口腔鳞状细胞癌组织中Periostin的表达及其在上皮间质转化中的作用

目的:观察Periostin在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况,及其在上皮间质转化(EMT)中的作用。方法:用免疫组化法检测59例口腔鳞状细胞癌组织(实验组)和15例正常口腔黏膜组织(对照组)中Periostin、E-cadherin、Vimentin表达情况,分析Periostin与E-cadherin、Vimentin间相关关系。结果:59例口腔鳞状细胞癌组织中Periostin、E-cadherin、Vimentin阳性表达率分别为71.2%、52.5%、39.0%, Periostin表达与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05);且Periostin与E-cadherin表达降低和Vimentin表达上调间均存在相关性(P＜0.01)。结论:Periostin可能通过调控上皮间质转化促进口腔鳞状细胞癌侵袭转移。     

核心结合因子a1、骨形成蛋白及骨桥素在小鼠牙周组织发育中的免疫组化定位研究

目的探讨核心结合因子a1、骨形成蛋白和骨桥素3者在小鼠牙周组织发育过程中的时间和空间分布特点、表达意义及它们之间的相互作用。方法用SABC免疫组化法检测3者在出生后不同时期小鼠牙周组织发育中的表达及特点。结果牙齿发育早期,仅骨形成蛋白在牙囊细胞中表达;当牙根开始发育后,3者皆在牙周膜细胞、成牙骨质细胞中表达,但骨形成蛋白在无细胞牙骨质和细胞牙骨质中皆不表达,核心结合因子a1在细胞牙骨质中表达,而骨桥素则在无细胞牙骨质、细胞牙骨质和牙槽骨表面皆呈强阳性表达。结论核心结合因子a1、骨形成蛋白、骨桥素3者皆参与牙周组织的发育,对矿化和生长发育发挥重要作用。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

小鼠重组Periostin对人牙周膜细胞粘附、伸展和移动的影响

目的：研究小鼠重组Periostin对人牙周膜细胞（PDL细胞）粘附、伸展及移动的影响。方法：采要用固相结合分析以及细胞机械创伤模型等细胞方法,观察PDL细胞在Periostin基质上的粘附率、伸展率及其定向移动的能力。结果：Periostin可促进PDL细胞的粘附、伸展和移动,当浓度在40mg/L时,作用最为显著（P＜0．01）,与纤维结合蛋白（FN0的作用相似。结论：小鼠重组Periostin可有效促进PDL细胞的附着、伸展及移动,但其作用的确切分子机制还需深入研究。     

细胞外基质磷酸糖蛋白在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的:观察细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织中的表达变化,初步探讨MEPE在小鼠牙齿发育过程中可能发生的作用.方法:免疫组织化学染色法观察MEPE在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织的表达变化.结果:牙胚发育早期,MEPE在成釉细胞、成牙本质细胞和牙髓组织中均有表达.随着牙胚的发育,MEPE在上述细胞中的表达逐步减弱,在牙周膜中逐渐表达.在前期牙本质中表达.牙胚发育完成后,MEPE在牙周膜,特别是成熟牙槽骨骨陷窝中的骨细胞中呈现高表达.结论:细胞外基质磷酸糖蛋白可能在牙齿硬组织形成、牙周膜的形成和稳定等方面发挥重要作用.     

小鼠牙胚发育过程中上游刺激因子1蛋白表达与分布模式的研究

目的:检测小鼠牙胚中上游刺激因子1(USF1)蛋白的表达及时空分布模式.方法:挖取P1和P11 d小鼠第一磨牙胚,抽提总蛋白,Western blot检测USF1蛋白表达;制备E13、16、19及P1、5、8、11、21 d和6月龄小鼠第一磨牙石蜡切片,免疫组化方法检测USF1蛋白的表达和分布.结果:Western blot从P11 d小鼠第一磨牙胚中检测到相对分子质量约43 000的特异性条带,但未从P1 d检测到;免疫组化染色从P5 d开始检测到较强的USF1阳性信号,持续至P11 d,阳性信号仅定位于成牙本质细胞与成釉细胞胞质;而蕾状期,帽状期,钟状期牙胚中未检测到阳性信号,并且在牙齿萌出后(P21 d与6月龄),牙齿中USF1阳性信号再次消失.结论:牙胚中有USF1蛋白表达,仅定位于分泌期的成牙本质细胞和成釉细胞,表达模式具有显著的时空特异性.     

