致倦库蚊(Culex pipiens quinquefasciatus)对登革热病毒的易感性问题

由于预防或防止登革热/登革出血热(DF/DHF)的发生或流行,须赖其媒介控制,因而媒介的确定具有实际重要性.在我国海南岛和广东本病流行中,有曾从致倦库蚊中分离到DF病毒,并在实验传播中有阳性结果的报道,引起了国内外有关学者的注意.本文综合这方面的报告,结合我们研究的结果,认为这种库蚊并非DF的生物性传播媒介.     

淡色库蚊与致倦库蚊三个地理株杂交的研究

本文针对我国重要的媒介蚊虫淡色库蚊和致倦库蚊，进行了３个地理株的实验室内杂交研究。结果发现淡色库蚊北京株与淡色库蚊南京株杂交，以及淡色库蚊南京株与致倦库蚊广州株杂交，都可以产生具有能育性的杂种子一代并且也得到了杂种子二代，但是杂种子二代成成蚊率很低，介于０％—５．５４％之间，提示这可能是尖音库蚊复合组蚊虫的分化在遗传学上的反映     

褐尾库蚊对白纹伊蚊和致倦库蚊捕食能力的研究

褐尾库蚊是白纹伊蚊、致倦库蚊的天敌,褐尾库蚊幼虫随虫龄的增大,各龄日捕食白纹伊蚊的数量增加,随着害蚊虫口密度的增加褐尾库蚊幼虫日捕食白纹伊蚊的数量增加;2、3、4龄褐尾库蚊幼虫日捕食白纹伊蚊的数量范围分别在4～8只,8～13只,10～19只之间。2、3、4龄褐尾库蚊幼虫对白纹伊蚊的捕食量分别呈函数关系y2=1.0615Ln（x）＋3.9494（R^2=0.9091）,y3=2.7116Ln（x）＋3.8863（R^2=0.8919）,y4=5.7767Ln（x）＋0.394（R^2=0.9722）,它们增幅大小的拐点分别是3、5、10只/100cm^3。4龄褐尾库蚊幼虫对致倦库蚊的捕食量呈函数关系y=1.4133Ln（x）＋0.5334（R^2=0.9520）,增幅大小的拐点是5只/100cm^3,害蚊单种种群时褐尾库蚊对白纹伊蚊幼虫的捕食量是致倦库蚊的4倍。2种害蚊混合种群时褐尾库蚊对白纹伊蚊的捕食量是致倦库蚊的15倍。     

大链壶菌感染致倦库蚊幼虫的组织化学观察

目的 :对大链壶菌感染的致倦库蚊幼虫体内重要生化组分变化进行观察 ,以探讨大链壶菌灭蚊的可能机制。方法 :利用组织化学的方法对正常蚊幼与感染不同程度蚊幼体内糖原、蛋白质、核酸 (DNA、RNA)进行显微摄影及定量的图像分析。结果 :潜在感染蚊幼体内即可见糖原反应减弱 ,随着感染加重 ,轻度感染及重度感染蚊幼糖原及蛋白质明显较正常蚊幼减少 ,经图像分析仪进行黑度测定也表明差别具有显著统计学意义。核酸 (尤其是RNA)仅在重度感染组蚊幼脂肪体细胞内有明显减少。结论 :大链壶菌在感染蚊幼尚未见组织学改变时 ,已开始掠夺蚊幼体营养物质 ;随着感染加重 ,蚊幼体大量营养物质 (糖原、蛋白质 )被掠夺 ,可能是其对蚊幼致病的重要原因之一。     

广东省和海南省致倦库蚊对常用杀虫剂抗药性的调查研究

为了解我国广东省和海南省不同地区致倦库蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,对这两省四个不同城市的致倦库蚊对常用杀虫剂毒死蜱和克百威的抗性水平进行了测定.结果发现不同地理株致倦库蚊对这两类杀虫剂均产生了一定程度的抗性,对毒死蜱抗性倍数由1.91到5.40倍不等,对克百威的抗性倍数由1.12到1.95倍不等.由此可见,广东和海南两省市致倦库蚊对毒死蜱和克百威均产生了一定的抗性.对蚊虫抗性水平的检测在杀虫剂使用方面具有重要的指导意义,为城市卫生杀虫防控提供理论依据.     

