游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1的表达和酪氨酸磷酸化的影响

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法：分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞。软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）与骨骼肌细胞共同孵育６、１２、２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化程度。结果：（１）软脂酸或油酸作用后骨骼肌细胞的胰岛素受体蛋白质表达量无改变。（２）骨骼肌细胞与软脂酸或油酸共同孵育１２和２４ｈ后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低。（３）骨骼肌细胞在软脂酸或油酸作用后各个时间点的ＩＲＳ１蛋白质量均明显降低。（４）骨骼肌细胞经软脂酸或油酸作用后ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论：游离脂肪酸可能通过抑制骨骼肌细胞的ＩＲＳ１蛋白质表达和胰岛素受体的酪氨酸磷酸化以及ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导，引起骨骼肌胰岛素抵抗     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1？…

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法；分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞，软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）与骨骼肌细胞共同孵育６，１２，２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受本和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ－１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体０６     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PTP1B蛋白表达的影响

目的研究游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响，以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞，分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６～２４小时，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ＜００５），以２４小时为著；ＳＨＰＴＰ２蛋白量无改变（Ｐ＞００５）。结论游离脂肪酸促进大鼠肝脏和骨骼肌细胞ＰＴＰ１Ｂ表达，提示游离脂肪酸可能通过增高ＰＴＰ１Ｂ蛋白量抑制胰岛素信号传导诱发胰岛素抵抗     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的　探讨游离脂肪酸是否会对大鼠骨骼肌细胞L eptin受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响 ,进而导致胰岛素抵抗及葡萄糖代谢的异常 .方法　分离、培养新生 Sprague- Dawley大鼠骨骼肌细胞 ,分别与软脂酸(0 .2 5 m mol· L- 1 )或油酸 (0 .12 5 mmol· L- 1 )孵育 12 ,2 4和36 h,提取蛋白后用 Western印迹法检测 L eptin受体的蛋白水平 .用 RT- PCR检测胰岛细胞内 L eptin受体 RNA含量的变化 .应用免疫沉淀法检测 L eptin受体的酪氨酸磷酸化程度 .结果　软脂酸和油酸孵育后大鼠骨骼肌细胞 L eptin受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后同对照组相比无显著变化 ,在孵育 36 h后同对照组相比显著下调 [软脂酸 (0 .36±0 .0 3)和油酸 (0 .35± 0 .0 4) vs对照 (0 . 39± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ];L eptin受体的 RNA水平在孵育 12 h后同对照组相比无显著变化 ,孵育 2 4和 36 h 后显著下调 [2 4h:软脂酸(0 .2 6± 0 .0 3)和油酸 (0 .2 6± 0 .0 4) vs对照 (0 .31± 0 .0 3) ,P<0 .0 5 ;36 h:软脂酸 (0 .2 5± 0 .0 4)和油酸 (0 .2 3± 0 .0 3) vs对照 (0 .2 9± 0 .0 1) ,P<0 .0 5 ];L eptin受体的酪氨酸磷酸化程度在在孵育 12 h后同对照组相比无显著变化 ,孵育 2 4和36 h后显著下调 [2 4h:软脂酸     

游离脂肪酸对基础状态β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原mRNA表 …

目的：研究游离脂肪酸（油酸和软脂酸）对基础状态大鼠β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：体外分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠β细胞，与软脂酸或油酸共同孵育２４ｈ后，测定胰岛素浓度和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测前胰岛素原ｍＲＮＡ表达。结果：（１）软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）组β细胞胰岛素分泌量明显高于对照组。（２）经软脂酸和油酸共同培养２４ｈ     

