Calponin对培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的

Ｃａｌｐｏｎｉｎ是一种抗细胞增殖基因，在多种病理情况下表达失调。用脂质体＿载体质粒ＰＣＡＧＧＳ作介导向培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞内导入人重组Ｃａｌｐｏｎｉｎ（ｈＣＮ），目的基因可在该细胞组织内表达，并持续较长时间（４周以上）。ＭＴＴＩ地的检测结果表明，导入ｈＣＮ基因能明显抑制ＳＨＲ平滑肌细胞的增殖，这种作用对血管成形术后再狭窄的防治和高血压时血管壁肥厚的逆转具有潜在的实用价值。     

运动对自发性高血压大鼠心肌血管内皮生长因子及其基因表达的影响

为探讨血管内皮生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）是否参与运动改善高血压性心肌肥大机制,采用免疫组化和分子杂交方法,研究了自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ　ｒａｔｓ,ＳＨＲ）游泳运动后心肌细胞ＶＧＥＦ及其基因表达的改变。免疫组化结果表明,ＳＨＲ经１０周游泳后,心肌细胞浆内ＶＥＧＦ特异染色颗粒比安静ＳＨＲ明显增多。Ｎｏｒｔｈｅｍ分子杂交结果表明,ＳＨＲ运动后心肌ＶＥＧＦ　ｍＲＮＡ表达比安静ＳＨＲ降低。目前对这一结果的生理意义还不清楚,推测可能与改善高血压肥大心肌间质血管增生机制有关。     

自发性高血压大鼠内皮素和降钙素基因相关肽水平观察

自发性高血压大鼠内皮素和降钙素基因相关肽水平观察程光华陶晓根张新路测定了正常血压大鼠（ＷＫＹ）、自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血浆和组织内皮素（ＥＴ）与降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的含量，以探讨其在高血压发病中的病理生理学意义，现报道如下。一、材料与方法...     

碱性成纤维细胞生长因子和内皮素在自发性高血压大鼠肾损害中的作用

为了解自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肾损害的程度，通过检测ＳＨＲ血浆、肾组织中内皮素（ＥＴ）和水平，碱性成纤维细胞６生长因子的表达，初步探讨ＳＨＲ肾损害的机制。将１６个月龄ＳＨＲ作为实验组，同龄ＷＫＹ大鼠作为对照组；检测ＣＣｒ、ＵＡＥ；采用放免疫射分析法大鼠血浆、肾组织中ＥＴ的水平；肾组织切片采用ＨＥ染色，ＰＡＳ染色用免疫组化检测Ⅰ、Ⅳ型胶原和ｂＦＧＦ蛋白的表达用原位杂交方法检测肾组织中ｂＦＧＦｍＲＮ     

rhGM-CSF基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞和小鼠体内的表达

将ｈＧＭＣＳＦ基因克隆至真核表达质粒ｐＣＤＳ中，构建成重组质粒ｐＣＧ１。用电穿孔法将质粒ｐＣＧ１导入ＣＯＳ７细胞和直接注射小鼠骨骼肌内，ＥＬＩＳＡ检测显示质粒ｐＣＧ１转染ＣＯＳ７细胞后４８、７２、９６ｈ和肌注质粒ｐＣＧ１后ｄ１０、ｄ１５、ｄ２０、ｄ２５小鼠体内均有ｈＧＭＣＳＦ的表达。生物学活性检测显示含肌注ｐＣＧ１的小鼠血液有维持ＴＦ１细胞生长的作用，表明重组质粒ｐＣＧ１表达分泌的ｈＧＭＣＳＦ具有生物学活性     

苯那普利、芦沙坦治疗自发性高血压大鼠对肾功能及对碱性成纤维细胞生长因子、内皮素的影响

为与血管紧张素转换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）苯那普利比较,研究新一代降压药血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂芦沙坦对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肾功能的影响,以及两药减轻 ＳＨＲ肾损害可能的机制,设立苯那普利治疗组、芦沙坦治疗组、未治疗组及正常血压对照组,治疗３个月后,检测肾功能、肾组织病理改变,血浆及肾组织内皮素（ＥＴ）水平和肾组织中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果显示,芦沙坦降压、延缓ＳＨＲ尿白蛋白排泄率与苯那普利比较差异无显著性意义,两治疗组肾组织病理损害轻,芦沙坦组血浆、肾组织中ＥＴ及苯那普利组肾组织中ＥＴ均明显降低,两组肾组织中ｂＦＧＦ的表达均减弱。结果表明,芦沙坦能延缓ＳＨＲ肾损害,苯那普利和芦沙坦减轻ＳＨＲ肾损害与其降低ＥＴ、抑制ｂＦＧＦ表达可能有关。     

hG－CSF cDNA重组逆转录病毒的构建

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆。该克隆细胞染色体中成功地整合了ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ，并且表达了有生物学活性的ｈＧ－ＣＳＦ产物。     

