外周血CD3+HLA-DR+细胞与疾病严重程度存在相关性。     

173例寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平与PASI相关性分析

目的：探讨寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体的水平变化及临床意义。方法：对173例银屑病患者进行PASI评分,采用流式细胞仪及全自动酶标仪对患者组和150例正常人外周血T淋巴细胞亚群、IgM、IgG、IgA及补体C3、C4的表达水平进行检测和分析。结果：寻常型银屑病患者外周血CD8^＋T细胞数量显著高于对照组（P〈0．05）,且与患者PASI呈正相关（r=0．845,P〈0．01）;补体C3较对照组显著降低（P〈0．05）,且与患者PASI呈负相关（r=0．699,P〈0．01）。而CD3^＋及CD4^＋T细胞、IgG、IgM、IgA及补体C4水平与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：寻常型银屑病患者外周血免疫功能处于紊乱状态,CD8^＋T细胞百分率及补体C3水平与银屑病患者的病情密切相关。     

流式细胞术双色免疫荧光标记观察寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群

目的了解寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化。方法应用流式细胞仪双色免疫荧光标记,检测98例寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群并与102名正常人进行比较。结果银屑病患者外周血CD4+细胞百分数显著高于正常人对照组(P<0.05);NK细胞百分数显著低于正常人对照组(P<0.01),寻常性进行期银屑病患者T细胞和CD4+细胞显著高于静止期银屑病患者(P<0.05),进行期银屑病患者T细胞、B细胞、CD4+细胞百分数均显著高于正常人对照组(P<0.001),NK细胞显著低于正常人对照组(P<0.001)。静止期银屑病患者与正常人对照组相比淋巴细胞亚群各项指标无明显差异。结论寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化主要表现在T、B淋巴细胞特别是CD4+细胞的升高和NK细胞的降低。     

重度寻常型银屑病患者外周血CD8~+T淋巴细胞CCR6及上清液中IL-22、IL-17的表达

目的研究重度寻常型银屑病患者外周血CD8+T细胞表面趋化因子受体CCR6表达及上清液中白细胞介素(IL)-22、IL-17的水平。方法流式细胞仪检测25例重度寻常型银屑病患者外周血中CD8+T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR6的表达率,ELISA检测CD8+T细胞培养后上清液中IL-22、IL-17的水平,分别与30例健康对照者进行比较。结果银屑病患者外周血中CD8+T细胞表面CCR6的表达率为(94.76±2.38)%,健康对照组为(72.56±8.33)%,差异有统计学意义(P0.05);经过anti-CD3单克隆抗体和anti-CD28单克隆抗体刺激后,10例银屑病患者外周血CD8+T细胞上清夜中IL-17、IL-22水平分别为(7.17±1.51)pg/m L、(102.42±15.34)pg/m L,健康对照组分别为为(2.68±1.12)pg/m L、(47.39±5.47)pg/m L,2组比较差异有统计学意义(均P0.01)。结论银屑病中CCR6可能促进外周血CD8+T细胞趋化至皮损中;银屑病患者外周血CD8+T细胞在活化的状态下可促进炎症细胞因子的表达增加,加重银屑病的炎症反应。     

寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞中白细胞介素-17的表达及意义

目的:探讨寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞中白细胞介素(IL)-17的表达及意义,以期为该病的临床治疗提供新的理论依据。方法:应用密度-梯度离心法分别获取寻常性银屑病患者及健康献血者(正常对照)的外周血CD14~+单核细胞,应用酶联吸附免疫(ELISA)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组人群外周血CD14~+单核细胞培养上清液中IL-17含量及其基因表达;扫描电镜观察与寻常性银屑病患者血清共培养后正常人外周血CD14~+单核细胞的形态变化。结果:寻常性银屑病患者组外周血CD14~+单核细胞培养上清液中IL-17含量及IL-17m RNA相对表达量分别为(28.79±5.96)ng/L和(4.48±2.64)ng/L,均高于健康献血者,差异有统计学意义(P0.05)。健康献血者的外周血CD14~+单核细胞与寻常性银屑病患者血清共培养后,随着共培养时间的延长,细胞膜发生明显改变,甚至破裂。结论:寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞过度表达IL-17,此细胞及其细胞因子在该疾病的发生、发展中起一定的促进作用。     

银屑病患者外周血调节性T细胞的检测

目的 检测不同类型银屑病患者外周血中调节性T细胞（Treg）的水平。方法 用流式细胞仪和单克隆荧光抗体检测20例寻常性银屑病、15例脓疱性银屑病和10例红皮病性银屑病患者外周血中CD4+CD25bright调节性T细胞百分率，对寻常性银屑病患者中的10例进行了CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞百分率的检测。结果 红皮病性银屑病组CD4+CD25bright调节性T细胞比例高于其他组（P < 0.01）；寻常性银屑病患者组CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞在CD4+ T细胞中比例为4.39% ± 0.84%，正常人对照组为3.83% ± 1.68%，两组进行Mann-Whitney U检验，差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 CD4+CD25bright调节性T细胞可能与红皮病性银屑病的发病有关。     

