烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶在动脉粥样硬化中的作用

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶不仅存在于吞噬细胞中，也广泛存在于非吞噬细胞中，如血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和血管外膜成纤维细胞。非吞噬细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶催化产生活性氧，参与动脉粥样硬化的发生和发展。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22^phox亚基的基因多态性与冠心病和缺血性脑血管病有着密切联系。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶在动脉粥样硬化中的作用

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶不仅存在于吞噬细胞中,也广泛存在于非吞噬细胞中,如血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和血管外膜成纤维细胞.非吞噬细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶催化产生活性氧,参与动脉粥样硬化的发生和发展.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox亚基的基因多态性与冠心病和缺血性脑血管病有着密切联系.     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与心房颤动的研究

心房颤动是最常见的心律失常,其发生和维持的分子机制尚未明确。近年来发现心房颤动存在氧化应激,并已从动物实验、临床试验等多方面证实其主要来源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶,推测NADPH 氧化酶可能在心房颤动发生发展过程中起重要作用。以NADPH 氧化酶为靶点的心房颤动干预措施如肾素-血管紧张素系统抑制剂和他汀类等也愈受关注。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者诱导痰中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox水平与病情的关系

目的 观察OSAHS患者诱导痰中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox的水平,探讨OSAHS患者气道局部氧化应激与病情严重程度的关系.方法 对2007年9月至2008年6月华中科技大学附属同济医院呼吸科就诊并进行睡眠监测的30例OSAHS患者和23名健康体检者分别行痰诱导,睡前和晨起各1次.其中OSAHS组男27例,女3例,平均年龄(43±9)岁;健康对照组男21名,女2名,平均年龄(45±10)岁.痰细胞涂片并行细胞分类计数,以逆转录PCR法检测诱导痰细胞中NADPH氧化酶p22phox mRNA水平,以免疫细胞化学法检测诱导痰细胞中NADPH氧化酶p22phox蛋白的表达水平.结果 OSAHS组诱导痰细胞中巨噬细胞百分比为(34±10)%,低于对照组的(66±5)%;而中性粒细胞百分比为(65±10)%,高于对照组的(33±5)%,两组比较,差异均有统计学意义(t=15.051、14.359,P<0.05).诱导痰细胞中NADPH氧化酶p22phox阳性细胞主要为中性粒细胞和巨噬细胞.OSAHS组2次诱导痰细胞中NADPH氧化酶p22phox mRNA水平及中性粒细胞和巨噬细胞阳性率均明显高于对照组.OSAHS组晨起时NADPH氧化酶p22phoxmRNA的表达水平及中性粒细胞和巨噬细胞阳性率高于睡前,并与最低脉搏氧饱和度呈负相关,与呼吸暂停低通气指数呈正相关.结论 OSAHS患者存在气道局部NADPH氧化酶p22phox表达水平的变化,并与病情严重程度相关.     

肝脏线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖性异柠檬酸脱氢酶参与葡萄糖代谢机制的研究

目的:探讨肝细胞中线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖性异柠檬酸脱氢酶（IDH2）对葡萄糖代谢机制的影响。方法:分别用高糖或低糖处理小鼠正常肝细胞AML12细胞株,于24、48、72 h后检测IDH2 mRNA及蛋白表达。慢病毒转染法构建IDH2敲低（KD-IDH2组）、IDH2敲低对照（KD-Ctrl组）、IDH2过表...     

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与动脉粥样硬化

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶是一种多亚单位酶复合体,是细胞中一种可诱发的电子传递系统.尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶目前被认为是血管内生成活性氧的主要酶体,它的激活受蛋白激酶C等信号途径介导.研究表明NADPH氧化酶和近年来新发现的gp91phox同工酶即NOX蛋白家族可能通过损伤血管内皮、促进低密度脂蛋白氧化等参与动脉粥样硬化的发生和发展.     

