光果甘草CHS基因的克隆与多态性分析

目的:克隆光果甘草Glycyrrhiza glabra查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)基因并分析其基因多态性。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从光果甘草主根中扩增得到CHS c DNA序列,测序并运用生物信息学软件对测序结果进行分析。结果:克隆得到19条长度为1 175 bp的光果甘草CHS c DNA序列,测序结果显示其一致性99.10%,存在81个变异位点,可分为17种单倍型;氨基酸序列分析显示,这19条c DNA序列共编码14种氨基酸序列类型,一致性99.34%,存在25个变异位点。生物信息学分析表明光果甘草CHS c DNA序列编码蛋白为稳定性亲水蛋白,平均相对分子质量42.6 k Da,等电点5.75~6.21,不含信号肽,无跨膜区,保守结构域包含1个查尔酮合酶超家族结构域,二级结构以α螺旋和无规卷曲为主。同源性分析显示,光果甘草CHS c DNA序列与乌拉尔甘草G.uralensis以及胀果甘草G.inflata在进化关系上最近,与小立碗藓Physcomitrella patens在进化关系上最远。结论:成功克隆并得到了光果甘草CHS c DNA序列,且这些序列编码区具有丰富的多态性。     

甘草种子的鉴别研究

 本文报道4种药用甘草：乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch．）、胀果甘草（G．inflata Bat）、黄甘草（G.eurycarpa P．C．L i）及光果甘草（G．glabra L．）种子的形态、显微特征，并与3种非药用甘草种子进行比较，为保证栽培甘草种子的正确及繁育优良品种，提供科学依据。     

甘草β-香树酯醇合成酶的编码区克隆与序列分析

目的:对甘草β-香树酯醇合成酶(β-amyrin synthase,bAS)编码区进行克隆及序列分析.方法:根据已报道的光果甘草bAS基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术,以甘草主根总RNA为模板扩增出甘草bAS基因的编码区序列.结果:序列分析表明,所克隆的bAS基因编码区长为2 289 bp,编码762个氨基酸残基,命名为GubAs(GenBank注册号:FJ627179),推测的氨基酸序列与光果甘草、光叶百脉根、豌豆、截形苜蓿、大豆的氨基酸序列同源性最高,分别达99%,92%,90%,90%,89%.结论:首次报道了甘草bAS基因的编码区序列,为进一步研究三萜类化合物的生物合成机制及为甘草优良品种的选育奠定基础.     

十八反中甘草物种的本草考证

"十八反"中有甘草作为反药组合的记载,《中国药典》2020年版记载有甘草Glycyrrhixa uralensis、胀果甘草G.inflata或光果甘草G. glabra 3个物种,"十八反"中甘草属何物种不能确定。在《神农本草经》提出"甘草"作为正名前,甘草名称较为混乱;古代陕西、甘肃、四川、内蒙古等地均产甘草,与今乌拉尔甘草产地较为一致;历代本草著作中甘草的小叶形态、荚果、总状花序等植物学形态与当今《中国植物志》中记载甘草植物学形态基本一致,与乌拉尔甘草最为接近;综合分析"十八反"中所记载甘草为乌拉尔甘草的可能性较大。     

光果甘草GgUGE基因的克隆和序列分析

目的:通过克隆光果甘草Glycyrrhiza glabra UDP-葡萄糖4-差向异构酶(UDP-glucose 4-epimerase,UGE)基因并进行生物信息学分析,探究光果甘草UGE基因与甘草酸生物合成分子调控之间的潜在关系。方法:从光果甘草主根中提取RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆得到UGE基因c DNA序列,测序并进行序列分析。结果:成功克隆得到一条长度为1 121 bp的光果甘草UGE基因(Gg UGE) c DNA序列,包含1个长度为1 053 bp的开放阅读框(ORF),共编码350个氨基酸残基,在Gen Bank上对所得c DNA序列进行注册,序列注册号为MK638908。序列分析表明Gg UGE基因编码蛋白为不稳定亲水蛋白,理论相对分子质量为39. 02 k Da,等电点为6. 13,不含信号肽,无跨膜区,二级结构以α-螺旋为主,保守结构域含有葡萄糖4-差向异构酶基因家族结构域。Gg UGE基因的c DNA序列和氨基酸序列聚类分析结果表明其与豆科植物亲缘关系最近,而与杨柳科植物亲缘关系较远。结论:首次克隆得到了光果甘草Gg UGE c DNA序列,对其进行了生物信息学分析,为后续Gg UGE基因的功能研究以及甘草酸生物合成分子调控机制的解析提供参考。     

