跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA （COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用胶带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中 MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果（1）组织学关节软骨评分：跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）MMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01),跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01)。（3）COL-ⅡmRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、蛋白多糖基因(ACAN)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~75mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞Col Ⅱ和ACAN mRNA的表达量均较对照组显著增加。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞ColⅡ及ACAN mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

高选择性非甾体抗炎药塞来昔布对大鼠骨关节炎关节软骨的影响

目的探讨长期应用高选择性NSAIDs（塞来昔布）对大鼠骨关节炎关节软骨代谢的影响。方法采用左侧跟腱切除术诱发wistar大鼠同侧膝关节骨关节炎（OA），分4组，每日给赛来昔布24mg／kg（CE组）、布洛芬72mg／kg（IBP组）、吲哚美辛9mg／kg（IN组）及生理盐水（NS组）。观察3、6及9个月后关节软骨组织学、蛋白多糖（PG）含量、Ⅱ型胶原表达及软骨细胞超微结构的变化。结果CE、NS组软骨表现为OA的渐进过程，CE组改变较NS组轻；IN组软骨损害明显重于NS组；IBP组介于两者之间。CE明显增加OA软骨基质PG含量；IBP的短、中期应用对PG的含量无明显影响，其长期应用减少PG含量；IN明显减少PG含量。CE、IBP促进OA软骨细胞Ⅱ型胶原的表达，IN抑制Ⅱ型胶原的表达。电镜观察：CE组、NS组的软骨细胞表现类似，但CE组可见发达的粗面内质网、高尔基复合体；IBP组：细胞周晕逐渐消失，核染色质结构模糊；IN组：软骨细胞的电子密度明显增加、溶解性坏死多见。结论塞来昔布可抑制大鼠OA关节软骨的退变，对退变的关节软骨可能有一定的修复作用。     

关节软骨细胞线粒体功能障碍与软骨退变的关系

目的:探求骨关节炎患者软骨细胞中线粒体功能状况及线粒体功能与软骨退变的关系.方法:收集2012年4月至10月在北京大学第一医院因骨关节炎(osteoarthritis,OA)行膝关节置换术患者的关节软骨10例.根据Outerbridge分级对所取软骨组织进行透射电子显微镜观察.获取正常及OA软骨细胞,用透射电子显微镜观察2组软骨细胞线粒体形态.定量检测正常及OA软骨细胞线粒体呼吸链复合体酶1,2,2+3,4及ATP合酶活力,用JC-1法检测2组软骨细胞线粒体膜电位.获取10例正常软骨细胞并将其分为正常对照组和鱼藤酮处理组,比较2组细胞线粒体超微结构、线粒体膜电位、细胞凋亡及Ⅱ型胶原含量.结果:软骨组织块及软骨细胞电子显微镜均发现病变的软骨细胞线粒体发生肿胀,外膜破裂,嵴破坏、消失.OA软骨细胞线粒体膜电位下降,红绿荧光比为1.50,较正常细胞(2.58)低.OA软骨细胞呼吸链复合酶1,2,2+3,4及ATPase活力都较正常组低,但差异无统计学意义(P =0.109,0.197,0.098,0.169,0.145).鱼藤酮处理的细胞线粒体出现类似于OA软骨细胞的形态变化.JC-1法示正常软骨细胞红绿荧光比为2.58;鱼藤酮组细胞为1.78.细胞凋亡检测示正常软骨细胞凋亡率为4.38％,鱼藤酮组细胞为7.53％.正常软骨细胞Ⅱ型胶原含量为(72.9±24.3) μg/L,鱼藤酮组为(44.63±7.11)μg/L,较正常组低(P =0.044).结论:OA软骨细胞中存在线粒体功能障碍,破坏软骨细胞线粒体功能会导致软骨细胞凋亡率增加,分泌Ⅱ型胶原的能力下降,从而促进软骨退变.     