逆转录病毒介导的基因转移方法的建立

将人促红细胞生成素（ｈＥＰＯ）、人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、细胞程序死亡抑制基因（ＢＣＬ－２）重组逆转录病毒质粒ＤＮＡ转染病毒包装细胞ＰＡ３１７后，经Ｇ４１８抗性筛选，其单克隆细胞株培养上清液均具有感染ＮＩＨ３Ｔ３及大鼠原代成纤维细胞、成肌细胞并形成Ｇ４１８抗性克隆的能力。其感染细胞的染色体ＤＮＡＰＣＲ鉴定结果均为阳性，表明其染色体中均成功地整合了目的基因；感染的靶细胞均能表达外源基因编码蛋白，表明已成功地建立了逆转录病毒介导的基因转移技术。     

hG—CSF cDNA重组逆转录病毒的构建

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆。该克隆细胞染色体中成功地整合了ｈＧ－ＣＳＦ ｃＤＮＡ，并且表达了有生物学活性的ｈＧ－ＣＳＦ产物。     

人睫状神经营养因子的原核表达及其初步纯化

目的：优化条件实现人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌中的高效表达。方法：ＣＮＴＦ克隆进ｐＢＶ２２０后,表达,凝胶过滤纯化,１０日龄鸡背根神经节（Ｅ１０ＤＲＧｓ）测定其生物活性。结果：ＣＮＴＦ在ＨＢ１０１中高效表达,并具有生物活性。结论：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察到相对分子质量约为２４×１０３的预期表达产物,优化表达条件后发现其在ＨＢ１０１中的表达状况最好,用凝胶过滤纯化的重组蛋白能促进Ｅ１０ＤＲＧｓ的生长     

直流电场影响血管平滑肌细胞迁移和增殖的研究

目的：探讨生物电场（EF）对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）迁移和增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉VSMC，EF干预72h，显微成像及图象分析技术检测VSMC迁移情况，免疫细胞化学染色方法观察VSMC增殖核抗原表达情况，观察细胞增殖改变。结果：在含有10％胎牛血清（FBS）的培养基中，在150mV／mm EF作用下，VSMC向阴极迁移明显，向阳极迁移受抑制。150mV／mm、250mV／mm EF干预下，细胞增殖核抗原较无EF干预培养VSMC无明显改变。结论：EF诱导VSMC定向迁移，对VSMC增殖没有明显影响。     

血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达在自发性高血压大鼠颈动脉血管间质胶原重构及逆转中的意义

目的　探讨血管平滑肌细胞及Bcl 2和Bax蛋白表达在自发性高血压大鼠 (SHR)颈动脉血管间质胶原重构及逆转中的意义。方法　选择 16周龄雄性SHR各 12只分别为厄贝沙坦组 (30mg·kg- 1·d- 1 )和非厄贝沙坦组 ,另选同龄雄性Wistar大鼠 12只为正常对照组 ;颈总动脉切片采用HE染色、苦味酸一天狼星红 (PSR)染色、免疫组化法染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导dUIP缺口末端标记法分别检测颈动脉壁厚 腔径比值、胶原面积百分比、Bcl 2和Bax蛋白表达和血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡率(APOI)。结果　非厄贝沙坦组颈动脉壁厚 腔径比值较正常对照组高 2 5 0 .11%± 15 .6 3% (P <0 .0 1) ,厄贝沙坦组治疗 2 0周后 ,较非厄贝沙坦组下降了 4 3.2 4 %± 8.6 2 % (P <0 .0 1) ;非厄贝沙坦组胶原面积百分比较正常对照组SBP高 2 0 1.6 7%± 16 .73% (P <0 .0 1) ,厄贝沙坦组治疗 2 0周后 ,较非厄贝沙坦组仅仅下降了 17.70 %± 6 .4 5 % (P <0 .0 1) ;非厄贝沙坦组的VSMC率APOI较正常对照组显著增高 ,经药物治疗后下降 ;非厄贝沙坦组的VSMCBcl 2蛋白表达阳性率明显高于正常对照组 ,用厄贝沙坦治疗后 ,VSMCBcl 2阳性率较非厄贝沙坦组明显减少 ;非厄贝沙坦组和正常对照组的VSMCBax蛋白表达阳性率无明显差别 ,用厄贝沙坦治疗后 ,VS     

