甘草黄酮对UVB辐射后HaCaT细胞表达IL-10的影响

为评价甘草黄酮对中波紫外线(UVB)损伤皮肤角质形成细胞的保护作用及其机制.将甘草黄酮预处理培养的HaCaT细胞24 h后,采用30 mJ/cm2的UVB照射细胞,于照射后6、12、24、48 h后分别以ELISA法、实时荧光定量-PCR法检测上清中IL-10含量及细胞中IL-10 mRNA的表达水平.结果显示UVB对照组IL-10表达水平较空白对照组早期升高,12 h后显著降低(P＜0.05),不同剂量甘草黄酮处理后可显著上调IL-10的表达(P＜0.05),表达水平无剂量依赖关系(P＞0.05).UVB辐射导致HaCaT细胞表达IL-10降低,甘草黄酮可上调IL-10的表达.     

Tempol对UVB所致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的:确定4-羟基-2,2,6,6-四甲基氧基哌啶(Tempol)对UVB所致HaCaT细胞凋亡的抑制作用。方法:HaCaT细胞分7组,A组:对照组;B组:UVB辐照组;C组:0.5 mM Tempol实验组;D组:1 mM Tempol实验组;E组:2 mM Tempol实验组;F组:4 mM Tempol实验组;G组:8 mM Tempol实验组。除A组外,其余组均辐照UVB,分析各组间HaCaT细胞增殖效应及细胞凋亡率差别。结果:与B和G组比较,各组HaCaT细胞增殖效应显著升高(P0.01);与A组比较,(除B组外),各组HaCaT细胞凋亡率随Tempol药物浓度的升高而显著升高(P0.01)。结论:Tempol对UVB所致HaCaT细胞凋亡有抑制作用,一定范围内其作用随Tempol浓度的升高而降低。     

Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的表达

目的探讨Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的作用。方法研究对象为人角质形成细胞HaCaT细胞,实验分为正常对照组、10、20、40、80 m J/cm^2中波紫外线组(UVB)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察增殖能力;流式细胞仅(FCM)实验检测细胞凋亡;实时定量PCR、Western-blot检测细胞内的Survivin、Caspase-3表达水平。结果与正常对照组相比,NB-UVB照射组细胞增殖抑制作用及凋亡明显增强(P<0.05),并随着照射剂量的增加,其细胞凋亡作用增加。同时与正常对照组相比,不同UVB照射剂量组Caspase-3表达均增强,其表达增强程度随着照射剂量的增加而增加,与正常对照组相比,10 m J/cm^2照射组,细胞表达Survivin水平最高(P<0.05),20 m J/cm^2组Survivin表达水平下降,稍低于对照组水平,40、80 m J/cm^2组Survivin进一步下降,较对照组下降明显(P<0.05)。结论 Survivin、Caspase-3参与了UVB诱导HaCaT凋亡细胞。Survivin表达水平与UVB辐射剂量有关。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的：研究在中波紫外线(UVB）诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT）凋亡过程中，T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19）的表达时相及位置，方法：使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin—V）、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果：在凋亡过程中，TFAR 19逐渐向核周聚积，最后向核膜内移位，在核膜及其周围以及核内表达。结论：在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。     

萝卜硫素对中波紫外线损伤HaCaT细胞的保护作用的研究

目的观察萝卜硫素对中波紫外线（UVB）损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法用不同浓度的萝卜硫素对HaCT细胞进行预处理4h，采用90mJ／cm^2的剂量照射细胞，以MTT法检测细胞生存率，以酶联免疫吸附实验（ELTSA）检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α的分泌量，以流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果UVB的照射对HaCaT细胞造成明显的损伤．萝卜硫素可提高UVB照射后HaCT细胞的生存率，抑制HaCaT细胞TNF-α的分泌水平。同时萝卜硫素能够降低UVB所引起的细胞凋亡率升高（P〈0．05）。结论UVB对HaCaT细胞有损伤作用，而萝卜硫素具有光保护作用．萝卜硫素可能是通过降低UVB引起的炎症因子TNF-α的分泌从而减轻紫外线辐射引起的损伤，同时也降低了细胞的凋亡率，改善细胞受UVB照射后增殖活性下降的状况。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

