C-Jun蛋白对糖皮质激素受体表达及转录激活能力的影响

目的观察促进与抑制c-Jun蛋白表达对糖皮质激素受体(GR)表达和转录激活能力的影响,探索c-Jun与GR功能的相互关系.方法采用基因重组技术,构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,电穿孔法分别转染U937细胞c-Jun蛋白表达真核载体与PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,观察c-Jun表达对GR表达和转录激活能力的影响.结果成功构建PAVU6-c JunsiRNA干涉质粒,转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性有增强,而转染c-Jun表达载体pCMV-c JunGR的表达和转录激活活性有所减弱.结论c-Jun蛋白表达水平对GR的表达和转录激活活性有影响,抑制c-Jun蛋白表达,一定程度上可促进GR表达并增强其转录激活功能.     

PAVU6-cJun siRNA干涉质粒的构建及对糖皮质激素受体表达与转录激活能力的影响

采用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术将合成的两段有回文结构的c-Jun互补cDNA序列插入PAVU6siRNA表达载体,构建PAVU6-cJunsiRNA干涉质粒,电转化U937细胞,观察沉默c-Jun的基因表达对GR蛋白表达和转录激活能力的影响,探讨c-Jun与GR功能的相互关系。PAVU6-cJunsiRNA转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性均有所增强。提示抑制U937细胞c-Jun蛋白表达,在一定程度上可促进GR表达及增强其转录激活功能。     

免疫反应对糖皮质激素受体的影响和意义

本文采用绵羊红细胞腹腔注入C_(57)BL小鼠产生抗绵羊红细胞的免疫反应。观察小鼠在免疫反应过程中,其脾脏淋巴细胞糖皮质激素受体(GCR)数的变化。发现在绵羊红细胞致敏后第五天小鼠脾淋巴细胞GCR数明显高于对照组(P<0.005),第七天达高峰,第十一天恢复至正常。用Dex抑制由植物血凝素(PHA)诱导的小鼠脾脏淋巴细胞的转化探讨致敏鼠脾淋巴细胞GCR变化的意义。结果提示Dex对淋转抑制程度可能与淋巴细胞GCR数有关。本文还用上述方法研究了妊娠小鼠,发现妊娠母体内脾淋巴细胞GCR数明显高于未孕小鼠(P<0.005),这在调节母胎免疫反应中有一定意义。     

糖皮质激素受体对大鼠中性粒细胞粘附的影响

本文通过Percoll梯度离心法分离获得大鼠中性粒细胞(PMNS)后,采用PMNS与玻璃珠粘附的模型,通过给予Dex及糖皮质激素受体(GR)阻断剂Mifepristone(RU_(38486))研究大鼠PMNS粘附过程中GR的作用。结果显示,Dex可以明显抑制PMNS的粘附,其作用随着Dex浓度的增大而增强;单纯给予不同浓度的RU_(38486)未发现明显的PMNS粘附增强,说明RU_(38486)本身对离体的PMNS粘附没有明显的作用;若同时给予Dex和RU_(38486),则Dex抑制PMNS粘附的作用逐渐减小,直至完全逆转。该结果强烈提示:糖皮质激素(GC)具有抑制PMNS粘附的作用,其作用是通过GR介导的,当GR被阻断时,这一抑制作用减弱,甚至消失。     

细菌超抗原SEB对皮炎局部糖皮质激素受体β表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对于皮炎局部糖皮质激素受体β(GRβ)的影响。方法 1%DNCB重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建特应性皮炎动物模型,以未经处理的模型小鼠为对照组,并分别用SEB、SEB+地塞米松、地塞米松处理该动物模型。通过HE染色观察组织病理变化,计数真皮内炎性细胞数量来反映不同处理组皮炎的变化情况,采用q RT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体β(GRβ)的m RNA和蛋白表达。结果在利用DNCB构建的Balb/c小鼠特应性皮炎动物模型中,真皮内炎性细胞数量明显增加;与未经处理的皮炎组相比,SEB处理后炎性细胞显著增加,地塞米松处理后炎性细胞显著减少,但SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;此外,在SEB处理的皮炎组以及SEB+地塞米松处理的皮炎组,GRβm RNA和蛋白的表达均显著上调,但SEB单独处理的皮炎组GRβm RNA和蛋白的表达上调情况更为显著。结论细菌超抗原(SEB)在皮炎局部诱导了GRβ的表达升高,在外用糖皮质激素快速减敏过程中起到了重要的作用。     

