子宫内膜癌中microRNA-125b对HER2基因3＇非翻译区的调控作用

目的：明确miR-125b在子宫内膜癌中对HER2基因3＇UTR的靶向调控作用。方法：分别构建野生型和突变型HER2基因3＇UTR荧光素酶载体;软件预测HER2基因3＇UTR靶向miRNAs;共转染miR-125b和荧光素酶载体于HEC-1B细胞中,双荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性。结果：通过软件预测在HER2 3＇UTR第37bp位置有一个miR-125b结合位点;与转染对照miR组和突变型载体组相比,miR-125b前体能明显降低野生型载体的荧光素酶活性。结论：miR-125b能够靶向负性调控HER2基因3＇UTR活性。     

miR-216b通过靶向调控蛋白激酶Cα基因的表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 明确miR-216b是否通过靶向调控蛋白激酶Cα(PKCα)基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.方法 构建PKCα 3'非编码区(UTR)-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统检测miR-216b对PKCα 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-216b模拟物转染鼻咽癌细胞CNE2,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测PKCα mRNA和蛋白的表达水平.将PKCαsiRNA转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察PKCα基因表达下调对CNE2细胞增殖和侵袭的影响.将PKCα重组质粒与miR-216b模拟物共转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验检测CNE2细胞的增殖能力.结果 双荧光素酶报告检测结果显示,miR-216b能特异性地与PKCα mRNA的3'UTR结合,下调荧光素酶活性,其活性约为转染对照模拟物细胞的62.4％.过表达miR-216b的CNE2细胞中PKCα mRNA和蛋白的表达水平均降低,与对照细胞比较,分别降低49.1％和55.7％.siRNA干扰PKCα表达能抑制CNE2细胞的增殖和侵袭能力,能部分模拟miR-216b的抑瘤功能.过表达PKCα能部分逆转miR-216b对CNE2细胞的增殖抑制作用.结论 miR-216b通过靶向调控PKCα基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.     

miR-200b通过靶向PROM1抑制胶质瘤细胞侵袭

目的 探讨miR-200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR-200b抑瘤的分子机制.方法 构建PROM1 3’端非翻译区(3'UTR)荧光素酶报告载体,荧光素酶报告检测miR-200b对PROM1 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-200b模拟物转染胶质瘤U87细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测PROM1 mRNA和蛋白的表达水平.将PROM1 siRNA转染U87细胞,Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响.结果 双荧光素酶报告检测显示,miR-200b能特异性地与PROM1 3'UTR结合,抑制其荧光素酶活性,其荧光素酶活性强度下降了57.0％,差异有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低,转染miR-200b组和对照组中PROM1 mRNA的表达水平分别为0.64 ±0.05和0.95 ±0.09,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA于扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力.转染PROM1siRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为(85±9)个和(155±16)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力.     

miR-1269a调控HOXD10基因抑制胆管癌细胞侵袭的作用及其机制

目的 探讨miR-1269a对HOXD10基因的调控作用及对胆管癌细胞侵袭能力的影响。方法 预测并筛选出调控HOXD10基因的miR-1269a作为研究对象;转染miR-1269a模拟物（mimic）及抑制剂（inhibitor）至胆管癌细胞系后检测 HOXD10mRNA及蛋白的表达变化,并观察miR-1269a对胆管癌细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a与HOXD10之间的靶向作用关系。结果 miR-1269a在胆管癌组织中表达显著高于癌旁组织（P=0.0023）;miR-1269a模拟物可显著降低胆管癌细胞中HOXD10 mRNA（Mz-CHA-1: P=0.0025; RBE: P=0.0038）及蛋白表达水平,且细胞的侵袭能力较对照组显著增强（Mz-CHA-1: P=0.004; RBE: P=0.004）。miR-1269a抑制剂转染则出现相反的结果（QBC939: P=0.16; HCCC9810: P=0.13）。miR-1269a明显抑制野生型HOXD10-3’UTR 的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无影响。结论 miR-1269a靶向负性调控HOXD10基因,在胆管癌细胞侵袭过程中发挥重要作用。     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