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在脂多糖诱导的小鼠急性心肌损伤组织中的表达及意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的非吞噬细胞氧化酶(Nox)家族在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性心肌损伤组织中的表达及意义。方法选取8~10周龄无特定病原体C57/BL6雄性小鼠30只,随机分为对照组和LPS组,每组15只。LPS组小鼠通过腹腔注射大剂量LPS(10 mg/kg)诱导急性心肌损伤模型,对照组腹腔注射等量生理盐水,观察6 h后取材,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nox、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase 3)基因表达,Western blotting检测Nox 2、Nox 4、Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白表达,免疫组织化学法检测4羟基壬烯醛(4-HNE)表达,末端脱氧核糖核酸转移酶(Td T)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)切口末端标记技术(TUNEL)法检测心肌组织细胞凋亡,比较两组结果差异。使用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析,两组比较采用t检验。结果相比对照组,LPS组小鼠心肌Nox 2、Nox 4、Bax基因和蛋白以及Caspase 3蛋白表达水平明显升高,Bcl-2基因和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学检测结果表明相比对照组,LPS组心肌组织4-HNE表达明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果表明相比对照组,LPS组心肌组织心肌凋亡细胞明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 NADPH氧化酶通过调控氧化应激和细胞凋亡参与急性心肌损伤的发生发展。     

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与心血管疾病关系的研究进展

活性氧的增加与心血管疾病密切相关,而产生活性氧的主要酶体是尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶(NADPH氧化酶)。NADPH氧化酶对动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭的发生发展起着重要的作用;而心房颤动又可引起NADPH氧化酶的增加。     

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在血管性认知障碍中的作用及其机制的研究进展

氧化应激(OS)是导致血管性认知障碍(VCl)的因素之一.尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)产生的活性氧(ROS)是VCI重要的致病分子.VCI的危险因素如高血糖及缺血/再灌注等在上游增加NOX的活化;其他危险因素如高龄、高血压及卒中是NOX依赖ROS产生的下游损伤.VCI的成因包括与NOX相关的...     

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保护作用

目的观察尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)对阿霉素(ADR)损伤的大鼠心肌保护作用。方法将60只雄性健康Wistar大鼠随机分为ADR组、NADH组、ADR NADH组及对照组。在实验第8周处死大鼠.光镜下观察心肌形态结构及病理改变;用生化方法测定大鼠心肌组织、心肌细胞线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平。结果光镜下ADR NADH组大鼠心肌组织损伤程度较ADR组明显减轻;从心肌组织GSH-Px、SOD活性可以看出,与ADR组[(3.97±1.11.15.63±3.79)kU/g Pr]比较,ADR NADH组[(5.88±0.97,49.27±4.22)kU/g Pr]明显增高,二者比较差异有统计学意义(q=7.22、32.18,P<0.01);心肌组织MDA水平,ADR组[(4.55±1.51)μmoI/g Pr]明显高于ADR NADH组[(3.64±0.75)μmoL/g Pr],二者比较差异有统计学意义(q=8.48,P<0.01)。结论NADH对阿霉素性心肌损伤有一定的保护作用,这种保护作用可能主要与NADH提高受损心肌细胞抗氧化能力有关。     

结核分枝杆菌黏附素(HBHA)对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究

目的 探讨结核分枝杆菌粘附素(HBHA)对小鼠结核病实验模型的免疫治疗作用.方法 取在改良罗氏培养基上生长良好的结核分枝杆菌H37Rv两周培养物,制备成均匀菌悬液,每只小鼠尾静脉注射菌量为106 CFU.于感染2周后,分别对CPG组30 ug、HBHA组5 ug、CpG+ HBHA组(CpG 30 ug和HBHA 5 ug)及对照组腹腔注射生理盐水.于感染后4周脱颈处死小鼠,称取小鼠体重、肺脏和脾脏重量,对肺和脾组织进行菌落计数,观察肺病理改变.结果 各实验组肺组织的重量与体重和对照组相比稍有偏大,菌落计数中发现HBHA免疫治疗组明显优于空白对照组,在病理切片中对照组小鼠肺组织有大片肉芽肿形成,病理损害严重.其它各组肺部病变呈弥散分布,但病变程度明显轻于对照组,在抗酸染色中空白对照组有大量的抗酸杆菌存在,其它各组相对明显减少.结论 实验结果表明HBHA对治疗小鼠结核病变模型起一定的作用.     

rpoB,katG and inhA mutations in multi-drug resistant strains of Mycobacterium tuberculosis clinical isolates from southeast Mexico

Introduction

Previous knowledge of molecular mechanisms related with multi-drug resistances in tuberculosis is important if molecular diagnostic procedures want to be used in specific geographical regions. For that reason, the aim of this study was to investigate the mutations at rpoB, katG and inhA in multi-drug resistant tuberculosis isolates from Southeast Mexico.