双氢青蒿素对UVB诱导的人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用

目的:明确双氢青蒿素(DHA)对UVB诱导人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用。方法:将体外培养的HaCaT细胞分为空白对照组,UVB照射组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组,采用MTT法检测细胞系的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR法检测抗凋亡基因survivin和促凋亡基因caspease-3(激活型)mRNA水平,Western检测相关蛋白表达水平。结果:30 mJ/cm~2 UVB照射24 h后,UVB组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组细胞的增殖率分别为空白对照组的(50.13±2.42)%,(60.23±2.30)%,(69.24±3.19)%,(79.37±2.47)%和(70.41±2.24)%。UVB组和UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞凋亡率分别为(46.7±3.2)%和(23.71±1.2)%。与UVB组比较,UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞caspase-3 mRNA及蛋白表达降低、survivin mRNA及蛋白表达升高。结论:DHA可抑制UVB所致HaCaT细胞的凋亡,其机制可能与survivin和caspase-3有关。     

葡萄籽原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的: 明确葡萄籽原花青素（ GSPE）对 UVB损伤角质形成细胞的保护作用。方法: 体外培养HaCaT细胞,分为正常对照组、UVB组、UVB+GSPE高剂量(200 μg/mL) 、中剂量(100 μg/mL)和低剂量组(50μg/mL)。CCK-8法检测HaCaT细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)和LDH水平。DCFH-DA染色法测定细胞内活性氧水平;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位水平。Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达。结果: UVB+GSPE组与UVB组比较,细胞SOD和GSH-Px活性、Bcl-2 表达量和线粒体膜电位水平增高,MDA、LDH水平、凋亡细胞数、Bax、Cleaved-caspase-3表达和细胞内活性氧水平明显降低。结论: GSPE对中波紫外线辐射诱导的表皮角质形成细胞凋亡、氧化损伤具有一定的保护作用。     

黄芩苷对中波紫外线所致HaCaT细胞凋亡、细胞周期变化及p16、原癌基因c-myc蛋白表达的影响

目的:观察中波紫外线(UVB)辐射引起的人表皮角质形成细胞株HacaT细胞凋亡、细胞周期及p16、c-myc蛋白水平的影响及传统中药黄芩苷(baicalin)对它的干预作用.方法:以200 mg/L黄芩苷预处理HacaT细胞,以流式细胞仪检测经0、30、60和90 mJ/cm2的UVB照射后24 h细胞周期和凋亡率变化;以Western blot方法检测90 mJ/cm2 UVB照射后p16、c-myc 蛋白的表达水平.结果:UVB照射可诱导HaCaT细胞产生凋亡,凋亡率呈剂量依赖性增加;30 mJ/cm2 剂量下细胞可出现明显S期阻滞,随UVB剂量增大,S期细胞数量相对下降;照光后p16、c-myc蛋白水平均有所增高.加入黄芩苷处理可抑制UVB引起的上述变化.结论:黄芩苷可明显抑制UVB引起的凋亡与细胞周期阻滞以及p16、c-myc蛋白表达,证实该药具有有效的光保护作用.     