β射线内照射抑制血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖的研究

目的 探讨β射线对血管内皮细胞和平滑肌细胞的细胞效应。方法 培养人脐静脉内皮细胞和牛主动脉平滑肌细胞,接受0、1.25、2.5、5.0、10、20、40 Gy β射线后,以四唑盐(MTT)比色实验评价剂量-效应关系,用划痕实验研究β射线对两种细胞增殖的影响。血管内皮细胞经0、2.5、5.0、10、20 Gy照射后,进行透射电镜超微结构观察和使用流式细胞仪进行DNA倍体及凋亡率分析。结果 血管内皮细胞在照射后2、24 h,在1.25～40 Gy其增殖呈剂量依赖性抑制;在照射后48、72 h,其剂量依赖性抑制在10 Gy时处于平台期。血管平滑肌细胞在照射后2、24和48 h,其增殖抑制在10Gy时处于平台期;在照射后72h,其增殖抑制在5 Gy时处于平台期。在照射后72 h,吸收剂量为5 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为27.9％和19.0％(P=0.016);吸收剂量为10 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为33.7％和20.9％(P=0.002)。划痕实验示吸收剂量为5Gy时血管内皮细胞几乎完全充填裂隙,而平滑肌细胞较少充填裂隙;10 Gy照射后,内皮细胞充填裂隙数量减少,而平滑肌细胞几乎未充填裂隙。透射电镜未发现典型的凋亡征象,流式细胞仪检查各实验组和对照组的凋亡率均<4.4％。DNA倍体分析发现对照组G_2/M期细胞数百分比为13.09％,各照射组依次为16.     

腺病毒介导的P21WAF1/CIP1基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的：应用重组腺病毒载体介导的P21^WAF1/CIP1基因转染血管平滑肌细胞（VSMC），探讨P21^WAF1/CIP1基因对平滑肌细胞凋亡的诱导作用。材料与方法：P21^WAF1/CIP1的重组病毒载体转染体外培养的猪主动脉平滑肌细胞，应用RT－PCR检测外源性P21^WAF1/CIP1基因的表达，并通过细胞形态、原位细胞凋亡分析、流式细胞仪和细胞生长曲线等方法观察P21诱导VSMC凋亡，抑制VSMC增殖的情况。结果：P21^WAF1/CIP1基因的重组腺病毒载体可以有效地转入平滑肌细胞中，诱导平滑肌细胞凋亡，并能显著地抑制平滑肌细胞增殖。结论：外源性P21^WAF1/CIP1基因转移可以诱导平滑肌细胞凋亡，显著地抑制平滑肌细胞增殖。     

波长510.6 nm铜蒸气激光诱导兔血管平滑肌细胞凋亡的照射剂量筛选

目的　筛选对离体培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)能诱导出较高凋亡率的激光照射剂量参数。方法　取离体培养的第 4代兔VSMC ,予波长 5 10 6nm铜蒸气激光照射 ,照射剂量为功率密度 10 0、2 0 0、30 0mW cm2 ,能量密度10 0、15 0、180、2 0 0、2 10、30 0J cm2 。脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)标记检测各照射剂量组细胞凋亡率。结果　与对照组比较 ,各照射组VSMC凋亡率明显增高 ,达对照组凋亡率的 2 9～ 14 7倍 (P <0 0 5 )。以功率密度 30 0mW cm2照射 6 6 7s照射组之VSMC凋亡率最高 ,达 30 %。结论　以波长 5 10 6nm、功率密度 30 0mW cm2 铜蒸气激光照射兔VSMC 6 6 7s可诱导发生较高的细胞凋亡率     

兔原代胸主动脉平滑肌细胞培养方法及不同浓度血清培养基对其增殖的研究

目的探讨体外分离培养兔原代胸主动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）技术及在不同浓度血清培养基下生长情况。方法采用组织贴块法进行原代培养,分别用不同浓度血清培养基（10％、15％、20％）对原代VSMCs进行培养．胰酶消化法传代,用倒置显微镜对原代培养兔平滑肌细胞进行形态学观察并鉴定,MTT法测定增殖能力。结果体积分数20％血清的DMEM培养液培养的原代细胞生长出现明显对数期。培养5代的兔平滑肌细胞纯度达97％以上：镜下可见平滑肌细胞生长,免疫组化提示平滑肌细胞肌动蛋白阳性表达,细胞生长第4～5d内光密度值变化较明显。结论本法能有效提高兔动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,为研究血管平滑肌细胞生物学行为提供了有效模型。     

Chronic hypoxia diminishes the proliferative response of Guinea pig uterine artery vascular smooth muscle cells in vitro