补肾定喘汤对哮喘大鼠糖皮质激素受体的影响

采用放射性配基竞争结合法，测定连续激光哮喘大鼠服用补肾定喘哮汤后第１、３、７天肺组织糖皮质激素受体（ＧＣＲ）。观察结果发现：激发后第１天中药组大鼠肺组织ＧＣＲ较正常对照组显著升高（Ｐ〈０．０１）；第３天中药组大鼠肺组织ＧＣＲ仍维持较高水平，与模型组比差异显著（Ｐ〈０．０１）；第７天中药组及中药加西药组大鼠肺组织ＧＣＲ水平较模型组均有显著差异（Ｐ〈０．０１），提示中药补肾定喘汤大鼠肺组织ＧＣＲ水平具     

山莨菪碱对中性粒细胞糖皮质激素受体的影响

以~3H地塞米松(Dex)为特异性配基,以一点分析法测得大白鼠腹腔中性粒细胞(PMNs)的糖皮质激素受体(GCR)位点数为5270±216/个PMN(n=18,X±SE下同);体外实验,PMNs直接与山莨菪碱(654-23×10~(-5)M)温育,对GCR无明显影响,测得位点数为4896±360/个PMNs(n=20,P>0.4);体内实验表明,给大鼠肌肉注射654-2(10mg/kg)每日两次共二天,则GCR位点数降至2740±101/个PMNs(n=18,P<0.001)。此时还测得血浆皮质酮含量明显增高(P<0.01)。提示654-2对GCR的影响可能与增加皮质激素所致的“降调节”有关。     

糖皮质激素对糖皮质激素受体α和β mRNA表达的调节作用

目的：研究糖皮质激素对人类糖皮质激素受体α和β mRNA表达的调节作用。方法：采用定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测受体mRNA。结果：人骨肉瘤细胞系、卵巢癌细胞系及外周血白细胞中除有糖皮质激素受体α mRNA表达外，还有糖皮质激素受体β mRNA的表达；糖皮质激素对糖皮质受体α和β mRNA的表达均具有明显的降调作用，且具有剂量依赖性和时间依赖性特点。结论：糖皮质激素受体β在人类多种组织细胞中均有表达，而且其表达受糖皮质激素的调节。     

低氧对人肺泡上皮细胞糖皮质激素受体表达及对地塞米松抗炎效应的影响

目的 研究低氧条件下人肺泡上皮细胞糖皮质激素受体(GR)的两种亚型GRα和GRβ水平的表达及在地塞米松抗炎效应的变化.方法 以人A549肺泡上皮细胞系为模型,细胞分别在常氧(37℃,950 mL/L空气、50 mL/L CO2)和低氧(37℃,950 mL/L N2、250 mL/L CO2)条件下培养24、48、72 h,Western blot法检测各组细胞GRα和GRβ的蛋白表达水平；脂多糖(LPS 10μg/mL)和不同浓度的地塞米松(DEX 10-8 mol/L～ 10-6 mol/L)一起加入A549细胞培养液中,分别常氧和低氧培养48 h,放射免疫法检测细胞培养上清中的IL-8水平.结果 24h低氧组的GRα水平与24h常氧组相比无明显差别(P＞0.05),48 h和72 h低氧组的GRα水平与相应时间点的常氧组相比明显下降(P＜0.05,P＜0.01),24、48、72 h低氧组GRα水平呈进行性下降(P＜0.05),而各相应时间点的常氧组GRα水平无明显差别(P＞0.05)；低氧组和常氧组各时间点GRβ的表达无明显差别.在10-7 mol/L和10-6 mol/L DEX浓度时,低氧培养48 h的A549细胞上清的IL-8均高于相应的常氧组的IL-8水平(P＜0.05).结论 低氧可以时间依赖性的导致人肺泡上皮细胞A549 GRα表达水平下降并减弱地塞米松的抗炎效应.     