葡萄糖转运蛋白4在宫内发育迟缓大鼠骨骼肌中的表达和转位

目的研究宫内发育迟缓(IUGR)大鼠骨骼肌胰岛素刺激下葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达和转位的变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法采用孕期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测18月龄IUGR子鼠骨骼肌胰岛素刺激下的2-D-3H葡萄糖的摄取,同时采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot方法检测胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的m RNA和蛋白表达;用Western blot方法分别检测胰岛素刺激前后骨骼肌总/膜GLUT4的蛋白表达变化。结果 1与对照组相比,18月龄IUGR组大鼠骨骼肌胰岛素刺激后葡萄糖摄取率显著降低(P=0.035);2IR和IRS-1 m RNA和蛋白表达在两组大鼠骨骼肌中差异无统计学意义(P>0.05),但GLUT4 m RNA表达在IUGR组大鼠骨骼肌中显著下降(P=0.031);3基础状态时,两组大鼠骨骼肌GLUT4总蛋白表达无明显差异(P=0.967);IUGR组GLUT4膜蛋白表达略降低,但未及统计学意义(P=0.072);经胰岛素刺激后,两组大鼠骨骼肌与各自基础状态相比,GLUT4总蛋白变化不明显,GLUT4膜蛋白表达均较各自的基础状态显著增加,但IUGR大鼠骨骼肌GLUT4膜蛋白的上升程度显著低于对照组(P=0.001)。结论 IUGR老龄大鼠骨骼肌中GLUT4 m RNA表达降低以及胰岛素刺激下的GLUT4转位下降,可能降低对胰岛素的反应性,从而减少葡萄糖摄取,促进胰岛素抵抗发生。     

脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响

目的：观察脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响。方法：缺氧（5％CO2、85％N2、10％H2或200μmol／L CoCl2）处理小鼠3T3-L1脂肪细胞,制备条件培养基孵育小鼠骨骼肌细胞。通过对胰岛素信号通路中关键蛋白的磷酸化水平和葡萄糖转运子4（GLUT4）转位得以检测骨骼肌胰岛素作用的改变。结果：缺氧处理的3T3-L1脂肪细胞条件培养基抑制骨骼肌胰岛素信号通路,其中胰岛素受体底物10RS1Set307）磷酸化水平呈显著增高,相反蛋白激酶B（AktSer473）磷酸化水平呈显著下降,最终显著抑制了胰岛素刺激的GLUT4myc转位（p〈0．05）。结论：抑制胰岛素刺激的GLUT4myc转位,其机制与IRSt的Ser307的磷酸化水平升高和Akt的Ser473的磷酸化水平降低有关。     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PBP1B蛋白表达的影响

目的 研究游离脂肪酸大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响,以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法 分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞,分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６￣２４小时,应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨ－ＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果 肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ〈０．０５）,以２４小时     

游离脂肪酸对基础状态β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原mRNA表达的影响

目的：研究游离脂肪酸（油酸和软脂酸）对基础状态大鼠β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：体外分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠β细胞，与软脂酸或油酸共同孵育２４ｈ后，测定胰岛素浓度和３ＨＴｄＲ掺入量，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测前胰岛素原ｍＲＮＡ表达。结果：（１）软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）组β细胞胰岛素分泌量明显高于对照组。（２）经软脂酸和油酸共同培养２４ｈ后，β细胞３ＨＴｄＲ掺入量增高。（３）软脂酸和油酸试验组β细胞前胰岛素原ｍＲＮＡ表达均高于未经游离脂肪酸培养的对照组。结论：游离脂肪酸可能通过促进基础状态β细胞前胰岛素原ｍＲＮＡ表达和细胞增生，造成基础状态β细胞分泌胰岛素过多，从而参与了高胰岛素血症的发生。     

游离脂肪酸对大鼠肝细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的 :探讨游离脂肪酸 (FFA)是否会对大鼠肝细胞瘦素 (leptin)受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响。　方法 :分离、培养新生Sprague Dawley大鼠肝细胞 ,分别与软脂酸 (0 .2 5mmol/L)或油酸 (0 .12 5mmol/L)孵育 12、2 4和 36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测瘦素受体的蛋白水平。用RT PCR检测肝细胞内瘦素受体RNA含量的变化。应用免疫沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。　结果 :软脂酸和油酸孵育后大鼠肝细胞瘦素受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后无显著变化 ,在孵育 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的RNA水平在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 )。　结论 :FFA可对大鼠肝细胞瘦素受体的基因、蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这可能是FFA导致胰岛素抵抗的机制之一。     

运动增加糖尿病大鼠葡萄糖运载体蛋白含量及基因表达的研究

研究运动对链脲佐菌素所致的糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体,葡萄糖运载体４（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ,ＧＬＵＴ４）基因表达和蛋白含量的作用,探讨运动训练改善糖尿病大鼠糖代谢的可能作用机理。方法实验大鼠分３组：糖尿病非运动组,糖尿病运动组、正常对照组。糖尿病运动组大鼠进行６周游泳运动。用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测大鼠骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４蛋白含量,用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内ＧＬＵＴｍＲ     