贵阳腐霉对致倦库蚊幼虫致病的组织学研究?

为了观察灭蚊真菌贵阳腐霉感染致倦库蚊幼虫后的组织形态学变化,探讨贵阳腐霉对致倦库蚊幼虫的致死机理,采用石蜡切片、 H． E．染色和比较组织学方法,以未经贵阳腐霉作用的致倦库蚊幼虫为对照,连续观察用贵阳腐霉感染24～72 h致倦库蚊幼虫的组织学变化。结果发现被贵阳腐霉感染的致倦库蚊幼虫中肠上皮细胞出现细胞间隙增大,随着感染时间的延长,细胞间隙进一步增大并出现空泡化、质膜破损、细胞裂解一系列病理变化。结果表明贵阳腐霉可导致致倦库蚊幼虫中肠上皮细胞的破坏,推测这可能是导致其死亡原因之一。     

诱导毕赤酵母分泌表达致倦库蚊防御素Defensin成熟肽

目的诱导毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达表达致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)防御素(defensin)成熟肽,为进一步研究致倦库蚊defensin的抗病原作用、机理及其应用奠定基础。方法利用生物信息和RT-PCR技术克隆了编码致倦库蚊防御素的成熟肽全基因序列,并克隆到毕赤酵母甲醇诱导型分泌表达载体pPICZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建成pPICZα-A-defensin重组表达载体,表达载体经SacⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母X-33感受态细胞,转化子经Zeocin抗性筛选,菌落PCR,Mut表型鉴定和Tricine-SDS-PAGE分析,成功获得了能够有效表达重组defensin的pPICZα-A-Defensin/X-33甲醇利用表型工程菌。结果在甲醇诱导24 h后pPICZα-A-Defensin/X-33的工程菌分泌表达了预期Mr8 200大小的致倦库蚊防御素成熟重组肽。结论致倦库蚊防御素可以在毕赤酵母中诱导分泌表达。     

致倦库蚊溴氰菊酯抗性株细胞色素P450基因的克隆,鉴定及同 …

根据果蝇的ＣＹＰ４Ｄ１保守区氨基酸序列，设计了１对简并引物，从致倦库蚊溴氰菊酯抗性株的基因组ＤＮＡ中，扩增出１条特异性ＤＮＡ片段，其大小与设计的细胞色素Ｐ４５０基因片段相符。将这个片段与ｐＵＣ１９质粒重组，并克隆到ＤＨ５α大肠杆菌中，经筛选后测序，得到１条长４５６的核酸序列。将推导的氨基酸序列进行同源性分析，表明该序列与ＣＹＰ４家族成员同源性较高，提示该序列属于ＣＹＰ４家族；该序列与ＣＹＰ４Ｊ亚家     

尖音库蚊复合组（Culex pipiens Complex）蚊虫体内脂肪酸组…

本文报告了我国尖音库蚊复合组尖音库蚊、致倦库蚊和淡色库蚊体内脂肪酸组分和含量的气相色谱分析结果。发现三者主要脂肪酸组分均为棕榈油酸（Ｃ１６：１）、棕榈酸（Ｃ１６：０）、亚油酸（Ｃ１８：２）、油酸（Ｃ１８：１）、硬脂酸（Ｃ１８：０）、肉豆蔻酸（Ｃ１４：０）和两种未知酸（保留时间分别为２１．０９和２１．３４）。而各组分含量在上述蚊虫之间有一定的差异。     

上海市冬季尖音库蚊复合组现状初步研究

为研究上海市冬季尖音库蚊复合组生态学,2012年12月中旬至2013年3月中旬,在上海市7个区县（3个郊区,4个市区）,每旬开展一次冬季尖音库蚊复合组调查。结果发现郊区和市区地上建筑的尖音库蚊复合组进入越冬状态,而市区地下建筑的尖音库蚊属相当一部分没有进入越冬状态,且市区地下建筑的尖音库蚊复合组吸血率与郊区和市区地上建筑越冬的蚊虫没有显著差异。     