寻常型银屑病患者Th17细胞及相关细胞因子的检测

目的:检测寻常型银屑病患者外周血Th17 细胞及相关细胞因子水平.方法:采用流式细胞分析法检测35 例寻常型银屑病患者和健康对照组外周血Th17 细胞,并分析与CD4+T 细胞比值;ELISA 法检测外周血IL-17 、IL-23 水平.结果:银屑病患者组外周血Th17/CD4+T 细胞比值为4.73% ± 0.78%,显著高于对照组2.52% ± 0.37%,差异有统计学意义(P＜0.01) ;银屑病患者外周血IL-17 和IL-23 水平亦明显高于对照组(P＜0.01).患者外周血IL-17 水平与IL-23 水平呈正相关(P＜0.01).结论:Th17 细胞可能参与了寻常型银屑病的发生与发展.     

红斑、丘疹及鳞屑性皮肤病

20090167银屑病患者角质形成细胞对T淋巴细胞CD25、CD69表达的影响;20090168流式细胞分析法测定外周血皮肤淋巴细胞相关抗原阳性T细胞在寻常性银屑病中的表达;20090169银屑病的免疫遗传学进展（综述）;20090170血管因子与银屑病微血管增生的关系（综述）;     

关节病型银屑病与强直性脊柱炎易感基因关联研究

目的：对关节病型银屑病与强直性脊柱炎的易感基因进行关联分析,以期发现共同的易感基因。方法：以379例关节病型银屑病（PsA）、595例寻常型银屑病（PsV）及806例健康对照为样本,以Sequenom MassARRAY 系统为平台,对全基因组关联研究发现的强直性脊柱炎的9个易感基因SNP位点进行基因分型和数据分析。结果：ERAP1基因（rs27037,P=6.66×10-5,OR：1.43）、21q22.2（rs2242944,P =1.07×10-3, OR：0.73）及IL23R基因（rs1004819,P=4.58×10-3,OR：1.28）与PsA相关。ERAP1（ rs27037, P=1.56×10-4,OR：1.35）与PsV相关。ERAP1基因对于PsA和PsV的患病风险无差异。IL23R基因(rs1004819)及21q22.2（rs2242944）在PsA和PsV患病风险上存在中等程度的异质性（I2值分别为57.41和71.20）,但P值无明显差异（小于0.05）。 IL23R基因（rs11209032,p=1.57×10-3,OR:1.52）与PsA脊柱炎相关。结论：ERAP1基因、21q22.2区域及IL23R基因是PsA与强直性脊柱炎共有的易感基因。     

银屑病患者外周血TL1A及其受体DcR3的表达

目的：检测肿瘤坏死因子样配体1A(TL1A)及其受体DcR3在寻常型银屑病患者外周血中的表达。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测30 例寻常型银屑病患者及30例健康对照者血清中TL1A及其受体DcR3的水平。结果：银屑病组外周血TL1A和DcR3水平分别为（478.21±231.18）pg/mL和（638.31±310.73）pg/mL,显著高于对照组的（125.67±82.85）pg/mL和（245.16±111.52）pg/mL (P＜0.05)。进行期患者TL1A和DcR3水平分别为（584.91±298.52）pg/mL和（860.41±402.78）pg/mL,显著高于静止期患者的（261.73±120.84）pg/mL和（467.34±225.16）pg/mL（P＜0.05);银屑病患者组外周血TL1A与DcR3水平呈正相关。结论： 银屑病患者外周血清TL1A及其受体DcR3水平显著升高,TL1A可能通过与其受体DcR3结合参与银屑病的发生与发展。     

寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体和TNF-α受体mRNA表达的研究

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA和TNF-α仅受体mRNA的表达及其在银屑病发病机制中的作用.方法 采集50例寻常性银屑病患者外周静脉血,分离单一核细胞后,以RT-PCR法检测其IFN-γ受体mRNA和TNF-α受体mRNA的表达,PASI评分法评估银屑病的严重程度.以24例正常人作对照.结果 50例银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA的表达均值为1.11±0.55,其中37例进行期患者为1.13±0.57,13例静止期患者为1.03±0.52,正常人对照组为0.72±0.17,银屑病患者显著高于正常人对照组(P=0.0034),进行期显著高于正常人对照组(P=0.008),而静止期与正常人对照组差异无统计学意义.正常人对照组和银屑病患者外周血单一核细胞TNF-α受体mRNA的表达水平差异无统计学意义.银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA表达水平与TNF-α受体mRNA表达水平及PASI值均无相关性.结论 IFN-γ受体mRNA在寻常性银屑病患者外周血单一核细胞中异常高表达,但与疾病的活动性无关.     

