低剂量辐射对脐血的免疫刺激作用

目的：探讨低剂量辐射对脐血T淋巴细胞膜分子表达，IL－2分泌及LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响。方法：新鲜分离的脐血淋巴细胞及LAK前体细胞接受低剂量γ射线照射，分别用直接免疫荧光标记流式细胞术，MTT法及3H-TdR释放实验检测T淋巴细胞膜分子的表达，IL－2分泌的LAK体外杀伤肿瘤靶细胞（K562，HL－60）活性。结果：（1）62mGyγ射线照射后，脐血淋巴细胞CD3，TCR／CD3复合物，CD4，CD8分子表达显著上调，且均在4－24h，人随时间推移而逐步增强，CD4／CD8比值无显著性变化；（2）62mGy γ射线照射后，脐血单个核细胞上清IL－2活性随培养时间推多逐渐增强，不同时间点比较差异均有显著性（P＜0．05）；（3）脐血LAK细胞对K562和HL－60的杀伤活性与成人外周血相比差异无显著性（P＞0．05），接受低剂量辐射的脐血LAK细胞对K562和HL－60的细胞毒性显著高于非照射组（P＜0．01），结论：低剂量辐射可促进脐血T淋巴细胞的成熟，活化和信号的转导及IL－2的分泌，增强脐血LAK杀伤肿瘤靶细胞的细胞毒活性，从而可能在脐血移植中加速免疫功能重建，增强移植物抗白血病效应。     

低剂量辐射对脐血免疫细胞功能影响的初步研究

目的 观察低剂量辐射对脐血淋巴细胞增殖，CD25分子表达，IL－2水平和NK细胞活性的影响。方法：（1）采用^3H-TdR掺入法和^3H-TdR释放法检测62mGy,124mGy,186mGy 射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性。（2）采用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测62mGy γ射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞在不同时间（12h,24h,48h）CD25分子表达和培养上清液的IL－2水平。结果 在一定剂量范围内的低剂量辐射显著促进脐血淋巴细胞增殖和增强NK细胞活性。62mGy γ射线照射后脐血淋巴细胞CD25表达和IL－12水平显著上调，CD25表达和IL－2的水平随时间推移逐步增高。结论 在一定剂量范围内的低剂量辐射能促进淋巴细胞的增殖，活化和成熟，增强NK细胞活性。低剂量辐射对脐血免疫细胞存在兴奋效应。可能加速脐血移植时造血功能和免疫功能的重建，这可能增加移植物抗白血病效应，降低其复发，显示出临床应用前景。     

人脐静脉内皮细胞支持体外造血和造血干／祖细胞扩增

目的 :研究人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell ,HUVEC)对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用 ,为造血干 /祖细胞体外扩增提供新的实验资料。方法 :用甲基纤维素集落形成实验检测集落形成情况 ,采用HUVEC与脐血单个核细胞和CD34+细胞直接接触共培养的方法观察HUVEC对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用。结果 :HUVEC上清具有集落刺激活性。将HUVEC与脐血单个核细胞直接接触共培养 ,结果表明HUVEC能维持脐血单个核细胞体外存活至少 4周。将脐血CD34+细胞与HUVEC直接接触共培养 ,动态地观察有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数、CD4 1a+细胞百分比和CFU GM扩增倍数的变化。结果发现 ,有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数和CD4 1a+细胞百分率均在第 3周达最高 ,分别为 (6 8.1± 14.8)倍、(6 .6± 1.4 )倍和 15.6 % ,而CFU GM扩增倍数则于第 2周达最高 ,为 (5.7± 2 .1)倍。结论 :HUVEC能支持体外造血和造血干 /祖细胞扩增并具有促进巨核系细胞分化的能力     