荧光定量PCR技术快速检测rpoB基因突变及其临床应用

目的探讨荧光定量PCR技术检测基因突变的价值及其临床应用。方法针对结核分枝杆菌rpoB基因利福平耐药决定区（RifampicinResistartceDeterminingReglon，RRDR）526密码子和531密码子常见的突变形式设计探针（526CAC，526TAC，53ITCG和531TrG）．应用已知rpoB基因RRDR区序列的38株利福平耐药临床分离株和24株利福平敏感临床分离株以及5株非结核分枝杆菌菌株建立荧光定量PCR检测基因突变的方法。继而，应用该技术检测84份肺结核病例痰标本，与痰罗氏培养以及药敏结果进行比较．部分标本进行DNA测序证实。结果在38株利福平耐药、24株利福平敏感的临床分离株和5株非结核分枝杆菌中．其检测526密码子和531密码子突变的敏感性和特异性达100％。在84份哺结核病例的痰标本中，罗氏培养阳性62株．其中利福平耐药株48份．荧光定量PCR检测痰标本结核分枝杆菌DNA阳性为75例。荧光定量PCR检测到53l密码子突变65例，526密码子TAC突变7例。在48株利福平耐药株中，荧光定量PCR检测43株为531TTG突变．3株为526TAC突变，另2株利福平耐药株，经测序证实，1株514密码子．TTC插入突变，1株为511密码子CCG和516密码子GGC联合突变。结论荧光定量PCR技术能快速检测rpoB基因突变，并能作为I晦床肺结核病人早期快速耐药诊断的辅助手段。     

Length rather than a specific allele of dinucleotide repeat in the 5' upstream region of the aldose reductase gene is associated with diabetic retinopathy.

AIMS: To assess the possible contribution of a genetic factor to diabetic retinopathy. METHODS: (CA)n repeat length was investigated in the 5' upstream region of the gene coding for aldose reductase (AR), which is a key enzyme of the polyol pathway and plays a role in hyperglycaemia-induced tissue damage, in Japanese patients with Type 2 DM. RESULTS: The dinucleotide repeat length was significantly associated with proliferative diabetic retinopathy (PDR) (P= 0.029, Mann-Whitney U-test); i.e. shorter alleles were more prevalent in the PDR group than in the control group. CONCLUSIONS: (CA)n repeat length, rather than a specific allele, in the 5' upstream region of the AR gene is associated with diabetic retinopathy. These data suggest that the AR locus plays a role in genetic susceptibility to diabetic retinopathy and that dinucleotide repeats in genomic DNA may be related to disease predisposition.     

二代线性探针技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的价值

目的 评价二代线性探针技术(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称“GenoType 2.0”)快速检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对异烟肼与利福平耐药性的临床应用价值。方法 收集2017年4月至2019年4月天津市结核病控制中心参比实验室中疑似肺结核患者的痰标本共6315份,纳入涂阳、培阳且经菌群鉴定为MTB的349 株菌株为研究对象,分别采用表型药物敏感性试验(简称“比例法药敏试验”)和GenoType 2.0检测菌株对利福平、异烟肼的耐药性;并以比例法药敏试验结果为参考标准,评价GenoType 2.0的检测效能。结果 GenoType 2.0、比例法药敏试验和GenoType 2.0+比例法药敏试验检测349株MTB菌株对利福平敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株的检出率分别为86.53%(302/349)、87.97%(307/349)、86.25%(301/349),2.58%(9/349)、2.29%(8/349)、2.29%(8/349),10.89%(38/349)、9.74%(34/349)、11.46%(40/349),前者与后两者及后两者对敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株检出率差异均无统计学意义(χ²=0.322,P=0.851;χ²=0.112,P=0.946;χ²=0.546,P=0.761);对异烟肼敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株的检出率分别为79.94%(279/349)、80.23%(280/349)、79.65%(278/349),9.17%(32/349)、9.46%(33/349)、9.46%(33/349),10.89%(38/349)、10.32%(36/349)、10.89%(38/349),前者与后两者及后两者对敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株检出率差异均无统计学意义(χ²=0.071,P=0.965;χ²=0.017,P=0.991;χ²=0.061,P=0.970)。以比例法药敏试验为参考标准,GenoType 2.0对利福平和异烟肼耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为91.67%(44/48)和95.89%(70/73)、99.00%(298/301)和100.00%(276/276)、97.99%(342/349)和99.14%(346/349)、0.91和0.97。结论 GenoType 2.0对于利福平和异烟肼的耐药性检测具有较高的敏感度和特异度,加上其检测周期较短,可以满足临床对结核病早期诊断和及时治疗的需求。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。     