银屑病患者血清C3的表达及其与银屑病的相关性

目的:明确银屑病患者血清C3与银屑病发生及代谢紊乱的相关性。方法:收集63例未系统治疗的寻常型银屑病患者(体重正常或偏瘦者30例,超重或肥胖者33例)及健康对照30名,t检验分析体重正常或偏瘦的银屑病患者血清C3与正常对照组间的差异,pearson或spermen相关性分析银屑病患者血清C3与体重指数、PASI评分、血脂、血糖、血压及代谢综合征的之间的相关性。结果:超重或肥胖的银屑病患者,体重正常或偏瘦的银屑病患者及健康对照中血清C3水平分别为1.37±0.21g/L,1.12±0.14 g/L,1.07±0.10 g/L。银屑病患者血清C3水平与体重指数、PASI评分、甘油三脂、及代谢综合征的发生显著正相关(均P0.05),与高密度脂蛋白水平显著负相关(P0.05)。结论:血清C3可能与银屑病的发生及代谢紊乱相关。     

窄谱中波紫外线治疗对寻常型银屑病Th22细胞及其相关细胞因子表达的影响

目的:观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常型银屑病的疗效以及对寻常型银屑病患者Th22细胞及相关细胞因子的影响,探讨NB-UVB治疗银屑病的作用机制。方法:40例寻常型银屑病患者NB-UVB治疗20次,以皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效;取患者治疗前后的外周血,用三色法流式细胞仪检测Th22细胞,ELISA法检测IL-6及IL-22的水平,并与健康对照组进行比较。结果:NB-UVB治疗后PASI评分明显下降(P0.01);银屑病患者治疗前外周血Th22、IL-6及IL-22的水平较对照组均明显增高(P0.01)。治疗后外周血Th22细胞的百分比(1.19±0.31)%,血清IL-6的水平(15.27±1.66)pg/mL及IL-22的水平(38.52±3.31)pg/mL较治疗前均明显下降(P值均0.01),且三者水平高低均与PASI呈正相关(P值均0.05)。结论:NB-UVB可能通过影响Th22细胞及IL-6、IL-22细胞因子来发挥治疗银屑病的作用。     

Expression and function of beta 2 integrin CD11B/CD18 on leukocytes from patients with psoriasis

The expression of beta 2 integrin CD11b on granulocytes and monocytes from patients with psoriasis vulgaris and pustular psoriasis was examined by flow cytometry. The amount of CD11b expressed on both granulocytes and monocytes was greater in 4 patients with pustular psoriasis than in 16 patients with psoriasis vulgaris. Its expression correlated with the development of pustules on the skin. No difference was seen between healthy blood donors and patients with active psoriasis vulgaris. Three patients with pustular psoriasis were followed during retinoid treatment. Granulocytes and monocytes showed a decrease in CD11b expression after administration of retinoids, in parallel with clearing of the skin. The adherence of granulocytes isolated from psoriasis patients was tested on cultured human umbilical vein endothelium. No significant difference in adherence was observed between control cells and cells from patients with active psoriasis vulgaris. These data indicate that the development of microabscesses in the dermis in psoriasis vulgaris is not related to enhanced beta 2 integrin function. The increased CD11b expression found in patients with pustular psoriasis may, however, serve as a triggering factor for pustule formation in pustular psoriasis.     

寻常性银屑病患者外周血白介素27、白介素35及EBI3 mRNA表达的研究

目的 探讨不同病期寻常性银屑病患者外周血白介素２７（IL-27）、白介素３５（IL-35）及其共同亚基EBI3 mRNA的表达。方法 分别采集寻常性银屑病进展期（22例）、静止期（20例）、消退期（20例）患者及30例健康对照外周血,采用竞争性免疫抑制ELISA法检测血清IL-27、IL-35表达水平,用SYBR Green实时荧光定量RT-PCR方法检测外周血单一核细胞中EBI3 mRNA的表达水平。 结果 寻常性银屑病患者血清内IL-27和IL-35表达均高于健康对照组。进展期、静止期、消退期IL-27（226.72 ± 71.32 ng/L,160.80 ± 20.02 ng/L,181.93 ± 27.36 ng/L）表达与健康对照组（138.66 ± 33.93 ng/L）相比,差异均有统计学意义（P值分别 < 0.01,< 0.05,< 0.01）;进展期、消退期血清IL-27表达显著高于静止期,差异有统计学意义（P值分别 < 0.01,< 0.05）。消退期血清IL-35（355.78 ± 49.82 ng/L）表达水平显著高于进展期（309.36 ± 36.10 ng/L）、静止期（299.14 ± 31.98 ng/L）、健康对照组（292.43 ± 36.26 ng/L）,差异均有统计学意义（P值分别 < 0.01,< 0.01,< 0.01）,进展期、静止期与健康对照组间比较,差异无统计学意义。外周血单一核细胞EBI3 mRNA在寻常性银屑病患者进展期、静止期、消退期表达量较健康对照组分别高20.15、16.17、19.74倍。 结论 IL-27、IL-35、EBI3作为抗炎因子可能参与寻常性银屑病发病。     