γ射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响

目的观察γ射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响。方法取正常分娩的新生儿脐带血,体外肝素抗凝,应用常规密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(MNC),计数并调整细胞浓度。Gamma Cell 1000数控细胞照射仪体外照射脐血MNC细胞,吸收剂量率3.72 Gy/min。①采用3H-TdR掺入法测量脐血淋巴细胞增殖:取已分离的单个核细胞,调至细胞浓度1×106个/ml,接受0.248、0.496、0.992、1.984、3.9685、.952、7.936和15.872 Gyγ射线照射。照射后继续培养56 h后加3H-TdR(3.7×107Bq/孔)再培养8 h后收集细胞,用Beckman液体闪烁计数器计数放射性核素每分钟闪烁数(计数/min)。②采用3H-TdR释放法检测脐血NK细胞活性:取传代培养24~48 h的K562细胞为靶细胞,调整浓度1×106个/ml,加入3H-TdR(3.7×108Bq/ml)孵育6 h,洗涤2次去除游离的3H-TdR,再制备成5×105个/ml备用。脐血单个核细胞调整细胞浓度为1×107个/ml作为效应细胞(效靶比20∶1),给以上述不同剂量γ射线照射。将效应细胞与制备好的靶细胞继续培养18 h后收集细胞,用Beckman液体闪烁计数器计数放射性核素每分钟闪烁数。结果在γ射线对脐血淋巴细胞增殖活性影响的研究中,0.248~15.872 Gyγ射线照射显著降低淋巴细胞增殖能力,增殖活性抑制程度与辐射剂量呈正相关(r=0.839,P<0.05);3.968 Gyγ射线照射组增殖活性仅为对照组的30.86%(P<0.01),SI=7.8,其中3.968~15.872 Gyγ射线照射未发现其明显的增殖活性。而γ射线对脐血NK细胞活性的影响的观察中发现0.248~1.984 Gyγ射线照射可引起脐血NK细胞活性显著增高(P<0.01);3.968 Gyγ射线照射保持NK细胞活性,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);5.952~15.872 Gyγ射线可引起脐血淋巴细胞NK细胞活性显著降低(P<0.01)。结论3.968 Gyγ射线照射完全抑制脐血淋巴细胞增殖的同时仍呈现脐血NK细胞抗肿瘤活性。因此,在进行供者淋巴细胞输注或混合脐血移植时,应用3.968 Gyγ射线照射淋巴细胞,再进行过继性细胞免疫治疗可能降低移植物抗宿主病效应,同时不影响移植物抗白血病效应;混合脐血移植时增强移植物抗白血病效应。     

缺铁性贫血合并反复呼吸道感染患儿细胞免疫功能观察

目的：测定63例缺铁性贫血（IDA）合并反复呼吸道感染（RRI）患儿外周血白细胞介素-2（IL-2）活性、血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）水平和T淋巴细胞亚群，并分析它们之间的相关性。方法：IL-2活性和sIL-2R水平测定分别采用MTT法和双抗体夹心法，T淋巴细胞亚群测定采用AP丸心法。结果：IL-2活性，CD3^＋、CD4^＋细胞百分率和CD6^＋／CD8^＋细胞比值均显著低于对照组（P均〈0．01），而sIL-2R水平显著高于对照组（P〈0．01），CD8^＋细胞百分率无明显变化。结论：IDA合并RRI患儿细胞免疫功能低下且紊乱。     

脐血移植中移植物抗宿主病低发生机理研究

目的　通过对脐血和外周血免疫功能的比较 ,探讨了脐血移植中移植物抗宿主病(GVHD)低发生率的分子机理。方法　经增殖试验、NK杀伤活性试验及免疫荧光双标记方法研究了 4种血清对T细胞免疫功能的影响。结果　与成人血清相比较 ,脐血血清能降低NK细胞杀伤肿瘤靶细胞的活性 ;同时脐血血清和成人血清都能增加丝裂原特异性T淋巴细胞增殖 ,成人血清在增殖反应中可达到峰值 ,而脐血血清没有达到峰值效应 ,甚至在 0 1的稀释度时仍没有下降 ;成人血清能增加PHA刺激外周血单个核细胞 (PBMC)中的T淋巴细胞HLA DR表达 ,而脐血血清却没有这种效应。结论　血清中所分泌的某些可溶性因子可能在T细胞活化中起重要作用 ,与GVHD发生机理相关联     

