新型环烯烃聚合物微流控芯片的设计及其在大肠埃希菌O157:H7快速检测中的应用

目的建立一种可快速检测大肠埃希菌O157:H7的新型微流控芯片方法,用于细菌的早期鉴别与诊断。方法采用激光雕刻技术制作微流控芯片,在OCA光学透明胶上雕刻1条微通道,再将上、下2层环烯烃聚合物(COP)不可逆键合,最后通过免疫荧光方法检测大肠埃希菌O157:H7。比较微流控芯片法与培养法检测结果的总体符合率。结果成功建立了一种新型、简易的微流控芯片系统,对大肠埃希菌O157:H7的检测限为10~3CFU/mL,且有良好的特异性和可重复性,与培养法的总体符合率为95%。结论新型COP塑料芯片系统可实现对大肠埃希菌O157:H7的低成本、快速检测。     

胶体金免疫层析法检测大肠杆菌O157:H7的实验研究

目的:建立一种简单实用的胶体金免疫层析法用于食品样品中大肠杆菌O157:H7的快速筛查.方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒.标记抗E.coli O157:H7单克隆抗体,制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其特异性、灵敏度和稳定性进行了测试和评价.结果:该试纸条特异性较好,不与其他受试菌株发生交叉反应,检测灵敏度为105 CFU/mL.120份人工污染E.coli O157:H7模拟食品样本增菌后检测,该法检测阳性118份,灵敏度高达98.3%.结论:本实验成功研制了E.coliO157:H7胶体金免疫层析试纸条,该试纸条具有灵敏度高、特异性好、检测速度快、操作简便等优点,可用于现场大量样品的初筛.     

一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定

目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.     

阀控多通道微流控芯片高通量快速检测大肠埃希菌O157:H7

摘要：目的：建立一种基于气阀控制的多通道微流控芯片系统,实现高通量、低成本、快速检测大肠埃希菌O157:H7。 方法：采用集成多条反应通道和控制气阀的微流控芯片,用气阀控制芯片通道内反应的顺序,在通道交叉处构建出10个检测区。然后以免疫荧光技术为检测手段,检测水和粪便标本中的大肠埃希菌O157:H7。 结果：成功建立了一种基于气阀控制的多通道微流控芯片系统,并应用于大肠埃希菌O157:H7的快速检测。此芯片一次可同时检测10个样本,单个样本检测时间少于10 min、试剂消耗量仅为0.5 μL,对大肠埃希菌O157:H7的最低检测限为1×10³ CFU/mL。检测大肠埃希菌O157:H7组的荧光信号（4 122±164）与大肠埃希菌ATCC 25922（2.67±0.45）及伤寒沙门菌（3.33±0.94）比较,差异有统计学意义（t分别为35.78和30.79,P均<0.01）。批内精密度为5.2%。将本法用于模拟临床样品中大肠埃希菌O157:H7的测定,敏感性和特异性分别为62%和100%,与培养法的总体符合率为81%。 结论：于气阀控制的多通道微流控芯片系统可实现高通量、低成本、快速检测大肠埃希菌O157:H7,有望成为一种高效和快捷的新检测方法。     

戊二醛对大肠杆菌O157:H7杀灭效果及影响因素的研究

研究戊二醛对大肠杆菌O157:H7的杀灭效果及其影响因素,采用悬液定量杀菌试验方法进行了实验室观察。结果,以含150 mg/L戊二醛的消毒液对大肠杆菌O157:H7作用9 m in,平均杀灭率为99.996%。在150 mg/L戊二醛浓度下,测得杀灭大肠杆菌O157:H7的D值为2.63 m in、浓度系数1.11、温度系数为1.54。将含戊二醛150mg/L的溶液pH值调整为5、7、9时,作用5 m in,平均杀灭率分别为96.54%、99.82%、100%。菌悬液中含20%以上小牛血清对含150 mg/L戊二醛杀灭该株大肠杆菌的效果有明显影响。结论,戊二醛消毒剂对大肠杆菌O157:H7杀灭效果明显受其浓度、作用时间、作用温度及有机物含量的影响。     

中国部分地区人群和动物中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7分布特征

自20世纪90年代以来,中国大部分省、市、自治区相继开展了人群和动物的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7病原监测.监测结果显示:①在不同的地区和时间,人群中O157∶H7的感染率/带菌率不同;②动物中O157∶H7的带菌率存在地区、时间及种群的差异;③人群O157∶H7的感染与动物带菌存在关联.提示,加强人群和动物的病原监测、揭示O157∶H7在人群和动物中的流行规律、降低动物的感染或带菌率对预防与控制人群肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的感染具有重要意义.     