has-miR-223表达载体构建及其对靶基因ARTN的调控

目的:构建hsa-miR-223真核表达载体,并在人食管癌细胞KYSE-150中验证hsa-miR-223对靶基因artemin(ARTN)的调控作用.方法:以基因组DNA为模板,RT-PCR扩增包括hsa-miR-223前体序列在内的基因序列,并将其克隆到载体pCD?NA3.1(+)上,通过实时定量PCR方法检测hsa-miR-223在人胚肾HEK293细胞中的表达.根据生物信息学预测软件TargetScan、mirBase和PicTar对hsa-miR-223靶基因进行预测,将靶基因ARTN的3'UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测hsa-miR-223 对靶基因ARTN 的3'UTR 区的调控作用.将pCDNA3.1-miR-223 表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测对ARTN蛋白表达的影响.结果:成功构建hsa-miR-223表达载体pCDNA3.1-miR-223.实时定量PCR 验证表明pCDNA3.1-miR-223 在人胚肾HEK293 中能够明显地过表达成熟miR-223.生物信息学预测ARTN 是hsa-miR-223的靶基因,并构建融合ARTN的3'UTR区表达质粒pMIR-ARTN,在此基础上对ARTN的3'UTR"种子区"进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明hsa-miR-223能够作用于ARTN的3'UTR.Western blot法进一步证实ARTN是miR-223的靶基因.结论:hsa-miR-223作用于ARTN的3'UTR可在转录后水平上调控ARTN蛋白的表达.     

微小RNA-373靶向调控LATS2的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-373（miR-373）靶向调控大肿瘤抑制因子2（LATS2）的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测HepG2细胞及正常肝细胞LO2中miR-373的表达水平,采用Lipofectamine脂质体法将miR-373抑制剂及阴性对照转染至HepG2细胞并分为抑制剂组和对照组,采用QPCR法检测两组的miR-373水平以评价转染效果,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖及凋亡情况,Western blotting检测各组凋亡相关基因（Bax和caspase-3）及LATS2的表达情况,采用双荧光素酶报告实验验证miR-373与LATS2间的靶标关系。结果 与LO2细胞相比,HepG2细胞中miR-373的表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;转染后抑制剂组的miR-373水平低于对照组（P＜0.05）,提示抑制HepG2细胞miR 373表达成功;与对照组比较,抑制组的细胞增殖率降低,凋亡率及Bax、caspase-3和LATS2蛋白水平均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;双荧光素酶报告基因实验表明miR-373可显著抑制野生型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-373可靶向调控LATS2的表达,且抑制miR-373表达可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,为肝癌的靶向治疗提供一定参考。     

MiR-125b靶向A20/NF-κB信号通路促进胰腺癌细胞增殖机制的研究

[目的]研究miR-125b在胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响及作用机制。[方法]QRT-PCR检测miR-125b在60例胰腺癌患者癌组织和癌旁组织中,及3株胰腺癌细胞系和1株正常胰腺导管上皮细胞中的表达;miR-125b敲减慢病毒质粒及阴性对照空载体质粒vector感染SUIT-2细胞,经1.0μg/ml嘌呤霉素筛选稳定敲减miR-125b或vector的SUIT-2细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察抑制miR-125b对胰腺癌细胞体内增殖能力的影响;利用Targetscan 7.2软件及荧光素酶报告基因试验,分析miR-125b对A20基因的靶向作用;SUIT-2细胞转染miR-125b inhibit和scramble后,体外实验检测miR-125b对细胞增殖、肿瘤坏死因子α诱导的蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein 3,TNFAIP3,又称A20)和NF-κB信号通路关键蛋白IKKα/β、IκBα、p65的表达影响。[结果]MiR-125b在胰腺癌的组织中的表达显著高于癌旁组织(0.99±0.21 vs 0.68±0.17,P<0.05);miR-125b在SW1990、SUIT-2、BxPC3胰腺癌细胞系中的表达显著高于在正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7中的表达(4.81±0.13,8.63±0.27,5.64±0.21 vs1.00±0.05,P均<0.05);SUIT-2_(mi R-125b)的裸鼠成瘤体积显著低于SUIT-2_vector细胞(P<0.05)。TargetScan软件预测和荧光素酶报告基因实验验证A20为miR-125b的靶基因;转染miR-125b inhibit后,A20基因表达显著增加(6.98±0.18 vs 1.00±0.06,P<0.05),细胞增殖能力、NF-κB信号通路关键蛋白IK-Kα/β、IκBα、p65的表达显著下降(P均<0.05)。[结论]MiR-125b可通过靶向调控A20/NF-κB信号通路促进胰腺癌细胞的增殖。     

miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖作用机制研究

目的 探讨 miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖的分子作用机制。方法 选取2016年12月至2017年12月宁夏医科大学总医院收治的胶质瘤患者32例（男18例、女14例）,选择同期行脑内血肿清除术的脑出血或因颅脑损伤行颅内减压术的但脑组织正常患者31例为对照组（男15 例、女 16 例）。利用qPCR法检测miR-125b在胶质瘤组织和人胶质瘤细胞系 LN229的表达,通过转染miR-125b 模拟物,检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229增殖的抑制作用,采用Targetscan、miRanda等预测软件对miR-125b的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统分析miR-125b与STAT3的相互作用,运用Western blot法检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229中STAT3表达的影响。结果 与正常癌旁脑组织相比较,胶质瘤组织中miR-125b的表达水平明显降低,胶质瘤细胞系LN229中miR-125b的表达与正常星形胶质细胞明显降低,相比于NC 模拟物,转染miR-125b 模拟物之后LN229细胞的增殖显著抑制,双荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-125b 可直接调控STAT3 转录活性,而且miR-125b显著抑制LN229细胞STAT3表达。结论 miR-125b可靶向STAT3的表达从而调控胶质瘤细胞的增殖。     

miR-124对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨miR-124对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及其机制.方法 采用CCK8法和克隆形成实验评估miR-124对细胞增殖能力的影响.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测miR-124转染后细胞内PIM3的表达水平.通过双荧光素酶报告系统检测miR-124对PIM3荧光素酶活性的影响,证实miR-124可靶向作用于PIM3的3'UTR区.采用qRT-PCR和Western blot检测si-PIM3转染后细胞内PIM3的表达情况,采用CCK8法和克隆形成实验检测沉默PIM3后对细胞增殖能力的影响.结果 ①miR-124模拟物组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;miR-124模拟物组的克隆形成数明显少于其对照组.②miR-124模拟物组的miR-124过表达后,其PIM3表达低于其对照组,差异有统计学意义.③含野生型结合位点(PIM3 3'UTR区完整片段)的miR-124模拟物组的荧光素酶活性低于其对照组,差异有统计学意义;含突变型结合位点(PIM3 3'UTR区突变片段)的两组无明显差异.④si-PIM3组的PIM3被沉默后,其表达水平明显低于其对照组,差异有统计学意义;si-PIM3组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;si-PIM3组的克隆形成数明显少于其对照组.结论 miR-124可通过靶向作用于PIM3的3'UTR区下调后者的表达而抑制NSCLC细胞的增殖.     

miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中miR-26a/b的表达水平,荧光素酶报告系统分析miR-26a/b与MDM2 3’非翻译区（3’UTR）的结合情况;将化学合成miR-26a/b前体分子mimics和无关序列转染胃癌细胞MKN-45,化学合成miR-26a/b inhibitor转染胃上皮细胞GES-1后,Western blotting检测MDM2、p53及其下游分子p21和Bcl-2的表达,MTT法检测转染24、48、72 和96 h的细胞增殖情况;通过Annexin Ⅴ/PI双染检测miR-26a/b对MKN-45细胞凋亡情况。结果 与永生化胃上皮细胞GES-1相比,miR-26a/b在肿瘤细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中的表达均下调,在MKN-45中表达水平最低;荧光素酶活性检测显示,miR-26a/b过表达抑制MDM2 3’UTR报告载体（Wild）的荧光素酶活性,而对3’UTR突变型报告载体（Mutation）荧光素酶活性无明显影响。miR-26a/b抑制MKN-45细胞中MDM2表达并增强p53及下游分子表达,而在GES-1细胞中抑制miR-26a/b可以增强MDM2表达,降低p53及下游分子表达。MTT结果显示,miR-26a/b抑制MKN-45细胞的增殖,miR-26a/b inhibitor则明显促进GES-1细胞的增殖。通过AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡发现,miR-26a/b过表达的MKN-45细胞的凋亡率高于对照细胞（P＜0.01）。结论 miR-26a/b 能与MDM2 3’UTR 特异结合,调控p53/MDM2通路影响胃癌细胞的增殖及凋亡。     