洋参多糖提高放射性免疫功能低下小鼠免疫功能实验观察

目的 观察洋参多糖提高放射性免疫功能低下小鼠免疫功能的药效作用。方法 采用^60Coγ射线一次全身照射7Gy诱发放射性免疫功能低下小鼠动物模型。照射前后小鼠每日口服洋参多糖87．5mg/kg，连续服药10d。测定模型小鼠服药后脾NK细胞活性、淋巴细胞转化能力、T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)、白介素2(IL-2)和足垫迟发超敏反应(DTH)等免疫功能变化。结果 洋参多糖可明显增加IL-2含量和T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)数量，提高鼠脾NK细胞活性和淋巴细胞转化能力及促进模型鼠足垫迟发超敏反应。结论 洋参多糖可减轻辐射诱发的机体免疫功能改变，该化合物可能是一种治疗免疫功能低下的有效制剂。     

再生障碍性贫血患者骨髓细胞免疫功能、Fas抗原和凋亡率的研究

目的：探讨细胞免疫、Fas抗原和凋亡率与再生障碍性贫血（再障）发病机制的关系。方法：应用流式细胞仪测定21例再障患者骨髓T细胞亚群、单个核细胞（MNC）Fas表达率及凋亡率，其中急性再障6例，慢性再障15例；同时以20例正常人作对照。结果：再障患者骨髓CD4^ 细胞减低、CD8^ 细胞增高、CD4^ /CD8^ 降低或倒置。再障患者Fas表达率及凋亡率均高于对照（P＜0．05）；急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障，但差异无显著性（P＞0．05）。结论：再障患者骨髓细胞免疫功能异常、MNC的Fas表达率和凋亡率增高与再障发病机制有关。     

低剂量照射对小鼠骨髓移植造血功能的影响

目的探讨低剂量照射促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。方法通过对小鼠体外骨髓细胞进行不同剂量的照射，用^3H-TdR掺入法确定产生最佳刺激增殖效应的照射剂量。在骨髓移植前，对供体小鼠骨髓细胞给予最佳刺激剂量的照射，然后将被照射的骨髓细胞输入受体小鼠内，最后动态监测受体小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞数量。结果在离体情况下，经6和8cGy低剂量照射的小鼠骨髓细胞增殖能力明显增强。用低剂量照射的骨髓细胞进行骨髓移植后，受体小鼠骨髓单个核细胞数和外周血细胞计数普遍高于相应的对照组。结论低剂量照射可能促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。     

重症肌无力患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达

目的：观察免疫治疗对重症肌无力（MG）患者外周血CD4＋CD25^＋T淋巴细胞表达的影响。方法：应用四色流式细胞术对MG30例（观察组）治疗前后和30例健康者（对照组）外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋、CD25^＋ T淋巴细胞亚群等表达进行检测，以CD2。抗原荧光强度10的细胞定义为CD25^high细胞，分析其百分率和荧光强度，并结合临床资料进行相关分析。结果：观察组治疗前外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^high、CD25^＋占总淋巴细胞的比例与正常对照组无显著差异（P〉O．05），但CD4^＋＋细胞数较正常增高（P〈0．05）；经类固醇激素或经胸腺切除治疗后，外周血CD4^＋CD25^＋、CD／CD25^high与治疗前及对照组比较，差异显著（P〈0．05）。结论：经免疫治疗后的MG患者外周血中存在高比例的CD4^＋CD25^＋表达，可能与病情缓解有关。     