淡色库蚊对一些化合物的触角电生理及行为反应

本文利用触角电位技术和嗅觉仪测试了几种气味化合物对淡色库蚊雌蚊的触角电生理和行为影响。触角电生理结果显示,淡色库蚊雌蚊对L-乳酸、苯甲醛和氨水产生明显的触角电位反应,且对苯甲醛和氨水的触角电位反应呈正相关。L乳酸在μL／mL剂量时产生最大的触角电位反应;氨水在10μL/mL剂量引发了最大的触角电位反应;淡色库蚊雌蚊对”蒎烯4个剂量的刺激没有产生明显的触角电位反应。行为实验结果显示,．氨水在10μL/mL时对淡色库蚊雌蚊产生明显的吸引作用;苯甲醛和壬醛显示出潜在的驱避作用,两者的反应率在1μL/mL和10μL/mL剂量仅10％左右;L-乳酸、苯甲酸、壬酸和α-蒎烯在测试剂量下都没有对淡色库蚊雌蚊产生明显的引诱作用。     

致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA克隆与序列分析

应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从吸血24h的致倦库蚊广州株蚊虫总RNA中反转录合成后期胰蛋白酶cDNA第1链.采用自动DNA分析仪进行序列分析,并与其他胰蛋白酶进行同源性比较.结果表明致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA部分序列分别长216bp、229bp和270bp,命名为Ctry1、Ctry2和Ctrt3.Ctry1和Ctry2均可编码50个氨基酸(1～150bp),氨基酸组成完全相同.Ctry1、Ctry2与致倦库蚊美国株后期胰蛋白酶前体物氨基酸同源性达86%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰蛋白酶特异位点(G1y-24,Gly-32).而Ctry3可编码76个氨基酸(1～228bp).Ctry3编码的氨基酸与果蝇胰蛋白酶前体物的同源性为68%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰酶特异位点(Gly-24,Gly-32).以上表明已克隆出致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA.     

淡色库蚊(Culex pipiens pallens)微卫星DNA位点的克隆

本研究利用地高辛标记的寡核苷酸(GT)8、(CAC)5、(GATA)4为探针,通过与基因组文库中的重组质粒DNA进行杂交,从686个重组质粒中筛选到8条淡色库蚊(Culex pipiens pallens)的微卫星(Microsatellite)DNA序列,已在GenBank数据库注册(Accession numberAY573280-AY573287).     

我国尖音库蚊复合组蚊虫核糖体DNA第2内转录间隔区序列测定与分析

通过对我国尖音库蚊复合组蚊虫及三带喙库蚊核糖体DNA第二内转录间隔区 (rDNA ITS2 )的序列测定 ,表明rDNA ITS2序列在我国尖音库蚊复合组种内亚种间和亚种内的变异存在有重叠现象。分子系统关系分析没有发现与形态学亚种阶元分类地位的一致性 ,但在种间差异明显。     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶全基因的克隆鉴定及蛋白同源模拟

根据已知的尖音库蚊乙酰胆碱酯酶 (AChE1 )的全基因序列在非编码区设计一对特异性引物 ,对淡色库蚊的cDNA进行扩增。PCR产物经T A克隆 ,PCR鉴定和DNA测序 ,利用DNAStar软件与部分已知物种的AChE1氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树。淡色库蚊Ace1基因的ORF序列为 2 1 0 3bp ,翻译成蛋白序列为 70 0个氨基酸。蛋白序列与尖音库蚊的AChE1相比只有 1 2个氨基酸的差异 ,缺失了一段 8个残基的序列。同源性分析表明 ,除尖音库蚊外 ,其与冈比亚按蚊的同源性最高 (79 5 % ) ,与黑腹果蝇AChE2相比则比较低 (31 1 % )。应用SWISS MODEL软件对该蛋白进行了同源模拟     

自然种群淡色库蚊钠通道基因全长的克隆及序列分析

本研究采用反转录多聚酶链式反应（ RT-PCR）的方法对野外采集的河北种群淡色库蚊的钠离子通道基因进行了克隆和序列分析。得到的克隆序列与GenBank中公布的序列能够吻合,说明成功克隆出淡色库蚊的钠通道基因全长,为抗性突变的研究奠定了基础。本研究在淡色库蚊钠通道基因上发现了多处氨基酸突变（A32T、 T336A、 S342P、 K535E、 L1035F、 N1595S和F1982L）和7处可变剪接。其中,包括经典的抗性突变L1014F （ L1035F）。但这些突变和可变剪接与蚊虫抗性的关系有待进一步研究。