GADA positivity at onset of type 1 diabetes is a risk factor for the development of autoimmune thyroiditis

Kordonouri O, Charpentier N, Hartmann R. GADA positivity at onset of type 1 diabetes is a risk factor for the development of autoimmune thyroiditis. Aim: To evaluate whether the presence of diabetes‐specific autoantibodies may predict the development of autoimmune thyroiditis (AIT) in children with type 1 diabetes (T1D). Methods: Glutamic acid decarboxylase antibodies (GADA), tyrosine phosphatase IA2 antibodies (IA2A), and insulin autoantibodies (IAA) were determined at T1D onset in 341 children and adolescents. Thyroid antibodies (anti‐TG, anti‐TPO), thyroid stimulating hormone (TSH), T₃ and T₄ were measured in 335 patients at T1D onset and thereafter annually with a follow‐up time of 1–15 yr. In case of thyroid antibody positivity and/or TSH elevation, thyroid gland sonography was performed. Treatment with l ‐thyroxine was started if persistent elevation of TSH and/or thyroid volume was present. Results: The majority of patients (92.1%) had at least one T1D antibody (71.6% GADA, 73.0% IA2A, and 44.9% IAA). GADA positive patients were older than those without GADA (p < 0.001). Thyroid autoimmunity was found in 15 of 335 patients (4.5%) at T1D onset with female preponderance (p = 0.013). At the end of follow‐up, 70 patients (20.9%) had developed thyroid autoantibodies [cumulative incidence (CI) 0.36 ± 0.06 at 10 yr of T1D]. In 30 patients (9.0%), AIT was diagnosed up to 9.4 yr after T1D onset (CI 0.24 ± 0.06 at 10 yr). AIT incidence was not influenced by IAA or IA2A positivity. In multivariate analysis, GADA positive patients were estimated to have a 3.5‐fold increased risk of AIT (CI 0.31 ± 0.11 at 10 yr) compared to those without GADA (p = 0.024). Conclusion: Based on the present results, a special focus should be given to GADA positive patients concerning screening for AIT as they are at increased risk to develop autoimmune thyroiditis.     

喘息性疾病婴幼儿外周血单个核细胞淋巴细胞功能相关抗原-1和巨噬细胞分化抗原-1的表达

目的探讨婴幼儿喘息性疾病患儿外周血单个核细胞(PBMC)表面淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)的表达及相关性,探讨喘息性疾病的免疫学发病机制,鉴别儿童喘息临床表型的炎性指标。方法随机选取在本院住院的3岁以下喘息患儿29例。男17例,女12例。从同期在本院住院的呼吸道感染但不伴有喘息的患儿中随机抽取同年龄患儿26例作为非喘息组,男15例,女11例。从同期在本院儿保门诊体检的健康儿童及外科非感染性疾病患儿中随机抽取同年龄患儿25例作为对照组。男15例,女10例。3组婴幼儿均在治疗前抽取静脉血2 mL,分离PBMC,采用流式细胞术检测PBMC中LFA-1、Mac-1的表达情况。结果喘息组和非喘息组LFA-1的表达[(47.46±13.94)%和(35.88±12.64)%]明显高于对照组[(26.62±10.41)%],喘息组和非喘息组Mac-1的表达[(7.43±3.42)%和(4.53±3.04)%]明显高于对照组[(2.92±1.80)%]。其中喘息组患儿LFA-1和Mac-1的表达高于非喘息组,差异均有统计学意义(Pa<0.01);相关性分析显示LFA-1和Mac-1在喘息组呈正相关(r=0.403,P<0.05)。结论 LFA-1、Mac-1在喘息性疾病发病机制中具有重要作用,检测LFA-1、Mac-1的表达可作为鉴别婴幼儿喘息临床表型的炎性指标。     

鞘氨醇激酶基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中的表达水平

目的 探讨鞘氨醇激酶基因(SPHK）在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化。方法采用细胞培养和RT-PCR技术检测细胞分化不同阶段脂肪细胞中SPHK基因表达水平。结果1．SPHK基因在3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化初期表达呈明显上调趋势；2．随着脂肪前体细胞分化成熟，该基因表达水平明显低于诱导分化初期的基因表达水平。结论 SPHK基因可能参与脂肪细胞分化的调控过程，与肥胖发生有一定联系。     