前列腺癌中发现的4种雄激素受体突变体在PC3细胞中转录激活功能的研究

目的 :雄激素受体 (AR)基因突变在前列腺癌 (PC)的发生、发展中具有重要作用。本实验室曾应用PCR -SSCP法 ,从 5 0余例PC患者肿瘤组织中筛选出 4种AR基因点突变 (G14 2V、D2 2 1H、E872Q、M886I) ,它们均位于AR重要的功能区中。本实验拟观察在雄激素的激动剂二氢睾酮 (DHT)以及其他甾体激素 (雌二醇及孕激素 )作用下 ,这 4种突变体在前列腺癌细胞系PC3中转录激活功能的变化 ,为阐明AR基因突变对AR功能的影响及其在前列腺癌发生、发展和治疗中的作用提供理论依据。方法 :将野生型AR(wtAR)或AR突变体的表达载体与报告基因 (p…     

小柴胡汤对糖皮质激素受体及其mRNA的调节作用

目的和方法:给予健康雄性小鼠(Balb/C)小柴胡汤(TSS),糖皮质激素(GC),应用受体放射配体结合分析法测定小鼠脾细胞糖皮质激素受体(GR)位点数,同时用定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法测定脾细胞内GRmRNA水平,以期从分子受体水平和基因水平探讨TSS对GR及GRmRNA的调节作用。结果和结论:(1)应用TSS后GR位点数及GRmRNA水平明显少于正常对照组,说明TSS对GR的降调是通过调节GRmRNA水平实现的;(2)TSS与GC合用时GR位点数及GRmRNA水平明显高于单独应用GC组,说明TSS可明显减弱GC对GR的降调作用。     

休克时糖皮质激素受体的变化及大剂量糖皮质激素抗休克治疗的受体机制

休克时糖皮质激素受体的变化及大剂量糖皮质激素抗休克治疗的受体机制△徐仁宝（第二军医大学病理生理教研室，上海２００４３３）ＡｂｓｔｒａｃｔＷｉｔｈｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄｂｉｎｄｉｎｇａｓａｙａｎｄＳｃａｔｃｈａｒｄａｎａｌｙｓｉｓｉｔｈａｓｂｅｅｎｄｅ...     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠肝脏糖皮质激素受体表达的影响

目的： 观察银杏叶提取物（EGB）对2型糖尿病大鼠肝脏糖皮质激素受体(GR)表达的影响,并探讨其机制。方法：雄性SD大鼠30只随机均分成3组：正常对照组、糖尿病对照组、EGB干预组。后两组采用高脂饮食4周,按30 mg/kg 腹腔注射链脲佐菌素（STZ） 诱导2 型糖尿病大鼠模型, EGB干预组给予50 mg·kg-1·d-1EGB连续灌胃12周。治疗结束取血生化检测血糖、血脂水平,放免法检测血胰岛素水平,HE染色光镜下观察肝脏组织的形态学改变,以RT-PCR法检测肝组织GR mRNA的表达水平,免疫组化法检测肝组织GR蛋白表达水平。结果：EGB可降低糖尿病大鼠血糖、血脂、血胰岛素水平,减轻肝细胞脂肪变性、坏死、炎细胞浸润,使肝组织GR mRNA的表达与蛋白表达明显减低。结论：EGB具有抑制2型糖尿病大鼠肝脏GR基因mRNA表达与蛋白表达的作用,这可能是其降低2型糖尿病大鼠血糖、血脂水平,改善肝内脂肪沉积的重要机制之一。     

RU486对早孕猕猴腺垂体-肾上腺皮质糖皮质激素受体表达的影响

目的探讨大剂量的RU486对早孕猕猴腺垂体-肾上腺皮质系统(PAS)的糖皮质激素受体(GR)的表达变化。方法15只早孕猕猴随机分为空白对照组、赋形剂组和RU486组。空白对照组不予任何处理,赋形剂组和RU486组每天分别鼻饲0.5%CMC-Na(1ml/mg)和RU486(15mg/kg),3d后处死动物。应用单克隆抗体链菌素亲生物蛋白过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观察腺垂体-肾上腺皮质GR的表达情况,并用电子计算机图像分析技术进行处理。结果RU486组猕猴妊娠终止,该组腺垂体、肾上腺皮质GR的表达减少,积分光密度值分别为32.9±6.6、64.9±4.5,与空白对照组(61.2±3.9、95.9±20.9)的差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组和赋形剂组妊娠没有终止,赋性剂组腺垂体、肾上腺皮质GR积分光密度值分别为63.8±4.8、91.3±14.7。与空白对照组GR表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论RU486可使早孕猕猴腺垂体-肾上腺皮质的GR表达下降,提示RU486的抗糖皮质激素作用可能是其终止妊娠的机制之一。     