益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的防治作用

目的：研究益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠模型关节软骨退变的防治作用及其机制。 方法：1月龄SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和益气化瘀方组,每组各30只。模型组,益气化瘀方组大鼠通过肩关节离断术＋直立位诱导法建立大鼠膝骨关节炎模型。益气化瘀方组大鼠分别于5、7、9月龄（即造模术后4、6、8月）开始用药,连续用药1个月。3组大鼠分别于6、8、10月龄（即造模术后5、7、9月）处死,每次10只。处死后取大鼠膝关节,行番红O／固绿染色观察关节形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测各组关节软骨内Ⅱ型胶原基因（type Ⅱ collagen gene,Col2A1）、聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）以及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的情况。 结果：模型组关节软骨结构破坏严重,而益气化瘀方组大鼠关节软骨退变较模型组明显减轻。实时荧光定量PCR结果显示,益气化瘀方组6和10月龄大鼠膝关节软骨Col2A1、Agc1以及TIMP-1 mRNA表达量高于模型组（P〈0．01,P〈0．05）,MMP-13 mRNA表达与模型组比较差异无统计学意义;益气化瘀方组8月龄大鼠Agcl mRNA表达明显高于模型组（P〈0。01）,MMP-13 mRNA表达明显低于模型组（P〈0．01）。 结论：益气化瘀方可通过促进软骨合成聚集蛋白聚糖与Ⅱ型胶原,延缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变。     

强力霉素对OA模型软骨中Ⅱ型胶原和MMP-13表达的影响

目的：通过观察强力霉素对兔膝关节制动骨关节炎模型软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13表达的影响,探讨其对骨关节炎的治疗作用及其作用机制。方法：健康成年新西兰大白兔18只,随机分为正常组、对照组和给药组,每组各6只。对照组和治疗组兔左下肢以石膏固定于伸直位4周,然后治疗组每日给予口服强力霉素治疗。4周后同时处死,观察股骨内髁关节面的病理改变,并检测软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13水平。结果：治疗组关节软骨增生性反应较对照组明显减轻。Mankin评分和Ⅱ型胶原含量增高（P〈0．01）,基质金属蛋白酶-13表达减少（P〈0．01）。治疗组与对照组和正常组三组之间相互比较均有显著统计学差异。结论：强力霉素可增高Ⅱ型胶原含量,改善软骨结构,其作用与强力霉素抑制软骨基质金属蛋白酶-13的表达有关。     

骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞保护作用的机理探讨

[目的]观察骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原(collage Ⅱ)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。[方法]SD大鼠10只,给予骨炎定2.4 g·kg-1·d-1灌胃,空白对照组给予等容积生理盐水灌胃,连续1个月,采血得含药血清和空白血清;从髋关节炎行关节置换术中获取离体股骨头关节软骨,进行软骨细胞分离培养;治疗组加入骨炎定含药血清,空白对照组加入空白血清,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对软骨细胞增殖的影响,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测含药血清对软骨细胞iNOS和collage Ⅱ信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。[结果]骨炎定含药血清可促进软骨细胞增殖,降低iNOS mRNA的表达,增强collage ⅡmRNA的表达,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]补肾益气活血方剂骨炎定治疗骨性关节炎的疗效可能与其促进软骨细胞增殖,抑制iNOS表达,增强Ⅱ型胶原表达,保护软骨细胞的作用有关。     

同种异体组织工程化软骨组织的生化分析

目的 以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异。方法 以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下。按不同时间段取材,Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较。结果 新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而Ⅱ型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异。结论 胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中Ⅱ型胶原的含量与正常关节软骨接近。     

胶原-纤维蛋白混合凝胶对关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原的影响

目的：以胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体在体外进行关节软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,研究载体对软骨细胞在其中的表达及合成Ⅱ型胶原的影响。方法：取2周龄的新生兔关节软骨,经消化,将获得的软骨细胞与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合,制成软骨培养物并在体外培养。培养第3周时,取材进行Masson染色、Ⅱ型胶原寡核苷酸探针原位杂交和Ⅱ型胶原的免疫组化观察。 结果：体外培养3周,培养物内细胞大部分存活, Masson染色形成软骨陷窝,同源性细胞簇出现,细胞周围有蓝色物质环绕存在,原位杂交证实其软骨细胞表达Ⅱ型胶原mRNA,免疫组化证实软骨细胞分泌Ⅱ型胶原。 结论：用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可促进关节软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原,Ⅱ型胶原是软骨组织最主要的细胞外基质成分。     

益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎关节软骨细胞胶原和基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的：探讨益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎（KOA）模型软骨细胞Ⅱ型前胶原基因（Col2A1）、X型胶原基因（ColX）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）mRNA表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为假手术组、模型组和益气化瘀补肾方组,每组12只。模型组和益气化瘀补。肾方组家兔采用改良Hulth方法复制KOA模型,假手术组仅切开膝关节表面的皮肤。益气化瘀补肾方组家兔于造模4周后连续用药1个月。观察各组软骨病理形态学变化及Col2A1、ColX和MMP-13mRNA变化。结果：模型组关节软骨结构破坏较严重,而益气化瘀补肾方组家兔关节软骨退变较模型组明显减轻。益气化瘀补。肾方组家兔膝关节软骨Col2A1mRNA表达明显高于模型组（P〈0．01）,ColX、MMP-13mRNA表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）,但与假手术组比较仍有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：益气化瘀补肾方可通过促进软骨合成Col2A1和抑制MMP-13及ColX胶原以延缓KOA家兔关节软骨的退变。     

DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

 目的 检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者中DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法 用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组（P=0.014）和缓解期组（P=0.030）显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组（P=0.264）相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数（SLE disease activity index,SLEDAI）呈现负相关（P<0.05）。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组（P=0.003）显著升高（P<0.05）;缓解期的CD11a表达水平与对照组（P=0.250）和缓解期组（P=0.069）相比差异无统计学意义（P>0.05）;SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关（P<0.05）。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性（P>0.05）。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。     

百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制

目的探索关节腔内注射百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制。方法选用新西兰大白兔构建动物模型,分为百里醌组、骨关节炎组和假手术组各20只,观察并记录实验大白兔6min内步行距离。术后9周处死动物取左膝关节标本进行大体组织学Gross评分,切片行苏木精-伊红（HE）染色、番红染色后进行组织病理学Mankin评分,采用RT-PCR检测3组大白兔关节软骨中基底金属蛋白酶-13（MMP-13）、基底金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）和2型胶原（CollagenⅡ）等靶基因表达水平。结果百里醌组大白兔的行走距离明显大于骨关节炎组（P＜0.05）;而Gross评分、Mankin评分均低于骨关节炎组（均P＜0.05）。与骨关节炎组比较,百里醌组MMP-13mRNA表达水平明显下降（P＜0.05）,TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达水平明显上升（均P＜0.05）。结论百里醌对兔骨关节炎模型的关节软骨具有保护作用,可以减少疼痛,延缓骨关节炎的进展。百里醌可能通过下调MMP-13mRNA表达,上调TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达的分子机制实现保护作用。     

同种异体组织工程化软骨组织的生化分析

目的以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异.方法以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下.按不同时间段取材, Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较.结果新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而II型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异.结论胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中II型胶原的含量与正常关节软骨接近.     

大骨节病与骨关节病软骨组织死亡相关因子表达的比较

目的观察大骨节病软骨组织中程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5, PDCD5）和早期生长反应蛋白1（early
growth response protein-1, EGR-1）表达的变化及其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法收集来自大骨节病患者关节软骨（KBD
组）10例,同时收集15例骨关节炎病人关节软骨（OA组）作为疾病对照,收集6例正常软骨作为健康对照（正常组）。采用免疫组化
染色法检测3组关节软骨组织中死亡受体调节因子PDCD5和EGR-1表达变化,并在显微镜下计数和分析3组关节软骨不同分层
间阳性表达率的显著性差异。结果（1）KBD软骨中层PDCD5阳性细胞表达率（41.35±2.97）%显著高于OA组（26.48±2.04）%和
正常组（19.02±1.88）%（P=0.001和P=0.000）,KBD软骨深层显著高于正常组和OA组（P=0.000和P=0.029）,OA组也高于正常组
（P=0.038）,而3组间的表层软骨细胞PDCD5阳性率无差异（P>0.05）;（2）在KBD软骨表层,EGR-1表达显著高于OA软骨和正常
软骨表层（P=0.000和P=0.000）,3组软骨的阳性表达率分别为（27.94±3.09）%、（3.20±1.49）%和（12.66±1.06）%,KBD软骨中层
EGR-1阳性细胞表达率显著低于OA组软骨（P=0.002）,而高于正常软骨（P=0.017）,KBD软骨和OA软骨深层阳性率均明显高于
正常组（P=0.000和P=0.001）,而KBD组和OA组的平均阳性率无统计学差异（P=0.187）;（3）KBD组与正常组的PDCD5和EGR-1
分别在3个软骨细胞层的表达均无相关性,而PDCD5和EGR-1在OA关节软骨表层呈强正相关。结论KBD软骨深层PDCD5显
著上调,而软骨表层和深层EGR-1显著高表达,提示这两种重要的细胞死亡相关因子在大骨节病软骨破坏过程中发挥重要作用。
     

Ⅲ型胶原与骨关节炎

Ⅲ型胶原是一种细胞外的结构蛋白,属于胶原家族的一种,广泛存在于机体组织器官中,其在骨关节炎关节软骨中的表达较正常关节软骨高。骨关节炎时关节软骨以Ⅲ型胶原沉积为主的纤维化改变可影响关节局部的细胞代谢及生物力学特性,本文拟通过对近年来关于Ⅲ型胶原的研究进行综述,总结Ⅲ型胶原在骨关节炎关节软骨中的表达及代谢特点。     