高体积分数氧暴露下A549细胞中小窝蛋白-1与转化生长因子-β1的表达及其相互关系

目的 观察高体积分数氧(高氧)暴露后肺腺癌A549细胞中小窝蛋白-1(CAV-1)和转化生长因子(TGF)-β1的动态表达,探讨CAV-1和TGF-β1表达变化在高氧肺损伤中的作用.方法 复苏液氮罐中冻存的A549细胞系,体外传代培养,待其在37℃、50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中生长至接近融合时,随机分为对照组和高氧组.每组18瓶A549细胞.高氧组换液后通入3 L/min的950 mL/L氧气和50 mL/LCO2高纯混合气,10 min后密闭培养.对照组仍置于50 mL/L CO2培养箱中.2组分别于12 h、24 h、48 h后在倒置相差显微镜下观察A549细胞形态并照相.采用免疫荧光双染检测CAV-1、TGF-β1表达.结果 对照组CAV-1高表达(44.25±3.23),TGF-β1低表达(10.18±2.74);高氧组随通氧时间延长,CVA-1表达逐渐减弱(12 h:35.25±1.88,24 h:20.75±1.68,48 h:9.86±2.80),TGF-β1表达逐渐增强(12 h:17.32±1.50,24 h:26.51±1.82,48 h:41.94 ±4.47).对照组及高氧组12 h、24h、48 h CAV-1的阳性表达与TGF-β1的阳性表达呈负相关(r=-0.91、-0.62,-0.53、-0.88,P均＜0.05).结论 CAV-1表达降低通过减弱对TGF-β1受体的抑制作用,激活TGF-β1信号通路,导致高氧肺损伤.     

GM1和NGF对神经干细胞体外增殖的影响

目的：探讨单唾液酸神经节苷脂（GM1）、鼠神经生长因子（NGF）对神经干细胞（NSCs）体外增殖的影响。方法：①体外分离培养NSCs;②将含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的NSCs完全培养基及不含bFGF、EGF的DMEM/F12培养基作为两种不同的培养介质,分别加入不同浓度的GM1和NGF,进行NSCs体外增殖研究;③以MTT法和细胞球计数观察NSCs增殖情况;以免疫组化法观察分化条件下药物对NSCs增殖的影响。结果：①在含有bFGF、EGF的NSCs完全培养基中,较高浓度GM1条件下,NSCs增殖明显（P<0.05）;②含血清的分化培养液中,随GM1浓度增加,NSCs增殖明显;随NGF浓度增加,神经元及胶质细胞比例增高。结论：高浓度GM1能促进NSCs增殖, NGF能促进NSCs分化。［中国当代儿科杂志,2009,11（10）：841-845］     

TRAF1在儿童急性淋巴细胞白血病化疗中的诱导表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗不同阶段中的表达情况及临床意义。方法SABC免疫组化技术分别检测40例ALL患儿化疗前、后骨髓细胞中TRAF1蛋白,RT-PCR技术检测儿童ALL Molt-4细胞于化疗药物作用前后TRAF1 mRNA表达的变化。结果40例ALL患儿化疗前有3例TRAF1蛋白阳性表达(7.5%),经化疗诱导缓解后,TRAF1蛋白阳性表达22例(55%),两者差异具有统计学意义(P<0.01)。临床随访40例患儿中,并发脑膜白血病、耐药或复发患儿共10例,TRAF1阳性表达率为80%(8/10例),表达强度为 4例, 4例,与其余30例患儿相比差异具有统计学意义(P<0.05),TRAF1蛋白诱导表达阳性率及强度与化疗效应具有相关性。Molt-4细胞经化疗药物作用后,TRAF1 mRNA表达上调。结论化疗可以诱导ALL细胞TRAF1的表达,可能为以后耐药复发的内在因素。     

Chemotherapy-induced expression of αB-Crystallin in neuroblastoma

Since αB-crystallin is known to be expressed in glial tissues of human brain and neuroectodermal tumors, the αB-crystallin content of neuroblastomas, may be related to the degree of glial or neuronal differentiation. The αB-crystallin content of 73 neuroblastomas, was determined by enzyme immunoassay. The concentration of αB-crystallin was examined in light of neuroblastoma prognostic factors. Neuroblastomas from patients who received chemotherapy (n = 23) contained higher and concentrations of αB-crystallin than those from patients who did not receive chemotherapy (n = 50) (P > 0.05). There was a statistically significant difference in αB-crystallin concentrations in advanced stage patients who received preoperative chemotherapy (P < 0.01). Immunohistochemistry demonstrated αB-crystallin expression in the nerve-like fibers and few ganglion-like cells. Staining was not apparent in the less differentiated cells in the tumor cell nest. αB-crystallin may play a role in the response to cellular stress in neuroblastoma. Med. Pediatr. Oncol. 29:11–15, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