急、慢性髓性白血病细胞低温冻存后诱生的树突状细胞生物特性研究

目的 观察急、慢性髓性白血病原代细胞经低温冻存后诱生的白血病源性树突状细胞的生物特性.方法 取急、慢性髓性白血病原代细胞,一部分细胞立即培养,一部分细胞用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉为保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存一定时间后复温培养.培养时细胞内加重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4、肿瘤坏死因子-α等细胞因子,培养12 d,为白血病源性树突状细胞,观察细胞形态及免疫表型、自身混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞活性.结果 急、慢性髓性白血病新鲜或冻存的原代细胞,经组合细胞因子培养,细胞均不同程度地出现典型的树突状形态,细胞表面CD80、CD54、人白细胞表面抗原DR、CD1a、CD83、CD86表达上调,CD14下调;冻存原代细胞经培养生成的白血病源性树突状细胞,还表现为自体混合淋巴细胞反应和T淋巴细胞杀伤自体白血病细胞活性明显.结论 急、慢性髓性白血病新鲜或经低温冻存的原代细胞可诱生为白血病源性树突状细胞,这种细胞可诱导T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞,为用树突状细胞免疫治疗微小残留病提供了实验依据.     

Radiation Chemical and Physical Mechanisms of Radiosensitization of Single Cell Systems by Iothalamate

Summary

The radiosensitizing effect of iothalamate (ITA) has been investigated in bacterial and mammalian cells in order to obtain a better understanding of the physical and radiation chemical mechanisms of sensitization displayed by the drug. In order to distinguish between the two, Escherichia coli B/r cells were irradiated with 9 MeV electrons, which allow only the radiation chemical mechanism to operate, and V79 cells with 250 KVp X-rays, which instead make possible the occurrence of both mechanisms.

It has been shown that: (a) Maximum sensitization already occurs in bacteria with 10^?2 mol dm^?3 ITA (enhancement ratio (ER) 11·2 in oxygen, 2·7 in nitrogen), while in mammalian cells a concentration higher by a factor of 10 is required (ER 2·2 both in air and nitrogen). (b) ITA sensitization is inhibited when bacteria are irradiated in growth medium instead of buffer. Such inhibition does not occur with V79 cells. (c) Cysteine and glycerol completely cancel the sensitizing effect of ITA on bacterial cells in both gas phases. Dimethylsulphoxide (DMSO) does the same in nitrogen, while in oxygen it only reduces ITA sensitization to about 50 per cent of the level observed in control conditions. With mammalian cells, all the three scavengers do not modify significantly the enhancement produced by ITA, either in air or in nitrogen. The experimental results are consistent with both postulated mechanisms of sensitization.     

TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响.方法将TPO cDNA构建到pBabe/pura中,通过"乒乓转染法"获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL,用Northern blot检测细胞中TPO基因的表达,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性;以未转基因的HFCL为对照,将CD34+造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+CD41+和表型为CD41-CD61+细胞的比例.结果基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因,在HFCL/TPO培养上清中有0 75 ng/ml水平的TPO活性;并且在HFCL/TPO支持下,CD34+造血细胞经过7 d扩增后,CD34+CD41+细胞的比例为(13.7±2.0)%,HFCL为(6.5±1.8)%(P＜0.01);CD41+CD61+细胞的比例为(11.9±0.7)%,略高于HFCL的(10.6±1.5)%(P＞0.05).结论基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+CD41+巨核祖细胞的扩增,但对较成熟的CD41+CD61+巨核细胞影响不明显.     

High Radiosensitivity of the MOLT-4 Leukaemic Cell Line

Summary

Radiation survival of MOLT-4, a leukaemic T-lymphocyte cell line, was measured by counting colonies formed in 0·8 per cent methyl cellulose. The survival curve was a simple exponential and showed the cells to be radiation sensitive, with D₀ = 0·49 ± 0·02 Gy and extrapolation number n = 0·92 ± 0·09. No increase in survival as measured by colony-forming ability or trypan blue dye exclusion was seen when the dose was split into two fractions, separated by a 5 h incubation period. Electron microscopy and trypan blue dye exclusion showed that 5 h after exposure to high doses, MOLT-4 cells began to die and displayed condensed, marginated chromatin and cellular vesticulation.     

