DOX联合HMME-PDT对人肝癌细胞HepG2联合作用的研究

目的:初步探讨阿霉素(DOX)联合血卟啉单甲醚介导的光动力疗法(HMME-PDT)对人肝癌细胞(HepG2)的作用及可能的机制.方法:实验分对照组、单独PDT组、单独DOX组和联合作用组.PDT组所用的光敏剂剂量为2.5μg/mL,能量密度为0.2 J/cm2、0.4 J/cm2、0.8 J/cm2、1.6 J/cm2和3.2 J/cm2.DOX组所用的DOX浓度为0.1 μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL.联合作用为不同剂量单独作用的组合,联合时序为PDT后立即加入阿霉素(PDT DOX)或阿霉素先于PDT24h加入(DOX PDT).MTT法检测24h后的细胞活性抑制率,并用金氏公式分析联合效应.荧光显微镜观察不同处理组阿霉素的摄取情况.结果:MTT法结果表明,联合作用的细胞抑制率高于单独作用,这在PDT DOX的联合时序作用中表现更为明显.金氏公式分析表明,PDT DOX的联合作用相对DOX PDT的联合作用产生更明显的协同或相加效应.荧光显微镜实验可以观察到联合作用明显提高了细胞对阿霉素的摄取,并且随着联合剂量的加大摄取加强.结论:相对单独作用,联合作用有更高的细胞活性抑制率,联合效应与联合时序有关,PDT DOX的联合作用的联合效果好.联合作用产生相加或协同效应的机制之一可能是因为PDT处理改变了细胞膜通透性从而更有利于细胞对阿霉素的摄取,最终提高作用效果.     

HMME介导的光动力疗法诱导鼠肝癌MM45T-Li细胞凋亡的实验研究

目的 探讨光动力疗法对鼠肝癌细胞MM45T-Li凋亡的影响.方法 以血卟啉单甲醚(HMME)为光敏剂,630 nm激光为激发光源的光动力疗法作用于鼠肝癌MM45T-Li细胞.细胞分别与2.5、5、10、20.μg/ml的光敏剂孵育4h后,用不同能量密度的激光照射;MTr法检测HMME的暗毒性以及光动力疗法作用24h后的细胞活性;Hoechst细胞核荧光染色法观察HMME介导的光动力疗法对细胞凋亡的影响.结果 在不照光的情况下各组浓度的HMME对细胞活性无明显抑制作用.当HMME浓度为10、20 μg/ml时,PDT对细胞活性的抑制率随能量密度的增加而增加.Hoechst染色观察PDT作用12h后部分细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变,5.4 J/cm2及7.2 J/cm2组的凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 HMME介导的光动力疗法可以有效地诱导鼠肝癌MM45T-Li细胞凋亡.     

HMME-PDT对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及影响因素初步研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及可能的影响因素。方法:以HMME作为光敏剂、发光二极管(LED)为光源的光动力疗法作用于Tca8113细胞。采用MTT法分别检测光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度对Tca8113细胞抑制率的影响。HE染色观察细胞形态学改变,Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况。结果:细胞抑制率随光敏剂孵育时间延长而增大,呈时间依赖效应;并且随光敏剂浓度和光剂量增加而增大,呈浓度-光剂量依赖效应;在相同光剂量下,抑制率随光功率密度增加而增大,在高剂量时更明显。HE染色显示,与对照组相比,PDT处理组细胞密度明显降低,死细胞明显增多;Hoechst 33342荧光染色可见核染色质浓集、核固缩、核碎裂,出现凋亡小体,呈典型凋亡形态改变。结论:HMME-PDT能有效杀伤Tca8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度以均是影响PDT疗效的重要因素,HMME-PDT主要通过凋亡方式诱导细胞死亡。     

HMME介导的光动力对兔血管平滑肌细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用

目的：观察原代培养的兔血管平滑肌细胞在HMME-PDT作用下生长的变化及其死亡方式。方法：常规台盼兰染色观察HMME-PDT作用后6h和24h对细胞的杀伤作用，HMME的浓度为10μg／ml，激光剂帚为2．4～9．6J／cm^2；HE染色法观察PDT后24h细胞形态的变化；流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测细胞死亡方式；共聚焦品微镜观察HMME在线粒体的定位。结果：台盼兰法检测结果娃示随着PDT能量密度的增加细胞的存活率逐渐下降，光镜下可见大部分细胞呈死亡或凋亡样改变，Annexin V／PI法检测显示PDT 24h后凋亡率可达50．5％．共聚焦显微镜观察到HMME在线粒体内有分布。结论：HMME-PDT能显著抑制兔血管平滑肌细胞的生长．并使其发生明显的凋亡。     

研究不同光敏剂诱导的光动力疗法对人白血病细胞的杀伤作用

目的 研究并比较3种卟啉类光敏剂——血卟啉衍生物(HpD)、癌光啉(PsD007)和血卟啉 单甲醚(HMME)诱导的光动力疗法(PDT)对白血病细胞K562的杀伤效应.方法 以人白血病细胞K562为研究对象,分为对照组和PDT组,以梯度浓度的光敏剂与K562细胞共同孵育,经不同能量光照后,用噻唑蓝(MTT)法测定PDT对K562细胞的杀伤作用.结果 与对照组相比,PDT对K562细胞有明显杀伤作用,并随着光敏剂浓度的增加和光照能量的增大,效果增强.PsD007-PDT和HMME-PDT的效果都明显优于HpD-PDT(P＜0.05);而当光敏剂质量浓度较大(25 μg/ml)或能量密度较大(7.2 J/cm2)时,PsD007-PDT的作用效果优于HMME-PDT.结论 PDT对人白血病细胞K562具有明显的杀伤作用,其对细胞的抑制率具有显著的剂量效应关系;PDT对K562的杀伤效应与光敏剂种类有关,HpD-PDT的杀伤效果不如PsD007和HMME;在较高能量密度和较大光敏剂浓度的条件下,PsD007-PDT的效果优于HMME-PDT.     