中国部分地区人群和动物中肠出血性大肠埃希菌O157：H7分布特征

自20世纪90年代以来，中国大部分省、市、自治区相继开展了人群和动物的肠出血性大肠埃希菌O157：H7病原监测。监测结果显示：①在不同的地区和时间，人群中O157：H7的感染率，带菌率不同；②动物中O157：H7的带菌率存在地区、时间及种群的差异；③人群O157：H7的感染与动物带菌存在关联。提示，加强人群和动物的病原监测、揭示O157：H7在人群和动物中的流行规律、降低动物的感染或带菌率对预防与控制人群肠出血性大肠埃希菌O157：H7的感染具有重要意义。     

浙江省检出带毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的了解肠出血性大肠杆菌O157:H7在浙江省人群中的感染情况和菌型分布特征,制定相应的防治对策。方法5～10月份肠道传染病高发季节,在浙江省各地(市)肠道门诊采集腹泻病人粪便,对O157:H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。结果1998年开始至今的人群监测中,共检出2株无毒力的肠出血性大肠杆菌O157:H7。PCR毒力基因检测,SLT2和Hly阳性,SLT1阴性。结论与以往不同,此次分离到带有毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7,说明浙江省O157:H7在菌型特征方面发生了变化,对人群健康构成了更大的威胁。     

Escherichia coli O157 infection mimicking acute appendicitis: usefulness of computed tomography for differential diagnosis

A 19-year-old man was admitted to our hospital with acute abdominal pain in the right lower quadrant. He had had mild diarrhea, of 1 days duration, 2 days before admission. Although physical findings were consistent with a diagnosis of acute appendicitis, computed tomography findings showed marked wall thickening from the ascending colon to the cecum, findings which were similar to those in patients with hemorrhagic colitis due to Escherichia coli O157. Instead of emergency laparotomy, the patient was treated with antimicrobial agents, which led to rapid recovery. Diagnosis of intestinal infection due to E. coli O157 was established later, as serum antibody against lipopolysaccharide of E. coli O157 was positive. E. coli O157 infection should be included in the differential diagnosis of diseases that exhibit marked wall thickening of the right colon on CT in patients with acute abdominal pain in the right lower quadrant who have mild transient diarrhea.     

连续消毒中大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力的变化及其与质粒关系的研究

为了研究 5 0代连续消毒中大肠杆菌O15 7:H7对两种消毒剂抵抗力的变化及其与质粒的关系 ,用二氯异氰尿酸钠、碘伏连续消毒 6株大肠杆菌O15 7:H75 0代 ,对比消毒前后试验菌对两种消毒剂的抵抗力 ,观察消除试验菌质粒后抗力的变化。结果 ,连续消毒 5 0代后 ,试验菌对二氯异氰尿酸钠、碘伏的抵抗力增加。消除原始菌的小质粒后 ,细菌对消毒剂的抵抗力不变 ;消除原始菌的所有质粒后 ,试验菌对二氯异氰尿酸钠的抵抗力不变 ,对碘伏的抵抗力增加 ;消除连续消毒后试验菌的质粒后 ,其对二氯异氰尿酸钠的抵抗力降低到原始菌的水平 ,对碘伏的抵抗力增加。试验结果提示 ,连续消毒会使试验菌对二氯异氰尿酸钠、碘伏的抵抗力增加 ;试验菌对二氯异氰尿酸钠抵抗力增加的原因可能与质粒pO15 7相关 ,对碘伏抵抗力增加与质粒pO15 7无直接关系。     

江苏省徐州市出血性大肠埃希菌O157∶H7 感染性腹泻的监测研究

目的 系统监测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(O157∶H7)感染并发肾衰(HUS)、腹泻患者、宿主动物、蝇类、食品携带O157∶H7的状况,为预警监测体系建立提供参考依据。 方法 采集徐州市疫情暴发点和监测点腹泻患者粪便、蝇类和食品标本分离菌株。应用PCR技术检测志贺毒素基因stx。 结果 1999-2011年徐州市累计报告O157∶H7引起的感染性腹泻并发HUS 132例。腹泻患者带菌率1.2%、蝇类带菌率0.5%、食品带菌率1.0%、宿主动物带菌率3.1%。菌株带毒由stx1和stx2共存发展为以不带毒为主。 结论 江苏省徐州市O157∶H7感染自1999年、2000年暴发流行后,该市疫情一直稳定。腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率、蝇类带菌率、食品带菌率及菌株带毒情况发生了改变。     

医院常用消毒剂对肠出血性大肠杆菌O157:H7杀灭效果试验观察

为了解医院常用消毒剂对肠出血性大肠杆菌O157:H7的杀灭效果及抗力变化,采用悬液定量杀菌试验进行了实验观察。结果,医院常用10种消毒剂在产品说明书规定的使用浓度下,对肠出血性大肠杆菌O157:H7杀灭率达到99.99%以上所需最短时间为5 m in,每次试验都可以达到合格要求;作用2 m in,则有部分试验杀灭率达不到99.9%。结论,10种常用消毒剂在常用浓度下对大肠杆菌O157:H7作用5 m in均可达到有效消毒效果,未发生明显抗力变化。     