HIF-1α特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

目的：己知缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在缺氧状态下可通过调节内皮素-1（ET-1）的升高而参与肺血管内皮细胞损伤及肺动脉高压,最终导致肺出血。RNA干扰(RNAi)是双链RNA介导的序列特异性转录后同源靶基因沉默效应,目前RNAi技术已成为一种研究基因功能的有力工具,故拟通过构建人HIF-1α基因的特异性小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,观测该载体在缺氧状态下对HIF-1α基因的干扰作用及对ET-1的抑制作用。方法：:选择6个（a～f）可能的人HIF-1α siRNA干扰位点,设计合成相应的特异性互补寡聚核苷酸链（A～F）,采用基因克隆技术,将合成的（A～F）链序列定向插入真核表达载体中,构建成重组质粒HIF-1α siRNA真核表达载体（A′～F′）,通过脂质体法转染至体外人脐静脉内皮细胞（HUVECs）48 h,再以CoCl2（100μM）模拟缺氧刺激3 h后,观测siRNA对HIF-1α mRNA和HIF-1 α蛋白表达的抑制效应及ET-1水平。结果：①成功构建了分别针对6个HIF-1 α siRNA干扰位点（a～f）的重组质粒HIF-1α siRNA真核表达载体（A′～F′）;②该6组真核表达载体转染HUVECs并经CoCl2模拟缺氧刺激后,与未转染组比较,结果显示B′ 及D′ 组明显抑制HIF-1α mRNA及HIF-1α蛋白的表达,并部分抑制ET-1表达,而其余4组与未转染组比较并无差异。结论：针对b及d干扰位点的B′及D′特异性siRNA真核表达载体,能明显干扰HIF-1α基因的表达,进而抑制ET-1的释放。该实验为下一步用B′、D′特异性siRNA真核表达载体在动物体内研究HIF-1α与新生儿缺氧性肺出血关系奠定基础。     

血管内皮生长因子对人急性白血病细胞凋亡影响及相关基因表达的临床与实验研究

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人急性白血病细胞株HL-60凋亡及相关基因Bcl-2和Mcl-1表达的影响,并从临床水平验证VEGF对人急性白血病细胞凋亡的影响。方法：采用单细胞凝胶电泳、流式细胞术检测VEGF处理后的HL-60细胞凋亡率;采用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测VEGF处理的HL-60细胞的Bcl-2和Mcl-1的表达水平。采用免疫细胞化学方法分别检测8例初发和复发、14例完全缓解的急性白血病患儿及5例正常儿童骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达。结果：VEGF可以明显抑制人急性白血病细胞株HL-60的凋亡,并且可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。VEGF孵育HL-60细胞株18h后,其细胞内的Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达水平明显增加。初发和复发组白血病患儿骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达水平高于完全缓解组。结论：VEGF可能通过同时提高Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达,抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡,可能是白血病的发病机制之一。VEGF,Bcl-2和Mcl-1表达的增加可能对人急性白血病细胞的发生发展及预后产生影响,有可能成为临床白血病预后的参考指标之一。     

胰岛素样生长因子1对新生儿脐带血单个核细胞产生细胞因子？…

目的 研究胰岛素样生长因子１（ＩＣＦ－１）对新生儿免疫功能的影响。方法 利用无血清、无激素培养系统,体外培养１０例健康足月顺产儿脐带血单个核细胞（ＣＢＭＣ）。１０例健康成人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）为正常对照,观察ＩＧＦ－１对ＣＢＭＣ细胞因子产生的影响。结果 与正常组比较,植物血凝素（ＰＨＡ）诱导的ＣＢＭＣＩＬ－２、ＩＬ－４、干扰素γ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－１０和ＩＬ－１２水平显著低下（Ｐ值均〈０     

血管内皮生长因子及胰岛素样生长因子-1在早产儿视网膜病变中的作用

早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)多发生于早产儿尤其是极低出生体重儿,是导致儿童视力下降甚至失明的重要原因.视网膜新生血管形成是其主要的病理特点,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)通过控制血管内皮细胞增殖,在新生血管形成中起到了关键作用.近年来临床研究表明,玻璃体内注射VEGF抑制剂及生后早期提高早产儿血清IGF-1水平是防治ROP的有效方法.该文以国内外相关研究为背景,综述VEGF及IGF-1在早产儿视网膜病变发病过程中的作用,以及针对其作用机制而采取的防治方法.     

缺氧缺血性脑病新生儿血清 TNF-α和 sICAM-1变化及其临床意义

目的观察新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的水平变化,探讨其在HIE中的作用。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测58例HIE患儿血清TNF-α和sICAM-1的水平,其中中重度28例,轻度30例,并与20例正常新生儿对照,采用方差分析进行统计学分析。结果中重度及轻度HIE患儿血清TNF-α和sICAM-1水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);中重度HIE患儿与轻度HIE组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α和sICAM-1可能通过缺氧缺血后的免疫功能改变、炎症反应参与HIE患儿的病理过程,血清TNF-α和sICAM-1水平可作为HIE严重程度和预后判断的早期分子生物学指标。