选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布对人子宫内膜癌细胞的凋亡诱导

目的 研究环氧合酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布诱导人子宫内膜癌细胞凋亡作用.方法 体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-B经塞来昔布处理后,采用Giemsa染色、流式细胞术和DNA Ladder观察HEC-1-B细胞凋亡变化;通过半定量RT-PCR方法检测HEC-1-B细胞COX-2及凋亡相关基因Fas、survivin的表达.结果 20 μmol/L塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,Giemsa染色即可见细胞核固缩、碎裂,出现凋亡小体等细胞凋亡形态变化;流式细胞学检测示50 μmol/L塞来昔布可使HEC-1-B细胞凋亡率达46.9%,PI荧光直方图出现凋亡细胞峰,DNA电泳可见典型的细胞凋亡梯形条带.塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,COX-2 mRNA表达下降,细胞凋亡相关基因Fas表达增加,细胞凋亡抑制基因surviyin表达下降,50 μmol/L塞来昔布可使survivin表达难以检出.结论 塞来昔布对HEC-1-B细胞有明显的凋亡诱导作用,通过抑制COX-2表达进而使Fas表达上调,survivin表达下调可能是其诱导细胞凋亡机制之一.     

厄罗替尼联合塞来昔布阻断EGFR和COX-2抑制肺癌A549细胞增殖

目的探讨厄罗替尼联合塞来昔布对肺腺癌A549细胞系凋亡、表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法厄罗替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞抑制率;Hoechst33258法和TUNEL法检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达。结果厄罗替尼联合塞来昔布组相比单药组A549细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆开始脱落;二者联合作用时抑制作用更强(P<0.05),厄罗替尼与塞来昔布均能诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高(P<0.05),并使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05),进一步下调了EGFR和COX-2蛋白的表达(P<0.05)。结论厄罗替尼与塞来昔布联合应用可协同介导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞株CD44v6表达水平的影响

目的 研究塞来昔布(COX-2选择性抑制剂)对鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力的影响及可能机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖活性的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,通过重组人工基膜实验检测细胞侵袭力的改变;RT-PCR检测鼻咽癌细胞CD44v6 mRNA的表达情况;用Western blot和免疫细胞化学检测鼻咽癌细胞CD44v6蛋白表达变化.结果 MTT法结果显示,塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖有明显抑制作用,呈剂量依赖性关系(P<0.01).塞来昔布作用细胞24 h后,肿瘤细胞的侵袭力明显下降(P<0.05).RT-PCR结果显示,塞来昔布可以明显抑制CD44v6 mRNA的表达水平(P<0.01).Western blot和免疫组化结果显示,随着药物浓度的增加,CD44v6蛋白表达水平逐渐减少(P<0.01).结论 塞来昔布可能通过下调CD44v6表达而降低鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力.     

塞来昔布增强长春新碱对KB/VCR细胞增殖和迁移的抑制作用

目的观察塞来昔布增强长春新碱对口腔癌KB/VCR细胞增殖和迁移的抑制作用。方法 KB/VCR细胞分为对照组、长春新碱组、塞来昔布组(10μmol/L)及长春新碱(1.5μmol/L)联合塞来昔布(10μmol/L)组,应用体外细胞培养技术培养人口腔癌KB/VCR细胞24 h,倒置显微镜下观察KB/VCR细胞的形态变化。Click-iT Edu检测各组细胞的生长增殖能力,并采用Transwell实验观察各组细胞的迁移能力。结果 10μmol/L塞来昔布和1.5μmol/L长春新碱联合作用于人口腔癌KB/VCR细胞后,KB/VCR细胞的增殖和迁移能力显著减弱(P0.05),且两者联合检测效果显着高于单用塞来昔布(10μmol/L)或VCR(1.5μmol/L)组。结论环氧化酶-2抑制剂塞来昔布具有增强长春新碱抑制人口腔癌KB/VCR细胞的生长增殖和迁移的相关作用,但其机制有待进一步研究。     

塞来昔布联合阿霉素促胃癌细胞凋亡作用的探讨

目的：探讨非甾体类抗炎药（NSAIDs）中选择性的环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布与常规化疗药物阿霉素（ADM）小剂量联合用药对MGC-803细胞的促凋亡或抑制增殖作用。方法：传代培养MGc-803细胞，用MTT法检测细胞的增殖程度；用荧光显微镜术，流式细胞术和DNA梯度检测细胞凋亡情况。结果：（1）荧光显微镜下，塞来昔布联合ADM用药组的MGc-803细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变；（2）塞来昔布和ADM联合使用可以诱导细胞凋亡发生，DNA梯形条带较单独使用时更加明显：（3）流式细胞术显示单独使用塞来昔布的细胞凋亡率为18．1，阿霉素28．7％，小剂量塞来昔布和阿霉素联合使用为64．9％。结论：小剂量塞来昔布与ADM联合使用可以促进胃癌细胞凋亡。