The pregnancy-related size enlargement of the guinea pig uterine artery is partially accomplished by hyperplasia in all layers of the vessel wall. We sought to determine the separate and combined effects of chronic hypoxia and pregnancy on the proliferative capacity of uterine artery vascular smooth muscle cells (UA VSMCs). We established primary UA VSMC cultures from a total of 13 guinea pigs using an enzymatic digestion technique. Animals were bred and kept in normoxia or hypoxia (P(B) = 463 mmHg, simulated elevation = 3962 m) for 45 days, a duration equivalent to midpregnancy in the guinea pig 63-day gestation. Nonpregnant matched controls were included. The proliferative response of UA VSMCs to 1, 3, 5 or 7 days of serum stimulation in vitro was compared. Exposure to hypoxia reduced UA VSMC proliferative response to serum stimulation relative to that seen in cells harvested from normoxic females. The inhibitory effect was present both in cells harvested from nonpregnant and pregnant animals and resulted in a lower UA VSMC proliferative response in the cells harvested from hypoxic compared with normoxic pregnant animals. Our data were consistent with our hypothesis that chronic maternal hypoxia compromises the capacity for growth and remodeling of the uterine artery during pregnancy, perhaps by interfering with the ability of vascular smooth muscle cells to de-differentiate to a proliferative phenotype. Noteworthy was that such effects of chronic hypoxia were retained in cultured cells.     

高同型半胱氨酸血症致血管平滑肌细胞增殖的机制初探

 目的 探讨高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia, HHcy)致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖在动脉粥样硬化发病中的机制.方法 整体水平实验:82例研究对象分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)组54例,对照组28例.荧光生化法检测血浆总同型半胱氨酸(total homocysteine, tHcy)水平,甲基化特异的 PCR(Methy-specific PCR,MSP)法检测雌激素受体α(estrogen receptor-α ,ER-α)启动子区CpG岛的甲基化状态.细胞水平实验:体外培养的人脐动脉VSMC,用不同浓度同型半胱氨酸(homocy steioe, Hcy)处理,MTT法观察Hcy对平滑肌细胞生长的影响,MS-PCR法和Rt-PCR法检测ER-α基因启动子区甲基化程度及mRNA的表达.结果 整体水平实验中,AS患者中甲基化率为70.4%,对照组甲基化率为28.6%,差异具有统计学意义(P<0.05).细胞水平实验中,MTT结果显示Hcy对VSMC具有明显促增殖效应.Hcy显著增加ER-α基因启动区的甲基化修饰,并使ER-αmRNA的表达进行性减少.结论 Hcy通过干扰DNA的甲基化修饰,使ER-а基因高甲基化可能是高同型半胱氨酸血症促使VSMC增殖,并引起动脉粥样硬化的重要机制.     

骨骼肌转移瘤罕见性机制的实验研究

为分析骨骼肌微环境因素在其转移瘤罕见性中的意义,作者建立了恶性肿瘤向Wistar大鼠骨骼肌血行转移的动物模型,用免疫组化方法进一步分析骨骼肌微血管内皮细胞粘附分子（VCAM－1）的变化,并用噻唑蓝（MTT）法分析新生Wistar大鼠骨骼肌细胞条件培养基（MCM）对不同肿瘤细胞系的体外抑瘤作用。观察到骼动脉注入瘤细胞后,大腿骨骼肌肌束旁结缔组织内偶见瘤细胞团或实验性转移灶形成,肌细胞间无实验性转移灶形成,与相对应的肺内广泛实验性转移瘤形成率比较,P＜0.001。实验组大腿骨骼肌与对照组肺微血管内皮细胞VCAM－1阳性率无显著差异（P＝0.5）,变化趋势一致。MCM对Walker256、K562、LS－174－T、PLA801－C及PLA801－D等肿瘤细胞增殖,均具有显著性意义（P＜0.01－0.05）,对RGP－2等正常细胞的增殖无抑制作用。对PLA801－D的抑制作用较对PLA801－C更敏感。骨骼肌细胞产生的抑瘤活性物质,可能是临床上骨骼肌转移瘤罕见性现象的关键因素。     

腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达

目的　以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,增强VSMC中gax基因的表达。方法　采用位置特异性重组方法构建携带大鼠 gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体(AdCMV gax) ,经 2 93细胞扩增 ,纯化制备高滴度病毒转染液 ;以病毒转染液常规转染VSMC后 ,应用RT PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中 gaxmRNA和蛋白质的表达。 结果　流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示AdCMV gax转染VSMC后 ,VSMC的Gax蛋白表达率明显增高 ,转染后 2 4小时即可达 80 %左右 ,高水平的表达可维持 5天以上 ;AdCMV gax转染前 ,PDGF BB对gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用 ,AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中 gax基因的表达均比转染前显著增高。 结论　腺病毒载体可有效地介导 gax基因转染VSMC ,并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究 gax基因对VSMC生物学行为的影响