Periostin对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :研究小鼠重组Periostin对牙周膜细胞 (PDL细胞 )增殖及碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法 :采用MTT比色试验及酶动力学方法 ,测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果 :Periostin仅在浓度为 40 μg/ml时 ,可显著促进PDL细胞的增殖 (P <0 .0 1) ,其余浓度则无作用 ,而其浓度在 10 μg/ml～ 80 μg/ml范围中时 ,均可显著提高PDL细胞ALP活性水平 (P <0 .0 5 )。结论 :小鼠重组Periostin对PDL细胞的增殖及ALP活性均有促进作用 ,但其在这两方面的作用存在差异 ,对此还需深入研究     

硫化氢在模拟正畸力作用下对牙周膜细胞Runx2表达的影响

目的 模拟正畸力作用下,观察不同浓度硫化氢(Hydrogen Sulfide,H2S)对人牙周膜细胞成骨相关因子Runx2表达的影响.方法 对人牙周膜细胞分别施加5％循环张力0、6、12、24、48h,通过Real-time PCR及Western blot检测成骨因子Runx2的基因及蛋白表达;观察加力与不加力时不同浓度H2S对Runx2基因表达的影响.并通过Western blot检测p38-MAPK信号蛋白的变化.结果 加力后Runx2基因表达升高,在加力24 h时最高;不论加力与否,H2S浓度为50 μM时促进成骨因子Runx2升高作用最明显;加力24 h,H2S浓度为50 μM时,检测信号蛋白p38-MAPK磷酸化水平明显升高.结论 在模拟正畸力作用下,H2S可引起人牙周膜细胞成骨因子Runx2表达升高,并且p38-MAPK信号通路参与H2S引起人牙周膜细胞成骨因子Runx2表达升高这一过程.     

Runt相关基因2/核心结合因子a1在小鼠牙周组织发育中的免疫组化定位研究

目的探讨Runt相关基因2/核心结合因子a1(Runx2/Cbfa1)在小鼠牙周组织发育过程中的时空表达及意义。方法建立BALB/c小鼠牙周发育动物模型,采用免疫组化方法检测Runx2/Cbfa1在小鼠出生后各期牙周组织发育中的表达及特点。结果Runx2/Cbfa1在牙齿发育过程中的表达具有时空特异性,在牙根开始发育之前,仅在牙槽骨及成骨细胞中表达;当牙根开始发育即从第11天以后各期,在根部牙周膜细胞、成牙骨质细胞及成骨细胞中均呈阳性表达,但牙槽骨呈阴性表达。结论Runx2/Cbfa1在成牙骨质细胞及成骨细胞的分化及牙植骨的形成具有重要作用,可能在牙周组织的发育中发挥作用。     

Periostin对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究小鼠重组Periostin对牙周膜细胞（PDL细胞）增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法。测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：Periostin仅在浓度为40μg/ml时,可显著促进PLD细胞的增殖（P＜0．01）,其余浓度则无作用,而其浓度在10μg/ml-80μg/ml范围中时,均可显著提高PDL细胞ALP活性水平（P＜0．05）。结论：小鼠重组Periostin对PDL细胞的增殖及ALP活性均有促进作用,但其在这两方面的作用存在着异,对此还需深入研究。     