试述甘草的炮制与应用

<正>甘草的药用部位是豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根及根茎。主要功效是补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,缓急止痛,调和诸药。临床上常用其治疗倦怠乏力、心悸气短、咳嗽痰多、脘腹疼痛、四肢挛急疼痛、痈肿疮     

新疆阿勒泰地区典型药用植物群落与多样性研究

目的:对新疆阿勒泰地区阿尔泰大黄、乌拉尔甘草、新疆阿魏、新疆芍药、木贼麻黄、牛至6种典型药用植物进行调查,明确其自然条件下生存现状。方法:基于30个样地对该地区6种典型药用植物群落结构与物种多样性进行生态学调查。结果:调查共记录植物39种,分属20科36属,旱生灌木、半灌木与草本植物占主导地位,6种典型药用植物的重要值依次为:0.32、0.37、0.42、0.50、0.49、0.34,6种药用植物群落物种多样性指数偏低(0.63~0.80):新疆芍药群落、新疆阿魏群落和阿尔泰大黄群落物种多样性指数最大(0.80、0.80、0.76);木贼麻黄群落和牛至群落次之(0.74、0.64);乌拉尔甘草群落最低(0.63)。结论:新疆阿勒泰地区药用植物物种组成与群落结构相对简单,亟待得到相应保护。     

基于ITS序列的伞菌类药用食用真菌的DNA条形码鉴定研究

目的:伞菌类真菌物种繁多、生物多样性丰富,包括多种重要的药用、食用真菌以及有毒真菌。因此,对该类群的快速、准确鉴定,对于新的药用食用真菌资源的发现,以及对真菌毒素危害的防治都具有重要意义。方法:本研究以伞菌类13个科23个属50个物种,共计84份样本的真菌为研究对象,采用真菌通用引物ITS5和ITS4,对其核糖体DNA的内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)进行PCR扩增和测序。通过比较不同真菌的序列长度、碱基构成,同时利用BLAST比对法和建树法对其进行鉴定。结果:伞菌类真菌的序列长度在463~751 bp之间,平均GC含量在37.1%~59.4%之间。通过与Gen Bank中序列的比对分析以及系统进化邻接(Neighbor-joining,NJ)树结果,可以在种级水平上鉴定各个真菌物种。结论:基于ITS序列的DNA条形码可以快速、准确鉴定伞菌类真菌,具有重要的应用价值。     

基于DNA条形码的甘草属植物的分子鉴别

目的:评价不同DNA条形码序列对甘草属的鉴定能力。方法:应用5条常用DNA条形码序列ITS、ITS2、psbA-trnH、matK与rbcL对甘草属进行PCR扩增与序列测序,结合在GenBank数据库下载的序列数据,通过分析各序列种内与种间变异与遗传距离,构建系统发育树,并基于相似性搜索算法和最近距离法计算各序列鉴定成功率,以分析比较各序列对甘草属的鉴定效率。结果:matk序列因扩增与测序成功率均较低,没有加入后续的数据分析。各个序列的鉴定成功率由高到低的顺序为psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL。ITS和ITS2序列种间最小变异均大于种内最大变异,且种内变异最小。Barcoding gap检验结果显示,ITS、ITS2的重叠区较小。NJ树结果显示,只有psbA-trnH序列能把甘草属不同物种分开。结论:利用DNA条形码序列可准确鉴别甘草属植物,psbA-trnH和ITS组合序列可作为鉴定甘草属植物的较优序列组合。本研究为甘草属植物的分子鉴别提供科学依据。     

甘草黄酮的研究进展

在我国甘草药用历史悠久，得到广泛的应用。传统医学认为其有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效，有“十方九草”之说。甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza Linn．)多种植物的根和根茎。据《中华人民共和国药典》2000年版一部记载其原植物有3种，即乌拉尔甘草G．uralensis Fisch．、胀果甘草G．inflate Bat和光果     

Toxicological Effects of Glycyrrhiza glabra (Licorice): A Review

Licorice (Glycyrrhiza glabra) has been considered as an herbal drug since ancient time. Nowadays, it is a well‐known spice that possesses worth pharmacological effects. However, some relevant articles have revealed negative impacts of licorice in health. By considering the great wishes in using herbal medicine, it is important to show adverse effects of herbal medicine in health. At present, there are misunderstandings toward the safety of herbal medicines. Herein, we gathered scientific research projects on the toxicity effects of licorice and glycyrrhizin to highlight their safety. In this regards, we categorized our findings about the toxicity effects of licorice and glycyrrhizin in acute, sub‐acute, sub‐chronic, and chronic states. Besides, we discussed on the cytotoxicity, genotoxicity, mutagenicity, and carcinogenicity of licorice and glycyrrhizin as well as their developmental toxicity. This review disclosed that G. glabra and glycyrrhizin salts are moderately toxic. They need to be used with caution during pregnancy. G. glabra and glycyrrhizin possess selective cytotoxic effects on cancerous cells. The most important side effects of licorice and glycyrrhizin are hypertension and hypokalemic‐induced secondary disorders. Licorice side effects are increased by hypokalemia, prolonged gastrointestinal transient time, decreased type 2 11‐beta‐hydroxysteroid dehydrogenase activities, hypertension, anorexia nervosa, old age, and female sex. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