糖皮质激素对大鼠脾淋巴细胞表达IL—2受体的调节

采用荧光标记的抗ＣＤ２５单抗，观察了地塞米松对大鼠脾淋巴细胞表达低亲和力ＩＬ－２受体（ＣＤ２５抗原）的影响，结果显示，在ＣｏｎＡ激活的淋巴细胞培养体系中加入地塞米松后，低亲和力ＩＬ－２受体的表达明显受到抑制，表达ＣＤ２５抗原的阳性细胞率亦明显减少，采用＾１２５Ｉ－ｒＩＬ－２结合分析实验，进一步研究了地塞米松对高亲和力ＩＬ－２受体的影响，结果证实，１０ｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松使高亲和力ＩＬ－２受体的数量     

原发性癫痫患者糖皮质激素和糖皮质激素受体改变的研究

用放射配体结合分析，测定了４１例（男１６例，女２５例）原发性癫痫患者外周血白细胞糖皮质激素受体（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＲ），同时用放射免疫分析测定了患者血浆皮质醇（Ｆ），即糖皮质激素（ｇｌｕｃｏｃｒｔｉｃｏｉｄＧＣ），并与正常对照组比较。结果表明，无论年龄、性别及服用何种抗痫药物，原发性癫痫患者的ＧＣ都明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＧＲ都明显低于对照组，（Ｐ〈０．０     

利用载体介导的RNA干扰技术抑制小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7内糖皮质激素受体表达及功能的研究

目的 :RNA干扰技术是最近几年发展起来的一种用同源双链RNA(siRNA)高效、特异地阻断目的基因表达的新方法。本研究旨在利用最近发展的载体介导的RNA干扰技术建立糖皮质激素受体 (GR)基因阻断的RAW2 6 4 7细胞模型 ,为进一步研究糖皮质激素 (GC)和糖皮质激素受体的功能及作用机制提供了新的手段。方法 :用RT -PCR检测GRmRNA ;用Westernblot检测GR蛋白表达 ;Griess法检测细胞上清中一氧化氮 (NO)生成量 ;利用GR报告基因GRE -tk -luc及双荧光素酶活性检测试剂盒研究细胞内GR转录激活功能的变化。结果 :我们设计了两段针对GR…     

环孢霉A对人单个核白细胞糖皮质激素受体和雌激素受体的影响及意义

用放射配体结合分析，体外实验观察了环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）、环磷酰胺（ＣＴＸ）及甲基强的松龙对人单个核白细胞（ＭＮＬ）的糖内皮质激素受体（ＧＲ）和雌激素受体（ＥＲ）结合容量的影响，以阐明ＣｓＡ免疫抑制作用机制，并产联合用药提供理论依据。当ＣｓＡ浓度为１００ｎｇ／ｍｌ时，ＧＲ和ＥＲ的结合容量无改变；５００和１０００ｎｇ／ｍｌ时，ＧＲ和ＥＲ结合容量无降低５０％左右。ＣＴＸ和甲强龙均使ＧＲ和ＥＲ结合容量降低     

糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α转录激活功能的影响

目的:通过研究糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α转录激活功能的影响,探讨糖皮质激素受体β存在的生物学意义。方法:将糖皮质激素受体α的报告基因CAT和糖皮质激素受体β共转染入人骨肉瘤细胞系HOS-8603,激素处理后,用ELISA方法检测CAT活性;用定量RT-PCR方法检测糖皮质激素受体β的稳定过度表达对糖皮质激素诱导p21mRNA表达的影响。结果:糖皮质激素受体β抑制报告基因CAT的表达,随着糖皮质激素受体β转染量的增加,抑制效果越明显;糖皮质激素受体β同样可以抑制糖皮质激素对糖皮质激素受体α内源性靶基因p21mRNA的诱导。结论:糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α的转录激活功能有抑制作用,糖皮质激素受体β可能是糖皮质激素受体α的内源性抑制因子。