超声波治疗兔膝骨关节炎对MMP-1和MMP-13表达的影响

目的探讨兔膝骨关节炎模型软骨基质金属蛋白酶(MMP)-1、-13超声波治疗前后在软骨组织中的表达及其作用机制。方法 30只新西兰大白兔随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)和超声波治疗组(C组),每组10只。B、C组骨关节炎造模后6周,C组实施超声波治疗,8周后取各组软骨予HE染色,免疫组化行MMP-1和MMP-13分析,观察软骨HE改变、MMP-1和MMP-13表达的变化。结果 HE染色结果采用Mankin′s评分比较,A组与B组、B组与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。软骨免疫组化MMP-1、-13测定,A组与B组、B组与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论超声波能有效治疗膝OA,其作用机制可能是减少软骨MMP-1、-13的含量,降低Ⅱ型胶原的降解、促进新的Ⅱ型胶原的生成,从而有利于软骨细胞外基质的合成,有利于软骨细胞的修复。     

p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系研究

目的:研究p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系。方法:对20例骨关节炎患者(OA组)及10例正常膝关节软骨组织(对照组),用实时定量PCR(real-time PCR)、免疫组化等方法检测p53及Beclin1在膝关节软骨中的表达与分布,并对两者进行相关性分析。结果:p53在OA组的表达明显高于正常对照组(P0.05),OA组关节软骨组织中Beclin1的表达量明显低于正常对照组(P0.01),p53与Beclin1在软骨组织中表达呈负性相关(r=-0.629,P0.05)。结论:骨关节炎中p53的高表达能够抑制软骨细胞自噬,从而减弱软骨细胞对凋亡抵抗能力,促进软骨细胞凋亡。     

透明质酸凝胶中肌源性干细胞与透明软骨联合培养的实验研究

 摘　要：目的 探讨肌源性干细胞与软骨细胞混和培养体外成软骨的可行性。方法 分离培养、扩增传代兔MDSCs及关节软骨细胞,二者按一定比例混和,6×1010/L密度接种于5%浓度的透明质酸凝胶为共培养组,以相同密度的单纯MDSCs和单纯软骨细胞作为阴性与阳性对照。倒置相差显微镜下观察,10d后行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达。结果 5d后镜下见共培养组MDSCs形态由梭形向多边多角形转化,10d后细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测与阳性对照组相同,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达。阴性对照组在体外培养过程中未分化为软骨细胞. 结论:软骨微环境在MDSCs成软骨分化过程中具有重要作用,软骨细胞能有效地诱导MDSCs向软骨样细胞分化,透明质酸凝胶可以作为软骨组织工程的良好载体。     

X型胶原基因在特发性脊柱侧凸患者顶椎椎间盘内表达的初步研究

目的　研究X型胶原基因在椎间盘内的分布及其在特发性脊柱侧凸发病中的作用。方法　收集 14例特发性脊柱侧凸患者顶椎及中间椎椎间盘共 2 8个 ,13例已知病因的脊柱侧凸患者顶椎及中间椎椎间盘共 2 6个为对照。 3例突然死亡的正常青少年椎间盘共 6个作为正常对照。采用免疫组织化学技术和RNA探针原位杂交技术研究X型胶原基因mRNA在椎间盘内不同部位的分布。终板软骨内X型胶原原位杂交图像输入图像分析系统 ,比较X型胶原mRNA含量在不同部位的分布。结果　X型胶原主要分布于肥大的软骨细胞周围 ,mRNA分布于终板软骨内肥大的软骨细胞。在少量侧凸患者髓核内也可见其少量阳性表达 ,但与病因无关。特发性侧凸组顶椎及中间椎 ,已知病因组顶椎及中间椎X型胶原mRNA含量均高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,而特发性侧凸组与已知病因组间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论　X型胶原主要分布于终板软骨内肥大软骨细胞 ,髓核内部分类软骨细胞也具有分泌作用。侧凸患者X型胶原表达量显著增高主要由于长期应力引起了软骨的早期钙化。X型胶原在侧凸患者髓核内的表达可能是髓核内类软骨细胞异常应力下分泌的结果     

碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响

目的 对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响.方法 分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O (Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50 ng/mL bFGF-多孔钽软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达.结果 Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50 ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A～D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显(P＜0.05);组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24 h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P＜0.05),组间差异也有统计学意义(P＜0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P＜0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A～D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P＜0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P＜0.05).结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨细胞分泌功能.