连续消毒中大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力变化与DNA关系的研究

为了解50代连续消毒中大肠杆菌O157:H7对4种消毒剂抗力的变化以及抗力与染色体DNA的关系,用4种消毒剂连续消毒大肠杆菌O157:H750代,用XbaⅠ酶切试验菌染色体DNA,对比消毒前后试验菌对4种消毒剂的抗力及染色体DNA的变化。结果,连续消毒50代后,试验菌对二氯异氰尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加,细菌染色体DNAXbaⅠPFGE酶切图谱均发生一定的改变;试验菌对洗必泰的抗力不变,细菌染色体DNAXbaⅠPFGE酶切图谱不变。结论,细菌染色体上携带有抵抗二氯异氰尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力的基因,连续消毒会使试验菌对此3种消毒剂的抗力增加,抗力增加的原因可能与细菌染色体DNA结构的改变相关。     

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7质粒 pO157 上毒力因子的研究进展

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7是一种重要的致病菌,可以引起不同程度人类疾病。目前已知的O157 ∶ H7的致病因子有3个,志贺毒素、粘附抹平效应毒力岛和特异性质粒pO157。其中pO157在致病过程中的作用并不十分清楚。本文结合近年来的研究进展,介绍了pO157上与细菌致病性有关的毒力因子。     

2008-2010年浙江省衢州市动物粪便O157∶H7监测及其意义

目的 动态了解浙江省衢州市家禽、家畜肠出血性大肠埃希菌O157∶H7带菌情况和菌型分布特征,以制定相应的防制对策。 方法 6、7月肠道传染病高发季节,采集动物粪便标本,对O157∶H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。 结果 共采集动物粪便标本914份,检出O157∶H7菌2株,总带菌率为0.22%,其中羊、牛各检出1株,带菌率分别为0.62%和0.71%。经PCR检测,其中1株携带stx2+ hly+ eaeA毒力因子,1株hly+eaeA阳性,stx1均为阴性。 结论 衢州市再次分离到带有毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,对人群健康构成了威胁,应加强O157∶H7的综合监测。     

不同来源STECO157:H7生物学特性研究

目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.     

Laboratory investigation of an Escherichia coli O157:H7 strain possessing a vtx2c gene with an IS1203 variant insertion sequence isolated from an asymptomatic food handler in Japan

We isolated an Escherichia coli O157:H7 strain that was negative for verocytotoxin production, but positive for the vtx2 gene using commercial kits, from an asymptomatic food handler. The laboratory investigations revealed that a 1310-bp insertion sequence, IS1203 variant, was present in the B subunit-coding region of the vtx2c gene.     

Identification of tuna species in commercial cans by minor groove binder probe real-time polymerase chain reaction analysis of mitochondrial DNA sequences

Three different minor groove binder (MGB) probe assays have been developed for rapid and accurate identification of the species commonly used for production of canned tuna, i.e. yellowfin (Thunnus albacares), bluefin (Thunnus thynnus) and albacore (Thunnus alalunga) tunas. The assays targeting the mitochondrial cytochrome b gene were able to discriminate efficiently between the three species contained in fresh or canned tunas and did not react with other Scombroidei that were tested. A correct species prediction was obtained even from artificial mixtures prepared with different amounts of the reference tuna species and subjected to the sterilisation treatment. Testing of 27 commercial canned tunas by PCR-RFLP, MGB probe assays and sequence analysis showed a concordance of 100% between the last two techniques, whereas by using PCR-RFLP several samples were uncharacterised or mischaracterised.These results make the established MGB probe assays an attractive tool for direct and rapid species identification in canned tuna.     

Radiologic findings in hemorrhagic colitis due toEscherichia coli 0157:H7

Hemorrhagic colitis due toEscherichia coli 0157:H7 is a distinct clinical entity characterized by abdominal pain, watery diarrhea progressing to bloody diarrhea, and little or no fever. It has been reported to have a mortality as high as 31%. This form of colitis is not described in the radiologic literature. This paper describes the radiographic findings, and stresses the need for radiologists to be familiar with the disease in order to assist in early diagnosis. Key clinical and epidemiological features are reviewed.     

Consanguineous hemolytic uremic syndrome secondary to Escherichia coli O157:H7 infection treated with aggressive therapeutic plasma exchange

We describe the successful management of an elderly husband and wife with Escherichia coli O157:H7 associated hemolytic uremic syndrome (HUS) treated with aggressive therapeutic plasma exchange (TPE) with replacement with fresh frozen plasma. Following twelve TPEs (three 1.5 volume; nine 1 volume), the husband's platelet count increased from 45 × 10⁹/L to 183 × 10⁹/L. Following ten 1.5 volume TPEs, the wife's platelet count increased from 30 × 10⁹/L to 193 × 10⁹/L. This is the first known occurrence of E. coli O157:H7 associated HUS in an elderly husband and wife successfully treated with aggressive TPE. We conclude that early, aggressive TPE should be considered and may be life‐saving for E coli O157:H7 associated HUS in the elderly. J. Clin. Aperesis 16:155–156, 2001 © 2001 Wiley‐Liss, Inc.