随机引物引导的乙型肝炎病毒DNA探针标记和重复杂交

随机引物引导的探针标记足一种比切中移位更为有效的探针标记方法,作者应用这种方法制备~(32)P标记的乙型肝炎病毒(HBV)DNA探针。经液闪测定,探什比放射性为lxl0~(9)cpm/ug,(32)P掺入率为71.43％,均比切口移位有关参数上限高出数倍。将这种探针用于尼龙膜载样杂交,在每100cm~(2)的样膜所加探针放射性强度为5 x10~(6)cpm、浓度为20ug/L条件下,放射自显影24小时即可出示清晰结果。并且检出HBV DNA灵敏度达0.1Pg,检测HBSAg和HBCAg双阳性血清,HBVDNA阳性率达87％(26/30)。用这种方法还制备地高辛素标记的HBV DNA探针,并在探针浓度为20 ug/L条件下,对~(32)p探针杂交过的样膜重复杂交。结束检出HBV DNA灵敏度为0.05 Pg,检测HBsAg和HBeAg双阳性血清,HBV DNA阳性率为73％(22/30)。上述结果表明随机引物引导标记可用于制备高比放同位素探针和高敏感性非同位索探针。前者对研究微量基因必不可少,后者对基层单位常规开展检测非常重要。     

随机引物法标记放射同位素DNA探针及其应用

我们报告应用随机引物和 DNA聚合酶I Klenow大片段进行放射性同位素 DNA探针标记,获得高比放射性DNA基因探针的方法。同时应用这种方法标记了MDRl基因cD-NA探针对脑胶质瘤基因组 DNA进行Southern blot杂交获得满意效果。我们认为,该方法较缺口平移标记法不仅放射比活性高,而且简便易行,是一种适合临床开展分子生物学研究的实验技术。     

PCR引物法及随机引物法标记cDNA探针杂交效率的研究

目的 :为提高原位杂交所用cDNA探针的杂交效率。方法 :采用正义引物PCR法及正义、反义引物PCR法制备地高辛 (Dig)标记的TGF_βcDNA探针。同时采用常规的随机引物法标记上述探针。用斑点杂交及原位杂交法比较三者的效率。结果 :在斑点杂交中 ,正义引物PCR法所标记的单链探针的杂交效率最高 ,高于随机引物法一个数量级。在探针浓度相同条件下 ,正义引物PCR法标记探针的原位杂交效果优于随机引物法标记的探针。正义和反义引物PCR法标记的双链探针的杂交效率次于正义引物PCR法所标记的单链探针     

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。     

生物素探针分子杂交试验检测乙型肝炎患者血清HBV—DNA的意义

用生物素探针分子杂交试验检测６１７临床各类乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，总阳性率为３５．６５％（２２０／６１７），各临床类型间无差异性。ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率：在ＨＢｅＡｇ阳性患者中为６７．０２％（１８７／２７９），而ＨＢｅＡｇ阴性性患者中为９．７６％（３３／３３８）；在ＨＢｓＡｇ阳性患者中为３９．１５％（２１１／５３９），而ＨＢｓＡｇ阴性患者中为１１．５４％（９／７８）；抗－ＨＢｅ阳性者为８．     

PCR引物法及随机引物法标记cDNA探针杂交效率的研究

目的：为提高原位杂交所用ｃＤＮＡ探针的杂交效率。方法：采用正义引物ＰＣＲ法及正义、反义引物ＰＣＲ法制备地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＴＧＦ－βｃＤＮＡ探针。同时采用常规的随机引物法标记上述探针。用斑点杂交及原位杂交法比较三者的效率。结果：在斑点杂交中，正义引物ＰＣＲ法所标记的单链探针的杂交效率最高，高于随机引物法一个数量级。在探针浓度相同条件下，正义引物ＰＣＲ法标记探针的原位杂交效果优于随机引物法标记的探     

一种生物素探针杂交技术

生物素标记的DNA探针由于其稳定、便宜及非放射性特点而日益受到重视。为提高生物素探针灵敏度,Gregersen等和chan等均做了较多工作。本文综合两者之所长,并作部分修改,建立了一套生物素探针标记、杂交及检测方法。 1 材料与方法     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果，ＰＣＲ标记法具有经济，快速，简易和标记量大等优点，实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ＵＴＰ的质量，ｄＴＴＰ和Ｄ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

随机引物法探针标记试剂盒的配制

随机引物法探针标记试剂盒的配制周建中王申五（南京市第一医院内科南京２１０００６）随机引物法标记探针具有标记核苷酸掺入率高，模板ＤＮＡ用量少，所标记探针具高比活性且未经纯化而可直接加入杂交液中变性后使用等优点，有取代缺口平移法的趋势，故其探针标记试剂盒...     