窄谱中波紫外线治疗寻常性银屑病患者疗效观察及白细胞介素6和17的检测

目的 探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常性银屑病患者血清中白细胞介素(IL)6和17的影响.方法 40例银屑病患者用NB-UVB照射治疗,每周3次,共治疗6周,分别于光疗前、光疗9次和光疗18次后,测定患者治疗前后血清IL-6和IL-17的水平,并以40例健康人作对照.结果 患者NB-UVB治疗前PASI评分15.68±2.86,光疗9次为10.58±1.36,光疗18次后为3.08±1.37,治疗前后评分对照,差异有统计学意义(P＜0.01).银屑病患者NB-UVB照射治疗前后,IL-6水平分别为(61.82±15.61)pg/L和(20.43±9.78)pg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).IL-17水平分别为(41.56±10.34) pg/L和(26.32±7.24)pg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).健康人血清IL-6和IL-17水平分别为(1.50±1.82) pg/L和(13.47±2.15)pg/L,健康人之间差异无统计学意义(P＞0.05).40例银屑病患者中,治愈20例,显效15例,有效率为87.5％.结论 NB-UVB照射可提高银屑病的疗效,并降低外周血IL-6、IL-17的水平.     

基于16S rRNA基因测序的寻常型银屑病患者肠道菌群差异研究

【摘要】 目的 研究成年寻常型银屑病患者和健康人群之间肠道微生物的差异。方法 采集2017年9月至2018年2月于中国医学科学院皮肤病医院确诊的22例寻常型银屑病患者和23例健康对照者粪便样本，提取肠道菌群总DNA扩增，并采用二代16S rRNA基因靶向测序技术测序，分析菌群多样性及菌群分布。对照Silva数据库进行物种注释及分类，采用秩和检验分析各层级样本物种差异；采用QIIME软件（Version 1.9.1）计算OTU数目及α多样性主要指数（Chao1指数、Shannon指数和Simpson指数），t检验分析指数差异；PCoA分析反映样本β多样性差异，置换多元方差分析两组群落组成结构差异；秩和检验及LEfSe分析评估物种差异。结果 银屑病组OTU数目（147.55 ± 57.07）与健康对照组（148.96 ± 50.45）比较，差异无统计学意义（t = 0.088，P = 0.930）。银屑病组Shannon指数（4.08 ± 0.80）、Chao1指数（169.52 ± 63.17）、Simpson指数（0.87 ± 0.07）与健康对照组（分别为4.11 ± 0.94、175.36 ± 53.59、0.86 ± 0.90）比较，差异均无统计学意义（t = 0.12、0.34、0.27，均P > 0.05）。PCoA分析银屑病组与健康对照组的第一主成分差异为49.8%，第二主成分差异为15.62%，置换多元方差分析显示两组间β多样性差异有统计学意义（P = 0.011）。银屑病组与健康对照组有差异的菌群包括在银屑病组中显著升高的厚壁菌门、梭菌纲、梭菌目，丹毒丝菌目、丹毒丝菌科，健康对照组中显著升高的艾普西隆变形杆菌纲、弯曲杆菌目、弯曲杆菌科、弯曲杆菌属，拟杆菌目、拟杆菌科。结论 寻常型银屑病患者与健康人的肠道菌群存在一定差异，肠道菌群有可能成为寻常型银屑病的潜在生物标志物。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶和P38丝裂原活化蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在寻常性银屑病皮损中的表达。 方法 收集30例确诊的寻常性银屑病患者皮损,同时收集30例健康人皮肤组织作为对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-JNK和p-P38MAPK蛋白在寻常性银屑病皮损组织和正常人皮肤中的表达情况。 结果 免疫组化结果显示,寻常性银屑病皮损组织p-JNK和p-P38MAPK表达的平均吸光度（AOD）值分别为0.663 ± 0.016和0.436 ± 0.011,均明显高于对照组（0.333 ± 0.009和0.306 ± 0.010）,差异有统计学意义（t = 44.869、21.913,均P < 0.001）。Western印迹法同样显示,寻常性银屑病皮损p-JNK和p-P38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（t值分别为20.477和165.084,均P < 0.05）。结论 JNK和P38MAPK的活化可能参与了寻常性银屑病表皮细胞的过度增殖。