饱和脂肪酸对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响及其机制研究

目的：探讨饱和脂肪酸是否造成骨骼肌细胞胰岛素抵抗,并检测核糖体s6蛋白激酶（S6K）是否参与此机制。方法：将棕榈酸偶联到无脂肪酸的牛血清白蛋白（BSA）上,制备成浓度为5mmol／L的棕榈酸储存液,备用。棕榈酸组用0．5mmol／L的棕榈酸孵育16h;溶剂组用含相同浓度的无脂肪酸的牛血清白蛋白（BSA）孵育16h;对照组没有任何处理。用偶联抗体的吸光度分析法测定细胞膜上GLUT4myc的含量,免疫印迹检测胰岛素信号分子胰岛素受体底物（IRS1）、蛋白激酶B（Akt）和S6K的磷酸化水平。结果：与对照组和溶剂组相比,棕榈酸组胰岛素刺激的GLUT4myc转位降低（P〈0．05）;Akt的磷酸化水平降低,S6K的磷酸化水平没有变化,IRS1 S636／639的磷酸化水平也没有改变。结论：棕榈酸可导致骨骼肌细胞胰岛素抵抗,其机制可能不涉及S6K。     

Ghrelin改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的观察酰化ghrelin和非酰化ghrelin分别对胰岛素抵抗（insulinresistance,IR）骨骼肌细胞的胰岛素受体后信号通路关键因子P13Kp85α、Akt／PKB及GLUT4的影响。方法大鼠L6成肌细胞经棕榈酸诱导分化,建立IR模型成功后入选实验,分为酰化ghrelin组（AG组）、非酰化ghrelin组（UAG组）、P13K抑制剂（LY）＋酰化ghrelin组（LY＋AG组）、LY＋非酰化ghrelin组（LY＋UAG组）和对照组（IR—CO组）。各组经处理因素干预24h后,激光共聚焦和流式细胞术检测各组骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对荧光葡萄糖的摄取能力,免疫印迹法检测骨骼肌组织的磷酸化／总P13Kp85α、磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌组织P13Kp85α、Akt、GLUT4mRNA的表达。结果L6成肌细胞诱导分化及IR模型建立成功;AG组和UAG组的细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取分别是IR—CO组的1．25和1．28倍,磷酸形总P13Kp85α相对蛋白表达量分别是IR-CO组的1．78和1．89倍,磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达是IR—CO组的1．84和1．80倍,细胞P13Kp85α、Akt／PKB、GLUT4的mRNA表达均较对照组显著升高,LY＋AG组和LY＋UAG组细胞的上述指标较单独使用酰化ghrelin或非酰化ghrelin作用时显著下降。结论酰化ghrelin和非酰化ghrelin均能改善骨骼肌细胞的IR,增加骨骼肌细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取;能够上调骨骼肌细胞的磷酸化P13Kp85α、磷酸化Akt／PKB、细胞膜GLUT4的相对蛋白表达和3者的mRNA表达,PI3K抑制剂LY294002能够抑制酰化和非酰化ghrelin的上述改善作用。     

PI3K/Akt和AMPK信号通路在运动诱导的啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达中的作用

骨骼肌在葡萄糖稳态中扮演重要作用,葡萄糖转运体4(glucose transporter4,GLUT4)作为骨骼肌内最主要的葡萄糖转运蛋白,其转位和表达的变化与胰岛素抵抗的发生密切相关.本文综述了近年来关于啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达的运动激活以及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路介导运动改善骨骼肌葡萄糖摄取的研究进展,旨在为全面了解和明确运动影响啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达的机制.     

棕榈酸致大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗与JNK1活化的关系

目的建立棕榈酸(PA)诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型,初步探讨其机制与C-jun氨基末端激酶1(JNK1)活化的关系。方法不同浓度PA分别培养已分化的L6肌细胞2、4、8、12、24、36 h,用葡萄糖试剂盒分别检测各组培养液中剩余葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对骨骼肌细胞葡萄糖摄取的影响。MTT法检测棕榈酸对L6细胞活性的影响。建立L6肌细胞胰岛素抵抗模型,Western blot检测正常组(NG组)和胰岛素抵抗组(IR组)的JNK1和p-JNK1的蛋白表达水平。结果 0.4 mmol/L的PA孵育24～36 h与0.6、0.8 mmol/L的PA孵育8～24 h后细胞上清液葡萄糖浓度明显高于NG组(P<0.05),MTT结果显示0.8、1.0 mmol/L的PA作用24、36 h时对细胞的活性有影响。Western blot结果显示:NG组JNK1和p-JNK1的表达量较低,IR组JNK1和p-JNK1的表达量上升,其中p-JNK1表达量上升较JNK1明显,但与NG组比较,IR组的JNK1表达差异无统计学意义,p-JNK1、p-JNK1/JNK1表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过一定浓度和时间的PA刺激可导致大鼠L6成肌细胞胰岛素抵抗的形成,其机制可能和JNK1的活化有一定关系。     