脂肪间充质干细胞分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMCSs)是否能分化为肾小管上皮细胞,用于急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗.方法 体外分离和培养ADMSCs,用一种携带有荧光素酶和红色荧光蛋白(fluc-mrfp)报告基因的慢病毒转染ADMSCs;构建SD大鼠缺血再灌注诱导的AKI模型,将病毒转染ADMSCs直接从肾实质注射移植2×106细胞量.使用生物发光成像仪(bioluminescence imaging,BLI)示踪移植后的ADMSCs在大鼠体内的分布;免疫荧光染色法检测ADMSCs在体内的分化.结果 ADMSCs高表达CD29、CD90,不表达CD31、CD45、CD34;慢病毒转染后的ADMSCs稳定表达fluc和mrfp报告基因.体内ADMSCs移植后,BLI可以检测到荧光信号一直持续到第14天;免疫荧光结果进一步证实移植的ADMSCs可能分化为肾小管上皮细胞.结论 ADMSCs在体内可以分化为肾小管上皮细胞,为进一步研究ADMSCs治疗AKI提供实验基础.     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养后对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的研究

 目的 研究树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后增殖活性、表型的变化和其对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的影响.方法 分离外周血单个核细胞(PBMC),经不同细胞因子作用后定向分化成DC和CIK细胞,将收获的DC与CIK共培养3d,以流式细胞仪检测CIK 细胞膜表面分子表达,MTT 法检测共培养后CIK细胞对HEP-3杀伤活性的变化.结果 CIK与DC 共培养3d 后增殖活性开始显著提高,与DC共培养的CIK较单独培养的CIK具有更强的杀瘤活性.结论 共培养后DC能够促进CIK增殖,提高其对肝癌细胞的杀伤活性,为指导临床应用DC与CIK联合治疗原发性肝癌提供了实验依据.     

人胎盘来源干/祖细胞生物学特性研究进展

胎盘通过分离可得到许多表型可塑性的细胞类型,现已成为再生医学新的细胞来源途径。目前已发表的众多文献使用了不同的分离鉴定方法,描述了来自胎盘不同区域的干细胞。本文系统整理人胎盘来源的各种干/祖细胞的生物学特性,并提示这些细胞在将来临床应用的可能性。     

新生大鼠肌源性干细胞跨胚层分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组,分别诱导并同期观察细胞的生长形态,采用双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞,RT-PCR方法检测诱导后细胞的基因表达情况。结果获得高纯度的MDSCs,且Desmin免疫细胞化学鉴定呈阳性。胰腺提取液诱导组诱导后4d,相差显微镜下可见细胞团结构,诱导后6d呈半贴壁状态,诱导后12d形成典型的胰岛样细胞团,较化学方法诱导组诱导时间缩短3d。RT-PCR检测显示:胰腺提取液诱导组诱导6d后可检测到胰岛前体细胞相关基因Ngn3、nestin、PDX-1的表达;诱导12d后可检测到胰岛素基因的表达,但未检测到Ngn3、nestin、PDX-1的表达。结论胰腺提取液可模仿胰岛细胞发育的微环境,并诱导大鼠MDSCs跨胚层分化为胰岛素分泌细胞。     

High Yields of Lethal Mutations in Somatic Mammalian Cells that Survive Ionizing Radiation

Summary

When mammalian cells are irradiated in vitro, the component cells of a normal-appearing survivor colony or clone are commonly thought to have proliferative capacity equivalent to that of the unirradiated cells. We have found, however, that cells appearing in survivor colonies may carry heritable lethal defects which come to light, perhaps only after numerous successful divisions, in the form of plating efficiencies that are reduced below those of unirradiated cells in a dose-dependent manner. We regard these heritable defects as signs of the induction of lethal mutations, which, like non-lethal mutations, may require many generations before they are expressed.

This effect has been noted in two very dissimilar mammalian cell lines, one a primary culture from adult tissue, the other an immortal cell line. We suggest that induction of lethal mutations may occur also in somatic cells in vivo; this would account for the well-known observation that previously irradiated but apparently healed tissue is subsequently proved to be extraordinarily sensitive to subsequent exposure to irradiation or cytotoxic drugs.

The results of our experiments in vitro suggest that current methods of estimating mutation or transformation yields may yield underestimates. If lethal mutations are induced also in vivo, interpretations of the results of fractionation experiments on normal tissues may have to be reconsidered.