骨膜蛋白与牙周组织再生

骨膜蛋白为成骨细胞及其前体细胞的细胞黏附分子,在骨膜中强表达,间接地参与骨形成和骨修复过程,还表达于牙周膜、肌腱、心脏瓣膜和皮肤等承受压力的纤维结缔组织。人类的骨膜蛋白基因定位于6p21,鼠类的骨膜蛋白基因位于17号染色体。骨膜蛋白有一个N-末端结构,一个富含半胱氨酸结构,四个同源性重复区,一个C-末端。N-末端有一个典型的信号序列,提示其可能是一种分泌性蛋白。在牙胚的帽状期,骨膜蛋白表达于内釉上皮和前期成牙本质细胞层之间以及颈环周围的间充质。在牙胚钟状期的牙囊细胞中也有骨膜蛋白表达。在牙体移动过程中,骨膜蛋白是机械应力下骨和牙周组织改建过程中的局部促进因素之一。牙周组织修复再生的关键是促使来源于牙周膜的细胞优先附着于根面并增殖分化,进而形成新的牙周膜、牙骨质和牙槽骨,即形成新的牙周附着。骨膜蛋白是具有骨膜及牙周膜组织表达特异性的骨黏附蛋白,对成骨细胞的分化及组织的早期矿化有重要作用。     

Tumor Necrosis Factor‐α and Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharides Decrease Periostin in Human Periodontal Ligament Fibroblasts

Background: Periostin is a matricellular protein essential for tissue integrity and maturation and is believed to have a key function as a modulator of periodontal ligament (PDL) homeostasis. The aim of this study is to evaluate whether periodontal disease‐associated pathogen‐related virulence factors (endotoxins/lipopolysaccharides [LPS]) and proinflammatory cytokines alter the expression of periostin in PDL cells. Methods: Human PDL cultures were exposed to inflammatory mediators (tumor necrosis factor‐α [TNF‐α]), bacterial virulence factors (Porphyromonas gingivalis LPS) or a combination in a biomechanically challenged environment. Culture conditions were applied for 24 hours, 4 days, and 7 days. Periostin and TGF‐β inducible gene clone H3 (βIGH3) mRNA expression from cell lysates were analyzed. Periostin and βIGH3 proteins were also detected and semiquantified in both cell lysates and cell culture supernatants by Western blot. In addition, periostin localization by immunofluorescence was performed. Analysis of variance and Fisher tests were used to define the statistical differences among groups (P <0.05). Results: In a mechanically challenged environment, periostin protein was more efficiently incorporated into the matrix compared to the non‐loaded controls (higher levels of periostin in the supernatant in the non‐loaded group). Interestingly, chronic exposure to proinflammatory cytokines and/or microbial virulence factors significantly decreased periostin protein levels in the loaded cultures. There was greater variability on βIGH3 levels, and no particular pattern was clearly evident. Conclusions: Inflammatory mediators (TNF‐α) and bacterial virulence factors (P. gingivalis LPS) decrease periostin expression in human PDL fibroblasts. These results support a potential mechanism by which periostin alterations could act as a contributing factor during periodontal disease progression.     

肥胖伴牙周感染小鼠体内B-1a细胞的表达初探

目的:分析肥胖伴牙周感染小鼠体内B-1a细胞的表达变化.方法:建立饮食诱导型肥胖伴实验性牙周感染的小鼠模型,通过免疫组化和蛋白质印迹的方法检测小鼠颌骨和脾脏中CD5、抗Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)抗体、IL-10的蛋白表达量;实时定量PCR检测小鼠颌骨中CD5、抗Col-Ⅰ抗体、IL-10 的mRNA表达量.结果:牙周炎组颌骨中的CD5、IL-10、抗Col-Ⅰ抗体的蛋白和mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.001);肥胖组脾脏中的CD5、IL-10、抗Col-Ⅰ抗体的蛋白表达量显著高于标准组(P<0.05);标准伴牙周真性结扎组脾脏中抗Col-Ⅰ抗体的表达量显著高于标准伴牙周假性结扎组(P<0.05).结论:B-1a细胞在肥胖与牙周炎的炎症早期被激活并存在一定的病理意义,这两种炎症状态并没有在病理机制上出现交叉影响.     