同时检测甘草中4种黄酮糖苷类成分的方法及其在基源植物鉴别上的应用

 目的 建立同时测定甘草中4种糖苷类成分含量的方法,鉴别3种正品甘草。方法 以甘草药材为研究对象,采用RP-HPLC,建立同时测定芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷和芒柄花苷含量的方法。在此基础上,测定了55份法定3种甘草样品,并从化学成分含量的角度鉴别3种正品甘草。结果 以这4种成分含量及其比值作为鉴别3种正品甘草药材的依据,鉴别甘草的准确率达到100%,区分光果甘草和胀果甘草的准确率达到94.7%。结论 本实验建立的HPLC分析方法稳定性、精密度和重复性良好,所确定的指标适用于3种正品甘草的鉴别。     

甘草及其活性成分的药理活性研究进展

甘草是一味常用大宗药材,来源于乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草的干燥根和根茎,其主要活性成分是三萜皂苷和黄酮类化合物,具有抗溃疡、抗炎、解痉、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗抑郁、保肝、祛痰和增强记忆力等多种药理活性.三萜皂苷是甘草中含量较高的成分,其药理活性研究的较为深入和明确.近年来,甘草黄酮类化合物被证明具有多种药理活性后,也成为药理研究的热点之一.作者综述了甘草提取物、三萜皂苷和黄酮类成分近5年的药理活性研究进展,试验研究表明甘草对消化系统、呼吸系统、神经系统、内分泌系统等均具有调节和保护活性.     

新疆光果甘草黄酮类成分的抗氧化活性

 目的从新疆光果甘草中制备总黄酮(LGFs)及单体成分光甘草定(glabridin,GLB),并研究它们的抗氧化活性。方法用常规方法制备LGFs和GLB;利用HL-60细胞中的Myeloperoxidase/H₂O₂/HClO氧化系统和肝微粒体中的细胞色素P450/NADPH氧化系统做体外抗氧化实验模型,对LGFs和GLB的抗氧化活性进行测定。系统中自由基诱发程度由探针物DCFH-DA的氧化产物DCF的浓度来检测。银杏叶提取物EGb761用作阳性对照物。结果在两种体外模型中,LGFs和GLB均显示较强的抗氧化活性,它们清除自由基活性强度为EGb761≥GLB>LFs。结论甘草总黄酮及其中的主要活性成分GLB在HL-60细胞和肝微粒体氧化系统中具有很强的抗氧化活性。这些结果可部分解释甘草药理作用与其抗氧化预防活性的关系。     

Exploring the possible metabolism mediated interaction of Glycyrrhiza glabra extract with CYP3A4 and CYP2D6

The rhizome of Glycyrrhiza glabra L. (licorice) is used very widely in Indian and Chinese traditional medicine, and it is a popular flavor ingredient of drinks, sweets and candies. Its medicinal uses include treating bronchitis, dry cough, respiratory infections, liver disorders and diabetes. Glycyrrhizin is normally considered to be its biologically active marker, so a rapid RP‐HPLC method was developed for the quantitative estimation of glycyrrhizin in the extract. The effect of the standardized extract and its marker on drug metabolizing enzymes was evaluated through CYP3A4 and CYP2D6 inhibition assays to evaluate the safety through its drug interaction potential. The inhibition of CYP3A4 and CYP2D6 isozymes was analysed by the fluorescent product formation method. In the CYP450‐CO assay, the interaction potential of the standardized extract and pooled microsomes (percentage inhibition 23.23 ± 1.84%), was found to be less than the standard inhibitor. In the fluorimetric assay, G. glabra extracts showed higher IC₅₀ values than their positive inhibitors, ketoconazole and quinidine for CYP3A4 and CYP2D6, respectively. Furthermore, the interaction potential of the plant extract was greater than the pure compound. The results demonstrate that G. glabra and its principle bioactive compound, glycyrrhizin, when co‐administered with conventional medicines showed only a weak interaction potential with drug metabolizing enzymes. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