miR-132在食管癌细胞系KYSE150 中对靶基因FOXA1的调控作用

 目的构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因 FOXA1的调控作用。方法根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩 增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上;通过 Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平。用生物信息学软件对 miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基 因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过 Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响。结果成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表 明pCDNA3.1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132。生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基 因。双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR。Western blot进一步证实miR-132能够抑制 内源性FOXA1蛋白的表达。结论FOXA1是miR-132直接调控的靶基因。     

miR-22通过靶向MTDH抑制胶质瘤细胞的生长

背景与目的：miR-22在胃癌、肺癌、结肠癌以及乳腺癌中表达下调,然而其在胶质瘤中的表达情况尚未明确。本研究旨在探讨miR-22是否通过靶向调控MTDH表达抑制胶质瘤细胞生长,从而进一步揭示miR-22的抑瘤机制。方法：运用实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测75例胶质瘤及17例正常大脑组织中miR-22的表达改变以及与胶质瘤患者预后关系;构建MTDH 3’UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-22对MTDH 3’UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-22 mimics转染胶质瘤细胞U251,以MTDH siRNA为阳性对照,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-22对U251细胞生长的影响。结果：qRT-PCR检测结果显示,miR-22在75例胶质瘤组织中表达下调;Kaplan-Meier生存分析发现,miR-22表达越高,患者生存率越高(P<0.05);在双荧光素酶报告检测显示,miR-22能特异性地与MTDH 3’UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Western blot检测结果显示,miR-22过表达或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,miR-22过表达或干扰MTDH可抑制人U251细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-22通过靶向调控MTDH的表达而抑制胶质瘤细胞的生长。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

MicroRNA-106b promotes pituitary tumor cell proliferation and invasion through PI3K/AKT signaling pathway by targeting PTEN

The purpose of this study was to investigate the expression of microRNA-106b (miR-106b) and phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) in pituitary tumor and to confirm whether miR-106b promotes proliferation and invasion of pituitary tumor cells through the PI3K/AKT signaling pathway by targeted regulation of PTEN expression, and thereby to find new targets for the treatment of pituitary tumor. Fifty-five cases of pituitary tumor tissue samples were collected, including 29 cases of invasive pituitary tumor, non-invasive 26 cases, and 8 normal pituitaries. The expression level of miR-106b in pituitary tumor tissue was detected by quantitative real-time PCR, and the expression of PTEN protein was detected by immunohistochemistry. PTEN 3′-untranslated region (UTR) luciferase vector was constructed, and dual-luciferase reporter gene assay was employed to examine the effect of miR-106b on PTEN 3′-UTR luciferase activity. AtT-20 cells were transfected with miR-106b mimics, miR-106b inhibitor, PTEN expression plasmid, and miR-106b mimics + PTEN expression plasmid respectively, and the changes in cellular proliferation and invasion were observed via MTT method and transwell assay respectively. PTEN messenger RNA (mRNA) expression was determined by quantitative real-time PCR, and western blotting was performed to detect the expression of PTEN, PI3K, AKT, and pAKT. miR-106b showed up-regulation in invasive pituitary tumor tissue: the expression level was significantly up-regulated compared with normal tissues and the non-invasive pituitary tumor tissue (P < 0.05). The positive rate of PTEN protein expression in invasive pituitary tumor tissues was significantly lower than in normal and non-invasive tissues (P < 0.01). Dual-luciferase reporter gene assay showed that miR-106b could bind to the 3ʹ-UTR of PTEN specifically and significantly inhibited the luciferase activity, cutting the 46 % (P < 0.01). Down-regulation of miR-106b or up-regulation of PTEN could suppress cell proliferation and invasion of AtT-20 cells, and PTEN expression plasmid could partially simulate the function of miR-106b. Expression of PTEN mRNA and protein decreased significantly in AtT-20 cells overexpressing miR-106b. The expression levels of PI3K and p-AKT were significantly inhibited by miR-106b inhibitor and increased by miR-106b mimics. The expression of miR-106b showed up-regulation in pituitary tumor tissues, while the protein expression of PTEN presented opposite results. The findings of this study further demonstrated that miR-106b as an oncogene regulated the pituitary tumor cell proliferation and invasion in vitro by directly targeting PTEN through the PI3K/AKT signaling pathway. Our study suggests that miR-106b and PTEN are likely to serve as potential diagnostic biomarkers or therapeutic targets for pituitary tumor treatment in the future.