大黄黄连泻心汤改善2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗及对骨骼肌GLUT_4蛋白表达的影响

目的:探明大黄黄连泻心汤改善2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)及作用机理。方法:昆明小鼠60只,随机分为5组:正常组(Normal,NOR),模型组(Model MOD),二甲双胍组(Metformin MET),大黄黄连泻心汤高剂量组(Dahuang Huanglian Xiexin Decotion Higher Dose,DHH)、低剂量组(Dahuang Huanglian Xiexin Decotion Low Dose,DHL),每组12只,采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)复制胰岛素抵抗T2DM小鼠模型。模型除正常组和模型组外,动物每天给予相应的药物进行治疗,连续14 d,末次给药后禁食12 h,眼球取血,检测空腹血糖(Fasting Blood-Glucose FBG)、空腹血清胰岛素(Fasting Insulin,FINS)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)的含量,胰岛素敏感指数(Insulin Senstive Index,ISI)和胰岛素抵抗指数(Homeostasis Model Assessment-Insulin Resistance,HOMA-IR),同时采用免疫印迹法(Westernblot)法检测模型骨骼肌组织细胞膜和细胞质葡萄糖转运蛋白4(Glucose Transporter 4,GLUT_4)蛋白表达。结果:与MOD组相比,DHH、DHL组的FBG、TG、LDLC、HOMA-IR均降低,HDL-C、ISI升高,组间有显著差异(P0.05);与MOD组相比,MET组的相关指标组间有特别显著差异(P0.01)。与NOR组相比,模型组骨骼肌细胞膜和胞质GLUT_4蛋白表达水平下降,组间有显著差异(P0.05);与MOD组相比,DHH、DHL和MET组的骨骼肌细胞膜和胞质GLUT_4蛋白表达水平上升,组间有显著差异(P0.05)。结论:大黄黄连泻心汤与二甲双胍作用相似,具有较好的改善胰岛素抵抗作用,其作用机制可能与促进骨骼肌GLUT_4转位和蛋白表达有关。     

糖耐康对肥胖Zucker大鼠血糖的影响及其机制

目的：观察中药复方糖耐康对肥胖Zucker大鼠糖代谢和胰岛素抵抗的影响。 方法：6周龄雄性肥胖Zucker大鼠12只,适应性喂养2周后,随机分为对照组和糖耐康组（3.24 g/kg）,所有大鼠给予高脂饲料喂养,疗程为4周。每周检测体质量和血糖;入组前和治疗14、28 d时行口服葡萄糖耐量实验（oral glucose tolerance test,OGTT）并检测空腹血清胰岛素水平;第28天时检测空腹血脂4项和血浆游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）水平;第29天时进行高胰岛素正葡萄糖钳夹实验检测平均葡萄糖输注率（glucose infusion rate,GIR）;实验结束后处死大鼠并取材,检测骨骼肌中蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/Akt）、磷酸化蛋白激酶B（phospho-Akt, p-Akt/Thr308）、葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter protein 4,GLUT4）的表达和脂肪组织GLUT4的蛋白表达。 结果：与对照组相比,治疗4周后,糖耐康组血清胰岛素水平没有变化,餐后血糖和OGTT中120 min时的血糖水平均显著下降;糖耐康组高胰岛素正葡萄糖钳夹实验后GIR显著提高;糖耐康能显著增加骨骼肌Akt、p-Akt（Thr308）的蛋白表达,减少脂肪组织GLUT4的蛋白表达;糖耐康有降低体质量、血脂（三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白）和FFA含量的趋势,但两组比较差异无统计学意义。 结论：糖耐康可能是通过增加骨骼肌Akt和p-Akt（Thr308）的表达,增强GLUT4的葡萄糖转运能力来实现降低血糖,改善外周胰岛素抵抗的功效。