基于变异系数的模糊物元模型评价不同基原甘草药材质量及快速判别研究

目的 综合评价乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis和光果甘草G. glabra的质量,通过化学计量学寻找质量差异标志物并建立快速判别乌拉尔甘草和光果甘草模型。方法 建立甘草药材液相指纹图谱,确立共有峰,共有峰数据结合模糊物元模型与偏最小二乘法判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）化学计量学方法进行质量综合评价及质量差异标志物筛选。基于近红外光谱建立不同的快速判别模型,通过对比筛选出最佳的快速判别模型。结果 模糊物元分析表明乌拉尔甘草与光果甘草存在显著差异;经PLS-DA,结果表明甘草酸铵、甘草素、甘草苷为乌拉尔甘草和光果甘草的差异标志物;光谱经SG预处理,iPLS波段筛选所建立的决策树判别模型,精确率为0.88、准确率为0.88、F1（精确率和准确率的调和平均值）为0.88。结论 乌拉尔甘草与光果甘草之间存在显著差异。通过近红外光谱技术建立的判别模型,为快速区分这2种基原甘草提供了有效手段,有助于提升甘草药材质量控制水平。     

光果甘草ARPI基因的克隆和生物信息学分析

目的:克隆光果甘草生长素/吲哚乙酸蛋白(Aux/IAA)(GgARPI)基因并进行生物信息学分析。方法:取光果甘草新鲜主根,提取RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆GgARPI基因互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,测序并对其进行生物信息学分析。结果:克隆得到长度为686 bp的GgARPI基因cDNA序列,包含1个585 bp的完整开放阅读框(ORF),编码194个氨基酸残基。生物信息学分析表明GgARPI编码蛋白为稳定亲水蛋白,相对分子质量21. 95 k Da,等电点6. 85,不含信号肽,无跨膜区,二级结构以无规卷曲为主,包含1个Aux/IAA蛋白超家族结构域。同源性分析表明GgARPI基因与豆科植物的亲缘关系较近,与单子叶植物谷子Setaria italica的进化关系最远。结论:首次克隆得到GgARPI cDNA序列,为进一步研究GgARPI基因的功能及其对甘草酸生物合成的分子调控机制奠定了基础。     

不同种源肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶含量研究

目的：揭示肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数的变异规律，为肿节风资源利用与药材质量优化提供依据。方法：分别建立异秦皮啶与反丁烯二酸的HPLC测定方法，并测定全国21个不同种源肿节风药材中异秦皮啶与反丁烯二酸的质量分数。结果：不同种源肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数存在显著差异，海拔从低到高，两者质量分数都逐渐减少；与经度、纬度关系密切，其中异秦皮啶质量分数在肿节风自然分布中心区最高；肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数地理变异规律不同药材部位表现不一，茎比叶密切。结论：本研究建立的肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数测定方法简便、准确、重现性好，可用于肿节风药材中此2种成分的质量控制。研究结果基本代表了我国肿节风药材质量及其差异的现状，与传统观点认为“江西、福建、浙江所产肿节风药材质量较佳”一致，建议上述区域列为今后肿节风药材良种选育与基地建设的重点。     

Analgesic and Uterine Relaxant Effects of Isoliquiritigenin,a Flavone from Glycyrrhiza glabra

Shaoyao‐gancao‐tang, a Chinese medicinal formula consisting of peony and licorice has been used for the treatment of dysmenorrhea for thousands of years. The purpose of the present study was to demonstrate the analgesic and uterine relaxant effects of isoliquiritigenin (ISL), a flavonoid isolated from the roots of Glycyrrhiza glabra (a type of licorice). In vitro, isoliquiritigenin caused concentration‐dependent inhibition of spontaneous contraction of isolated rat uterus and the contraction induced by various types of stimulants, such as acetylcholine (Ach, 10 µm ), KCl (40 mm ) and oxytocin (1 mU/mL). The uterine contractile response to cumulative concentrations of CaCl₂ was blocked by 0.1 and 1 mm of isoliquiritigenin. The isoliquiritigenin‐induced relaxation was partly inhibited by the nitric oxide synthase (NOS) inhibitor N^ω‐nitro‐l ‐arginine methylester (l ‐NAME, 100 µm ) and the COX‐1/COX‐2 inhibitor indomethacin (10 µm ). In vivo, isoliquiritigenin could cause a significant reduction in the acetic acid‐induced writhing response and hot‐plate test at the high dose. These results indicate that isoliquiritigenin, a flavonoid isolated from the roots of Glycyrrhiza glabra, not only has a spasmolytic effect on uterine contraction, which is in relation to Ca²⁺ channels, NOS and COX, but also an effective activity in reducing pain. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.