复方甘草酸苷对HaCaT细胞表达AQP3的影响

目的 观察复方甘草酸苷(compound glycyrrhizin,CG)对HaCaT细胞表达水通道蛋白3(aquaporin3,AQP3)的影响.方法 不同浓度CG处理人角质形成细胞株HaCaT,MTT法检测CG对HaCaT细胞的增殖抑制作用,蛋白质印迹法(Western blotting method)分析CG处理后的HaCat细胞的AQP3表达.结果 低浓度(31.25～62.5μL/mL)CG对HaCaT细胞生长没有明显影响,而125μL/mLCG则对HaCaT细胞的生长产生低毒,但AQP3的表达明显高于正常对照组.结论 浓度(62.5～125)μL/mLCG可促进HaCaT细胞表达AQP3,而自125μL/mL开始出现细胞毒性,但此时AQP3表达至最高峰.     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

N-乙酰半胱氨酸对PM2.5引起HaCaT细胞损伤的保护作用

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)对PM2.5诱导的HaCaT细胞损伤的影响.方法:HaCaT细胞分为NAC干预组、不同浓度PM2.5组(25、50、100、200、400μg/mL)及空白对照组.DCFH-DA荧光探针法检测HaCaT细胞内活性氧(ROS)的水平,RT-PCR...     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用

目的:评价Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用.方法:72只无毛鼠分为正常对照组(A组)、UVB照射对照组(B组)、外用0.36%Tempol 1 h后照射tNB组(C组)、外用0.36%Tempol 2 h后照射UVB组(D组)、外用0.36%Tempol 4 h后照射UVB组(E组)和外用0.36%Tempol 8 h后照射UVB组(F组).末次UVB照射后取其背部皮肤,在显微镜下观察真皮内胶原纤维和弹力纤维含量的变化及病理形态学改变.以生化分析方法测定丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(HYP)含量.结果:B、C、E和F组真皮胶原纤维及弹力纤维均增粗、断裂、排列紊乱,皮肤丙二醛含量均显著升高,皮肤羟脯氨酸含量均显著下降,与A和D组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:外用0.36%Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化具有防护作用,有效防护时段可能在用药后1-4 h.     

Induction of apoptosis by synthetic ceramide analogues in the human keratinocyte cell line HaCaT

Abstract: In contrast to extracellular, long chain ceramides which comprise a structural component of the epidermal water barrier, intracellular ceramides originating from sphingomyelin hydrolysis have been shown to inhibit proliferation and to induce apoptosis in different cell populations. To further elucidate the possible role of intracellular ceramides in human epidermis, two new cell-permeable ceramide analogues, N -thioacetylsphingosine (C₂-Cer=S) and 4-dodecanoylamino-decan-5-ol (FS-5), were synthesized and tested for their ability to suppress cell growth and to induce apoptosis in immortalized human keratinocytes. It was shown that the well-investigated ceramide analogue N -acetylsphingosine (C₂-Cer=O), as well as the new compound C₂-Cer=S inhibited proliferation of HaCaT cells with half-inhibitory concentrations (IC₅₀) of 20 μg/ml and 10 μg/ml, respectively, whereas FS-5 has been potent with an IC₅₀>40 μg/ml. Overall, all three ceramide analogues induced apoptosis in HaCaT cells as assessed by DNA-fragmentation using ELISA technique and in situ nick end labelling, thereby confirming the importance of ceramide signalling in keratinocytes.     

中波紫外线辐射对原代及永生化角质形成细胞损伤能力的比较研究

目的：观察原代角质形成细胞和永生化HaCaT角质形成细胞对中波紫外线照射的反应差异。方法：采用不同剂量中波紫外线(UVB)照射上述两种细胞，评估UVB对细胞作用的时间及剂量效应，以倒置光学显微镜观察细胞受损程度，MTT法检测细胞活性。结果：UVB照射后，细胞损伤程度均随照射剂量加大而加重；另经24h、48h及72h孵育后，对两种细胞进行不同时间段的细胞活性(MTT)比值比较(72h／24h，72h／48h)：分别为原代角质形成细胞(1．16和1.63)和HaCaT细胞(0．96和0．91)。MTT结果显示低剂量紫外线照射时，细胞损伤恢复可发生在照射后48h；高剂量紫外线照射后，两种细胞的损伤程度均随孵育时间延长而加重。结论：原代角质形成细胞抵抗紫外线照射损伤的能力较强，而HaCaT细胞相对较易受损。