生物素探针分子杂交试验检测乙型肝炎患者血清HBV－DNA的意义

用生物素探针分子杂交试验检测６１７例临床各类型乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，总阳性率为３５．６６％（２２０／６１７），各临床类型间无差异性。ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率：在ＨＢｅＡｇ阳性患者中为６７．０２％（１８７／２７９），而ＨＢｅＡｇ阴性患者中为９．７６％（３３／３３８）；在ＨＢｓＡｇ阳性患者中为３９．１５％（２１１／５３９），而ＨＢｓＡｇ阴性患者中为１１．５４％（９／７８）；抗－ＨＢｅ阳性者为８．１７％（１７／２０８）；抗－ＨＢｓ阳性者为１２．５％（５／４０）。２３例非乙型肝炎患者均未检出血清ＨＢＶ－ＤＮＡ。检测结果表明本方法是一种快速、简便、特异、敏感、无同位素污染的方法。     

聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）和DNA探针杂交法检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)的临床诊断价值。方法：应用这两种方法对未使用过抗衣原体药物的80例宫颈炎患者同时进行Ct检测。结果：PCR法检出Ct基因的阳性率（23．8％）高于探针杂交法（15．0％），两者比较有显著性差异。结论：PCR法检测Ct较DNA探针杂交法敏感，如将两法结合应用结果将更可信。     

支原体全DNA光敏生物素探针杂交方法的建立

支原体基因组全ＤＮＡ分子量较小，本研究直接制备肺炎支原体，人型支原体和解脲脲原体中３个型ＳＵ１，ＳＵ４，ＳＵ８全ＤＮＡ光敏生物毒探针，用斑点杂交鉴定表明探针可用于检测同种支原体，但３个型ＵＵ探针不能用于型别鉴定。探针检测灵敏义较一般片段ＤＮＡ探针灵敏度低，可能是由于前者分子量较大，降低了杂交速率和效率。     

HRP标记DNA探针的制备及杂交条件探讨

目的：用辣根过氧化物酶(HRP)直接标记DNA探针,并对其斑点杂交条件进行探讨。方法：以对苯醌(PBQ)氧化HRP使其产生活化位点,并与聚乙烯亚胺PEI缩合形成HRP-PBQ-PEI复合物,再以戊二醛连接DNA,共价结合构建直接酶标探针进行斑点杂交,利用HRP可与底物发生颜色反应的特点观察结果,并对不同杂交条件进行研究。结果：成功构建了HRP标记的DNA探针,并进行了斑点杂交反应,归纳出较好的杂交条件。结论：直接酶标DNA探针有较高的特异性及敏感性,操作简便快速,经济可行。     

简便,敏感的地高辛标记DNA探针原位分子杂交技术

本文应用人乳头瘤病毒6B和11型基因探针原位分子杂交技术检测了57例尖锐湿疣和假性湿疣。同时用免疫组化ABC法做对照检测。探针标记选择地高辛随机引物延伸法。原位分子杂交的主要步骤包括:石蜡切片的预处理;杂交;免疫检测及显色。结果显示:在尖锐湿疣中,人乳头瘤病毒的阳性率为94.4％;免疫组化核壳抗原检测阳性率为47.2％;假性湿疣杂交结果均为阴性。结果表明:原位分子杂交方法比免疫组化方法敏感,提高了阳性率。本实验过程中遇到并试图解决的主要技术问题有:(1)防止脱片;(2)蛋白酶K的浓度;(3)显色时间的掌握;(4)左旋脒唑的剂量。     

重复序列DNA探针分析我国3株恶性疟原虫

分析鉴定疟原虫虫株,在种下分类理论研究及疟疾防治应用上均具有重要意义。基因分析技术精确、可靠,能揭示虫体内在的本质差别。本实验试用重复DNA序列PFrep20作探针,以分子杂交方法分析我国恶性疟原虫(P.f)、安徽Fcc/AH株、云