富含亮氨酸的间质蛋白多糖在小鼠牙周组织发育中的组织学定位

目的研究富含亮氨酸的蛋白多糖类物质：纤维调节素（FMN）、核心蛋白聚糖（DCN）及双糖链蛋白聚糖（BGN）在小鼠牙周组织不同发育时期的分布特点，探讨其在牙周组织发育中的作用。方法取出生后第5、10、15、25天的BALB／c小鼠36只，引颈处死，解剖并分离含下颌第一磨牙区的下颌骨，新鲜配制4％多聚甲醛固定24h，甲酸一甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周，常规石蜡包埋，近远中向5μm连续切片。免疫组织化学Power Vision^TM二步法，观察各发育时期第一磨牙牙周组织中3种间质蛋白多糖的组织学分布特点。结果FMN在牙龈结缔组织和牙周膜中呈强阳性表达，且在牙周膜与牙骨质及牙槽骨界面有较强表达；DCN强阳性表达于牙龈结缔组织、靠近牙槽骨面的牙周膜及牙槽骨表面的成骨细胞中；BGN则在各期牙龈结缔组织及牙周膜中表达，在牙槽骨表面及成骨细胞中为阴性。结论FMN可能与DCN及BGN相互作用，调节牙龈结缔组织及牙周膜胶原纤维的网络形成，并可能参与牙槽骨和牙骨质的矿化过程。     

Protective effect of serum antibodies against a 110-kilodalton protein of Actinobacillus actinomycetemcomitans following periodontal therapy

Thirty-four adult patients with untreated periodontitis were randomly assigned to receive full mouth scaling alone or scaling with an adjunctive antimicrobial therapy, both followed by supportive periodontal therapy. At 24 months, specific serum immunoglobulin A (IgA), IgG and IgG subclass antibody reactivities against a 110-kDa protein of Actinobacillus actinomycetemcomitans were assessed by Western blot. In patients harboring A. actinomycetemcomitans intraorally, the IgG4 antibody reactivity against the 110-kDa protein of A. actinomycetemcomitans was associated with significantly increased survival rates of teeth and of sites not exhibiting 2 mm or more of probing attachment loss. The same trend was found for IgG3 and IgG2 antibody reactivities, but it was statistically insignificant. No association with clinical treatment outcome was observed for IgA, IgG and IgG1 antibody reactivities. The results indicated that systemic IgG4 antibody reactivity against the 110-kDa protein of A. actinomycetemcomitans may have a protective effect against periodontal disease progression in patients harboring A. actinomycetemcomitans and receiving periodontal therapy.     

淫羊藿苷口服给药对骨质疏松牙周炎小鼠牙槽骨吸收的影响

目的:研究口服淫羊藿苷（ICA）对骨质疏松小鼠牙周炎引起的牙槽骨吸收的抑制作用。方法:3月龄、雌性、C57BL/6J小鼠随机分为3组,即正常组（SHAM组）、卵巢切除+口腔涂布牙龈卟啉单胞菌（Pg）+淫羊藿苷组（OVX+Pg+ICA）、卵巢切除+Pg口腔涂布组（OVX+Pg）。小鼠适应性喂养1周,第2周进行双侧卵巢切除术,诱导小鼠骨质疏松形成。从第4周开始,对小鼠牙周涂布Pg,1次/d,连续1周。第12周收集左侧下颌骨进行固定切片及染色,分析各组之间牙槽骨吸收高度的差异。收集右侧下颌骨进行亚甲蓝染色,分析各组间牙槽骨吸收面积的差异;收集双侧上颌骨牙周组织蛋白,分析成骨相关蛋白的表达差异。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:小鼠股骨及牙周组织切片染色显示,成功建立了小鼠骨质疏松牙周炎模型。对牙槽骨吸收距离和面积的测量分析显示,相比于OVX+Pg组,口服淫羊藿苷可显著减少釉-牙骨质界-牙槽嵴顶（CEJ-ABC）的距离及颊舌侧牙槽骨吸收面积（P<0.05）;Western免疫印迹显示,相比于OVX+Pg组,OVX+Pg+ICA组中Runx2、OSX、OCN及OPN蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。结论:口服淫羊藿苷在预防小鼠骨质疏松发生的同时,可有效减少牙周炎引起的牙槽骨吸收。