结核病患者N-乙酰基转移酶2基因型与异烟肼血药浓度关系的研究

目的 探讨结核病患者N-乙酰基转移酶2(NAT2)基因型与异烟肼(INH)血药浓度的关联性,为临床根据NAT2基因分型指导合理INH用药提供依据。 方法 应用PCR结合限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法对121例住院结核病患者NAT2基因型分布进行检测,同时应用液相色谱-串联质谱分析仪（LC/MS-MS）检测结核病患者服药2h后血浆INH浓度。所获数据采用单因素方差分析检测组间差异,进而采用Tamhane’s T2法进行两两比较,以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果121例结核病患者NAT2基因型中快速乙酰化型（RA,野生型）有55例,INH血药浓度为（1.86±1.28）μg/ml;慢乙酰化型（SA,纯合突变型）有17例,INH血药浓度为（5.86±2.10）μg/ml;中间乙酰化型（IA,杂合突变型）有49例,INH血药浓度（3.49±2.60）μg/ml。住院结核病患者整体INH血药浓度均值为（3.08±2.42）μg/ml。三型INH血药浓度比较,差异均具有显著统计学意义（RA与IA,P＝0.001;RA与SA,P＝0.002;IA与SA,P＝0.000）。结论 不同NAT2基因型人群对INH的代谢能力差异存在显著统计学意义,NAT2基因型分析对结核病患者INH用药具有重要指导意义。     

Metabolic Adaptation of the Hypertrophied Heart: Role of the Malate/Aspartate and α -Glycerophosphate Shuttles

Activation of the malate/aspartate and α -glycerophosphate shuttles (the NADH shuttles) has been identified in glycolytically active newborn myocardium. The goal of this study was to determine if the NADH shuttles and their regulatory genes are activated in hypertrophied myocardium as substrate utilization shifts away from fatty acids and toward glucose and lactate. Capacity of the shuttles was determined in cardiac mitochondria isolated one week, one month, and three months following aortic banding or sham operation. Myocardial steady-state mRNA and protein levels of regulatory enzymes were also measured. Despite a significant increase in left ventricular mass and activation of the atrial natriuretic peptide gene, no change in malate/aspartate nor α -glycerophosphate shuttle capacity was found at any of the three time points studied. Reactivation of the genes encoding the regulatory inner mitochondrial membrane proteins was not found in the hypertrophied myocardium, though these genes were down regulated one week following aortic-banding. These results suggest that sufficient malate/aspartate and α -glycerophosphate shuttle capacity exists in cardiac mitochondria to accommodate increased shuttle flux as hypertrophied myocardium becomes more glycolytically active.     

Accumulation of poly (adenosine diphosphate-ribose) by sustained supply of calcium inducing mitochondrial stress in pancreatic cancer cells

BACKGROUNDThe biochemical phenomenon defined as poly adenosine diphosphate (ADP)-ribosylation (PARylation) is essential for the progression of pancreatic cancer. However, the excessive accumulation of poly ADP-ribose (PAR) induces apoptosis-inducing factor (AIF) release from mitochondria and energy deprivation resulting in the caspase-independent death of cancer cells.AIMTo investigate whether sustained calcium supply could induce an anticancer effect on pancreatic cancer by PAR accumulation.METHODSTwo pancreatic cancer cell lines, AsPC-1 and CFPAC-1 were used for the study. Calcium influx and mitochondrial reactive oxygen species (ROS) were observed by fluorescence staining. Changes in enzyme levels, as well as PAR accumulation and energy metabolism, were measured using assay kits. AIF-dependent cell death was investigated followed by confirming in vivo anticancer effects by sustained calcium administration.RESULTSMitochondrial ROS levels were elevated with increasing calcium influx into pancreatic cancer cells. Then, excess PAR accumulation, decreased PAR glycohydrolase and ADP-ribosyl hydrolase 3 levels, and energy deprivation were observed. In vitro and in vivo antitumor effects were confirmed to accompany elevated AIF levels.CONCLUSIONThis study visualized the potential anticancer effects of excessive PAR accumulation by sustained calcium supply on pancreatic cancer, however elucidating a clear mode of action remains a challenge, and it should be accompanied by further studies to assess its potential for clinical application.